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肿瘤微环境在神经纤毛蛋白1诱导的辐射抗性中的作用机制
目的 观察神经纤毛蛋白1(NRP1)对肺癌细胞炎性微环境及迁移微环境的影响,并探讨肿瘤微环境中的炎性因子和趋化因子在NRP1诱导的肺癌细胞辐射抗性中的作用机制.方法 建立NRP1LowA549和A549-RR细胞模型,并鉴定两种细胞模型中NRP1的表达水平.利用三维培养技术分别建立A549+ Jurkat、NRP1LowA549+Jurkat、A549-RR+ Jurkat三维共培养模型;A549+HLF-1、NRP1LowA549+ HLF-1、A549-RR+ HLF-1三维共培养模型,同时设立对照组和照射组.共培养2d后,对照射组进行10 GyX射线照射.24 h后收集各种模型的培养基上清液,利用cytometricbead array(CBA)方法通过流式细胞仪检测相关因子的表达情况.结果 在NRP1LowA549细胞中NRP1的表达明显受到抑制,而在A549-RR细胞中NRP1的表达明显升高.在炎性微环境方面,发现IL-12p70与TNF在A549-RR+Jurkat组中,表达明显低于A549+Jurkat组(t=3.88、5.34,P＜0.05),但经照射后明显升高(t=8.49、5.92,P＜0.05);而IL-6及IL-8表达则相反,在A549-RR+ Jurkat组中,表达明显高于A549+ Jurkat组(t=38.30、30.02,P＜0.05),但经照射后明显降低(t=14.39、9.78,P＜0.05).IL-1β、IL-10表达量在各组中经照射后与对照组相比均有不同程度的降低(t=2.80 ～ 11.22,P＜0.05).在迁移微环境方面,发现与A549+HLF-1组相比,RANTES、MCP-1在NRP1LowA549+ HLF-1组中,均呈现表达升高(t=6.07、4.04,P＜0.05),在A549-RR+HLF-1组中表达明显降低(t=15.50、14.62,P＜0.05)的趋势.照射后,RANTES、MCP-1在各组中与对照组相比均不同程度降低(t=2.23、8.45、16.68,P＜0.05).与其不同的是,IP-10、CXCL8(IL-8)在其他各组中表达量均低于A549+HLF-1组,且在NRP1LowA549+ HLF-1组中降幅大(t =31.86、29.79、6.62、3.85,P＜0.05).结论 NRP1对肺癌炎性微环境及迁移微环境中相关炎性因子和趋化因子的表达具有明显影响,且这些因子对肺癌细胞辐射抗性的调控具有重要作用.
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Sema3A/Nrp1信号轴在慢性牙周炎牙周组织中的表达及在牙周骨质破坏中的作用
目的 探究Sema3A/Nrp1信号轴在慢性牙周炎牙周组织中的表达及在牙周骨质破坏中的作用.方法 选择2015年4月-2016年12月收治的已确诊慢性牙周炎患者53例作为研究组,另选同期来我院进行健康体检无口腔疾病的健康志愿者41例作为对照组.采用聚合酶链式反应法检测牙周组织中Sema3A和Nrp1的mRNA相对表达量,采用酶联免疫吸附法测定两组研究对象牙周组织中脑信号蛋白3A(Sema3A)、神经纤毛蛋白1(Nrp1)、炎性分子、骨代谢分子、骨代谢产物的含量.结果 研究组中Sema3A,Nrp1,β-连环蛋白(β-catenin),破骨细胞形成抑制因子(OPG)含量明显低于对照组(P<0.05);几丁质酶3样蛋白1(YKL-40),CXC趋化因子配体16(CXCL16),相关粘附分子1(ICAM1),高迁移率蛋白1(HMGB1),核因子κB受体活化因子配体(RANKL),5-脂氧合酶(5-LOX),白三烯B4(LTB4),Ⅰ型原胶原羧基末端前肽(PICP),Ⅰ型胶原交联C端肽(CTX),Ⅰ型胶原交联N端肽(NTX)的含量明显高于对照组(P<0.05).YKL-40、CXCL16、ICAM1、HMGB1、RANKL、5-LOX、LTB4、ICTP、NTX、CTX在CP患者牙周组织中的含量与Sema3A和Nrp1表达量呈负相关,β-catenin、OPG、PICP含量与Sema3A和Nrp1表达量呈正相关.结论 Sema3A/Nrp1信号轴在慢性牙周炎牙周组织中的表达受到抑制,进而对牙周骨质破坏有抑制作用.
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NRP-1、P53和CD34在大肠癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨大肠癌组织中P53、NRP1和CD34表达的意义及相关性.方法 选取62例大肠癌和30例正常大肠粘膜组织标本,采用免疫组化方法检测正常大肠粘膜及大肠癌组织中P53的表达,免疫组化和Western blot方法检测正常大肠粘膜及大肠癌组织中NRP1和CD34表达情况,测定微血管密度,并进行相关性分析.结果 免疫组化结果发现,NRP-1和p53在大肠癌组织的阳性表达率显著高于正常大肠粘膜组(P＜0.05),CD34阳性产物MVD值大肠癌组显著高于正常大肠粘膜组(P＜0.05).Western blot结果显示,与正常粘膜组织相比,大肠癌组织中NRP1、CD34的表达水平显著升高(P＜0.05).结论 NRP-1、p53、CD34在大肠癌组织中过表达并呈正相关.
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超声检测老年前列腺癌患者血流分级与术后组织中NRP1和NRP2的关系
临床常通过血清学中前列腺特异抗原(PSA)等肿瘤相关标志物的检测以早期发现肿瘤,但由于其特异性差,使其在临床中的应用并不理想.研究显示前列腺癌发生中血管生成相对于正常组织来说明显增多[1].临床上观察血流简便而无创的是彩色多普勒超声检测血流分级.神经纤毛蛋白(NRP)1和NRP2是内皮细胞表面的一种受体,其对肿瘤的进展和血管形成均有促进作用[2,3].在超声检测中的血流分级提示器官内的血液流量,由于超声检测的无创性,早期通过超声将血流分级与肿瘤组织中的NRP1和NRP2联系起来,可能对早期判断肿瘤的生物学行为有一定意义.本文关注血流分级与术后组织中NRP1和NRP2的关联性.
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Nrp1、Nrp2及SEMA3F在口腔癌组织及TCa、ACC细胞系中的表达及其可能的作用
目的 研究SEMA3F及其受体Nrp1和Nrp2在口腔癌组织和细胞(ACC2,ACCM 和 TCa)中的表达情况,并推测其在口腔癌生成中的可能意义.方法 应用RT-PCR和Western bloting以及免疫组化法检测SEMA3F、Nrp1及Nrp2在口腔癌(ACC2,ACCM and TCa)组织和细胞中的表达情况.结果 在所有口腔癌组织和癌细胞中均可检测到Nrp1和Nrp2的表达,但Nrp2相对表达较弱.Western bolting、RT-PCR提示Nrp1呈高表达,Nrp2及SEMA3F均表达较低.在免疫组织化学中显示癌及癌周组织中Nrp1均呈高表达,且癌巢中的表达明显高于癌间隙组织,Nrp2及SEMA3F呈较弱表达.结论 提示在肿瘤的发展进程中,Nrp1可能对肿瘤本身的发生,增殖及肿瘤的血管生成均可能起到了重要的作用.
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pcDNA3.1(+)-NRP1真核表达载体的构建与鉴定
[目的]从人角质形成细胞系HaCaT中克隆NRP1(Neuropilin-1)基因全长cDNA,构建含NRP1基因的重组真核表达载体,为下一步的NRP1基因功能研究奠定基础.[方法]采用RT-PCR法从人角质形成细胞系HaCaT中扩增NRP1基因全长cDNA,扩增产物通过TA克隆连接到pMD18-T载体进行测序鉴定,然后通过双酶切将全长cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),后得到pcDNA3.1(+)-NRP1重组质粒.[结果]成功克隆NRP1基因全长cDNA,并成功构建了pcDNA3.1(+)-NRP1 真核表达载体.[结论]pcDNA3A(+)-NRP1 真核表达载体的成功构建可以为NRP1基因功能的进一步研究及其临床基因治疗奠定实验基础.
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抗人NRP1单克隆抗体的活性鉴定及初步应用
目的 鉴定抗人神经菌毛素1 (neuropilin1,NRP1)单克隆抗体的生物活性并利用该抗体检测常见肿瘤细胞株NRP1蛋白的表达情况.方法 腹水法制备4株抗NRP1单克隆抗体并用rProtein A亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测4株抗体的滴度水平,Western blot分析4株抗体结合NRP1蛋白的特异性,流式细胞术分析4株抗体结合NRP1蛋白的亲和力,共聚焦免疫荧光实验进一步验证抗体结合NRP1蛋白的能力;细胞免疫组织化学染色检测14株肿瘤细胞表达NRP1蛋白的情况.结果 4株抗体均能特异结合NRP1蛋白,其中A6结合NRP1能力强,能结合在表达NRP1蛋白的细胞膜表面.细胞免疫组织化学染色结果显示NRP1在HepG2、C6、HEK293、BEL-7402、MDA-MB-453呈高水平表达,在U87、MGC803、MCF7 、MDA-MB-231中表达水平相对较弱,而在U251、BGC823,H6 、HT-29的表达介于两者之间,在SMMC-7721细胞中未检测到表达.结论 4株抗NRP1单克隆抗体均能特异结合NRP1蛋白,多种肿瘤细胞株均不同程度表达NRP1蛋白,为进一步探讨NRP1蛋白与肿瘤发生发展的关系奠定了基础.
