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HPLC测定结肠黏膜中氢化可的松的浓度及其局部作用机理初探
目的建立检测结肠黏膜中氢化可的松(HD)浓度的方法,并初步探讨HD灌肠治疗溃疡性结肠炎(UC)的局部作用机理.方法采用HPLC测定HD灌肠后不同时间血及肠黏膜活检组织中的药物浓度,并由药动学软件算出相应药动学参数.结果检测了两例患者在使用HD灌肠剂后的6个不同时点,血及肠黏膜组织中HD的浓度,并算出相应药动学参数.HD在黏膜中Tmax＝1.16 h,T1/2＝0.84 h;在血中Tmax0.25 h,T1/2＝11.23.结论 HD局部灌肠可能同时具有局部和全身作用.
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体外诱导K562细胞伊马替尼耐药及其机理的初步探讨
目的 体外诱导K562细胞伊马替尼(imatinib)耐药并对其耐药性进行检测.方法 以浓度递增的方法诱导K562对伊马替尼产生耐药, MTT法确定其耐药性.RT-PCR方法半定量测定耐药细胞中BCR/ABL基因水平,并进行BCR/ABL基因序列测定.流式细胞术测定P-gp表达.高效液相色谱仪(HPLC)测定耐药细胞内药物浓度.结论 ①浓度递增法成功诱导K562细胞伊马替尼耐药(K562R),K562R细胞能长期在含5.0 μmol/L的伊马替尼的培养液中生长.②细胞生长曲线显示5.0 μmol/L伊马替尼作用于K562R细胞120 h,其活细胞数量与0 h无明显差别.6个浓度梯度的伊马替尼(0、0.25、0.50、0.75、1.00、2.00 μmol/L)作用于K562细胞24 h,发现所有浓度(除0 μmol/L外)伊马替尼均可抑制K562细胞的生长,24 h细胞活力几乎为零.③MTT法抑制率测定K562细胞半数抑制浓度约为0.75 μmol/L,K562R细胞约为7.5 μmol/L,耐药倍数约为10倍.④HPLC细胞内药物浓度测定显示K562R胞内伊马替尼药物浓度低于K562细胞(P＜0.01),流式细胞检测未发现P-gp表达.⑤374 bp的BCR/ABL基因序列分析未发现常规热点区域基因突变.结论 体外成功诱导出伊马替尼耐药细胞--K562R细胞.K562R耐药主要环节为胞内药物浓度降低,而胞内药物浓度降低与P-gp无关.耐药机理需要进一步研究.
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高效液相色谱仪检测不同吸附剂对百草枯的吸附作用
目的 利用高效液相色谱仪检测体外不同吸附剂在不同时间对百草枯的吸附作用,为临床治疗百草枯中毒洗胃液种类的选择提供实验室依据. 方法 实验组为:4%碳酸氢钠、50%乙醇、30%泥浆、30%泥浆(煮沸)、30%活性炭,对照组为清水. 将600mg/L百草枯分别加入以上各组中混匀后沉淀,分别于10min、30min、1h取上清液离心,用高效液相色谱仪检测百草枯浓度. 结果 各实验组吸附剂对百草枯均有吸附作用,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0. 05). 10min时测上清液中百草枯含量:清水>50%乙醇>30%泥浆、30%泥浆(煮沸) >4%碳酸氢钠、30%活性炭.30min、1h时测上清液中百草枯含量:清水>50%乙醇>4%碳酸氢钠>30%泥浆、30%泥浆(煮沸)、30%活性炭. 同组内不同时间比较:清水组差异无统计学意义(P>0. 05). 乙醇组:10min与30min比较差异无统计学意义(P>0. 05);10min与1h、30min与1h差异有统计学意义(P<0. 05). 其余实验组:30min与1h差异无统计学意义(P>0. 05);10min与1h、10min与30min差异有统计学意义(P<0. 05). 结论 实验所用吸附剂对百草枯均有吸附作用,30%泥浆、30%泥浆(煮沸)、30%活性炭吸附效果佳. 随吸附剂与百草枯作用时间延长,吸附效果更佳.
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氧氟沙星注射液制备方法改良及质量
氧氟沙星注射液其配制方法在<医院制剂规范>中未收载,95版<药典>也无其质量标准,卫生部只有其试行质量标准(尚未公开).氧氟沙星在水中(包括沸水)难溶解,但有极易溶于酸性较强的溶液的性质,故我们在1998年3月采用了酸溶法配制.在质控方面我们也进行了改良,卫生部试行质量标准中的含量测定采用的是高效液相色谱法(高效液相色谱仪价格昂贵,一般医院均未添制),我们利用该药在293±1nm处有大吸收峰的特性,采用紫外分光光度法测定含量,经与高效液相色谱法测定结果比较、符合要求.我们采用该法测定含量、缩短了溶解时间,减少了劳动强度,降低了药品成本价格,有利于在医院制剂中推广.
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何首乌生品及4种炮制品中二苯乙烯苷含量测定
目的:对何首乌生品及其4种炮制品中二苯乙烯苷的含量进行测定与比较.方法:采用高效液相色谱法测定含量.结果:二苯乙烯苷的含量为:生品＞黄酒拌蒸品＞清蒸品＞黄酒炙品＞黑豆汁制品.结论:何首乌4种炮制品中二苯乙烯苷的含量均低于生品.
关键词： 何首乌生品及其炮制品 二苯乙烯苷 高效液相色谱仪 -
快速溶剂萃取法测定蔬菜中的6种多环芳烃
针对蔬菜中多环芳烃(PAHs)基质复杂、检测干扰太大的问题,采用正己烷—丙酮混合溶剂通过快速溶剂萃取法提取,提取液经硅胶层析柱净化后,用高效液相色谱仪进行检测.快速溶剂萃取(ASE)法溶剂用量少,萃取时间短,检出限较低,回收率稳定,适合批量测定蔬菜中多环芳烃.
关键词： 快速溶剂萃取(ASE)法 高效液相色谱仪 6种多环芳烃 蔬菜 -
巫山淫羊藿及其不同炮制品中淫羊藿苷的含量测定
目的:对巫山淫羊藿生品及其4种炮制品中淫羊藿苷的含量进行测定与比较.方法:采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量.结果:淫羊藿苷的含量为:羊脂炙品=盐蒸品>盐炙品>酒炙品>生品.结论:淫羊藿炮制品较生品中的淫羊藿苷有较大增幅.
关键词： 巫山淫羊藿生品及其炮制品 淫羊藿苷 高效液相色谱仪 -
散寒活络丸中5-o-甲基维斯阿米醇苷的含量测定研究
目的:测定散寒活络丸中5-o-甲基维斯阿米醇苷含量.方法 :反相高效液相色谱法.结果 :5-o-甲基维斯阿米醇苷在32.32μg～193.92μg范围内呈良好的线性关系r=0.9999,平均回收99.53%,RSD=1.61%(n=6).结论 :该方法简便、快速、重现性好,能够有效的控制散寒活络丸的内在质量.
关键词： 5-O-甲基维斯阿米醇苷 高效液相色谱仪 含量测定 -
HPLC法测定吗氯贝胺片的有关物质
目的：建立高效液相色谱测定吗氯贝胺片片有关物质的方法。方法：采用C18柱（250mm×4.6mm），以甲醇-水（40：60）为流动相，用冰乙酸调pH值到2.6，流速0.3ml·min-1，滴加2滴三乙酸，检测波长为240nm，自身对照法测定。结果：线性范围为2.5～80μg· ml-1，R2=0.9978，低检测限为3.0ng。结论：该方法准确、简便，可以用于吗氯贝胺片有关物质的测定。
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LC-10AD高效液相色谱仪保养与常见故障排除
色谱法已成为世界许多科学领域中普及的分离分析手段,色谱仪也呈多样化、高精化、自动化、联用技术化等方向发展.高效液相色谱仪具有柱效高、分析速度快、流动相和被测组分的体积流量小等特点,广泛应用于临床工作.日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪主要包括LC-10AD输液泵、TOC-10A柱箱、检测器、C-R6A积分仪几部分,其中检测器分SPD-10A紫外检测器、FLD-6A荧光检测器及L-ECD-6A电化学检测器,现将我们在使用过程中的保养体会及常见故障排除方法介绍如下,以供同行参考.
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藏红花提取液对慢性高眼压兔眼玻璃体谷氨酸浓度的影响
目的:探讨慢性高眼压后兔眼玻璃体谷氨酸浓度的变化情况及藏红花提取液对谷氨酸浓度的抑制作用.方法:将新西兰白兔20只随机分为对照组、高眼压组、治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组,每组均5兔5眼.高眼压组和治疗Ⅰ、Ⅱ组兔眼前房注入3g/L复方卡波姆溶液制作成慢性高眼压模型.治疗Ⅰ、Ⅱ组兔每日耳缘静脉推注50g/L藏红花提取液.4wk后利用高效液相色谱仪测定各组兔眼玻璃体中谷氨酸的浓度.结果:高眼压组与对照组、治疗组兔眼玻璃体谷氨酸浓度有显著性差异(P＜0.01),且治疗Ⅰ组与治疗Ⅱ组有显著性差异(P＜0.01).结论:慢性高眼压可导致玻璃体谷氨酸浓度升高,对视网膜产生损伤;藏红花提取液可显著降低玻璃体中谷氨酸的浓度,对这种视网膜功能损害起到保护作用.
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不同类型牙本质粘接系统中单体Bis-GMA的析出动力学研究
目的:利用反相高效液相色谱法定量分析不同牙本质粘接体系中Bis-GMA随时间变化的析出量.方法:15个牙本质片(8 mm×8 mm×1 mm)根据选用的牙本质粘接剂随机分为Single Bond 2(SB)、Clearfil SE Bond(SEB)和Clearfil 3S Bond(3SB)3组,分别按使用说明进行粘接操作后储存于37 ℃、75%的酒精中浸泡老化,于10 min、30 min,1 h,3 h,6 h、24h、48 h、72 h、7 d、14 d各取每个试件浸泡的老化液进行反相高效液相色谱议(HPLC)检测,对结果数据做单因素方差分析.结果:3种不同类型的粘接系统中均存在未聚合单体Bis-GMA的析出,且主要集中在操作完成后的24 h内,以初10 min内的析出量高,SEB组>3SB组>SB组(P<0.01).结论:不同类型牙本质粘接系统内的单体Bis-GMA在75%的酒精中的析出动力学基本类似.
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动画模拟在药学专业HPLC实验教学中的应用初探
采用Flash多媒体制作技术实现了HPLC实验教学的模拟互动,介绍了动画模拟技术在目前的应用情况以及未来的发展趋势.HPLC检测法是分析化学的一个重要实验,在药学、中药、药剂、食品检验等专业广泛应用.各个高校对学生实验多采用一元泵手动进样系统,具备二元泵梯度洗脱和自动进样系统的高效液相色谱仪价格昂贵,在实验教学中一般采用教师演示教学,学生动手操作机会较少.并且所有类型的高效液相色谱实验,学生只能看到计算机处理出来的色谱信号图,对其中重要的色谱分离过程知之甚少.新刊发的2005版中国药典中,大约80%的药品采用HPLC技术对药物进行含量测定.为了使学生能更生动的了解HPLC的内部构造及分离过程,我们设计开发了这一软件,可以使学生更好的理解色谱原理和过程,也实现了计算机模拟操作,解决了仪器数量少,学生实验效果差的难题.
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HPLC法测定锐通注射液中白屈菜碱和原阿片碱含量
锐通注射液主治气滞血瘀引起的各种癌性疼痛等,为控制产品质量,对其主要有效成分中的白屈菜碱和原阿片碱进行了含量测定.仪器与试剂HP1100高效液相色谱仪:G1322A脱气机,G1311A四元泵,G1315A二极管阵列检测器,HP ChemStation for LC/Rev.A.06.01[403].
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用紫外分光光度法快速鉴别诺氟沙星胶囊
诺氟沙星是广谱抗菌类药物,由于价廉而应用广泛,因此,近年来市场上假劣品种泛滥.《中国药典》1995年版鉴别方法采用丙二酸—醋酐反应和紫外吸收光谱法,含量测定采用非水滴定法[1].由于以上定性、定量反应缺乏特异性和专属性,往往检测结果与实际不符,混乱局面难以控制.为了提高检测的专属性,国家药品监督管理局颁发了《关于修改诺氟沙星胶囊质量标准的通知》,将含量测定方法由非水滴定法改为HPLC法.由于检测手段的更新,使检测结果更具有专属性和特异性,但也给检验工作带来了一定的难度,由于基层缺乏高效液相色谱仪,为此我们探讨一种用紫外分光光度法快速预测产品是否合格的方法.
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机械通气与急性颅脑损伤患者二棕榈磷脂酰胆碱相关性分析
机械通气作为一项基本而有效的治疗手段应用于危重患者的支持领域中,且为提高危重患者的抢救成功率做出了很大的贡献.但是呼吸机相关性肺损伤的发生率也越来越受到医学界的关注.有学者推测,肺泡表面活性物质的合成减少在呼吸机相关性肺损伤中发挥着重要的作用 [1].为了证实这一理论,国内外学者已做过一些实验研究,而临床研究报道甚少.笔者于1998年6月～2003年6月对35例不伴胸肺损伤的中重型脑损伤患者行机械通气,用一次性痰液收集器吸取通气治疗不同时间段患者气管深部的痰液,采用高效液相色谱仪测定痰液中二棕榈磷脂酰胆碱(DPPC)的含量,发现该物质随通气治疗的时间延长而逐渐下降,并出现肺顺应性下降和气道压力升高,少数患者有氧合功能受损.现报告如下.
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高效液相色谱法测定甲硫氨酸维B1注射液中甲硫氨酸的含量
目的:建立高效液相色谱法测定甲硫氨酸维B1 注射液中甲硫氨酸的含量.方法:采用Discovery C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以己烷磺酸钠溶液(取己烷磺酸钠1.0 g,加pH 5.8磷酸盐缓冲液1000 mL)-乙腈(95:5)为流动相,检测波长为215 mm.结果:甲硫氨酸的进样量在1.04～10.38 μg的范围内,与峰面积响应值呈良好的线性关系(r=O.9996),样品溶液在室温条件下8h内稳定,平均回收率为99.79%,RSD=0.41%.结论:本法操作简便、快速、结果准确,可用于甲硫氨酸的含量测定.
关键词： 甲硫氨酸维B1注射液 甲硫氨酸 高效液相色谱仪 含量测定 -
体外培育牛黄中主要胆酸类成分的测定
目的:建立准确度高、重复性好的测定体外培育牛黄中主要胆酸类成分的方法.方法:采用高效液相色谱仪与蒸发光散射检测器联用技术对体外培育牛黄进行测定.色谱条件:Wondasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温25℃；流动相为0.2％甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～7 min,5％B；7～ 15 min,5％ B→80％B；15 ～ 20 min,80％B→90％B；20～23min,90％B→96％B),流速1.0 mL·min-；ELSD检测器氮气流速2.3 L· min-1,漂移管温度110℃.结果:同时测定了体外培育牛黄中胆酸和去氧胆酸含量,胆酸和去氧胆酸进样量分别在0.48～2.42 μg和0.16～0.83μg范围内线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为102.1％ (RSD=1.1％)和100.7％ (RSD=1.3％).结论:该法可同时测定体外培育牛黄中主要胆酸类成分胆酸和去氧胆酸的含量,适用于体外培育牛黄的质量评价与控制.
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N-苄氧羰基-甘脯酰表阿霉素体内分析方法的建立与血药浓度测定
目的:建立一种灵敏、稳定的新型靶向侯选化合物N-苄氧羰基-甘氨酰脯氨酸表阿霉素(Z-GP-EPI)体内分析方法,并考察大鼠单次给药血药浓度变化及求算药代动力学参数.方法:液-液萃取法进行样品处理.色谱条件:色谱柱为Ultimate(R)XB-C18(4.6 mm ×250 mm,5μm)；流动相为乙腈-0.1％ TFA水(45∶55,v/v)；流速为1 mL·min-1;荧光检测器,激发波长为495 nm,发射波长为590 nm.SD大鼠颈静脉注射给药(18 mg·kg-1),HPLC测定血药浓度经时变化,绘制平均血药浓度-时间曲线,统计矩模型估算药代动力学参数.结果:Z-GP-EPI在0.1～100 μg·mL-1浓度范围内线性相关性良好(r=0.9993),回归方程为:Y=0.526X-0.014,定量下限为0.1 μg·mL-1.低、中、高质控样品的萃取回收率、日间/日内精密度与准确度均符合化学药物非临床药代动力学技术指导原则.主要药代动力学参数如下:AUC0-∞为(10.165±2.863) μg·mL-1·h,MRT0-∞为(1.283±0.629)h,t1/2x为(2.208±1.475)h,Vz为(5.458±2.80)L·kg-1,CLz为(1.714±0.885)L · h-1·kg.结论:建立稳定、可靠的Z-GP-EPI体内分析方法,为后续开展系统性药代动力学研究奠定基础.
关键词： N-苄氧羰基-甘氨酰脯氨酸表阿霉素 血药浓度测定 高效液相色谱仪 大鼠 -
米非司酮在血液、蜕膜和绒毛中的浓度及其对流产结局的影响
本文探讨了米非司酮在血液、蜕膜和绒毛中的浓度及其对流产结局的影响.服米索后6h内(4～6h)胎囊排出者为I组,共38例;服米索后6h胎囊仍未排出即刻刮宫者为Ⅱ组,共20例.应用HPLC分析法检测I组、Ⅱ组早孕妇女口服米非司酮后该药物在血液、蜕膜和绒毛组织中的浓度.结果I组用药后不同时间血液米非司酮浓度均高于Ⅱ组(P＜0.01);两组间绒毛组织中药物浓度无显著性差异(P＞0.05).蜕膜组织中,Ⅱ组药物浓度低于I组;两组绒毛组织中米非司酮浓度均高于蜕膜组织(P＜0.01).实验结果提示米非司酮不但作用于蜕膜还可直接作用于绒毛组织,对流产结局产生一定影响.
