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鞘内注射可乐定对切口痛大鼠脊髓背角PKA催化亚单位表达的影响
目的:观察鞘内注射(intrathecal injection IT)可乐定对切口痛大鼠脊髓背角PKA催化亚单位表达的影响.方法:选择鞘内置管成功的雄性SD大鼠80只,随机分为5组,每组16只,分别为假手术组,对照组,可乐定5μg组,可乐定10μg组和可乐定20μg组.按Yaksh法鞘内置管,按Brennan法制作大鼠足底切口疼痛模型,用机械缩爪反射阈值(mechanical withdrawal threshold MWT)和热缩爪潜伏期(thermal withdrawal latency TWL)来确定疼痛行为学变化,应用免疫组织化学法和免疫印迹法测定大鼠脊髓背角PKA催化亚单位表达的变化.结果:与假手术组比较,术后3h时对照组大鼠的MWT明显降低,TWL明显缩短(P＜0.01),脊髓背角PKA催化亚单位免疫反应阳性神经元数量和神经元胞浆内PKA催化亚单位表达明显增加(P＜0.01)；与对照组比较,术前IT可乐定10μg组和IT可乐定20μg组大鼠的MWT明显增加,TWL明显延长(P＜0.01),脊髓背角PKA催化亚单位免疫反应阳性神经元数量和神经元胞浆内PKA催化亚单位表达明显减少(P＜0.01),尤以可乐定20μg组为甚；而IT可乐定5μg组大鼠的MWT,TWL,脊髓背角PKA催化亚单位免疫反应阳性神经元数量和神经元胞浆内PKA催化亚单位表达与对照组比较均无统计学意义.结论:在大鼠切口痛模型中,IT可乐定具有剂量依赖性抗伤害作用,其机制可能与其抑制切口痛引起的脊髓背角PKA催化亚单位的表达增加有关.
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鸡迟发性神经病模型脑组织中蛋白激酶含量的改变
目的 用鸡建立迟发性神经病的动物模型,观察其脑组织中蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、β-肌动蛋白(β-actin)含量的改变.方法 分为甲胺磷组、磷酸三甲苯酯组和对照组,甲胺磷组经口给予10 mg/(kg·d),连续给药14 d建立模型;磷酸三甲苯酯组经口给予磷酸三甲苯酯原油1 ml/(kg·d),连续给药7 d建立模型;对照组给予生理盐水.观察染毒组的中毒表现,染毒组和对照组母鸡于染毒后7、14、21和28 d处死,利用Western Blotting方法检测各组脑组织中PKA、PKC和β-actin含量的改变.结果 甲胺磷组动物大脑中PKC与对照组比较,在染毒后的7、14、2l和28d分别降低了24%(P<0.05)、28%(P<0.05)、30%(P<0.05)和62%(P<0.01),磷酸三甲苯酯组分别降低了64%(P<0.01)、58%(P<0.01)、58%(P<0.01)和43%(P<0.05).甲胺磷组β-actin含量在14 d升高了30%(P<0.05),磷酸三甲苯酯组在7 d降低了26%(P<0.01).结论 在本试验条件下,甲胺磷和磷酸三甲苯酯使脑组织中的PKC含量在OPIDN的进行阶段出现降低,提示PKC含量的降低可能是OPIDN的发病机制之一.
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全氟辛烷磺酸对小鼠大脑谷氨酸含量和蛋白激酶活性的影响
目的 通过观察全氟辛烷磺酸(PFOS)对雄性小鼠大脑谷氨酸含量、蛋白激酶C(PKC)和蛋白激酶A(PKA)活性的影响及超微结构的改变,探讨PFOS所致神经毒性机制.方法 44只雄性昆明系小鼠按体重分为4组,每组11只.PFOS染毒剂量分别为5、10、20 mg/kg,对照组给予同等体积2%吐温-80,连续经口染毒10 d.分光光度计法测定小鼠大脑谷氨酸含量,非放射性蛋白激酶检测法测定PKC和PKA活性,透射电镜观察大脑皮质超微结构的损伤.结果 10、20 mg/kg染毒组小鼠大脑谷氨酸含量分别为(1.57±0.11)、(1.62±0.16)mmol/g蛋白,与对照组[(1.45±0.13)mmol/g蛋白]相比,差异有统计学意义(F=39.59,P＜0.05);5、10、20 mg/kg染毒组PKC活性分别为(29.05±2.89)、(33.65±3.82)和(34.20±3.16)pmol·min-1·(mg蛋白)-1,与对照组[(24.53±2.88)pmol·min-1·(mg蛋白)-1]比较,差异有统计学意义(F=7.75,P＜0.05).5、10、20 mg/kg染毒组PKA活性与对照组比较,分别升高了(24.12±3.86)%、(34.02±3.04)%和(33.42±3.71)%,差异有统计学意义(F=26.27,P＜0.01).但PKC和PKA活性的升高趋势在PFOS剂量为20 mg/kg时趋缓.给予小鼠PFOS可对大脑皮质细胞造成细胞核膜凹陷的超微结构损伤.结论 PFOS染毒导致小鼠脑组织谷氨酸含量、PKC和PKA活性升高,并对大脑皮质细胞造成超微结构损伤,可能是PFOS引起神经毒性的机制之一.
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针刺疗法对局灶性脑缺血大鼠神经功能、大脑皮层蛋白激酶A表达及细胞凋亡率的影响
目的:观察针刺疗法对局灶性脑缺血大鼠大脑皮层蛋白激酶A (protein kinase A,PKA)表达的影响,探讨针刺疗法对局灶性脑缺血大鼠的神经保护机制.方法:选取雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、针刺组,每组30只,每组大鼠再随机等分为3d、7d、14d组,共计9个亚组.采用线栓法制备左侧大脑中动脉阻塞2h再灌注模型.针刺组大鼠行针刺“百会”“水沟”及右侧“曲池”“合谷”“内关”“足三里”“三阴交”“太冲”穴,每日1次,每次30 min.采用神经行为评分法评价大鼠神经功能缺损情况,采用流式细胞仪测定缺血侧皮层细胞凋亡率,采用免疫组织化学法测定缺血侧大脑皮层PKA阳性细胞表达率.结果:与假手术组各时相点比较,模型组大鼠神经功能严重受限,缺血侧皮层细胞凋亡率及PKA阳性细胞表达率明显升高(均P＜0.05)；针刺组各时相点的神经行为缺陷评分均低于模型组(P＜0.05),缺血侧皮层细胞凋亡率明显低于模型组,PKA阳性细胞表达率明显高于模型组(均P＜0.05).结论:针刺能够降低局灶性脑缺血大鼠缺血侧大脑皮层的细胞凋亡率,提高大脑皮层PKA阳性细胞表达率,促进神经修复与再生,从而降低神经行为缺损评分,改善受损神经功能.
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加味逍遥汤对抑郁大鼠海马cAMP,PKA,PKC的影响
目的:从信号转导通路上重要调节因子cAMP(环磷酸腺苷),PKA(蛋白激酶A)及PKC(蛋白激酶C)的角度,探讨抑郁大鼠模型受体后信号转导的变化及加味逍遥汤的干预作用.方法:将SD大鼠随机分为6个组,每组10只,即正常组、模型组、氯米帕明组(13.5 mg·kg-1)、加味逍遥汤高、中、低剂量组(生药11.7,5.85,2.925 g·kg-1).造模同时各组按10 mL·kg-1体重给药,正常组、模型组给予等量的生理盐水,每日1次,连续24 d.末次给药后1h,快速断头处死,在冰上剥离大脑,分离海马迅速放入冻存管,投入液氮中,随后置于-70℃低温冰箱保存备用.按ELISA试剂盒说明用酶标仪检测大鼠海马cAMP,PKA及PKC的含量变化.结果:与模型组比较,各组均能增加大鼠海马cAMP,PKA及PKC的含量,差异有显著性意义(P＜0.05),加味逍遥汤各剂量组cAMP,PKA及PKC的含量增加,随剂量增加作用加强,与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.05)；加味逍遥汤高、中剂量组与氯米帕明组相比cAMP,PKA及PKC含量差异没有显著性意义.加味逍遥汤高、中剂量组与低剂量组相比,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:加味逍遥汤可能是通过调节受体后cAMP,PKA及PKC信号传导通路发挥抗抑郁作用.
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桂枝汤对低体温大鼠下丘脑组织蛋白激酶A和C活性的影响
目的:研究低体温大鼠下丘脑蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)活性的变化及桂枝汤的升温作用机理.方法:选用腹腔注射氨基比林低体温大鼠模型,先观测桂枝汤(p.o.)对模型大鼠体温的影响,继而采用放射性同位素法,测定给予桂枝汤后低体温大鼠下丘脑组织中PKA、PKC的活性.结果:桂枝汤可使低体温模型大鼠下丘脑组织中受抑的PKA、PKC活性显著增强,促进体温恢复.结论:PKA、PKC参与了大鼠的低体温过程,桂枝汤的升高体温的作用可能与提高下丘脑组织中PKA、PKC活性有关.
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安神定志灵对大鼠脑内突触体多巴胺合成相关因子表达的影响
目的:研究安神定志灵对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH),多巴脱羧酶(DOPA decarboxylase,DDC),蛋白激酶A (protein kinase A,PKA)的调控作用,揭示安神定志灵治疗注意缺陷多动障碍(ADHD)的药效机制.方法:依据随机数字将自发性高血压(SHR)大鼠分为模型组,利他林组,安神定志灵低、中、高剂量(6.75,13.35,26.70 g·kg-1)组,每组8只,另设WKY大鼠8只为正常组,分别灌胃4周.Percoll密度梯度离心法制备脑突触体,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TH,PKA蛋白表达;运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Read-time PCR)技术检测TH,DDC,PKA mRNA表达水平,运用免疫荧光技术检测TH,DDC阳性细胞表达量.结果:与正常组比较,模型组大鼠突触体内TH,DDC,PKA表达量显著降低(P＜0.01);与模型组比较,利他林组及安神定志灵中剂量组突触体内TH,PKA蛋白及TH,PKA,DDC mRNA表达量及阳性细胞数均有所升高(P＜0.05);免疫组化阳性细胞计数显示,与正常组比较,模型组及安神定志灵高剂量组TH阳性细胞表达显著降低(P＜0.01),安神定志灵低剂量组TH阳性细胞表达明显降低(P＜0.05);模型组及安神定志灵低剂量组中DDC阳性细胞表达显著降低(P＜0.01);治疗后与模型组比较,利他林组及安神定志灵低、中剂量组TH阳性细胞表达显著上升(P＜0.01),利他林组及安神定志灵中、高剂量组DDC阳性细胞数上升显著(P＜0.01).结论:安神定志灵通过调控TH,DDC,PKA的表达,影响多巴胺的合成速度,安神定志灵控制ADHD核心症状的作用可能与调控多巴胺合成速度有关.
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桂枝汤有效部位B对胃肠运动双向调节作用的实验研究Ⅵ-对cAMP、蛋白激酶A和C活性的影响
目的:探讨桂枝汤有效部位B(Fr.B)对胃肠运动双向调节的作用机理.方法:应用放射免疫法测定阿托品致胃肠运动受抑或新斯的明致胃肠运动亢进大鼠下丘脑及胃肠组织cAMP含量、PKA和PKc活性.结果:对阿托品致胃肠运动受抑大鼠,Fr.B可拮抗下丘脑和空肠组织cAMP含量及PKA、PKc活性的降低,对胃窦组织PKA活性的降低也具拮抗作用;对新斯的明致胃肠运动亢进大鼠,Fr.B可升高胃窦组织PKA活性、下丘脑和空肠组织PKc活性,对cAMP含量无明显影响.结论:Fr.B对胃肠运动的双向调节与其影响下丘脑及胃肠局部组织中cAMP含量和蛋白激酶活性有关.
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健脾益智胶囊对MCAO大鼠海马NT-3、GAP-43、SYP-P38、PKA表达的影响
目的:探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马神经营养因子-3(NT-3)、神经生长相关蛋白-43(GAP-43)、空触囊泡蛋白-p38(SYP-P38)、蛋白激酶A(PKA)表达的影响.方法:建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组.采用免疫组化法于术后7、14、28d观察海马NT3、GAP-43、SYP-P38、PKA表达情况.结果:术后7d,中药组NT-3、GAP-43、SYP-P38、PKA阳性细胞数多于模型组、西药组(P＜0.05);术后14d,中药组GAP-43、PKA阳性细胞数多于模型组、西药组(P＜0.05),中药组SYP-P38与模型组、西药组比较明显减少(P＜0.05),NT3与西药组无差异;术后28d,中药组NT3、GAP-43、SYP-P38、PKA阳性细胞数多于模型组(P＜0.05),NT-3、SYP-P38表达多于西药组(P＜0.05),GAP-43、PKA表达与西药组无差异.结论:健脾益智胶囊可促进NT3、GAP-43、SYP-P38、PKA表达增加,提示健脾益智胶囊能可能通过诱导突触再生,特别是新生的轴突形成突触联结以促进缺血后神经功能恢复.
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温阳消饮法对胸腔积液大鼠小肠AQP4及cAMP-PKA信号通路表达的影响
目的:探讨温阳消饮法对胸腔积液模型大鼠小肠水通道蛋白4 (AQP4)的表达、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)含量的影响,阐释该法的作用机制.方法:用计算机随机分组方法,将Wistar成年大鼠随机分为温阳消饮组、去桂消饮组、模型对照组、空白对照组,每组10只.除K组外,其余3组动物以1％角叉菜胶胸腔注射建立大鼠胸腔积液(悬饮)模型,造模24h后拍摄X线胸片进行模型评价.于造模成功后2h各组予相应药物灌胃,每天1次,连续5d.灌胃结束后处死各组大鼠,采取小肠组织,用蛋白印迹法检测AQP4,用酶联免疫吸附法检测cAMP、PKA.结果:①AQP4表达:与空白对照组比较,模型对照组显著降低(P＜0.05);与模型对照组比较,温阳消饮组、去桂消饮组均显著增高(P＜0.05);②cAMP含量:各组比较,其差异均无统计学意义;③PKA含量:与K组比较,其余各组均显著升高(P＜0.05);与模型对照组比较,温阳消饮组、去桂消饮组的差异无统计学意义.结论:在胸腔积液模型中,大鼠小肠上段AQP4的表达降低,而温阳消饮法可上调之,这可能与该法治疗水饮病的作用机制有关.
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活血解毒方对糖尿病大鼠神经中AC-cAMP-PKA途径的影响
目的:观察腺苷酸环化酶(AC) -环磷腺苷(cAMP) -蛋白激酶A(PKA)途径在糖尿病大鼠周围神经中的变化及活血解毒方对其的影响.方法:雄性SD大鼠分为正常组、模型组、甲钴胺组、活血解毒方高低剂量组.链脲佐菌素( streptozocin,STZ)腹腔注射65mg/kg造模,放免法检测坐骨神经内cAMP水平,免疫组化法检测坐骨神经中AC、PKA的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经内AC、cAMP水平降低;与模型组比较,活血解毒方高、低剂量组大鼠坐骨神经内AC表达升高,高剂量组cAMP含量升高.结论:AC-cAMP在糖尿病大鼠周围神经中表达水平下降,活血解毒方可能通过调控AC-cAMP途径防治糖尿病神经病变.
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卒中后抑郁大鼠受体后信号转导的变化及中药的干预作用
目的:从受体后信号转导通路上重要调节因子cAMP、PKA及PKC的角度,探讨卒中后抑郁模型受体后信号转导的变化及中药颐脑解郁方的干预作用.方法:在卒中后抑郁大鼠模型上,采用放射性同位素等方法,观察PSD大鼠脑前皮质及海马cAMP含量、PKA及PKC活性的变化及中药颐脑解郁方的干预作用.结果:卒中后抑郁模型大鼠前额叶皮质、海马cAMP含量及PKA活性明显低于正常组,中药颐脑解郁方能使之上调;模型组PKC活性明显高于正常组,颐脑解郁方能使之下调.结论:卒中后抑郁模型脑皮质及海马受体后cAMP-PKA信号通路系统下调而PKC信号通路上调,中药颐脑解郁方的抗抑郁作用可能与调节受体后cAMP-PKA及PKC信号通路有关.
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桂枝汤对发热大鼠下丘脑组织PKA,PKC活性的影响
目的:研究前列腺素受体Ⅲ型(EP3)受体激动剂硫前列酮(Sul)致热大鼠下丘脑蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)活性的变化及桂枝汤的解热作用机制.方法:选用Sul 1 mg·kg-1脑室注射(icv)致大鼠发热,观察H-89(特异性PKA抑制剂)1 mg·kg-1(icv),calphostin C(特异性PKC抑制剂)1 mg·kg-1(icv)和桂枝汤10 g·kg-1(ig)对模型大鼠发热的影响,继而采用放射性同位素法,测定给予桂枝汤后EP3受体激动剂致热大鼠下丘脑组织中PKA,PKC的活性变化.结果:Sul脑室注射后,呈现单峰的发热曲线,峰值时在注射后0.5 h左右,并伴有下丘脑组织中PKA活性显著增高和PKC活性的降低倾向.PKA,PKC抑制剂及桂枝汤均可使模型大鼠的发热曲线下移;口饲桂枝汤能显著抑制造模动物下丘脑PKA的活性,大剂量桂枝汤还能显著降低PKC的活性.结论:下丘脑组织中的PKA,PKC参与了EP3致大鼠发热的病理过程,桂枝汤可抑制EP3激动诱致的PKA活性增高,这可能是桂枝汤解热作用靶点之一.
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真武汤对NRK-52E细胞“AVP-V2R-AQP2”通路的调控作用研究
该实验探讨真武汤对体外培养NRK-52E细胞AQP2相关的“AVP-V2R-AQP2”通路的调控作用,初步揭示真武汤调节水分转运平衡的部分分子机制.取SPF级雄性SD大鼠48只,随机分成8组,每组6只.分别给予蒸馏水或真武汤22.68 g·kg-1·d-1(按生药量计)灌胃,心脏采血,3 000 r·min-1离心分离制备含药血清.然后体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E细胞,给予上述不同给药天数和日给药次数制备的真武汤含药血清和血管加压素类似物1-去氨基-8-右旋-精氨酸加压素(1-desamino-8-D-arginine vasopressin,dDAVP)进行干预,采用实时无标记动态细胞分析技术(Real time cell analysis,RTCA)检测细胞增殖情况;免疫荧光法检测细胞中V2R,AQP2蛋白的分布情况;Western blot法检测V2R,PKA,AQP2的蛋白表达量;Real-time PCR法检测AQP2mRNA水平.结果显示,与正常大鼠血清组比较,每天给药2次连续给药7d制备的真武汤含药血清作用于NRK-52E细胞约24h,可显著上调其AQP2的mRNA水平(P＜0.01);显著增加V2R,PKA,AQP2的蛋白表达量(P ＜0.05,P＜0.01,P＜0.05);该方法制备的真武汤含药血清与dDAVP合用干预NRK-52E细胞后,可显著增加V2R,p-AQP2和AQP2的蛋白表达量(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01).以上实验结果表明,真武汤含药血清能增加NRK-52E细胞“AVP-V2R-AQP2”通路中V2R,PKA及AQP2的蛋白表达量,与dDAVP合用存在协同效应,提示“AVP-V2R-AQP2”通路可能是真武汤调节水分转运平衡的分子机制之一.
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电针内关穴及列缺穴对心肌缺血大鼠心肌细胞蛋白激酶表达的影响
目的 研究电针内关穴及列缺穴对心肌缺血大鼠心肌细胞蛋白激酶表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠按照随机数字表随机分为对照组、模型组、内关组、列缺组、非经非穴组,每组10只.采用注射盐酸异丙肾上腺素(85 mg/kg)制作大鼠心肌缺血模型,针刺内关、列缺、非经非穴进行干预,通过Western blot检测技术,观察电针前后各组大鼠心肌细胞蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)及蛋白激酶G(protein kinase G,PKG)表达量的变化情况.结果 与对照组比较,模型组PKA、PKC、PKG的表达明显升高(P＜0.01).与模型组比较,内关组和列缺组PKA、PKC、PKG蛋白表达量均降低(P ＜0.01,P＜0.05),非经非穴组PKA蛋白表达量降低(P＜0.01);与内关组比较,列缺组、非经非穴组PKA、PKC、PKG的表达量明显升高(P ＜0.01,P＜0.05);与列缺组比较,非经非穴组PKA、PKC、PKG表达量升高(P ＜0.01,P＜0.05).结论 电针内关穴和列缺穴均可以降低心肌缺血大鼠心肌细胞蛋白激酶的表达量,且内关穴的针刺效应优于列缺穴.
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Forskolin上调MN9D细胞Nurr1的表达及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响
目的寻找能激活MN9D细胞内源性孤儿核受体(Nurrl)表达的信号分子,研究Nurrl表达增高对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响,探讨激活Nurrl表达的信号机制.方法用蛋白激酶A激动剂Forskolin或蛋白激酶C激动剂PMA作用于MN9D细胞,用免疫荧光细胞化学及Western blot方法检测MN9D细胞内源性Nurrl表达的变化,以及Nurrl表达增加对TH表达的影响.利用PKA信号转导通路的特异性抑制剂H89探讨激活Nurrl表达的信号机制.结果1.从加入Forskolin 1h起,直至6 h,MN9D细胞Nurrl表达比未加Forskolin组明显增加(P＜0.05);Forskolin主要增加MN9D细胞核内Nurrl含量,而细胞浆内Nurrl含量变化不明显;Forskolin作用后MN9D细胞TH表达无明显变化.2.用蛋白激酶A的特异性抑制剂H89预处理后,Forskolin仍具有增加Nurrl表达的作用.结论Forskolin可增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位,单纯Nurrl表达及核转位增加不影响MN9D细胞TH的表达,TH表达的激活可能还需要其他特殊的细胞(或神经元)环境或共激活因子的共同作用.Forskolin增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位的作用不是主要通过激活PKA信号转导通路完成的.
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蛋白激酶A RⅡβ结构及功能的研究进展
蛋白激酶A(PKA)是由1个调节亚基(R亚基)二聚体和两个催化亚基(C亚基)组成的四聚体,全酶无活性.R亚基有RⅠα、R Ⅰ β、RⅡα和RⅡβ 4种亚型,分别具有不同的理化性质.RⅡβ亚基氨基端包含1个二聚化/对接结构域,PKA通过此结构域与腺苷酸激酶锚定蛋白结合锚定于细胞的特定位点.羧基端是两个串联的高度保守的环核苷酸结构域,与PKA全酶解聚以及激活有关.两个RC异二聚体通过RⅡβ亚基中的β4 ～β5环相锚定.细胞质中存在足够的MgATP时将导致RⅡβ亚基自身磷酸化.RⅡβ在特定组织表达,主要表达于内分泌腺、脑和脂肪组织.生物信息学分析表明,RⅡβ与其他R亚基的序列有很大差别,只有大约50％的序列相同,提示RⅡβ可能具有不同的生物学功能.因此,目前对PKA RⅡβ的功能及其作用机制的研究已逐渐成为热点.
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A型激酶锚定蛋白的结构和生物学功能
cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)通过A型激酶锚定蛋白(A-kinase anchor proteins,AKAPs)靶向亚细胞位点,PKA识别它的底物或效应蛋白,从而引导并放大cAMP信号的生物学效应.AKAPs是功能上相关的调节蛋白家族,具有结合PKA的保守区和引导AKAP-PKA复合体到亚细胞位点的靶向区.AKAPs不仅与PKA相互作用,也与其它信号分子作用,主要是磷酸酶和激酶.AKAP-PKA复合体可汇集和整合来自各种通路的信号,该复合体不仅可局部增强cAMP和其它信号,通过降低PKA的基础活性,还可发挥远程效应.
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AKAP9及其与疾病关系的研究进展
A型激酶锚定蛋白9(A-kinase anchoring protein9,AKAP9)是A型激酶锚定蛋白家族(AKAPs)中的重要成员.A型激酶锚定蛋白(AKAPs)广泛存在于多种细胞,在底物附近募集不同的信号传导酶,从而将上游激活子和下游作用因子有效的组装在一个大分子信号传导复合物中,整合了共同调节细胞底物的磷酸化的各种信号分子,从而保证了信号传导的特异性和准确性.研究发现,AKAP9可通过和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)直接相连,调控PKA对N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDA)受体的磷酸化,进而参与神经系统功能活动.在心血管系统,AKAP9还可通过与PKA,蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)相互作用,调节钾通道的离子流,影响复极化进程,与长QT综合征密切相关.并且对不同病人的基因组大数据筛选发现,AKAP9基因突变存在于多种疾病中,说明AKAP9不仅在正常的生物体中发挥重要作用,而且其异常与多种疾病发生密切相关.因此,本文将着重从AKAP9生理功能及其与疾病之间关系这两方面作一综述.
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小鼠精子获能过程中FSCB蛋白磷酸化研究
目的：研究精子鞭毛纤维鞘CABYR结合蛋白（FSCB）在小鼠精子获能过程中发生磷酸化的分子机制。方法取重组FSCB蛋白进行蛋白激酶A（PKA）体外磷酸化实验，反应产物电泳后分别用抗磷酸化PKA底物抗体和抗磷酸化酪氨酸抗体进行免疫印迹分析。取小鼠未获能与获能2 h精子，分别应用抗磷酸化PKA底物抗体、抗磷酸化酪氨酸抗体或FSCB抗体进行免疫共沉淀，免疫共沉淀产物使用FSCB抗体行免疫印迹分析。使用FSCB抗体和磷酸化PKA底物抗体进行免疫荧光定位分析。结果重组FSCB可被PKA催化亚单位体外磷酸化。FSCB在精子获能过程中可以被PKA磷酸化，并可同时发生酪氨酸磷酸化。免疫荧光定位显示FSCB与磷酸化PKA底物共定位于精子主段。结论 FSCB作为PKA作用底物之一参与小鼠精子的获能过程。
