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氧化槐果碱对小鼠的镇痛作用及其与GABAA受体的关联
目的:观察氧化槐果碱(oxysophocarpine,OSC)的中枢镇痛作用并初步探讨其镇痛机制.方法:以小鼠温浴热缩尾潜伏期为指标观察不同剂量OSC(0.25,1和4 mg· kg-1)通过鞘内注射给药(intrathe-cally,ith)后的镇痛作用强度及镇痛作用部位;采用侧脑室注射(intracerebroventricle,icv) GABAA受体相关拮抗剂荷包牡丹碱(bicuculine,BIC)、GABAB受体激动剂巴氯芬(baclofen,BAC)及拮抗剂法克洛芬(phaclofen,PHAC)与腹腔注射(intraperitoneal,ip)OSC合用观察其镇痛效果,并分析OSC的镇痛作用机制;利用免疫组化法检测小鼠大脑皮层及海马GABAARα1受体的表达与OSC镇痛作用的关系;Western-Blot法测定OSC对小鼠大脑GABAARα1蛋白表达的影响.结果:与阴性对照组(NS)比较,ith OSC 4 mg· kg-1明显延长小鼠温浴缩尾潜伏期,痛阈提高率高可达29.91％;与NS+ OSC组比较,BIC+OSC组均可显著对抗OSC的镇痛作用;BAC和PHAC对OSC的镇痛作用无影响,提示OSC的镇痛作用与GABAA受体有关;免疫组化结果显示OSC能够上调小鼠大脑皮层及海马GABAARα1的表达;Western-Blot法与0.9％ NaCl溶液组相比,OSC组小鼠大脑皮质中的GABAARα1蛋白表达量明显提高.结论:OSC具有明显的中枢镇痛作用,其镇痛机制可能GABAARα1有关.
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皮质发育不良模型鼠脑病理特征及其致痫机制研究
目的 建立皮质发育不良(CD)大鼠模型,观察行为、脑电及大脑病理特征,探讨病理与致痫机制的关系.方法 建立60Coγ-射线辐照诱导CD动物模型,视频监测;脑电;HE、Nissl、Timm's硫化银和细胞凋亡-Hoechst染色;电境观察.免疫组化采用SABC法,DAB显色.结果 模型鼠少数自发性癫痫发作.额叶皮质及海马EEG示频繁自发的棘波、尖波、棘慢综合波等发放.病理主要表现为皮质和海马结构异常及细胞结构异常,双侧海马CA3区苔藓纤维发芽,海马CA1区结节中有致密浓染的凋亡细胞核.电境示CD鼠脑皮质及海马CA1区结节锥体神经元内线粒体异常、内质网扩张等.GABAARα1阳性细胞在Fr、HL、Par1、Par2、CA1、CA2、CA3区减少(P＜0.05).结论 γ-射线诱导的皮质发育不良大鼠模型是模拟人类神经元异位、室周结节性异位的理想动物模型.
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γ-羟基丁酸对神经细胞缺氧复氧损伤的保护作用与γ-氨基丁酸及其A受体的关系
目的探讨γ-羟基丁酸(GHBA)对大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与γ-氨基丁酸(GABA)和GABA受体A型α1亚型(GABAARα1)阳性神经元表达的关系.方法采用原代培养新生大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤模型,分为缺氧前GHBA干预组、缺氧后GHBA干预组和未干预组,于复氧24h后,观察细胞存活数、GABA和GABAARα1阳性神经元的表达.结果(1)GHBA干预各组皮层神经元细胞存活数、GABA和GABAARα1阳性细胞数均高于相应未干预组(P＜0.05).(2)缺氧前GHBA干预组细胞存活数、GABA和GABAARα1阳性细胞表达数均高于相对应缺氧后干预组(P＜0.05).结论GHBA可通过上调GABA和GABAARα1阳性神经元的表达水平对缺氧复氧皮层神经元发挥保护作用.
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四逆酸枣仁汤合方对失眠大鼠海马GABAARα1、γ2及NKCC1的影响
目的:观察四逆酸枣仁汤合方对失眠大鼠海马GABAARα1、γ2及NKCC1的影响.方法:采用SD大鼠腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制失眠模型,将复制成功的模型大鼠随机分为模型组、西药组、四逆散组、酸枣仁汤组、合方组,并设置空白对照组,各组给予相应药物连续7 d,模型组和正常组生理盐水连续灌胃7 d,并观察各组大鼠的一般活动状态和体质量增量.采用实时荧光定量PCR检测海马中GABAARα1、γ2和NKCC1 mRNA的表达;采用Western Blot的方法检测海马中GABAARα1、γ2和NKCC1蛋白的表达.结果:四逆酸枣仁汤合方可以提高海马中GABAARα1、γ2 mRNA和蛋白的表达,降低海马中NKCC1 mRNA和蛋白的表达.结论:四逆酸枣仁汤合方可以通过调节失眠大鼠海马中GABAARα1、γ2和NKCC1 mRNA和蛋白的表达量来改善大鼠的睡眠节律.
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氧化槐定碱镇痛作用及其对小鼠中枢GABAARα1表达的影响
目的 研究氧化槐定碱(oxysophoridine,OSR)的镇痛作用及其对小鼠全脑和脊髓GABAA受体表达的影响.方法 采用温浴法测定小鼠痛阈,观察OSR(iv)对小鼠热甩尾潜伏期的影响; 采用蛋白印迹实验技术(Western blot)检测 OSR 对小鼠脊髓和脑GABAARα1蛋白表达的影响;采用荧光实时定量PCR方法检测OSR对小鼠脊髓和脑GABAARα1 mRNA表达的影响.结果 OSR(500.0,250.0 mg·kg-1,iv)可明显延长小鼠温浴热甩尾潜伏期(P<0.05,P<0.01),药效可持续60 min以上,大痛阈提高率可达59.82%.OSR(500.0 mg·kg-1,iv)可使福尔马林致痛小鼠脊髓和脑GABAARα1 mRNA和蛋白表达量均明显升高(P<0.01,P<0.05).结论 OSR具有明显的镇痛作用,脊髓和脑GABAARα1参与了OSR的镇痛机制.
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癫痫持续状态NKCC1、 GABAARα1蛋白在大鼠海马的表达及脑源性神经营养因子对其的影响
目的 观察大鼠癫痫持续状态(SE)后72 h内海马组织中NKCC1及GABAAR α1表达的动态变化,以及使用anti-BDNF干预后其表达的变化,探讨NKCC1与GABAARα1在SE中的可能机制及其之间的关系,以及BDNF在SE发生过程中对NKCC1和GABAARα1表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为生理盐水对照组(10只)、SE组(40只)和干预组(40只).制作LiCl-PILO癫痫模型(SE组)和造模前3～4h侧脑室注射anti-BDNF(干预组),选取SE后2、6、24和72h为时间点.观察大鼠在SE诱发过程中的行为学差异、海马NKCC1及GABAARα1蛋白的表达改变、海马各区NKCC1及GABAARα1蛋白的时空分布等特点.结果 干预组SE诱发成功率较SE组低,SE诱发成功后生存状态好、死亡率低.SE组NKCC1蛋白在SE后均高于对照组,干预组NKCC1蛋白表达在2h显著增加,6h达高,24h后开始明显恢复,72 h时接近正常.两组在海马不同亚区,SE后2h开始,NKCC1在CA1及CA3区均显著增高.SE组GABAARα1蛋白在SE后2～6 h表达显著下调,24 h降至低,至72 h突然增高.干预组GABAARα1蛋白表达在SE后2h达低值,6h后上调,72 h达高值,SE组与干预组GABAAR α1在CA1、CA3区的表达呈进行性下调,但干预组变化幅度较小.结论 NKCC1蛋白表达在SE后的上调可能是SE后GABAAR介导的兴奋性作用产生的重要机制之一;A nti-BDNF干预可通过抑制BDNF的表达,延缓癫痫发生并减弱癫痫发作的严重程度.
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GABAARα1在弥漫性皮质发育障碍鼠大脑皮质和海马中的表达
目的:观察γ-射线辐照诱导的弥漫性皮质发育障碍(DCD)模型鼠大脑皮质和海马结构中γ-氨基丁酸A受体α1亚型(GABAARα1)的表达,探讨其与癫痫发生的关系.方法:建立弥漫性皮质发育障碍大鼠模型,察看其行为、EEG改变,喂养到14～16周处死,采用常规HE染色、Nissl染色和Timm's硫化银组织化学方法染色,免疫组织化学方法用SABC法,肉眼观察,光镜下观察大脑皮质和海马结构形态及CA3苔藓纤维发芽情况,大脑皮质和海马中GABAAR α1阳性细胞形态结构及表达情况,免疫组化图象系统分析.结果:F1代组大鼠有自发性癫痫发作,头皮EEG示小波幅节律为主.小脑畸形、胼胝体发育不全、大脑皮质和海马CA1结节状物,皮质下灰质异位,海马异位神经元.双侧海马CA3区均有苔藓纤维发芽,与正常对照组和假手术组比较有显著差异(P＜0.05).GABAARα1阳性细胞在F1代组的Fr、HL、Par1、Par2、CA1、CA2、CA3和DG区GABAARα1阳性细胞较母鼠组及正常对照组显著减少,有统计学意义(P值均＜0.05).结论:大脑皮质和海马结构异常及抑制性GABAAR α1的下调可能是弥漫性皮质发育障碍导致癫痫发作的重要因素之一.
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柴贝止痫汤对颞叶癫痫大鼠GABAARα1 NMDAR1表达的影响
目的:本研究通过比较不同药物干预下对GABAARα1、NMDAR1表达的影响,探讨柴贝止痫汤抑制颞叶癫痫发作的分子病理机制.方法:腹腔注射氯化锂-匹罗卡品制成颞叶癫痫模型,通过免疫组织化学方法和显微图像分析技术检测大鼠颞叶、海马的γ-氨基丁酸受体(GABAARα1)和谷氨酸受体(NMDAR1)的表达.结果:GABAARα1的表达,与空白模型组比较,柴贝止痛汤组、柴贝止痫汤联合卡马西平组癫痫大鼠海马CA1、CA3区及颞叶皮层的GABAARα1亚单位表达均明显增强,有高度显著性差异(P＜0.01),但柴贝止痫汤组与柴贝止痫汤联合卡马西平组之间无显著性差异(P＞0.05).与正常组比较,空白模型组和卡马西平组癫痫大鼠海马CA1、CA3区及颞叶皮层的GABAA Rα1表达均明显减少,有高度显著性差异(P＜0.01).NMDAR1的表达,与正常组比较,柴贝止痫汤组、柴贝止痛汤联合卡马西平组、卡马西平组、空白模型组海马CA1、CA3区及颞叶皮层的NMDAR1表达均明显增高,有显著性差异(P＜0.05),但柴贝止痫汤组、柴贝止痫汤联合卡马西平组、卡马西平组、空白模型组各组之间无显著性差异(P＞0.05).结论:柴贝止痛汤可以提高GABAARα1的表达,而对NMDAR1无明显影响.对GABAARα1表达的调节是柴贝止痛汤控制癫痫的可能机理之一.
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左归丸、右归丸对老年大鼠下丘脑氨基酸类神经递质受体表达的影响
目的:观察左归丸、右归丸对老年大鼠下丘脑NMDAR1、GABAARα1蛋白表达的影响.方法:以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,老年左归丸组和老年右归丸组从20月龄起分别服用左归丸和右归丸药液,另设老年对照组、青年对照组(5月龄).采用Western-blot法检测各组大鼠下丘脑NMDAR1、GABAARα1蛋白表达变化.结果: 与青年对照组相比,老年对照组大鼠下丘脑NMDAR1、GABAARα1表达均明显降低,左归丸和右归丸均能显著提高下丘脑NMDAR1、GABAARα1蛋白表达水平.结论:左归丸和右归丸能通过调整下丘脑氨基酸类神经递质受体表达,改善中枢神经系统功能.
