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脐血CD34+细胞和外周血单个核细胞中HOXB4基因表达及其启动子区CpG岛甲基化状态的研究
本研究旨在通过检测脐血CD34+细胞和正常人外周血单个核细胞(PBMNC)中HOXB4基因表达水平及其启动子区CpG岛的甲基化水平,初步探讨造血系统中HOXB4基因的表达水平与其启动子区甲基化的相关性.采用半定量RT-PCR检测脐血CD34+细胞和PBMNC中HOXB4基因的表达,应用亚硫酸氢盐测序法检测这两种细胞中HOXB4基因启动子区CpG岛的甲基化位点.结果发现,CD34+细胞高表达HOXB4,HOXB4基因启动子区CpG岛未发生甲基化;PBMNC不表达HOXB4,HOXB4基因启动子区在ATG上游-129 bp的C碱基发生甲基化.结论:HOXB4基因启动子甲基化程度是其基因表达水平的负性调节机制之一.HOXB4在CD34+细胞中的高表达与其基因启动子低甲基化有关,而HOXB4在PBMNC中的基因沉默则可能与其启动子区的甲基化密切相关.初步筛选出的HOXB4基因启动子区CpG岛甲基化位点,为后续研究奠定了基础,也为扩增造血祖细胞提供一条新途径.
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p15INK4b基因异常与骨髓增生异常综合征
在肿瘤抑制基因中,p15INK4b基因由于在骨髓增生异常综合征(MDS)演进过程中的重要作用而逐渐受到关注.系列的研究表明,随着MDS向AML的演进,p15INK4b基因由于其外显子1启动子区的5＇CpG岛发生高度甲基化而失活.这种类型的甲基化限于MDS细胞克隆,用甲基化特异性PCR法可较为敏感地将其检测到.p15INK4b基因的失活抑制了细胞因子如Fas抗原、TGF-β和碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白介导的细胞凋亡.由于p15INK4b基因甲基化与MDS的密切关系,调节其甲基化状态可能会成为治疗MDS的一个新途径.
关键词： p15INK4B基因 骨髓增生异常综合征 基因甲基化 -
砷剂诱导多发性骨髓瘤细胞socs-1基因去甲基化作用的研究
本研究探讨三氧化二砷(As2O3)对人多发性骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226细胞内socs-1基因甲基化状态的影响.用MTT法观察As2O3对骨髓瘤细胞增殖情况的影响,采用甲基特异性PCR法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226 socs-1基因的甲基化状态,以实时定量PCR技术定量检测细胞株给药前后socs-1基因mRNA的表达变化,流式细胞技术检测As2O3诱导的骨髓瘤细胞的凋亡情况.结果表明:人骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226均存在不同程度的socs-1基因CpC岛甲基化,socs-1基因不表达的现象.As2O3作用72小时后socs-1基因甲基化程度明显减弱或消失,socs-1基因在mRNA水平上表达明显增强,与各野生型细胞株相比,差异具有显著性p＜0.05),且细胞生长抑制明显,早期、晚期细胞凋亡比率明显升高,并呈现剂量依赖性.结论:As2O3可诱导socs-1基因甲基化状态的改变,使基因表达上调,恢复其活性,这为进一步阐明As2O3诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制和As2O3治疗多发性骨髓瘤的可能机制提供新的思路和新的研究方向.
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四种恶性血液病细胞系的Id4基因启动子甲基化
本研究探讨4种白血病和淋巴瘤细胞系以及非肿瘤细胞系和正常人骨髓Id4基因启动子甲基化状态及其差异.采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)对白血病细胞系K562和HL-60、淋巴瘤细胞系Ramous和CA46以及良性细胞系Hek937和正常人骨髓细胞进行Id4基因甲基化状态检测.结果表明:Id4基因在正常人骨髓细胞和Hek937细胞系中呈完全非甲基化状态,在4个血液肿瘤细胞系K562、HL-60、Ramous 和CA46中均呈甲基化状态.结论:所检测的4种血液肿瘤细胞系中,Id4基因的甲基化状态与正常人骨髓细胞和非肿瘤细胞系完全不同,Id4基因甲基化模式的改变与造血细胞恶变的发生密切相关.
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微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因甲基化的应用
p16基因甲基化是癌症诊断的标志物之一.目前检测p16基因甲基化的甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)[1]灵敏度有限,对血浆中脱落肿瘤细胞少的标本易报告为假阴性.而微流控芯片电泳技术具有高灵敏度、成本低、分析速度快等特点[2].本研究用微流控芯片电泳技术检测肿瘤患者血浆中p16基因异常甲基化,并探讨其临床应用价值.
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实时荧光定量PCR检测人肺癌p16基因启动子异常甲基化阳性参比物的研究
我国肺癌发病率较高,且5年生存率仅有6%～16%,早期发现和治疗可使5年存活率提高到60%～90%.研究证明,p16基因启动子区域的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸岛(CpG岛)异常甲基化[1]在肿瘤发生组织增生和化生阶段已出现,故对肺癌的早期诊断具有很大价值[2].因此,本研究用实时荧光定量PCR方法检测p16基因甲基化,以寻找敏感、特异的肺癌诊断标志,这对肺癌早期诊断和预后观察以及高危人群筛查都有重要意义.
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甲基化特异性PCR检测脆性X综合征患者FMR1基因甲基化的应用价值
脆性X综合征95%以上患者的致病分子机制是由于脆性X智力低下基因1(Fragile X mental retardation 1 gene,FMRI)5'端非翻译区一段不稳定的三核苷酸重复序列(CGG)异常扩增;和该基因上游启动子区域CpG岛的异常甲基化,使FMR1基因失活,而产生智力低下等系列脆性X综合征临床症状的疾病.我们用甲基化特异性PCR检测先天性智力低下患儿FMR1基因CpG岛的甲基化状况,并分析其在诊断脆性X综合征中的价值.现报告如下.
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粪便中基因甲基化检测筛查结直肠肿瘤的荟萃分析
目的:越来越多的研究发现粪便中基因异常甲基化可作为生物标志来检测结直肠肿瘤.为了系统评价粪便甲基化基因作为生物标志物来检测结直肠肿瘤的可行性.方法:以“colorectal cancer/colorectal adenoma/colorectal polyps”、“methylation”、“stool/fecal DNA”作为关键词,检索PubMed、Web of Kowledge和OVID(On-line Visual Display Unit Interrogation of Databases)数据库纳入研究甲基化基因作为生物标志物来检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)或腺瘤的相关文献.该荟萃分析是使用了敏感性,特异性和95％CI作为影响测量结果,采用Stata11.0软件进行统计学分析.结果:一共有24个研究,3555例患者被纳入.统计结果显示粪便DNA中检测单基因甲基化筛查结直肠肿瘤(CRC和腺瘤)的敏感性和特异性分别为0.58(95％CI:0.51-0.66)和0.93(95％CI:0.89-0.96),联合检测多基因甲基化筛查结直肠肿瘤的敏感性和特异性分别为0.79(95％CI:0.67-0.81)和0.88(95％CI:0.86-0.91).结论:通过本次荟萃分析,我们可以发现粪便基因甲基化检测筛查CRC具有较高的敏感性和特异性,具有作为无创性CRC筛查方法的前景,而且联合检测多基因甲基化方法筛查结直肠肿瘤优于单基因检测方法.
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母体甲基供体缺乏对子代小鼠结肠炎发生影响的研究
目的探讨母鼠饮食中甲基供体含量的缺乏是否可能通过影响干扰素γ,(interferonγ,IFN-γ)基因的甲基化参与子代鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的发生及发展.方法从母鼠孕前l mo至生产子鼠哺乳期结束,分别给予母鼠(Balb/c)正常饮食和甲基供体(叶酸、维生素B12)缺乏饮食.随后母鼠所产子代小鼠分别给予葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)溶液和纯净水作为饮用水.实验子鼠被随机分为4组:标准饮食无DSS处理组(C/DSS-)、甲基供体缺乏饮食无DSS处理组(D/DSS-)、标准饮食DSS处理组(C/DSS+)、甲基供体缺乏饮食DSS处理组(D/DSS+).处理5d后,评价子鼠结肠黏膜炎症程度,检测血清叶酸、维生素B12和同型半胱氨酸,并检测肠组织IFN-γ表达以及干扰素γ基因(interferonγgene,IFNG)启动子区CpG岛基因甲基化水平.结果D/DS S+组小鼠较C/DS S+组的结肠黏膜炎性活动指数(disease activity index,DAI)显著增高(3.22±0.55 vs 2.22±0.50,P＜0.01).D/DS S+和D/DSS-组与C/DS S+和C/DSS-组相比,血清叶酸(8.87 nmol/L±1.11 nmol/L vs11.34 nmol/L±0.31 nmol/L,P＜0.01)、维生素B12(409.2 ng/L±56.27 ng/L vs 676.1 ng/L±51.66 ng/L,P＜0.01)显著降低,同型半胱氨酸显著增高(8.45 μmol/L±0.35 μ.mol/L vs6.77 μmol/L±0.36 μmol/L,P＜0.01).C/DSS+和D/DSS+组IFN-γ表达较C/DSS-和D/DSS-组显著增高(5.3±1.2 vs 10.6±10.8,x2=14.517,P=0.001,P＜0.01),DSS+组的IFN-γ表达水平与结肠炎症程度正相关(r=0.853,0.840;P=0.031,0.036;P＜0.05).子鼠结肠黏膜中的IFNG启动子区总体甲基化水平以及同一位点的甲基化水平,4组之间相比无统计学差异(P＞0.05).结论母体孕期及哺乳期饮食中甲基供体缺乏可能通过结肠黏膜中IFN-γ表达增高导致子鼠结肠黏膜炎症严重程度增加.子鼠结肠黏膜中IFN-γ,的表达异常与IFNG启动子区的甲基化无明显相关性,可能是其他途径导致的.
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错配修复基因甲基化紊乱与消化系肿瘤
肿瘤的发生过程中,表型遗传修饰对肿瘤相关基因的表达起调控作用,主要有总基因组甲基化水平降低,癌基因的低甲基化和抑癌基因的高甲基化及抑癌基因的低乙酰化.其中,DNA错配修复基因的失活与基因的甲基化紊乱密切相关.hMLHl(human Mut L homologue 1)和hMSH2(humanMut S homologue 2)是DNA错配修复的主要控制基因,其表达的失活与该启动子区高甲基化有关.本文就消化系肿瘤发生中错配修复与甲基化紊乱关系作一综述.
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胃癌DNA甲基化谱研究进展
肿瘤的发生与多基因的异常有关,其中,DNA甲基化作为基因表达调控的一种方式,其甲基化状态的改变与基因的异常表达相关.胃癌的发生亦系多因素、多阶段、多基因异常累积的过程.本文就与胃癌有关的肿瘤抑制基因(p14ARF、pi6INK4a、APC、pS2、p15INK4b和RASSF1等)、DNA修复基因(MGMT和hMLHl)和其他与肿瘤转移和侵袭有关的基因(CDHl和TIMP-3)的CpG岛甲基化情况作一综述,说明了胃癌的发生与DNA甲基化的关系,揭示了胃癌的形成与DNA甲基化有一定的关系,探讨利用基因甲基化的检测作为胃癌早期诊断的生物学标记的可能性.
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胰腺癌组织和胰液中p16基因启动子区5'CpG岛甲基化及其表达
目的探讨胰腺癌组织中p16基因启动子区5'CpG岛甲基化情况及其与p16蛋白表达的关系,并检测胰液中p16基因甲基化改变情况,为胰腺癌的诊断和鉴别诊断提供一个新的分子标志物.
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前脑啡肽原及其甲基化与胰腺癌研究进展
自1975年Hughes等从脑中分离并鉴定出两个脑啡肽即甲啡肽和亮啡肽以后,陆续发现10多种来自不同基因的内源性阿片肽.前脑啡肽原(preproenkephalin, ppENK)作为重要的内源性阿片肽前体,其基因甲基化及降解产物甲硫氨酸-脑啡肽与胰腺癌的发生、发展及治疗关系密切,现综述如下.
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结直肠腺癌凝血栓蛋白1基因甲基化异常
探讨凝血栓蛋白(THBS)1基因表达、启动子胞嘧啶磷酸鸟嘌呤岛(CpG岛)甲基化与结直肠腺癌及其临床与病理特征的关联,并分析THBS1基因甲基化与其蛋白表达的相关性.
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半巢式MSP在急性白血病患者p15基因甲基化检测中的应用
传统的观点认为,基因的缺失和突变是基因失活的主要方式,近研究显示,基因异常甲基化所导致的基因沉默亦是基因失活的方式之一.在多种恶性血液病中,p15基因发生异常的主要途径是基因异常甲基化和缺失.目前国内文献上p15基因甲基化的检测方法主要集中在甲基化敏感限制性酶切和Herman等[1]总结的甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法.我们通过优化MSP方法,设计了p15基因的半巢式-MSP(Hn-MSP)引物对85例急性白血病(AL)患者进行了p15甲基化状态的检测.
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肺癌细胞株抑癌基因启动子CpG岛甲基化与转录的关系
基因特别是抑癌基因启动子区CpG岛甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展关系的研究正受到越来越多的重视.本研究用甲基化特异性的PCR(MSP)测NSCLC细胞株中12个肿瘤相关基因的甲基化发生情况,并观察甲基化与mRNA转录之间的关系,以进一步阐明抑癌基因甲基化在NSCLC中的作用.
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胆管癌TMS1/ASC基因甲基化及其临床意义
肿瘤发生是多基因协同作用、多因素共同参与、综合发展的结果.研究发现肿瘤抑制基因失活与其启动子区域表遗传性改变即CpG岛甲基化状态直接关联;因此CpG岛甲基化在肿瘤发生、发展过程中发挥着关键作用.
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血清DNA定量及基因甲基化状态检测在卵巢上皮性癌诊断中的应用
卵巢恶性肿瘤是病死率高的女性生殖系统肿瘤,其中90%为卵巢上皮性癌(卵巢癌),而70%的患者诊断时已达Ⅲ期或Ⅳ期,5年生存率仅为15%～20%[1].因此发现新的既敏感又特异的肿瘤标志物,对卵巢癌的早期诊断、提高生存率具有重要意义.近年的研究发现,作为表观遗传的主要方式之一,DNA异常甲基化是肿瘤发生的早期事件,可早于基因及其表达产物的改变[2].而且,肿瘤患者血清DNA含量明显升高,虽然其来源尚未十分明确,但其具有与肿瘤DNA类似的遗传学和表观遗传学改变[3].因此,血清DNA的异常甲基化用于肿瘤的早期诊断具有明显的优势和极大的潜力.本研究通过定量检测卵巢癌患者血清DNA含量,以及基因EGFLAM、CDKN2A和LSM2的启动子区胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸岛(CpG island,CGI)甲基化状态,探索新的可用于辅助卵巢癌早期诊断的血清DNA甲基化标志物.
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人粪便中MALL基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的作用
目的：探讨粪便中MALL 基因甲基化检测在结直肠癌诊断中的价值。方法收集2013年1月至2014年12月在本院确诊的89例结直肠癌患者及33例正常人清晨粪便标本，提取其DNA 经处理后采用甲基化特异性 PCR 技术分析 MALL 甲基化状态，比较粪便 MALL 基因甲基化状态与粪便潜血（FOBT）、CEA 诊断结直肠癌的价值。结果结直肠癌患者粪便 DNA 中 MALL 基因启动子甲基化率为78．7％（70／89），显著高于正常人3．0％（1／33）（P＜0．01）。粪便 MALL 基因甲基化诊断结直肠癌的敏感度（78．7％）显著高于粪便潜血（30．3％）、CEA（29．2％）（均 P＜0．01）。 MALL 基因甲基化状态与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移及TNM分期均无关（均P＞0．05）。结论粪便MALL基因异常甲基化对于诊断结直肠癌具有较高的敏感性，可作为诊断结直肠癌的无创性初筛方法。
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血小板源性生长因子B及其基因启动子区甲基化在脑胶质瘤中的表达及意义
目的 探讨脑胶质瘤中血小板源性生长因子B(PDGF-B)表达水平及其基因启动子区甲基化程度与肿瘤增殖的关系.方法 运用免疫组化检测54例脑胶质瘤中PDGF-B、磷酸化Smad2(p-Smad2)和Ki-67的表达水平;运用焦磷酸测序检测上述54例脑胶质瘤中PDGF-B启动子区甲基化程度.结果 (1)PDGF-B表达水平随着病理分级的增高而增多(P＜0.05);(2)PDGF-B表达分别与Ki-67、p-Smad2表达呈正相关(r=0.839,P＜0.001)(r=0.802,P＜0.001),与PDGF-B甲基化水平呈负相关(r=-0.817,P＜0.001);(3)在低级别和高级别胶质瘤中,PDGF-B甲基化水平的差异具有统计学意义(P =0.001).结论 PDGF-B甲基化水平越低,其蛋白表达越高,则胶质瘤恶性程度及增殖活性越高.
关键词： 神经胶质瘤 基因甲基化 焦磷酸测序 血小板源性生长因子B
