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两面针、川芎、生首乌内生真菌的分离纯化及抑菌性研究
采 用 组 织 块 法 从 两 面 针(Zanthorμlum nitidum(Roxb.) DC)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)生首乌(Fallopia multiflora)组织中分别分离得到7、11、6株内生真菌,以大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎球菌(Diplococcus pneumoniae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、地衣杆菌为供试菌种,对所有两面针、川芎生首乌内生真菌进行抑菌性试验,结果显示,两面针3株内生真菌至少对1株测试病原菌有抑制作用,2株内生真菌对5株测试病原菌都有抑制作用; 川芎6株内生菌至少对一株测试病原菌有抑制作用,3株内生真菌对5株测试病原菌都有抑制作用,生首乌 5内生菌至少对一株测试病原菌有抑制作用,3株内生真菌对5株测试病原菌都有抑制作用.说明从两面针、川芎、生首乌内生真菌中可选择出对病原真菌具有良好抑制作用的真菌菌种.
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肉桂、石韦内生真菌的分离纯化及抑菌性研究
采 用 组 织 块 分 离 法 从 肉 桂(Cinnamomum cassia Pres1)、石韦(Pyrrosia lingua(Thunb)Farwell)组织中分别分离得到7、24株内生真菌,以大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎球菌(diplococcus pneumoniae)、金 黄 色 葡 萄 球 菌 (Staphylococcus aureus)为供试菌种,对所有肉桂(Cinnamomum cassia Pres1)内生真菌、所有石韦(Pyrrosia lingua(Thunb) Farwell)内生真菌进行菌饼法抑菌试验,有抑菌效果的菌株继续进行滤纸片法抑菌试验,结果显示,肉桂3株内生真菌至少对1株测试病原菌有抑制作用,1株内生真菌对3株测试病原菌都有抑制作用;石韦12株内生菌至少对一株测试病原菌有抑制作用, 4株内生真菌对3株测试病原菌都有抑制作用.
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产白藜芦醇葡萄内生菌的分离与鉴定研究
白藜芦醇属于多酚类化合物的一种,桑堪、花生、葡萄以及虎杖中均含有白藜芦醇.多个研究中均表明,其对于缺血性损伤、心血管疾病、癌症等疾病可起到一定的预防作用与舒缓作用.就此,本次研究对白藜芦醇葡萄中内生菌所应用的分离方法、鉴定方法进行探讨.
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中药内生菌的研究进展
目的 综述植物内生菌在中药领域的研究进展.方法 查阅了近几年来相关的文献,并进行分析总结.结果 中药内生菌中活性物质结构类型很多,几乎涵盖天然药物化学中所有的有效成分,如生物碱类、蒽醌类、黄酮类、苯丙素类、甾体及萜类、苷类、多肽类等等.结论 中药内生菌资源丰富,应用前景广阔,是新药研发的宝贵资源.
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铁皮石斛内生菌的分离及代谢产物活性的初步研究
目的:分离纯化铁皮石斛的内生菌,对其代谢产物进行抑菌活性和抗肿瘤活性的研究.方法:采用组织块分离法分离铁皮石斛的内生菌,通过形态学观察,初步鉴定分离的内生菌.采用对峙法和牛津杯法分别对内生菌及其发酵代谢产物进行抑菌实验;采用MTT法检测内生菌TG2代谢产物的抗肿瘤活性.结果:共分离得到内生菌31株,其中根9株、茎17株、叶5株.内生菌中真菌22株,细菌9株;且细菌中革兰氏阴性菌7株,革兰氏阳性菌2株.所得31株铁皮石斛内生菌,其中有14株对至少1种供试菌有抑菌作用,占总分离菌株的45.16％.8株内生菌代谢产物的乙酸乙酯相对至少1种供试菌有抑菌作用,占总分离菌株的25.81％.MTT实验表明,内生菌TG2代谢产物具有良好的抗肿瘤效果,且呈剂量依懒性.结论:铁皮石斛含有丰富的内生菌资源,部分内生菌具有代谢抑菌和抗肿瘤活性物质的特性,这可为寻找新型抑菌抗肿瘤物质提供资源.
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半夏内生菌的分离与初步鉴定
目的:探讨半夏内生菌类群的多样性.方法:采用平板分离法分离半夏的内生真菌、细菌、放线菌,同时采用点植法、插片法和印片法对分离真菌菌株进行分类鉴定.结果:从多年生和一年生的半夏根茎叶样品中共获得内生菌84株,其中内生真菌48株、细菌31株、放线菌5株,内生真菌经形态观察分类鉴定为4科、15属.结论:半夏内生菌多样性丰富,同时不同部位内生菌的数量、种类及分布存在差异.
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白茅内生菌Chaetomium globosum的化学成分研究
采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对白茅内生菌Chaetomium globosum固体发酵产物的化学成分进行分离纯化,获得9个化合物.利用高分辨质谱、核磁共振谱及文献比对的方法,将上述化合物分别鉴定为chaetoglobosin F(1),chaetoglobosin Fex(2),chaetoglobosin E(3),cytoglobosin A (4),penochalasin C(5),isochaetoglobosin D (6),N-benzoylphenylalaninyl-N-benzoylphenylalaninate (7),尿嘧啶(8),5-甲基尿嘧啶(9),其中化合物7为首次从毛壳菌中分离得到.采用MTT法测定化合物的体外细胞毒活性,结果显示,化合物1,3,4,5对人宫颈癌细胞株HeLa具有明显的抑制活性,IC50分别为99.43,23.77,97.92,86.25 μmol·L-1,而阳性对照药顺铂的IC50为24.33 μmol·L-1.
关键词： 白茅 内生菌 Chaetomium globosum 化学成分 细胞毒活性 -
枯草芽孢杆菌ge25菌株发酵及其抑菌活性成分的初步研究
人参是我国传统名贵中药材,病害问题严重影响人参的产量和品质.在前期分离到对多种人参致病菌有理想抑菌活性的内生枯草芽孢杆菌ge25菌株基础上,研究采用盐析和酸沉淀法从LB和Landy发酵液中制备蛋白粗提物和脂肽粗提物,用人参黑斑病菌检测粗提物的抑菌活性及其对高温和蛋白酶消解的稳定性;研究发现,LB发酵物中的抑菌成分主要是蛋白类物质,不耐高温和蛋白酶K;Landy发酵物中的抑菌成分主要是脂肽类物质,其对高温和蛋白酶K稳定.原位酸水解-茚三酮显色和TLC-生物自显影分析发现,脂肽粗提物中至少含有1种抗菌环肽.鉴于源自ge25菌株的脂肽类物质的高稳定性及理想的抑菌活性,对其开展深入研究将有助于推动人参病害的生物防治.
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宁夏枸杞内生菌的抗菌和抗肿瘤活性研究
为筛选具有抗菌抗肿瘤活性的枸杞内生菌资源,对分离自宁夏枸杞的10株内生菌发酵液的抑菌活性和体外细胞毒活性进行检测,通过ITS和16SrDNA序列分析对菌株进行了分子鉴定.结果表明,5株内生真菌对供试病原菌都未表现出抑制活性,放线菌AL6对3种病原真菌都有一定的抑制作用,而AL5仅对金黄色葡萄球菌有较强抑制活性.但内生真菌的抗肿瘤活性明显强于放线菌.当发酵液浓度为0.2g·L-1时,有4株内生真菌至少对1种肿瘤细胞的抑制率高于50%.序列分析表明,5株内生真菌隶属于曲霉属、青霉属和翘孢霉属.5株内生放线菌隶属于链霉菌属、微球菌属和拟诺卡氏菌属.曲霉属菌株FL1对A549和HeLa细胞的抑制活性都较强,其IC50分别为0.022,0.028g·L-1,值得进一步研究.
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凤丹内生菌的分离鉴定及抑菌活性研究
从药用植物凤丹根部分离、纯化内生菌,运用形态学与分子生物学方法进行种类鉴定,采用生长速率法和滤纸片法进行抑菌活性研究.研究分离得到内生菌129株,其中内生真菌4属、6种、58株,优势属为镰刀菌属Fusarium;内生细菌3属、9种、71株,芽孢杆菌属Bacillus为优势属.Pseudomonas chlororaphis,F.nematophilumn,Bacillus megaterium 内生菌发酵液各自对金色葡萄球菌、大肠杆菌以及枯草杆菌的抑菌圈直径分别达到25.0,20.2,24.0 mm,F.nematophilum对青霉、黑线炭疽菌的抑菌率分别到达了90.6％,83.3％,P.chlororaphis对西瓜枯萎病原菌以及毛霉的抑制效果好,抑菌率分别为80.0％,84.9％.凤丹内生菌组成丰富,P.chlororaphis和F.nematophilum是具有较好的杀菌剂出发菌种.
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内生菌与植物的互作关系及对药用植物的影响
随着菌根生物学、分子生物学、代谢组学等学科的快速发展,影响植物发育和代谢的研究更加深入,其中,内生菌与植物的互作关系及对宿主代谢的影响是近年来热点领域之一.这为我国药用植物品质的评价和改良带来机遇,也能进一步完善我国药用植物道地性成因的传统评价体系.本文就当前植物-内生菌互作的理论与机制、研究进展和对药用植物的影响进行综述,以加强这一领域在药材品质研究中的认识,为客观评价药材道地性、中药研究和生产提供帮助.
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甘草内生菌的鉴定及抗炎作用研究
目的 对分离的甘草内生菌进行鉴定,并研究其抗炎作用.方法 取对数生长期贴壁巨噬细胞RAW264.7,制成1×106cell·mL-1的单细胞悬液,培养至细胞贴壁.空白组,加1640培养基培养;模型组,加1 mg·L-1脂多糖(LPS)培养;对照组,分别加入10,20,40 mg·L-1的甘草水提液浸膏;实验组,分别加入10,20,40 mg·L-1的内生菌发酵物(JTYB006、JTYB012、JTYB029、JTYF023),药物组均预处理2h,再加入1 mg·mL-1 LPS刺激培养;以Griess法检测一氧化氮(N0)含量,以酶联免疫吸附法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素-E2(PGE2)含量.按照体重将昆明种小鼠随机分为7组:模型组、对照Ⅰ组、对照Ⅱ组、实验Ⅰ～Ⅳ组.通过二甲苯致小鼠耳肿胀、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高,评价甘草内生菌发酵物的体内抗炎作用.结果 甘草内生细菌JTYB006、JTYB012、JTYB029分别属于芽孢杆菌(Bacillus.)3个不同种属,内生真菌JTYF023属于曲霉属赭曲霉.模型组的NO、PGE2、IL-1β的含量分别为(89.53±8.02) μμmol·L-1,(420.85±57.85) pg·mL-1,(35.24±5.77)pg·mL-1,40 mg·L-1实验Ⅰ～Ⅳ组(JTYB006、JTYB012、JTYB029、JTYF023)的NO含量分别为(65.60±4.31),(63.48±6.89),(62.30±5.92),(56.47±7.26) μmol·L-1,PGE2含量为(254.07±43.62),(295.40±49.13),(280.65±52.91),(296.42±54.90) pg·mL-1,IL-1β的含量为(21.34±5.36),(20.65 ±4.78),(16.67±3.98),(22.54±5.30)pg· mL-1,实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).模型组小鼠耳肿胀度、腹腔冲洗液光密度值分别为17.99±1.60,0.28±0.02;实验Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ组的小鼠耳肿胀度分别为15.05±2.38,13.68±2.69,15.36±2.03,腹腔冲洗液光密度值分别为0.24±0.04,0.18±0.05,0.21±0.05,实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).结论 3株(JTYB006、JTYB029、JTYF023)甘草内生菌发酵物具有体外及体内抗炎作用.
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内生菌在天然药物研究中的研究进展
内生菌具有丰富的生物多样性,是潜力巨大的微生物新资源.内生菌的研究对于保护野生与濒危药用植物、拓展药用资源、新药研发等均有一定意义.本文对近年来报道的内生菌的活性代谢产物、内生菌与药用植物的相互影响、内生菌对中药材道地性的影响等进行综述,为内生菌的进一步研究提供参考.
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甘草水煎液和内生菌止咳祛痰作用的比较研究
目的 比较甘草内生菌与宿主甘草水煎液止咳祛痰作用,筛选甘草内生菌有效菌株.方法 将昆明种小鼠84只随机分为空白组、阳性对照组、甘草水煎液组、JTYB006组、JTYB029组、JTYF023组,共6组.先后共2批小鼠.空白组给予0.9％ NaCl,阳性对照组予以磷酸可待因30 mg·kg-,甘草水煎液组予以野生甘草水煎液1.3 g·kg-1,JTYB006、JTYB029、JTYF023组分别予以JTYB006、JTYB029、JTYF023内生菌发酵液烘干粉末1.3 g· kg-1.6组小鼠予以每天灌胃1次,连续7d.末次给药1h后,2批动物分别用氨水和S02引咳,以小鼠半数引咳时间(EDT50)、R值、咳嗽潜伏期、2 min内咳嗽次数、延长率、止咳率为指标.将70只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、甘草水煎液组、JTYB006组、JTYB029组、JTYF023组,共7组.用SO2烟薰、低温兼冷风刺激诱导痰浊阻肺大鼠模型.造模10 d后,空白组和模型组给予0.9％ NaC1,阳性对照组予以复方贝母氯化铵0.08 g· kg-1,甘草水煎液组予以野生甘草水煎液0.95 g·kg-1,JTYB006、JTYB029、JTYF023组分别予以JTYB006、JTYB029、JTYF023内生菌发酵液烘干粉末0.95 g· kg-1.7组大鼠予以每天灌胃1次,连续7d.观察各组大鼠的一般情况,光镜下观察肺组织病理形态学变化,检测大鼠毛细管排泌量、肺组织一氧化氮(NO)含量、肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)、IL-23的含量.结果 与空白组的EDT50 13.00 s比较,阳性对照组、甘草水煎液组、JTYB006组、JTYB029组、JTYF023组的EDT50分别为30.09,20.32,18.45,25.03,16.52 s,EDT5o均延长.阳性对照组、甘草水煎液组、JTYB029组的R＞150,有显著止咳作用;JTYB006组R值为130 ～150,有止咳作用;JTYF023组R＜130,无止咳作用.SO2引咳后,与空白组的咳嗽潜伏期(14.67±7.20)s和2 min内咳嗽次数(78.92±19.06)次比较,阳性对照组、甘草水煎液组、JTYB006组、JTYB029组小鼠的咳嗽潜伏期分别为(28.00土8.15),(25.83±9.35),(20.58±6.52),(26.50±5.32) s,2 min内咳嗽次数分别为(47.42±19.96),(57.67±19.04),(63.15±15.30),(44.25±16.87)次,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);与甘草水煎液组比较,JTYB006组、JTYF023组小鼠的咳嗽潜伏期显著缩短,而JTYB029组小鼠2 min内咳嗽次数显著减少,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).痰浊阻肺试验结果显示:模型组、阳性对照组、甘草水煎液组、JTYB029组的毛细管排泌量分别为(14.47±3.30),(7.26±4.55),(8.45±3.78),(8.23±1.19)mm;NO分别为(51.57±8.33),(30.02±2.65),(39.10±9.63),(39.25±10.20)μmol· L-1;TNF-α分别为(654.80±56.40),(282.56±70.81),(400.24±78.03),(410.86±68.74)ng·mL-1;IL-17分别为(66.28土9.34),(39.10±6.27),(50.20±9.05),(48.70±10.28) pg· mL-I;IL-23分别为(29.04±3.55),(16.02±3.60),(20.11±2.96),(21.25±3.40)pg·mL-,模型组与阳性对照组、甘草水煎液组、JTYB029组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论 筛选出2株有止咳作用的甘草内生菌(JTYB006、JTYB029),1株有祛痰作用的甘草内生菌(JTYB029).内生菌JTYB029与野生甘草水煎液的止咳、祛痰作用相当.
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内生菌提高免疫功能的实验研究
中国科学院武汉植物研究所张政铨、聂开印两位教授于1986年在世界上首次发现单子叶植物百合组织中与其互利共生的内生菌(Cell Endophyte Bacteria,CEB)[1],其代谢产物富含天然维生素E、天然维生素C、维生素B6、多糖、谷胱甘肽、类SOD及生物碱等主要抗氧化物活性成份.应用CEB技术培育的水稻不仅主要营养成份明显优于普通大米,而且含有上述CEB的活性物质[2],称为CEB功能营养米.这一重大发现引起了国内外学者的广泛关注.为了评价CEB功能营养米提高免疫的功能状态,我们设计了一组小鼠动物试验,现将研究方法与结果报道如下.
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走马胎三萜皂苷衍生物的生物转化制备及其抗肿瘤活性研究
目的 利用走马胎内生菌Sphingomonas yabuuchiae GTC 868T (AB071955)和果胶酶Ultra AFP对走马胎三萜皂苷Ag3进行生物转化,制备具有抗肿瘤活性的三萜皂苷衍生物.方法 采用硅胶柱色谱分离技术对转化产物进行分离;采用波谱技术进行化合物结构鉴定;采用CCK法进行细胞毒活性测试.结果 制备得到5个三萜皂苷衍生物:3β-O-{α4-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A(1)、3β-O-{β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-西克拉敏A(2)、3β-O-{β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A(3)、3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-西克拉敏A(4)和西克拉敏皂苷元A(5).结论 化合物2～5为首次从走马胎三萜皂苷生物转化产物中分离得到,所得部分产物具有一定的抗肿瘤活性,其中化合物2对肝癌细胞的抑制活性强于底物和阳性药顺铂.
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内生真菌固体发酵提高穿山龙中薯蓣皂苷元的研究
目的 分离提取穿龙薯蓣内生真菌,筛选能够发酵提高穿山龙药材中薯蓣皂苷元的菌种.方法 采用PDA培养基分离纯化穿龙薯蓣内生真菌,将内生真菌与121℃湿热灭菌后的穿山龙药材粗粉在28℃条件下固体发酵培养15d,以HPLC法测定发酵物中薯蓣皂苷元,并与穿山龙原药材、灭菌空白药材以及未经灭菌药材的发酵物进行比较.结果 分离筛选的穿龙薯蓣内生真菌C39能够稳定提高灭菌后穿山龙药材中薯蓣皂苷元的水平,提高幅度达原药材的70％～75％.结论 采用固体发酵的方法可以使穿龙薯蓣内生真菌C39稳定提高穿山龙药材中薯蓣皂苷元.
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内生菌与药用植物活性成分相关性研究进展
从药用植物中提取分离出的内生菌的数量和种类不断增多,内生菌不仅自身能够产生活性成分,而且可以促进药用植物产生活性成分.就近年来药用植物内生菌与活性成分相关性研究进展及存在的问题做一综述.
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甘肃野生甘草内生菌发酵液与宿主水煎液、总黄酮、总皂苷对LPS致raw264.7分泌炎症因子的影响
目的:研究甘肃野生甘草内生菌发酵液与宿主水煎液、总黄酮、总皂苷对LPS刺激的raw264.7细胞炎症模型分泌炎症因子的调节作用.方法:采用Griess法、ELISA法检测甘肃野生甘草内生菌有效菌株发酵液与宿主水煎液、总黄酮提取物、总皂苷提取物对LPS刺激raw264.7细胞分泌NO、TNF-α、IL-6含量.结果:经LPS刺激后,与模型组相比,野生甘草的水煎液和野生甘草的总黄酮、总皂苷以及其有效菌株的发酵液均能抑制NO、TNF-α、IL-6的分泌(P＜0.05).结论:甘草内生菌JTYB018、JTYF027的发酵液有抑制raw264.7分泌NO、TNF-α、IL-6的作用.
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半夏内生菌的分离及抗菌活性筛选
目的:分离三叶半夏和掌叶半夏的内生菌,并对分离的内生菌进行抗菌活性筛选.方法:采用组织块分离法从不同品种半夏中分离内生菌,并对分离所得内生菌进行初步鉴定.利用对峙法进行抗菌活性筛选,获得具有抑菌活性内生菌.结果:共分离得到内生菌39株,其中内生细菌15株、内生真菌24株.对峙法筛选实验结果表明:5株菌对大肠杆菌具有较强拮抗性,5株菌对金色葡萄球菌有较强拮抗性,4株菌对枯草杆菌有较强拮抗性.结论:半夏含有丰富的内生菌菌种资源,实验表明多株菌具有代谢抑菌活性物质的特性,在获取天然药用生物活性成分方面存在很大潜能.
