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聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒在Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型的转运研究
建立Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型,研究不同表面化学性质的PLGA纳米粒在覆盖黏液层的Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型的转运能力.以聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,通过单甲氧基聚乙二醇(mPEG)及壳聚糖(chitosan)对其进行表面修饰,采用纳米沉淀法制备PLGA-NPs、mPEG-PLGA-NPs和壳聚糖包裹的PLGA-NPs,并测定其平均粒径及zeta电位.以香豆素-6(coumarin 6)为荧光标记物,通过激光共聚焦显微镜观察纳米粒的转运情况;以呋喃二烯(FDE)为模型药物,HPLC测定纳米粒的转运量.通过加入内吞阻断剂秋水仙素及诺可唑研究纳米粒的转运机制.采用免疫荧光法考察不同表面化学性质的纳米粒对细胞紧密连接蛋白ZO-1的影响.结果表明,纳米粒分散均匀,PLGA-NPs表面荷负电,经mPEG修饰后zeta电位近电中性,壳聚糖包裹后表面荷正电.呋喃二烯的包封率均＞75％.mPEG-PLGA-NPs在Caco-2/HT29-MTX共培养细胞的转运能力高于PLGA-NPs和CS-PLGA-NPs,在秋水仙素及诺可唑作用下转运量明显降低,并影响ZO-1蛋白的分布.说明PLGA-NPs和mPEG-PLGA-NPs可能通过胞吞作用和细胞旁路途径进行转运,CS-PLGA-NPs主要以胞吞作用进行转运;rnPEG-PLGA-NPs因其表面的亲水性及电荷近中性,具有较好的抗黏性能,能够快速穿过黏液层到达细胞并转运.
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呋喃二烯脂质体的制备及理化性质考察
目的:制备呋喃二烯脂质体,并考察其理化性质.方法:用乙醇注入法制备呋喃二烯脂质体,在单因素试验的基础上,以磷脂浓度、脂药比和磷脂/胆固醇的比例为自变量,以包封率、载药量、粒径为因变量,采用星点设计-效应面法优化处方,并预测较优处方且进行验证,按优化条件制备脂质体,考察其粒径、Zeta电位、体外释放等理化性质.结果:佳制备条件:磷脂浓度为11.95 mg·mL-1,脂药比为9.77,磷脂/胆固醇为8.32,此条件下制备的脂质体包封率为81.35％,载药量为4.86％,粒径为114.5 nm.结论:乙醇注入法制备的脂质体粒度均匀、包封率高、稳定性好,并有一定的缓释作用.
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呋喃二烯纳米乳冻干工艺的研究
目的:研制呋喃二烯冻干纳米乳剂,提高呋喃二烯纳米乳的稳定性.方法:采用冷冻干燥法将呋喃二烯纳米乳冷冻,以冻干乳的外观、复溶情况和粒径等为考察指标优化呋喃二烯纳米乳冻干保护剂和冻干工艺.结果:采用10％的蔗糖作为冻干保护剂所研制的呋喃二烯冻干纳米乳冻干复溶后粒径为(166.3±7.9)nm,多分散系数(polydispersity index,PDI)为0.163;而呋喃二烯纳米乳冻干前平均粒径为(164.9±3.3) nm,多分散系数(PDI)为0.157.并且冻干乳外观雪白、平滑、饱满,复溶速度快,20℃放置粒径及主药含量稳定.结论:该工艺制备的呋喃二烯冻干纳米乳稳定性明显优于其乳剂.
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呋喃二烯mPEG-PLGA纳米粒的制备及大鼠口服生物利用度
目的:制备载呋喃二烯的单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒(monomethoxy polyethylene glycol-poly-actic coglycolic acid-nanoparticles,mPEG-PLGA-NPs),并研究其理化性质及大鼠口服生物利用度.方法:采用乳化溶剂挥发法制备纳米粒,应用动态光散射法考察其粒径、Zeta电位及4℃贮存稳定性,以动态膜透析法测定其释放度,微柱离心-HPLC法测定其载药量和包封率.大鼠经灌胃(ig)给药,给药剂量50 mg～ kg-,HPLC法测定血药浓度并计算相对生物利用度.结果:mPEG-PLGA-NPs平均粒径为(147.7±1.7) nm,Zeta电位为-5.69 ±1.40 mV,粒度分布均匀,4℃贮存稳定性良好.载药量和包封率分别为(10.2±0.3)％和(84.5±3.7)％.与呋喃二烯混悬液相比,PLGA-NPs和mPEG-PLGA-NPs大鼠口服相对生物利用度分别为164.16％和260.90％.结论:mPEG-PLGA-NPs能够比PLGA-NPs更显著改善呋喃二烯大鼠口服生物利用度(P＜0.01).
关键词： 呋喃二烯 单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸 纳米粒 生物利用度 -
呋喃二烯抗脑胶质瘤的研究
目的:本文从体内外多角度进行呋喃二烯抑制脑胶质瘤作用的研究及机制的初步探讨.方法:采用四甲基偶氮咗盐微量酶反应比色法(MTT法),研究呋喃二烯对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用.呋喃二烯脂质微球的体内抗肿瘤活性研究是通过建立小鼠脑胶质瘤G422整体动物模型,选用昆明种雄性小鼠,呋喃二烯脂质微球(80和40 mg·kg-1),用卡莫司汀(BCNU 20 mg·kg-1)作为阳性对照组,腹腔注射给药,qd,共9次,计算胸腺、脾脏指数及抑瘤率.结果:研究发现FDE浓度为20 μg· mL-1作用于U251细胞48 h,对U251细胞抑制率为92.1％,形态学实验表明其能有效诱导细胞调亡.当对G422荷瘤小鼠腹腔给药剂量分别为FDE 80 mg·kg-1和FDE 40 mg· kg-1时,抑瘤率为46.19％和25.56％.结论:呋喃二烯对脑胶质瘤细胞具有很强的抑制和杀伤效应.
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PEG化呋喃二烯固体脂质纳米粒的制备及体外巨噬细胞摄取研究
目的:研究PEG化呋喃二烯固体脂质纳米粒(PEG-FDE-SLN)的制备方法,并考察其理化性质及细胞摄取性能.方法:实验采用乳化蒸发-低温固化法制备PEG-FDE-SLN,以粒径、Zeta电位、多分散系数、包封率为评价指标,通过单因素考察选择制备PEG-FDE-SLN的佳处方.以小鼠腹腔巨噬细胞(MPM)为模型做体外细胞摄取实验.结果:制备PEG-FDE-SLN的佳处方为固态脂质单硬脂酸甘油酯100 mg,液态脂质中碳链三酰甘油40 mg,乳化剂蛋黄卵磷脂13 mg,聚乙二醇硬脂酸酯150 mg,制备的样品粒径为(272.9±2.4) nm,多分散系数为(0.193±0.022),Zeta电位为(-19.82±0.52)mV.包封率为(90.0±1.0)％.体外细胞摄取实验证明,MPM对FDE-SLN的摄取随着聚乙二醇硬脂酸酯的加入以及PEG相对分子质量的增加而逐渐减小,以PEG5000-FDE-SLN摄取少为(8.4±0.4)％.结论:本实验制备的PEG-FDE-SLN,能够改善巨噬细胞对FDE-SLN的摄取作用,PEG链长度影响MPM对FDE-SLN的摄取作用,PEG链越长MPM摄取越少.
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呋喃二烯纳米脂质载体冻干制剂的研究
目的:制备呋喃二烯纳米脂质载体(furanodiene-loaded nanostructured lipid carriers,FN-NLC)的冻干制剂,并对其性质进行考察.方法:通过单因素实验优选冻干制剂的处方工艺,并评价其制剂学性质.结果:以5％海藻糖溶液作为冻干保护剂,确定终的冻干工艺.冻干后制剂(粒径为105.57 nm,Zeta电位为-18.8 mV,包封率为88.83％),与冻干前(粒径为95.23 nm,Zeta电位为-19.6 mV,包封率为91.27％)相比,无明显变化.结论:在优选的冻干工艺条件下可制得稳定的呋喃二烯纳米结构脂质载体冻干制剂.
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呋喃二烯对人胃腺癌MGC-803细胞凋亡的诱导作用
目的：研究呋喃二烯（FDE）在体外对人胃腺癌MGC-803细胞凋亡的诱导作用。方法 FDE 46.29~740.74μmol·L-1与MGC-803细胞孵育48 h，MTT法测定FDE对细胞存活的抑制率；FDE 92.58~370.32μmol·L-1与MGC-803细胞作用24 h，光镜下及Hoechst 33342荧光染色分别观察细胞形态和细胞凋亡，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，罗丹明123染色和DCFH-DA荧光探针分别检测细胞线粒体膜电位的改变和活性氧的产生。结果 MTT结果表明，FDE 46.29~740.74μmol·L-1对MGC-803存活具有明显抑制作用，作用24，48和72 h时IC50分别为347.91，257.41和101.01μmol·L-1。流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双染结果显示，FDE在92.58~370.32μmol · L-1作用24 h，能显著促进MGC-803细胞凋亡（P<0.05）。细胞周期检测结果表明，FDE可使MGC-803细胞周期阻滞于S期。罗丹明123和DCFH-DA染色结果显示，当药物浓度为370.37μmol·L-1时，FDE使细胞内线粒体膜电位降低（P<0.05），对应荧光强度的细胞比例与对照组的比值为0.85∶1，使细胞内活性氧水平增加，活性氧水平为对照组的1.30倍（P<0.05）。结论 FDE可抑制人胃腺癌MGC-803细胞存活，并诱导其凋亡，其诱导凋亡的作用机制可能与激活线粒体凋亡通路、影响细胞周期和抑制DNA的生物合成相关。
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复方莪术油栓中呋喃二烯及莪术醇的测定
目的:建立复方莪术油栓中呋喃二烯和莪术醇的含量测定方法.方法:采用<中国药典>2010年版复方莪术油栓[含量测定]项下色谱条件.结果:呋喃二烯在85.89~2579.4 ng范围内,莪术醇在16.272~488.16 ng范围内,线性关系良好,平均回收率分别为99%和97%,RSD分别为3.9%与4.0%(n=9).结论:药典标准色谱条件可同时控制呋喃二烯和莪术醇的含量,为进一步完善复方莪术油栓质量标准提供了参考依据.
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薄层色谱法鉴定莪术油中倍半萜类成分的研究
目的 建立莪术油中(牛龙)牛酮、呋喃二烯、莪术二酮和莪术烯4种倍半萜类成分的鉴别方法.方法 采用薄层色谱法,硅胶薄层板,正己烷-醋酸丁酯(98:2)为展开剂,香草醛硫酸试液显色.结果 (牛龙)牛儿酮、呋喃二烯、莪术二酮和莪术烯的Rf值分别为0.11、0.31、0.50、0.60.结论 方法操作简便、准确、重现性好,可用于同时鉴别莪术油中有效成分(牛龙)牛儿酮、呋喃二烯和莪术二酮.
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正交试验优化莪术的乙醇提取工艺研究
目的 优化莪术药材中吉马酮和呋喃二烯的乙醇提取工艺.方法 采用L9(34)正交设计,以吉马酮和呋喃二烯的质量分数为指标,优化莪术的乙醇提取工艺条件.结果 佳的工艺条件为10倍量80％乙醇,提取3次,90 min/次.吉马酮和呋喃二烯的质量分数分别达到0.45、0.57 mg/g.结论 优选的佳工艺能充分有效地提取莪术中有效成分,具有一定推广价值.
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毛细管气相色谱法同时测定保妇康栓中冰片及3种倍半萜含量
目的 建立GC-FID含量测定方法,同时测定保妇康栓中冰片、呋喃二烯、莪术醇和莪术二酮的含量.方法 采用HP-5石英毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm)程序升温,流速为2.5 mL· min-1,分流比为10∶1,进样量为1μL.结果 冰片、呋喃二烯、莪术醇和莪术二酮质量浓度分别在28.0～224.0(r =0.999 8)、16.0～ 128.0 (r =0.999 9)、2.8～22.4(r=0.9998)、4.0～32.0 mg·L-1 (r=0.999 9)内线性关系良好,平均回收率分别为103.7％、91.6％、102.5％、99.5％,RSD分别为4.7％、3.6％、3.9％、4.3％(n=9).结论 本方法可为保妇康栓的质量控制提供科学依据.
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呋喃二烯抑制脑胶质瘤作用
目的 观察呋喃二烯(furanodiene,FDE)纳米乳对颅内移植G422胶质母细胞瘤小鼠化疗后的生存期变化及病理改变,并初步探讨其作用机制,评估FDE纳米乳对胶质母细胞瘤的抑制作用.方法 将G422胶质母细胞瘤细胞植入昆明小鼠脑白质中建模,考察FDE纳米乳及其与卡莫司汀联合组对荷瘤小鼠生存期的影响,观察各组瘤组织的病理结构变化.采用细胞增殖抑制法、Hoechst33258染色法和Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率等方法初步探索FDE对人胶质瘤U251细胞的作用机制.结果 FDE纳米乳(80 mg·kg-1)组治疗荷瘤小鼠生命延长率为28.1％,联合组生命延长率可达69.0％;组织病理学分析显示,FDE纳米乳组肿瘤细胞排列疏松,未见明显侵润;联合组肿瘤体积小,且与周围组织间边界清晰.细胞增殖抑制和Hoechst33258荧光染色实验均表明FDE对U251细胞增殖抑制具有浓度依赖性,流式细胞术结果分析当FDE浓度为18.5 μmol·L-1时,U251细胞早期凋亡率可达71.8％.结论 FDE通过调节胶质母细胞的增殖、早期凋亡等机制,有效抑制小鼠胶质瘤的生长.
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HPLC-DAD法同时测定理冲生髓饮中7种亲脂性成分
目的 建立RP-HPLC法同时测定理冲生髓饮中亲脂性成分的分析方法.方法 理冲生髓饮超临界萃取,HPLC法分析采用Dikma Diamonsil-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),以0.1％磷酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,体积流量为1 mL/min,检测波长210 nm.结果 姜黄素、莪术二酮、莪术醇、拢牛儿酮、呋喃二烯、亚油酸、β-榄香烯分别在0.16 ～8.14 μg/mL、0.27 ～ 13.44 μg/mL、0.10～4.98 μg/mL、0.18～9.10 μg/mL、0.08～4.06 μg/mL、0.21 ～ 10.59 μg/mL、0.28 ～ 14.18 μg/mL范围内线性关系良好.平均加样回收率在96.76％ ～ 100.38％之间.结论 本方法能够准确测定理冲生髓饮7种亲脂性成分.
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HPLC法同时测定灵泽片中牻牛儿酮和呋喃二烯
目的 建立HPLC法同时定量测定灵泽片(乌灵菌粉、莪术、浙贝母、泽泻)中牻牛儿酮和呋喃二烯.方法 Dionex Acclaim 120 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm×5μm),流动相为乙腈和水,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长216 nm;进样量5μL.结果 牻牛儿酮在2.21 ～44.24 μg/mL的质量浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率98.5％,RSD为1.6％;呋喃二烯在2.08 ～41.60 μg/mL的质量浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率97.3％,RSD为1.6％.结论 本方法操作简便,结果准确,可以替代GC法测定牻牛儿酮.
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呋喃二烯对肝脏细胞色素P450酶不同亚型的影响
目的 考察呋喃二烯(furanodiene,FDE)对肝脏微粒体主要的细胞色素P450(CYP)酶活性的影响.方法 采用探针底物法,考察FDE在体外孵育体系中对大鼠和人肝微粒体CYP1A、CYP2A、CYP3A、CYP2C、CYP2D、CYP2E1的抑制作用,并计算相应的IC50值;采用微粒体体外“鸡尾酒”孵育法(cocktail法),考察大鼠经低、高剂量FDE(40 mg·kg-1和160 mg·kg-1)连续灌胃7d,其肝微粒体主要CYP酶活性的变化.结果 FDE对大鼠肝微粒体CYP2D1和CYP2C6/7有较弱的抑制作用,其IC50分别为15.8和23.8 μmol·L-1;对人肝微粒体CYP2C9也有较弱的抑制作用,IC50为26.1 μmol·L-1.与对照组比较,大鼠灌胃40 mg·kg-1 FDE,肝微粒体主要CYP酶活性无显著变化;灌胃160 mg·kg-1后,肝微粒体CYP2E1活性为对照组的164％.结论 FDE对大鼠和人肝微粒体CYP主要亚型的抑制作用较弱;40 mg·kg-1 FDE对大鼠肝微粒体主要CYP酶未显示明显诱导作用,160 mg·kg-1 FDE对肝微粒体CYP2E1有一定的诱导作用.
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莪术油凝胶剂制备工艺研究
目的:确定莪术油凝胶剂优制备工艺.方法:正交设计实验,比较不同种类及含量的凝胶基质、乳化剂、及载药量,以涂展性、稳定性、主成分体外释放时间(以薄层鉴别检查莪术醇、莪术二酮、呋喃二烯释放量)为指标,优选莪术油凝胶剂的制备工艺.结果:以卡波姆934为基质,吐温80为乳化剂,甘油-丙二醇(2:1)为增稠剂,氢氧化钠为pH调节剂,尼泊金乙酯为防腐剂,所制备的凝胶载药高达10％.结论:本制备工艺载药量高,制成的凝胶剂为淡黄色均匀乳剂凝胶,质地细腻,稠度、黏度适宜,易于涂布,不污染衣物,易清洗,制备工艺简便.
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黔产莪术和种子中提取挥发油的具体成分异同比较
目的 研究黔产莪术和莪术种子中挥发油质控成分的检定方法与含量范围.方法 建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定黔产莪术与莪术种子中吉马酮和呋喃二烯含量方法:色谱柱为C18(4,6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～20 min,60％A～95％A;20～35 min,95％A),流速为1 ml/min,检测波长为216 nrn,柱温35℃,进样量10 μl.结果 吉马酮和呋喃二烯的检测浓度分别在4.18～83.6μg/mL(r=0.9999),10.21～204.2 μg/ml (r=1.0000)范围呈现良好的线性关系;吉马酮和呋喃二烯的平均回收率(n=6)分别103.2％(RSD=1.44％,102.2％(RSD=1.28％),重复性实验(n=6)RSD分别为0.90％,2.10％.结论 黔产莪术与莪术种子中提取的挥发油的质量,可以用挥发油中所含吉马酮和呋喃二烯含量进行控制.控制范围是:黔产莪术挥发油中吉马酮,呋喃二烯含量依次是85.87％～ 100.10％,59.07％～78.92％;黔产莪术种子挥发油中吉马酮,呋喃二烯含量依次是65.69％～80.47％,59.94％～68.41％.
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呋喃二烯纳米脂质载体中主药含量及包封率的测定
目的：建立呋喃二烯纳米脂质载体( FN-NLC)包封率和含量测定方法。方法采用微柱离心法分离FN-NLC中游离药物，高效液相色谱法测定药物浓度并计算包封率。结果微柱离心法可以很好地将纳米脂质载体与游离药物分离，空白纳米脂质载体的回收率为98.6%~100.3%，游离药物的吸附率高于99%；纳米脂质载体的包封率约90%。结论葡聚糖凝胶微柱离心法快速便捷，准确性高，适于FN-NLC含量和包封率的测定。
关键词： 呋喃二烯 纳米脂质载体 包封率 葡聚糖凝胶微柱离心法 -
聚乙二醇化聚乳酸羟基乙酸纳米粒的制备及体外抗黏性能评价
目的:制备单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸纳米粒(mPEG-PLGA-NP)并研究其理化性质及体外抗黏性能.方法:以不同mPEG分子量和含量的mPEG-PLGA为载体,采用自乳化溶剂扩散法制备纳米粒,并对其制备处方工艺进行单因素考察.以呋喃二烯为模型药考察纳米粒的载药性能,采用体外黏蛋白结合法评价纳米粒的抗黏性能.结果:确定自乳化溶剂扩散法制备mPEG-PLGA-NP的佳处方,丙酮为有机溶剂,0.2％的聚山梨酯80为乳化剂,mPEG-PLGA的用量为25mg,有机相和水相的体积比为1:15.纳米粒呈球形,外观规整,分布均匀.mPEG-PLGA-NP随着修饰的mPEG含量的增加粒径逐渐减小,Zeta电位的绝对值逐渐减小.载呋喃二烯的mPEG-PLGA-NP包封率为50％,载药量在10％左右.体外黏蛋白结合实验显示,经mPEG修饰的纳米粒抗黏性比未修饰的高6倍,并且随着修饰的mPEG相对分子质量和含量的增加,mPEG-PLGA-NP的抗黏性能逐渐增强.结论:本实验成功制备并表征了mPEG-PLGA-NP,并且mPEG-PLGA-NP具有良好的载药和抗黏性能.
关键词： 单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸 纳米粒 呋喃二烯 黏蛋白 抗黏
