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基于DNA的汞离子检测研究进展
汞是一种分布广泛的剧毒污染物,即使在极低浓度下也会对环境与公众健康造成极大危害,因此大量技术被应用于快速简便地检测汞离子.DNA中的胸腺嘧啶(T碱基)被证明可与汞离子发生反应形成T-Hg-T结构,其稳定性要远远强于T碱基与其互补碱基的相互作用,一系列利用多T碱基DNA序列的新方法被用于检测汞离子.现介绍基于DNA的比色、荧光、纳米金和电化学的汞离子检测方法及发展现状.
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基于核酸适配体-金纳米粒子比色传感器快速检测食品中赭曲霉毒素A
本研究以核酸适配体为识别元件实现对赭曲霉毒素A(OTA)的高选择性识别,以及采用金纳米粒子做为比色探针,建立了适用于OTA快速检测的比色适配体传感器.研究结果表明,该比色传感器对OTA具有较高的灵敏度和特异性,操作简单快速,能用于实际食品样品中OTA的快速筛查检测;该比色传感器在520nm和650nm下吸光度的比值(A520/A650)与OTA浓度在0.05～5μM的范围内呈线性相关,检测限为0.02μM.
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基于核酸适配体技术对清开灵注射液中胆酸的研究
目的 利用免疫磁珠分离技术和核酸适配体相结合的方法剔除清开灵注射液中胆酸小分子,借此研究胆酸在清开灵注射液对细胞脱颗粒中的作用.方法 将标记有生物素的胆酸的核酸适配体与表面有链霉亲和素包被的磁珠偶联,然后将偶联物与清开灵注射液进行孵育,使胆酸与核酸适配体特异结合,后利用磁性分离将清开灵注射液中的胆酸剔除.对胆酸剔除前后的清开灵注射液进行细胞脱颗粒实验,以研究其类过敏反应的性质.结果 磁珠与适配体的偶联反应具有浓度依懒性.适配体剔除清开灵注射液中的胆酸也具有浓度依懒性.剔除部分胆酸后的清开灵注射液对细胞的脱颗粒作用,与清开灵注射液相比,有显著下降.结论 利用胆酸的核酸适配体与免疫磁珠分离技术能够剔除清开灵注射液中的胆酸,为研究小分子物质在中药注射液中的作用提供了新的研究方法.
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针对于白蛋白的新型核酸适配体的筛选与鉴定
目的 研发能特异结合白蛋白的DNA核酸适配体,为去除实验样品中的白蛋白提供新型技术手段.方法 体外合成全长为59个碱基并含有21个随机寡核苷酸的单链DNA文库,以白蛋白为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从单链DNA文库中筛选能特异结合白蛋白的核酸适配体;用流式细胞计量术来检测核酸适配体的富集程度、适配体与白蛋白的结合特性;用MFold软件预测其二级结构.结果 经过多轮筛选得到了能特异识别白蛋白的DNA核酸适配体A6,其Kd值为77.4 nmol/L,且基本不结合卵清蛋白、免疫球蛋白IgG等对照蛋白.结论 针对于白蛋白的DNA核酸适配体A6能选择性识别白蛋白,在去除实验样品中的白蛋白方面具有应用潜能.
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核酸适配体修饰的铁纳米粒对HER2阳性乳腺癌的靶向热疗效应
目的 研发能提高HER2阳性乳腺癌热疗效应的核酸适配体-铁纳米粒子复合体(AptNPs),探索肿瘤靶向治疗的全新途径.方法 利用生物素和链霉亲和素的结合反应构建AptNPs,用动态光散射粒径仪表征其尺寸分布,用流式细胞仪和相差显微镜检测AptNPs的靶向结合能力,MTS法测其对磁场下抗肿瘤热疗效果的影响.结果 通过生物素-亲和素反应构建了AptNPs,其平均直径为333.7 nm,对HER2阳性细胞有较强的结合,对HER2阴性细胞没有结合.此外,AptNPs可显著提升对HER2阳性细胞的热疗杀伤率(P＜0.05),但对HER2阴性细胞的热疗后杀伤率影响较小.结论 AptNPs能靶向性地提升针对HER2阳性肿瘤细胞的热疗效率,在研发新型肿瘤靶向热疗方面具有潜在应用价值.
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HIV-P24核酸适配体的筛选
目的 利用SELEX技术筛选HIV-P24的核酸适配体,为艾滋病的诊断和治疗奠定基础.方法 以重组P24为筛选靶,用SELEX技术从随机寡核苷酸库中筛选与HIV-P24结合的寡核苷酸,利用凝胶阻滞实验鉴定第12轮筛选到的寡核苷酸与HIV-P24的结合,再用Dot-blot法筛选出与HIV-P24结合的核酸适配体,并检测核酸适配体识别HIV-P24的特异性.结果 Dot-blot筛选到5条与HIV-P24有较强结合能力的核酸适配体,且均为不同的序列.特异性检测显示,18和26号配体只与HIV-P24特异性结合,而与人血清白蛋白、牛血清白蛋白和脱脂奶粉均无明显结合.结论 成功筛选到2条特异结合HIV-P24的核酸适配体,为其应用于艾滋病诊断和治疗提供了实验基础.
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MUC1靶向性载药纳米粒的构建及其体外抗肿瘤效应的评估
目的 构建MUC1靶向纳米粒,并在体外评估其抗肿瘤效应.方法 采用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)制备包载紫杉醇的纳米粒,并在表面偶联具有MUC1蛋白靶向性的核酸适配体.紫外分光光度法、动态光散射法测定MUC1靶向载药纳米粒的基本表征;以MUC1过表达的乳腺癌细胞MCF-7为实验组,肝癌细胞HepG2为对照组,用流式细胞仪检验纳米粒的选择性,MTS法评估其杀伤效果和IC50.结果 MUC1靶向载药纳米粒粒径(225.3±9.2)nm,药物包封率83.6%±1.7%,在体外可以特异性地被MUC1+癌细胞摄入,对MCF-7细胞杀伤作用显著强于普通载药纳米粒(P<0.01),IC50为1.52 mg/L.结论 该靶向纳米粒可以在体外特异性地增加MUC1+肿瘤细胞对纳米粒的摄人,降低IC50值,提高抗化疗药物对肿瘤细胞的杀伤效率.
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核酸适配体修饰的铁纳米粒对EGFR阳性肿瘤细胞的靶向热疗效应
目的 构建一种核酸适配体修饰的铁纳米粒子(Apt-NP),并研究其对表皮生长因子受体(EGFR)阳性的人胶质瘤细胞的靶向热疗效应.方法 用流式细胞术检测核酸适配体的特异性,用生物素与链霉素的结合反应的原理构建Apt-NP,用DNA探针杂交检测核酸适配体是否结合在纳米粒子表面,用动态光散射粒径仪观察Apt-NP的尺寸分布,普鲁士蓝染色检测Apt-NP的靶向结合能力,通过检测磁场条件下细胞释放的LDH来评估Apt-NP的靶向热疗效应.结果 Apt-NP的平均直径为574 nm,较强结合EGFR阳性U251肿瘤细胞.此外,在磁场条件下,Apt-NP可以显著提升对EGFR阳性U251肿瘤细胞的热疗杀伤效应(P＜0.05).结论 Apt-NP可以显著提升针对EGFR阳性U251肿瘤细胞的热疗杀伤作用,在肿瘤靶向热疗方面具有潜在的应用价值.
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核酸适配体在肿瘤学中的应用研究进展
核酸适配体是一类通过指数级富集的配体进化技术(SELEX)获得的能以较高的亲和力与各类生物靶标特异性相结合的单链DNA或RNA.利用细胞-SELEX (Cell-SELEX)技术筛选出来的核酸适配体越来越多的作为靶向分子应用在肿瘤细胞检测、靶向药物载体和siRNA的研究中.体内外研究证明,核酸适配体作为靶向分子能用于肿瘤细胞的体外检测和肿瘤组织的体内成像,并能显著提高药物或siRNA对肿瘤细胞的杀伤作用.
关键词： 核酸适配体 Cell-SELEX 肿瘤细胞检测 靶向药物载体 siRNA -
基于核酸适配体SERS技术快速检测大肠埃希菌O157∶H7的研究
目的 基于核酸适配体表面增强拉曼技术(SERS),建立一种快速检测大肠埃希菌O157∶H7的方法. 方法 将大肠埃希菌O157∶H7与其特异性适配体共孵育,采用原位还原纳米银方法在大肠埃希菌O157∶ H7-适配体表面原位还原纳米银颗粒,形成纳米银壳,通过SERS技术特异性检测目标细菌. 结果 在500～1 900 cm-1范围内采集拉曼信号,在735 cm-1、1 331 cm-1、1 578 cm-1处发现拉曼特征峰.对检测到的拉曼信号峰进行归属分析,735 cm-1来自胞嘧啶与尿嘧啶的代谢产物,1 331 cm-1归属于鸟嘌呤代谢产物,1 578 cm-1归属于蛋白质中酰胺Ⅰ和酰胺Ⅲ.将大肠埃希菌O157∶H7、单增李斯特氏菌、肠炎沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠埃希菌DH5α混合,通过SERS可快速检出目标细菌大肠埃希菌O157∶H7.试验的重复性良好,低检测限为10 cfu/ml. 结论 基于核酸适配体SERS技术,建立的大肠埃希菌O157∶H7快速检测方法的特异性和灵敏性高、操作简单、省时,费用低,可用于临床大肠埃希菌O157∶H7感染的快速检测.
关键词： 核酸适配体 原位还原纳米银 表面增强拉曼光谱 大肠埃希菌O157∶H7 -
基于DNA的无机纳米材料组装
纳米材料由于其独特的光、热、电、磁学性质,已数年持续成为研究热点.而生物分子,包括多肽、核酸适配体、蛋白质以及DNA,与纳米材料间的相互作用也引起了国内外研究工作者的持续关注.而利用生物分子的高度选择性和特异性来诱导纳米材料组装,对于构建纳米结构单元的器件和实现纳米材料的周期性组装,成为获得有序的纳米结构为有效的方法之一[1],也已经成为纳米科技领域所面临的巨大挑战[1-3].
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核酸适配体分子信标探针在肿瘤研究中的应用进展
核酸适配体是从随机寡核苷酸文库中筛选出来,可以高特异性和高亲和力与靶点结合的寡核苷酸序列,具有靶点范围广、相对分子质量小、化学稳定性高、易于合成和修饰等优点.分子信标是一种具有特殊发夹结构的新型荧光探针,具有背景信号低、灵敏度高、特异性识别强、操作简单以及不必与未反应的探针分离即可实时检测等优点.将核酸适配体的分子识别特性和分子信标的光学检测性能相结合,在生命科学研究领域有着良好的应用前景.但核酸适配体的应用研究仍处于初级阶段,还有许多问题需要解决,为解决这些问题,进一步拓展核酸适配体分子信标在生命科学领域,特别是肿瘤领域的应用,需要科学工作者不断的努力和突破.同时随着核酸适配体的发展,越来越多与不同靶点特异性结合的核酸适配体将被筛选出来,并被应用于生命科学研究领域.本文主要对以核酸适配体为基础的分子信标探针在肿瘤研究中的应用进展进行综述.
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核酸适配体及其在生物医学研究中的应用
核酸适配体是经过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选得到的能与金属离子、小分子、生物大分子,甚至整个细胞高专一性和亲和性结合的ssDNA或RNA分子.核酸适配体不仅具备抗体分子的识别特性,凡是涉及抗体的诊断领域,几乎都可以用核酸适配体来代替,而且还具备自己独特的优异性能,所以对核酸适配体的研究引起了许多科学家的关注.本文介绍了核酸适配体及其相关筛选技术(SELEX),综述了核酸适配体近年来在治疗新药、药物运输、癌细胞检测、生物成像、生物标志物的发现、毒品检测、抗病毒等生物医学领域中的应用,后对核酸适配体在生物医学上的应用前景进行了展望.
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适配体标记的阿霉素对于人胶质瘤U251细胞凋亡的影响
目的 构建一种核酸适配体(aptamer,Apt)标记的阿霉素(doxorubicin,DOX)靶向药物Apt-DOX,并研究其对表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)阳性的人胶质瘤U251细胞凋亡的影响.方法 利用紫外分光光度计检测阿霉素连接核酸适配体前后紫外线特征吸收峰位置的变化;CCK-8法检测Apt、DOX和Apt-DOX对U251细胞增殖的影响,并以EGFR阴性的人乳腺癌MDA-MB-231细胞为对照组;Annexin V-FITC/PI双染法对DOX和Apt-DOX处理的U251和MDA-MB-231细胞进行染色,然后通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 Apt的连接对DOX的紫外吸收峰位置没有产生影响,DOX对U251和MDA-MB-231细胞均有一定的杀伤效果,并具有浓度和时间依赖性,而与DOX相同浓度的Apt对U251和MDA-MB-231细胞的活性均没有产生明显影响,Apt-DOX相比单独的DOX更加明显抑制U251细胞的活性(P＜0.01),而Apt-DOX对MDA-MB-231细胞活性的影响与DOX的差异无统计学意义.流式双染结果显示Apt-DOX对MDA-MB-231细胞的凋亡率与DOX的相似,分别为14.6％和13.5％,而Apt-DOX对U251细胞的凋亡率显著高于DOX,为42.7％.结论 Apt-DOX可以显著靶向EGFR阳性U251细胞.相对单独的DOX,Apt-DOX对U251细胞有明显的细胞活性抑制效果,并诱导其凋亡.
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核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用
核酸适配体是利用指数富集的配基系统进化技术体外筛选得到的单链DNA或RNA片段,能高亲和、高特异性地结合氨基酸、糖类、蛋白质、细胞、细菌和病毒等多种目标物质,具有操作简单、灵敏度高和检测成本低等优点.在海洋生物毒素的检测和预防中,核酸适配体技术已显示出巨大的潜力.本文概述了核酸适配体技术的基本原理、目前的应用现状及优势,分析了海洋生物毒素分子的特点及现有检测手段的局限,并对核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用前景进行了展望.
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核酸适配体在肿瘤靶向治疗中的研究进展
理想的肿瘤治疗制剂能特异性地靶向于肿瘤细胞,起到安全有效的药物传递作用.核酸适配体非同寻常的分子识别能力使得其成为具前景的生物靶向分子.笔者从结合方式、载体种类等方面,以有代表性的核酸适配体与靶向制剂结合文献资料为依据,进行归纳、总结,综述了近5年来核酸适配体用于靶向肿瘤制剂构建的新研究进展,并对存在的问题进行了分析与展望.
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核酸适配体在临床诊断领域中的研究进展
核酸适配体是一类能够高灵敏、高特异性地与靶标相结合的寡核普酸序列,包括小分子化合物、细胞膜表面受体、蛋白质、金属离子等,具有超强的结合能力、低免疫原性、高稳定性等特点,同时能与各种药物及载体结合,构建多元复合靶向给药系统,目前已用于肿瘤的靶向治疗.本文综述核酸适配体在临床诊断领域中的新研究进展,为肿瘤疾病的靶向治疗提供新的干预方向,同时也为核酸适配体更为广阔的应用提供参考.
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核酸适配体在真菌毒素检测中研究进展
核酸适配体是指在体外利用指数富集的配基系统进化技术筛选得到的核酸(DNA或RNA)片段.基于核酸适配体的检测方法具有特异性高、稳定性好、易于修饰等优点,在真菌毒素检测领域得到了广泛的关注和应用.本文在传统检测方法的基础上,着重介绍核酸适配体在真菌毒素检测领域中的研究进展,并提出目前存在的问题及发展趋势.
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靶向乳腺癌的核酸适配体应用研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,实现乳腺癌的早期诊断和早期治疗意义重大.核酸适配体是经过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)筛选得到的寡核苷酸序列,在肿瘤诊断及治疗方面拥有良好的应用前景.本文对靶向乳腺癌的核酸适配体及适配体作为载体和探针在乳腺癌诊疗中的作用进行综述.
关键词： 乳腺癌 核酸适配体 指数富集配体系统进化技术 诊断 -
核酸适配体药物生物分析方法的研究进展
目的 结合目前核酸适配体药物的体内研究,综述核酸适配体药物的生物分析方法.方法 查阅国内外近年相关文献42篇,对其进行归纳、总结,从核酸适配体药物研究概况、分析样品前预处理差异及各方法的优缺点等方面进行了介绍.结果 应用于核酸适配体药物定量的生物分析方法各有其优缺点,应用时应根据具体情况合理选择灵敏度高、专属性强的方法.结论 随着核酸适配体技术的发展,不断有崭新的核酸适配体药物诞生、完善、进入临床阶段并终成为上市药物,针对其体内定性和定量的分析方法也将越来越成为研究热点.
