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用分子生物学方法检测微小RNA-543促进非小细胞肺癌细胞的增殖机制
目的 研究微小RNA-543(miR-543)在非小细胞肺癌A549细胞中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡和周期的影响和潜在机制.方法 用荧光实时定量聚合酶链反应法检测非小细胞肺癌A549细胞与正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-543的表达水平.用miR-543抑制物沉默A549细胞中miR-543表达后,分别将转染miR-543-NC的细胞、miR-543抑制物的细胞、miR-543mimics的细胞命名为正常组、沉默组、过表达组.用细胞增殖试剂盒-8检测miR-543对A549细胞增殖的影响,用流式细胞术检测miR-543对A549细胞凋亡及周期的影响,用荧光素酶报告基因实验检测孕激素与脂联素受体3(PAQR3)是否为miR-543的直接靶分子.结果 miR-543的相对表达量:在人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞系A549中分别为1.00±0.05,3.87±0.04,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).正常组与沉默组的A549细胞中miR-543的相对表达量分别为1.00±0.05,0.42±0.07,差异有统计学意义(P＜0.05),说明miR-543 inhibitors可抑制A549细胞中的miR-543表达.连续5 dOD值:正常组和沉默组的细胞分别为0.25±0.05,0.48±0.04,0.73±0.05,0.99±0.05,1.35±0.04;0.25±0.04,0.36±0.04,0.47±0.05,0.58±0.05,0.66±0.04,组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),说明miR-543抑制物可显著抑制A549细胞增殖.A549细胞凋亡率和A549细胞早期凋亡率:正常组和沉默组分别为(1.21±0.37)％,(5.78±1.69)％;(0.84±0.22)％,(2.18±1.28)％,组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),说明miR-543抑制物可显著促进A549细胞凋亡和早期凋亡.A549细胞G1期细胞百分比:正常组和沉默组分别为(51.27±3.19)％,(59.30±4.19)％,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),说明miR-543抑制物阻滞A549细胞周期于G1期.过表达组细胞与野生型(WT)孕激素PAQR3和与突变型PAQR3 (mutant)相结合的荧光素酶报告基因的相对活性分别为0.42±0.05,0.97±0.04,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05);而正常组分别为1.00±0.05,0.94±0.07,两者比较差异无统计学意义,说明PAQR3为miR-543的直接靶分子,miR-543可在A549细胞中直接调控PAQR3的表达.结论 miR-543通过直接靶向抑制PAQR3的表达而调控非小细胞肺癌A549的增殖、凋亡与周期.
关键词： 微小RNA-543 增殖 凋亡 周期 孕激素与脂联素受体3
