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HPLC法同时测定钩吻提取物中3种生物碱的含量
目的 建立HPLC同时测定钩吻提取物中钩吻素子、钩吻素甲及16-表伏康树卡平碱3种生物碱含量的方法.方法 采用YMC C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈和0.025 mol· L-1磷酸二氢钾(磷酸调pH至3.0)水溶液进行梯度洗脱;检测波长为254 nm,柱温30C,进样量10 μL,流速1.0 mL· min-1.结果 钩吻素子、钩吻素甲和16-表伏康树卡平碱质量浓度分别在32.2～322、34.4～344、6.2～62 μg· mL-1内与峰面积呈良好的线性关系,加样回收率分别为98.6％、101.1％、98.3％,RSD分别为1.7％、1.3％、1.1％.结论 该方法准确、简便、重现性好,可用于钩吻提取物中钩吻素子、钩吻素甲及16-表伏康树卡平碱的含量测定.
关键词： 钩吻提取物 钩吻素子 钩吻素甲 16-表伏康树卡平碱 含量测定 -
人血浆中钩吻素甲和钩吻素子HPLC-UV测定
目的 建立HPLC法测定人血浆中钩吻素甲(GM)和钩吻素子(KM)的浓度.方法 用Waters HLB-SPE固相萃取小柱提取人血浆中GM及KM.色谱柱为Shim-Pack C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5 μm);流动相为甲醇-水-二正丁胺(58∶42∶0.01);体积流量1.0 mL/min;进样量50μL;柱温30℃;检测波长263 nm.结果 GM和KM在0.05～20tg/mL线性关系良好,低定量限为50 ng/mL (S/N≥10),GM和KM的平均提取回收率分别为90.88％、87.84％,平均方法回收率分别为98.65％、96.31％,平均日间精密度RSD分别为9.81％、10.63％,平均日内精密度RSD分别为7.79％、8.24％.含GM和KM的人血浆在室温25℃避光的条件下保存12h、在4℃冰箱保存2d、在-20℃冰箱保存15d、-20℃冰箱反复冻融3次的条件下,低、中、高3个质量浓度(0.05、5.0、20 tg/mL)的GM和KM回收率均在90％以上.结论 建立的人血浆中GM和KM的HPLC测定方法灵敏度高、血浆用量少、操作简便、结果准确可靠,适用于钩吻制剂药动学研究和钩吻中毒时定性和定量分析.
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HPLC法同时测定钩吻茎中胡蔓藤碱丙等6个生物碱的含量
目的:建立HPLC法同时测定钩吻茎中胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱和胡蔓藤碱乙的含量,并比较评价各产地钩吻生物碱含量的差异.方法:采用外标法进行测定,色谱柱为ZORBAXBonus-RP Analytical(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1％甲酸水梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长254 nm,柱温30℃.分别测定32批钩吻茎,并进行聚类分析.结果:胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙6个成分的线性范围分别为1.00～50.06μg·mL-1(仁1.000 0)、1.13～50.85 μg· mL-1(r=0.999 8)、1.16～52.20 μg· mL-1(r=1.000 0)、1.16～52.20 μg· mL-1(r=0.999 7)、1.06～50.88 μg· mL-1(r=0.999 7)和1.01～50.50 g· mL-1(r=1.000 0),平均加样回收率为93.1％～103.8％(RSD为2.0％～2.9％).不同产地样品中钩吻茎中胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素已、钩吻绿碱和胡蔓藤碱乙含量范围分别为0.136～2.202、0.564～2.686、0.718～3.553、0.160～2.025、0.151～3.493、0.288～4.700mg·g-1.结果显示不同产地的钩吻6个成分含量均有差异,32批不同产地钩吻药材可聚为6大类.结论:该法可为钩吻多指标成分的质量评价提供参考.不同产地钩吻的各个化学成分的含量呈现明显分类特点,为钩吻地区鉴定提供依据.
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LC-MS/MS法同时检测生物检材中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己
目的 建立准确、灵敏的生物检材中钩吻素子、钩吻素甲及钩吻素己的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,并进行方法学验证.方法 以士的宁为内标,血液、尿液及肝组织样品经1%氢氧化钠溶液碱化后用乙酸乙酯提取,采用ZORBAX SB-C18柱(150 mm×2.1 mm,5μm)分离,以甲醇-20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液(含0.1%甲酸和5%乙腈)为流动相进行梯度洗脱.定性定量分析采用电喷雾正离子化(ESI+)、多反应监测模式.结果 血液、尿液及肝组织中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己在相应的线性范围内线性良好,相关系数(r)>0.9950,检出限分别为0.1 ng/mL(或0.1 ng/g)、0.1 ng/mL(或0.1 ng/g)及0.01 ng/mL(或0.01 ng/g),各生物碱提取回收率为61.9%~114.6%,准确度为92.4%~114.3%,日内、日间精密度的相对标准偏差均不超过11.0%.结论 本方法选择性好、灵敏度高,适用于同时检测生物体液和组织中的钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己,可为钩吻中毒的临床诊治和法医学鉴定提供有效的技术支撑.
