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金黄色葡萄球菌检验分离培养基的应用
本文主要探索食品中金黄色葡萄球菌分离鉴定所使用不同培养基在实际工作中的应用,样品采集于百色市区主要超市、农贸市场和餐饮单位,按照GB4789.10-2010《食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》对样品进行金黄色葡萄球菌检测.同时用不同分离培养基进行分离培养.得出结论:食品中金黄色葡萄球菌的分离培养用显色培养基与传统的Baird-Parker平板和血平板相比有较高的灵敏度、特异性和选择性.
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一次性使用医疗用品微生物污染调查
为了加强一次性使用医疗用品的监控工作,确保医疗质量,2000年1～12月,对本院购进的一次性使用医疗用品采取随机抽样进行检测,凡包装破损者不作为样品.用破坏性方法取样,即用无菌剪刀剪断用品,取样2 g(5 ml注射器直接取外套、内芯、针头),分别接种于10 ml需-厌氧肉汤中.于35℃培养7 d,再转种血平板,置35℃培养24 h,观察有无细菌生长.
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一次使用性医疗用品质量检测
1999年1月～2000年5月，对本院所用5种一次使用性医疗用品质量进行了检测。采取破坏性采样，即用无菌剪刀剪断用品，取样1.5～2.0 g(5 ml注射器直接取外套、内芯、针头)，分别接种于10 ml需氧、厌氧肉汤中。于35℃培养7 d，转种血平板。置35℃培养24 h，观察有无细菌生长。输液器、注射器除检测无菌外，尚需鲎试验阴性(无热原)，澄明度检查(注入无菌注射用水洗后，将水集中于莫斐氏滴管中)肉眼观察清亮、无颗粒，pH试纸测上述水pH 5～7，氯化物检测合格(上述水中加1滴硝酸银后不浑浊)。
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鼠伤寒沙门氏菌引起足部感染一例
患者男性，65岁，有糖尿病史。因右足红肿及第四、五NFDE6根部溃烂伴发热，在当地医院治疗无效于1999年9月6日来我院就诊。(1)实验室检查：WBC 21.8×109/L、N 0.89、L 0.11，空腹血糖11.8 mmol/L、尿糖()。取脓性分泌物分别接种血平板及SS平板，35℃ 24 h培养。血平板可见中等大小、灰白色、光滑湿润的菌落，在SS平板上可形成无色透明、光滑、中心产H2S黑色菌落，涂片为革兰氏阴性杆菌。生化反应：在克氏双糖铁培养基斜面上反应阴性，下层产酸产气，产H2S。分解葡萄糖、甘露醇、阿拉伯糖、鼠李糖、液化明胶，赖氨酸、鸟氨酸均为阳性；苯丙氨酸、靛基质、尿素、枸橼酸盐均为阴性，符合沙门氏菌特征。(2)用沙门氏菌属诊断血清作凝集试验：A-F多价血清及O4、O6、Hi均为阳性，盐水对照为阴性，后诊断为鼠伤寒沙门氏菌。(3)药敏试验(K-B法)：本菌对先锋铋、丁胺卡那霉素敏感，对氟哌酸、环丙沙星中敏，对头孢唑啉、氧哌嗪青霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、妥布霉素耐药。 病人入院后以敏感抗生素治疗，并用降血糖药治疗1个月，足NFDE6痊愈，糖尿病控制后出院。
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肠出血性大肠埃希杆菌O157:H7溶血毒素的检测方法
我们曾和美国马利兰大学发展了鉴定肠出血性大肠埃希杆菌的探针，其特异性和灵敏性极高。经序列分析发现该探针是溶血素基因的部分片段。我们又从溶血表型进一步完善了这一鉴定方法。由于其溶血条件特殊，人们一直认为该菌不溶血。我们将经验总结报告如下。 一、材料和方法 1．菌种来源：肠出血性大肠埃希杆菌882364，1986年江苏省徐州市卫生防疫站分离，经本实验室鉴定，并保存。851006为本实验室筛选到的溶血素基因的天然缺失株（对照菌株）。 2．菌株鉴定：生化鉴定为大肠埃希菌。O157单抗和H7血清为本实验室制备。用O157：H7 PCR诊断试剂盒检测882364、851006的溶血素基因，882364的扩增结果为阳性，851006为阴性。 3. 血平板的制备［1］：脱纤维羊血用磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次，加入至终浓度为3%。培养条件：于混合气（8%CO2，40%H2，52%N2）环境中37℃培养16 h，然后置21℃空气中6 h。 4．液体溶血活性检测［2］：(1)标准1%羊红细胞的制备；(2)活化菌体；(3)活性检测。 二、结果血平板检测的结果需对光观察，如发生溶血，可见菌落周围透明溶血环。液体溶血检测的结果如只需定性，则A值大于完全不溶血管即可；如需相对定量，可用溶血单位（HU）表示，一个溶血单位(HU)为裂解50%羊红细胞的检测样品的量。
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组织胞浆菌病一例
我院于1999年7月收治一女患者，64岁，农民，以发热入院。经骨髓培养诊断为荚膜组织胞浆菌病。患者自4月下旬出现无明显诱因发热，以下午和晚上为甚，伴乏力、头昏、纳差，无腹痛，腹泻。经检查：肝脾淋巴结肿大，口腔无溃疡，全身出血点，肺部有阴影。经抗炎、抗疟治疗均无效。实验室检查：WBC 1.9×109/L,RBC 2.58×1012/L,Hb 64 g/L,PLT 13×109/L,结核抗体(+),血培养(-),骨髓涂片可见细胞内和细胞外酵母样真菌。 骨髓涂片：取患者骨髓涂片，经固定,瑞氏染色,显微镜下可见大单核细胞及巨噬细胞的胞浆内可见数个至数10个酵母孢子，经瑞氏染色，胞核呈紫色，粗颗粒状偏于一边，胞浆淡天蓝色，3～5 μm，卵圆形，一端稍尖，一端稍圆，有些荚膜明显。当细胞内荚膜组织胞浆菌孢子较多时，在镜下很象洋葱的横切面，分层明显。 培养:取患者骨髓分别接种于沙氏斜面培养基，普通血平板，脑心浸汁葡萄糖血斜面,胱氨酸葡萄糖血斜面,用透明胶封口，一组置25℃培养，一组置35℃培养。在25℃孵育组：普通血平板10 d可见不规则的、湿润的匍匐生长的菌丝型菌落，脑心浸汁葡萄糖血斜面，胱氨酸葡萄糖血斜面一个月长出菌落。在35℃孵育组：普通血平板5～10 d长出菌丝型菌落；脑心浸汁葡萄糖血斜面和胱氨酸葡萄糖血斜面1个月可见圆形、光滑、凸起、湿润的酵母样菌落。取酵母型菌落涂片，除见酵母型孢子外还有少许细长分隔菌丝。孢子3～5 μm，卵圆形，可见少许有荚膜的芽生孢子。凡培养长出的菌丝或酵母型菌落再接种到沙氏斜面，置25℃培养开始呈白色棉花状菌落，后渐变为淡灰黄色且长出典型齿轮状厚壁孢子。
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木糖氧化产碱杆菌木糖亚种引起肺部感染一例
我们于2000年8月从1例肺炎患者的痰标本中2次分离出木糖氧化产碱杆菌木糖亚种.现报告如下. 患者,男,16岁,因慢性支气管炎急性发作,胸闷、咳嗽、咳痰,于2000年8月17日门诊就医.血常规检查:WBC 12.6×109/L,N 0.81,L 0.19;胸片显示右下肺纹理增多、紊乱、片状阴影、云絮状.连续2天痰培养分离出木糖氧化产碱杆菌木糖亚种.先后用敏感抗生素头孢噻肟钠、庆大霉素、复方新诺明给于治疗,3周后痰培养转阴. 细菌鉴定:取患者清晨深咳痰标本经消化接种于血平板和巧克力琼脂平板,置37℃培养,24 h后血平板上生成灰色发亮、微隆起扁平、光滑、不溶血、边缘菲薄的较大菌落.在肉汤中培养24 h呈均匀混浊生长,可形成薄膜,管底形成不易摇散的粘性沉淀.革兰阴性短杆菌、成对或成链状排列、
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马肠链球菌引起脑脓肿一例
2000年3月，我们从脑脊液中分离出一株马肠链球菌， 现报告如下。 患者,男,42岁,汉族,因头痛,恶心,呕吐两周,发热1周,前来我院就诊。查体:体温39℃,脉搏84次/分,呼吸20次/分,血压113/68 mm Hg。神志清楚,头颅无畸形,头皮无异常。头部CT扫描示:左额叶深部可见一囊性肿物影,周围水肿明显。初步诊断为脑脓肿,收住院。血象:WBC 26.8×109/L, RBC 4.33×1012/L, Hb 146 g/L,PLT 608×109/L,N 0.86,L 0.14。脑脊液常规检查:颜色淡黄,透明度,混浊似脓汁,WBC 760个/μl,RBC 2 240个/μl,N 0.90,L 0.10。3 月16日和3月20日两次行脑脊液穿刺做细菌培养, 均分离出马肠链球菌。用头孢他啶100 mg治疗有效。 细菌鉴定：取脑脊液1.5 ml注入肉汤管增菌培养,同时接种血平板和麦康凯平板各两块。各取1块分别置35℃孵箱和置37℃含3%～5% CO2的烛缸内。两种环境下培养18～24 h。结果有氧条件下,血平板和麦康凯平板均未生长细菌；烛缸内,麦康凯平板上，亦未见细菌生长,血平板上长出灰白色、圆形、凸起,直径为0.5～0.75 mm的小菌落,表面光滑、半透明、无溶血现象。菌落涂片、染色,为革兰阳性球菌呈链状排列。
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从胆汁中分离出一株酪黄肠球菌
2001年3月,我们从一胆石症患者的胆汁中分离出1株酪黄肠球菌(E.casseliflavus),报告如下.患者,男,65岁,汉族,因急腹症入院.查体,WBC 1.8×109/L,N 0.8,L 0.2,B超提示为胆石症.行手术治疗,术中无菌收取胆汁3 ml,注入肉汤中(OXID)增菌,同时接种血平板和麦康凯平板.置35℃孵育24 h后,肉汤增菌瓶明显混浊,遂移种于血平板和麦康凯平板,35℃ 24 h孵育,有湿润、圆形、凸起,直径为0.7 mm左右的菌落生长,α溶血、产生黄色素.涂片染色为革兰阳性链球菌.
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麻疹孪生球菌致小儿败血症
患儿，男，两岁3个月，因口腔溃疡并伴突发性高热入院。住院期间连续2次(第1 d，第3 d)抽取小儿股动脉血做血培养，均培养出麻疹孪生球菌。参考药敏试验结果采用阿莫西林和头孢噻肟抗感染治疗，7天后患儿痊愈出院。 细菌培养与鉴定：血标本经BacT/Alert 120自动监测培养仪培养12 h，仪器显示结果阳性，然后复种哥伦比亚琼脂血平板35℃培养24 h。血平板上长出灰白色中等大小、光滑、圆形、突起、边缘整齐，稍干燥，不透明且无溶血环的菌落。该菌用生理盐水涂片不易涂散，不易乳化。染色可见革兰阳性双球菌，成双球菌状排列，少有部分成四联或短链状排列。氧化酶试验，触酶试验均为阴性，6.5% NaCl、七叶苷阴性。 用ID32 strep鉴定卡经api/ATB鉴定系统鉴定为麻疹孪生球菌。鉴定率id%=99.4%，符合率T=0.99，生化反应编码为00002401100。生化反应结果符合该菌。 药敏试验：采用配套的ATB strep药敏试验卡做药敏试验：红霉素、四环素、呋喃妥因、链霉素、阿米卡星、青霉素、氨苄西林耐药；复方磺胺甲恶唑、利福平、万古霉素、替考拉宁、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、头孢噻肟敏感。 讨论：麻诊孪生球菌属孪生球菌属，包括溶血孪生球菌和1998年Collins报道的柏格孪生球菌也属孪生球菌属。均为革兰阳性兼性厌氧双球菌，成双排列，少有四联、短链状排列，氧化酶试验、触酶试验阴性，鉴别试验：麻疹孪生球菌在血平板上没有溶血环，APPA、GTA阳性；溶血孪生球菌在血平板上有溶血环，APPA、GTA阴性；柏格孪生球菌部分在马血平板上有溶血环，菌落扁平，光滑透明，6.5%NaCl、10℃和45℃生长、葡萄糖产酸、尿素、七叶苷、明胶、马尿酸，VP、靛基质、硝酸盐、精氨酸双水解酶均阴性。
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正常儿童上呼吸道卡他布兰汉菌调查
近年的研究表明卡他布兰汉菌(Branhemella Catarrhalis,BC)可引起临床的多种感染[1],儿童和免疫缺陷者更具易感性[2].我院对243名学龄前儿童进行了咽拭子培养及产酶情况调查,现报告如下.材料和方法(1)标本来源:菌株来自2000年1月,北京某幼儿园体检者共243例,年龄3～6岁,男122例,女121例,标本采集时无口腔,咽喉,气管与肺等相关感染性疾病.(2)培养基:血平板粉末购自OXIOD公司;含50 μɡ/ml万古霉素的兔血巧克力平板为本实验室自配;DNA平板粉末来自法国生物梅里埃公司.(3)可疑菌株以法国生物梅里埃公司的API-NHI条(奈瑟菌及嗜血杆菌的鉴定系统)进行确认.(4)β-内酰胺酶纸片为英国OXOID公司产品.(5)菌株鉴定 :将标本接种于血平板和巧克力平板,置8% CO2环境中,于培养的24 h,48 h,72 h挑选可疑菌落作革兰染色,若形态为革兰阴性双球菌,肾形;则作DNA酶,DNA酶阳性者进一步以API-NHI条验证.(6)β-内酰胺酶:被确认为BC的菌株,以OXOID公司提供的β-内酰胺酶纸片进行验证,变为粉红色者为产酶株.
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肺结核继发洋葱伯克霍尔德菌肺部感染的耐药性分析
回顾性分析2011年1月至2012年12月我院肺结核继发肺部感染患者中分离出的36株洋葱伯克霍尔德菌对抗菌药物的耐药情况,报告如下.材料与方法1.标本来源:收集肺结核患者的痰液、咽拭子、纤维支气管镜吸取物、肺泡灌洗液标本.2,方法:送检标本按操作规程[1],直接划种血平板、巧克力平板,35℃培养、分离并进行菌种鉴定与药敏试验.参照2012年版美国临床和实验室标准化研究所标准(CLSI)进行结果判断.
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耐药木糖葡萄球菌致气管化脓性炎症1例
木糖葡萄球菌为条件致病菌，我院于1999年4月，于脑干损伤患者的气管切开术后排出的脓汁内，培养分离出一株对多种抗生素耐药的木糖葡萄球菌。报告如下。1 病历报告患者，男，33岁，因脑干损伤呼吸困难而行气管切开术，发现气管内大量脓汁，将脓汁作细菌培养：标本接种于血平板.35 ℃培养24h后，长出圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、乳白色直径0.5～1mm小菌落，无溶血环。G+葡萄状排列球菌—木糖葡萄球菌。
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1240例妇科阴道分泌物培养分析
为了解妇女细菌性阴道炎的细菌分布及药物敏感情况,帮助临床诊断治疗,对我院近1年来门诊和住院妇科送检的1240份阴道分泌物标本,进行涂片、接种血平板和麦康凯琼眄脂平板,35℃～37℃培养18～24h,涂片发现线索细胞的接种阴道琼脂平板35℃～37℃培养24h,对所分离到菌株作半定量计数确定病原茵,进行鉴定并用K-B法做药敏试验.结果显示:细菌性阴道炎阳性率为52%,霉菌性阴道炎阳性率为10.4%,菌种类型有12种,有关资料报告如下.
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婴儿淋菌性眼结膜炎一例
患儿男,40d,顺产.产后2d眼部开始不间断出现分泌物,误认为有炎症,滴用氯霉素眼药水后,无效,且眼部脓性分泌物逐渐增多,颜色渐黄,常糊满眼部,眼睛红肿.来我院儿科门诊就诊.取脓性分泌物涂片,革兰氏染色,镜下可见大量脓细胞内有革兰氏阴性肾形双球菌.同时采取脓性分泌物接种巧克力色血平板,置于5%～10%的CO2环境中,37℃培养48h,出现圆形,不透明,灰白色,凸起,细小颗粒状菌落.挑取典型菌落涂片染色,为革兰氏阴性肾形双球菌,氧化酶试验阳性.诊断为淋菌性眼结膜炎.
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糖尿病合并泌尿系感染尿细菌培养及药敏初探
本文总结我院近两年糖尿病合并泌尿系感染细菌培养结果及药物敏感情况.对象两年来糖尿病合并泌尿系感染病例,其中有细茵培养的86例,男8例、女78例,年龄56.45±13.08岁.细菌培养阳性46例.每例均为连续三次送检,至少二次培养出同一种细菌.培养基用血平板常规法制备,细菌的分离鉴定法按<全国临床检验操作规程>进行,抗生素敏感试验采用Kirby-Bauer扩散法.所选用抗生素纸片均由北京天坛药物生物科技开发公司提供.
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不同时期小儿肺炎克雷伯菌耐药性检测及分析
为探讨肺炎克雷伯菌的耐药性及变迁,我们对我院儿科1997～1998年和2001年7月至2003年4月两个时期送检的痰、粪、血液标本进行细菌培养,采用法国生物-梅里埃公司生产的ATB全自动细菌及药敏测试仪进行菌株鉴定及药敏测试,探讨2个不同时期细菌耐药性的差异.将粪、痰液标本接种于EMB及S-S平板上,35℃18～24h;将血液标本接种于梅里埃公司生产的双相血培养瓶中,35℃,每24h观察1次,如有细菌生长,转血平板.取上述平板中的可疑菌落进行革兰染色,并按ATB鉴定系统标准程序进行菌种鉴定及药敏测试.
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肿瘤患者痰标本中微球菌的鉴定及临床意义
微球菌是口腔正常菌，一直以来被视为非致病菌。但据近年国外的报道，该菌能引起多种机会感染。我院于1998年10月～1999年12月自临床送检的痰标本中分离出24株微球菌，现就该菌的分离鉴定、药敏试验及临床情况报道如下。 1 临床资料 ①标本的来源：1998年10月～1999年12月我院住院患者送检的痰标本，共检出24株菌。②临床诊断：24株菌来自24名肿瘤患者，其中19例为肺癌，3例为淋巴癌，1例为结肠癌。③培养：痰标本划线接种血平板及伊红美兰平板上，35℃孵育18～24 h，24名患者的伊红美兰板均无菌生长，而血平板则长有大量黄橙色、圆形突起、边缘整齐的菌落且为优势菌(伴有少量耐瑟氏菌)。④鉴定：涂片染色为G+球菌，且菌体较大多成四联状排列，也可成双立方形或不规则团块状排列，触酶(+)、氧化酶(+)，OF为氧化型。能在5%NaCl琼脂上生长，能液化明胶，能被溶菌酶溶解，呋喃唑酮耐药，抑菌环直径为6～10 mm，杆菌肽和O/129敏感，抑菌环直径分别为10～25 mm和20～36 mm。⑤药敏试验：采用纸片扩散法，用金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)做药敏纸片监控。
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采样及检测方法对医院环节中金黄色葡萄球菌检出率的影响
目前,对医院环节样品金黄色葡萄球菌的检测,多采用国家标准规定的常规检验方法,但检出率偏低.若采取PCR、快速纸片法等检测技术,虽能提高检测效率,但成本过高且得不到目标菌株,不利于对金黄色葡萄球菌的耐药性等进一步研究分析.针对以上问题,我们对国家标准中的采样方法作了改变,并将国家标准中SCDLP液体培养基的增菌时间从24 h延长到48 h,将第一次分离的血平板改为显色平板,观察其检测效果.
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应用PCR检测副溶血弧菌的耐热溶血毒素基因tdh
副溶血弧菌可引起食物中毒或急性胃肠炎,尤其在夏季,常可从食用不洁海产品而导致食物中毒的病人肛拭标本中分离到.目前一般认为该菌的热稳定性溶血毒素(TDH)是重要的毒力因子.TDH可在莪萋氏血平板上产生一种特殊的溶血现象,称作神奈川现象(Kanagawa phenomenon,KP)[1].临床上分离出的副溶血弧菌株几乎都是KP阳性,因此通常认为KP阳性为产毒株,KP阴性为非产毒株.本文分别对从医院肠道病人及食物中毒者肛拭样本中收集的100株副溶血弧菌,用PCR检测TDH基因(tdh)并与KP法加以比较;同时还运用PCR技术直接对300份肛拭样品增菌液检测tdh,与细菌常规培养鉴定法作比较,以探讨PCR检测鉴定副溶血弧菌tdh的实践意义以建立简便快速的副溶血弧菌检测方法.
