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龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性及动力学影响的研究
目的 探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的芳香胺Ⅳ-乙酰化转移酶(NAT)1的影响.方法 采用高效液相色谱法(HPLC),以对氨基笨甲酸(PABA)为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量反应NAT1酶的活性.观察不同浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响;龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响;通过改变底物PABA浓度,采用双倒数作图法,以底物PABA浓度的倒数(1/S)对NAT1反应速率的倒数(1/V)作直线,得出回归方程,计算K<,m>和<,max>.结果 在NAT1酶活性测定中,龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性;随着作用时间的增加Ac-PABA生成的量逐渐增加,但在相同作用时间段龙葵碱能显著降低Ac-PABA生成的量.动力学研究表明,以PABA为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的K<,m>和V<,max>分别为(1.04 x 10<'-3>±8.36×10-5)mmol·L<'-1>、(1.64×10<'-4>±9.57×10<'-6>)nmol·10<'6>cells<'-1>,龙葵碱组的K<,m>和K<,max>分别为(1.06×10<'-3>±6.97×10<'-5>)mmol·L<'-1>和(1.48×10<'-4>±4.28×10<'-6>)nmol·10<'6>cells<'-1>·h<'-1>.对于HepG2细胞质,阴性对照组的K<,m>和V<,max>分别为(3.32×10<'-1>±2.35×10<'-4>)mmol·L<'-1>、(2.60×10<'-3>±6.79×10<'-6>)nmol·h<'-1>·mg pro<'-1>,龙葵碱组的K<,m>和K<,max>分别为(3.35×10<'-1>±1.66×10<'-4>)mmol·L<'-1>和(2.22x10<'-3>±8.12×10<'-6>)nmol·h<'-1>·mg(Pro)<'-1>,经统计学处理表明,对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的K<,m>没有差异,而V<,max>差异显著结论 龙葵碱是HepG2细胞NAT1酶的非竞争性抑制剂.龙葵碱通过作用于NAT1与PABA结合位点以外的其他位点抑制NAT1酶的活性而诱导HepG2细胞凋亡.
关键词： 龙葵碱 HepG2人肝癌细胞 N-乙酰化转移酶 来氏常数 最大反应速率 -
青藤碱抗肝癌作用机制研究
目的:探讨青藤碱对HepG2人肝癌细胞株的增生和转移能力的多靶向作用机制.方法:运用噻唑蓝还原法(MTT)来检测青藤碱对HepG2人肝癌细胞株的抗增殖作用,而同时运用Transwell 法来检测药物对于细胞转移能力的作用变化;间接荧光标记法测定经过不同浓度的青藤碱作用后,细胞内活性氧水平的变化;利用酶抑制动力学方法,研究青藤碱对逆转录酶的抑制作用;再通过逆转录聚合酶链式反应和蛋白质印迹的实验来检测HepG2细胞中凋亡蛋白水平的变化.结果:青藤碱对HepG2人肝癌细胞株具有抗侵袭及转移的治疗作用.MTT检测结果显示青藤碱对于HepG2人肝癌细胞抗增殖作用明显,半抑制浓度IC50为(15.35±2.43)μmol/L;而Transwell法的结果显示青藤碱对癌细胞有较好的抗转移能力;青藤碱是一种有效的逆转录酶抑制剂,IC50为(21.32±2.43)μmol/L;荧光标记法检测细胞内活性氧水平随青藤碱呈浓度依赖性升高;蛋白水平测定显示青藤碱上调HepG2人肝癌细胞CASP3、CASP9、CAV1和下调SOX2的表达. 结论:青藤碱可能是通过上调CASP3、CASP9、CAV1和下调SOX2的表达,进而抑制人肝癌细胞的增殖和转移,调节相关信号通路,终在分子水平证明青藤碱对HepG2人肝癌细胞的抑制作用.
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龙葵碱对HepG2人肝癌细胞NAT酶动力学常数的影响
目的 探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及大反应速率Vmax的影响.方法 MTT法测定龙葵碱对消化系统SGC-7901人胃癌、HepG2人肝癌、Ls-174人大肠癌3种肿瘤细胞株的细胞毒作用,采用高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在以HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法,以底物2-AF浓度的倒数1/S对NAT反应速率的倒数1/V作直线,得出回归方程,计算Km和Vmax.结果 MTT法测定表明龙葵碱对HepG2人肝癌细胞比较敏感,酶动力学研究表明,以2-AF为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为(2.37×10-3±8.37×10-5) mmol·L-1、(9.16×10-4±7.54×10-5) nmol·106 cells-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(2.22×10-3±9.05×10-5) mmol·L-1和(5.14×10-4±3.72×10-5) nmol·106 cells-1.对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为(8.95×10-3±2.61×10-4) mmol·L-1、(2.55×10-6±1.92×10-8) μmol·min-1g-1 Pro,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(9.48×10-3±3.63×10-4) mmol·L-1和(2.43×10-6±1.32×10-8) μmol·min-1 g-1 Pro,统计学表明对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax差异有显著性(完整细胞P<0.01,细胞质P<0.05).结论 龙葵碱是HepG2人肝癌细胞NAT酶2-AF底物的非竞争性抑制剂.
关键词： 龙葵碱 HepG2人肝癌细胞 NAT酶 米氏常数 最大反应速率 -
CyclinD1和Ki-67在茉莉酸甲酯抑制人肝癌细胞HepG2增殖作用中的表达变化
目的:探讨CyclinD1、Ki-67蛋白在茉莉酸甲酯(MeJA)抑制人肝癌细胞HepG2细胞增殖过程中的表达变化.方法:免疫细胞化学检测HepG2细胞CyclinD1、Ki-67蛋白的表达.结果:MeJA作用HepG2细胞48h后,CyclinD1、Ki-67蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).结论:MeJA通过下调CyclinD1、Ki-67蛋白表达,使细胞周期相关蛋白的表达发生改变,减少处于增殖期的细胞数目,从而发挥抗肝癌作用.
关键词： 肝肿瘤 HepG2人肝癌细胞 CyclinD1蛋白 Ki-67蛋白 茉莉酸甲酯 -
猪牙皂皂苷对HepG2细胞的抗肿瘤作用研究
目的:以HepG2人肝癌细胞为模型,研究猪牙皂皂苷的抗肿瘤作用,为进一步的机理研究提供新的依据.方法:猪牙皂皂苷由传统化学方法从猪牙皂中分离提取;CCK-8法检测猪牙皂皂苷对HepG2细胞增殖的影响;DAPI染色观察细胞凋亡形态;Annexin V/FITC双染法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期.结果:猪牙皂皂苷旱浓度和时间依赖抑制HepG2细胞增殖,诱导HepG2细胞凋亡,并能将HepG2细胞的细胞周期阻滞在G2/M期.结论:猪牙皂皂苷具有显著的抗肿瘤作用.
关键词： 猪牙皂皂苷 HepG2人肝癌细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期 -
白藜芦醇靶向DNA拓扑异构酶Ⅰ诱导恶性肝癌细胞凋亡机制的研究
目的 探讨白藜芦醇对HepG2人肝癌细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ(TOP Ⅰ)的活性的影响及对HepG2人肝癌细胞生长的抑制作用.方法 采用MTT法观察白藜芦醇对HepG2人肝癌细胞生长的抑制作用及对LO2人正常肝细胞毒性作用,利用琼脂糖凝胶电泳法测定白藜芦醇对TOPⅠ活性的影响,在此基础上,利用分子对接观察白藜芦醇与TOP Ⅰ的相互作用机制,进一步探讨白藜芦醇对HepG2人肝癌细胞侵袭及其凋亡蛋白Caspase 3活性的影响.结果 白藜芦醇对HepG2人肝癌细胞的生长和转移有抑制作用,半抑制率(IC50)为(9.657±0.93)μmol·L-1,且对LO2人正常肝细胞具有低毒性;琼脂糖凝胶电泳显示白藜芦醇对TOP Ⅰ活性的有较好的抑制作用;分子模拟结果表明,白藜芦醇能够优先结合到TOPⅠ的活性中心附近,并与催化基团ARG364形成氢键;Caspase 3活性检测结果表明,白藜芦醇能显著提高HepG2人肝癌细胞中凋亡蛋白Caspase 3活性(P＜0.01).结论 白藜芦醇能够通过对TOPⅠ的活性起到可逆的竞争性抑制作用,而使肿瘤细胞DNA单链解旋的速率降低,终对诱导了HepG2人肝癌细胞的凋亡起到重要作用.
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茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用机制的实验研究
目的 探讨茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡的作用机制.方法 琼脂糖凝胶电泳检测HepG2细胞凋亡,RT-PCR检测HepG2细胞中Bcl-2、Bax mRNA表达,免疫细胞化学检测HepG2细胞Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 MeJA作用HepG2细胞48 h后:DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显典型"梯"状条带;细胞Bcl-2 mRNA表达水平明显下降(P<0.05)而Bax mRNA表达水平明显增高(P<0.05);Bcl-2蛋白在胞浆中表达水平明显降低(P<0.01)而Bax蛋白表达水平显著增加(P<0.01).结论 茉莉酸甲酯通过降低抑凋亡相关基因Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,上调促凋亡相关基因BaxmRNA及蛋白的表达,从而诱导HepG2细胞凋亡的发生.
关键词： 茉莉酸甲酯 全反式维甲酸 HepG2人肝癌细胞 凋亡 -
茉莉酸甲酯抑制人肝癌细胞HepG2增殖作用的实验研究
目的 初步探讨MeJA是否具有抑制肝癌细胞HepG2增殖的作用.方法 体外培养HepG2细胞;MTT法进行茉莉酸甲酯有效作用浓度筛选,确定MeJA作用浓度(1/2IC20);HE染色观察各组细胞形态变化;透射电镜观察细胞超微结构.结果 不同浓度MeJA作用不同时间对HepG2细胞增殖的抑制作用呈时-效和量-效依赖关系;MeJA工作浓度(1/2IC20)为4.3μmol/L,作为后续实验中MeJA的工作浓度;HE染色见各处理组出现不同程度贴壁细胞数量减少,悬浮细胞增多;透射电镜发现部分细胞出现细胞连接消失,微绒毛消失,胞质密度增加,可见大量凋亡小体形成.结论 MeJA具有抑制肝癌细胞增殖,诱导凋亡的作用.
关键词： 茉莉酸甲酯 全反式维甲酸 HepG2人肝癌细胞 增殖
