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ELISA试剂盒法值得推广的孔雀石绿、结晶紫类物质检测法
孔雀石绿(Malachite Green,MG),结晶紫(Crystal Violet,CV)作为杀真菌剂和消毒剂被广泛应用于水产养殖.
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水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的快速测定
孔雀石绿、结晶紫是有毒的三苯甲烷类化学物，农业部将它们列为水产上的禁药。然而由于其对鱼体水霉病和鱼卵的水霉病有特效，许多水产业养殖户仍在违规使用。因此，农业部将孔雀石绿、结晶紫列为水产品检测的重点项目。
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高分子印记固相萃取-液相色谱质谱法测定水产品中孔雀石绿、结晶紫、亮绿及其代谢产物
目的 建立一种高分子印记固相萃取-液相色谱质谱联用( MISPE-HPLC/MS2)测定水产品中孔雀石绿、结晶紫、亮绿及其代谢产物的检测方法.方法 样品经乙腈提取后,经中性氧化铝柱和高分子印记固相萃取柱净化,Waters Atlantis T3色谱柱(2.1 mm x 150 mm,3 μm)分离,乙腈和0.1％甲酸水等度洗脱,采用选择反应监测(SRM)模式进行正离子扫描,内标法定量.结果 待测化合物在0.2～10 μg/L范围内有很好的相关性,相关系数大于0.99,加标水平为1、2、4μg/kg,孔雀石绿、结晶紫和亮绿的平均回收率分别为93.2％ ～ 105.9％、92.7％ ～ 107.5％和60.6％ ～ 94.4％,相对标准偏差均小于12.5％,孔雀石绿、结晶紫和亮绿的捡出限分别为0.02、0.03、0.03 μg/kg,定量限分别为0.07、0.10、0.10μg/kg.结论 本方法前处理净化效果更好、灵敏度更高,同时采用稳定性同位素稀释技术及基质匹配标准曲线,将基质抑制效应降低到低,适用于大批量鱼类产品中孔雀石绿、结晶紫和亮绿的检测.
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广州市水产品鱼类中孔雀石绿及结晶紫残留状况分析
目的 了解广州市市售水产品鱼类中孔雀石绿及结晶紫的残留情况,为监管部门提供参考依据,为广大消费者提供消费指导.方法 按GB/T 19857-2005《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》对所采集的鱼类样品中孔雀石绿及结晶紫的残留情况进行检测.结果 检测的120份鱼类样品中孔雀石绿及其代谢物的检出率为6.67％(8/120)、结晶紫及其代谢物的检出率为0.83％(1/120),两者在淡水鱼中的检出率为8.91％(9/101),近海鱼中的检出率为0％(0/19).不同种类养殖鱼间比较,桂花鱼的检出率高,达40％(2/5).结论 广州市市售鱼类中存在孔雀石绿及其代谢物和结晶紫及其代谢物残留的情况,值得关注.
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六种天然多酚类化合物对沙门菌生物被膜形成的抑制作用研究
目的 研究植物来源的天然多酚类化合物对沙门菌生物被膜形成的影响,筛选具有抑制作用的化合物,为沙门菌的防治提供技术支持.方法 利用结晶紫染色法,研究不同化合物在26℃或37℃条件下对沙门菌生物被膜形成的影响.结果 与空白对照二甲基亚砜(DMSO)相比较,化合物水杨酸在各种条件下均未对沙门菌生物被膜形成表现出明显的抑制作用；在26℃及37℃条件下培养36 h,阿魏酸、蔓荆子黄素、绿原酸和肉桂酸均表现出显著抑制沙门菌生物被膜形成的作用；而咖啡酸在26℃条件下对沙门菌生物被膜形成具有显著抑制作用,37℃条件下却没有表现出明显的抑制作用.结论 该实验结果说明天然多酚类化合物阿魏酸、蔓荆子黄素、绿原酸和肉桂酸在一定条件下均可以显著抑制沙门菌生物被膜的形成,具有较强的生物活性.
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芹菜中芹菜素的阻抑溴酸钾氧化结晶紫褪色光度测定法
目的 建立一种阻抑溴酸钾氧化结晶紫褪色光度法测定芹菜中芹菜素的新方法.方法 在0.05 mol/L盐酸介质中,结晶紫在588 nm处有大吸收,当温度升高到85℃时,结晶紫能被溴酸钾很快氧化而褪色,而芹菜素能很好地抑制此褪色反应,并使体系在λmax=614 nm处的吸收随其浓度的增大而增强.体系吸收强度的变化值(△A)与芹菜素浓度在一定范围内呈现良好的线性关系,由此建立阻抑光度法来测定芹菜中的芹菜素含量.结果 体系大吸收波长为λmax=614 nm,而且其吸收强度变化值(△A)与芹菜素浓度在0.017～8.0 μg/ml内线性关系良好,回归方程为△A=39.94 C(mg/ml)+0.106 1,相关系数r=0.998 6,检出限为5.1 ng/ml,加标回收率为98.4％～102.2％,RSD为0.62％～2.65％(n=6).该方法用于芹菜中芹菜素含量的测定,结果满意.结论 该方法操作简单、灵敏,仪器易得,能很好地应用于实际样品的分析.
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清肺注射液不同配伍体外对流感病毒增殖的影响
[目的]观察复方清肺注射液经正交设计确定的16组不同配伍制剂对流感病毒亚甲型鼠肺适应株[A/FM/1/47(H1N1)]增殖的影响.[方法]采用结晶紫染色法观察清肺注射液16组不同配伍制剂对流感病毒FM1株的体外抑制作用,同时以利巴韦林和双黄连粉针为阳性对照药.[结果]清肺注射液的16种不同制剂中第9、13、14、15和16组制剂对流感病毒FM1株具有综合抑制作用,能阻止病毒吸附于狗肾细胞株(MDCK),具有直接杀病毒作用,且具有抑制细胞内病毒复制的作用.制剂1无抗病毒作用,制剂2～制剂4不能直接杀病毒,其余各组制剂仅在高浓度(2-1～2-2)时抑制病毒.[结论]清肺注射液的第9、13、14、15和16组制剂具有明确的抗流感病毒作用.
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共振瑞利散射法测定透明质酸
目的 建立透明质酸钠的共振瑞利散射(RRS)测定方法.方法 于10ml比色管中依次准确加入一定量的钠盐(SH)标准溶液、1.0ml pH 5.0的HAc-NaAc缓冲溶液和2ml 0.01%的CV溶液,以二次蒸馏水定容,摇匀.将溶液于荧光光度计上以λem=λex(即Δλ=0)方式进行同步扫描得RRS光谱,于λem=λex处测定产物溶液的散射光强度I和试剂空白的散射强度Ⅰ0,以ΔⅠ=Ⅰ-Ⅰ0计量记录.结果 透明质酸钠与结晶紫在pH 3.6～5.6的HAc-Ac-酸性介质中作用, 将导致其溶液的共振瑞利散射(RRS)增强,并产生新的RRS光谱,其大散射峰位于341nm处.在0～2.0mg/L范围内透明质酸钠浓度与RRS强度成正比.透明质酸钠的检出限(3σ)为17.1ng/ml,RSD为2.1%.结论 该法灵敏度高,选择性也较好.用于测定从动物组织鸡冠中提取自制的透明质酸粗品,结果满意.
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两种血小板稀释液的性能比较
血小板计数是研究止血与凝血障碍的重要指标之一，我国由于多年的习惯，很多医院均采用许汝和法血小板计数。但在计数过程中不可避免产生误差，利用改良草酸铵法，则能准确地计数血小板。1 检测对象 患者153例，其中血小板正常患者128例，血小板减少患者25例，包括肝炎8例，肝硬化3例，血小板减少性紫癜4例，再生障碍性贫血2例，癌症化疗8例，健康人对照50名。2 试剂与方法2.1 草酸铵改良液 草酸铵1.0 g EDTA-Na2 0.108 g，加蒸馏水溶解后，加入0.2 mL氯仿，再加蒸馏水至100 mL。轻轻振荡促使氯仿溶解(氯仿的溶解度是20 ℃水温时每升水8.2 mL)。避光保存。待2～3 d氯仿溶解后，加入4 g/L的结晶紫乙醇溶液20 μL。有定性滤纸滤过后室温避光保存。2.2 许汝和液(复方尿素液)
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分光光度法测定空气中的氧化氮
为了建立离子缔合物分光光度法测定空气中氧化氮的新方法 ,在含NO-2的吸收液中,依次加入磷酸,结晶紫溶液,KI溶液,PVA-124溶液,定容,摇匀后室温下反应一段时间,在723分光光度计上扫描得到吸收光谱,并于大吸收峰处测定体系的吸光度A,与空白对照的吸光度A0比较,以△A(A-A0)与NO-2浓度绘制标准曲线.结果 显示,NO-2将I-氧化成I-3后,I-3能够进一步与结晶紫形成离子缔合物,结晶紫在波长630 nm处有固定吸收峰,但随着离子缔合物的形成,体系在550 nm处出现新的吸收峰.在PVA-124存在下,NO-2在浓度4.0×10-3～0.40μg/ml范围内与离子缔合物的吸光度呈良好的线生关系(r=0.999 5);摩尔吸光系数达9.8×105L/(mol·cm).本方法 具有良好的选择性,操作简便,可用于空气中氧化氮的测定.
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磁性硅气凝胶对水中结晶紫的吸附作用
目的 利用磁性硅气凝胶吸附水中的结晶紫染料,研究其吸附行为.方法 以自制的磁性硅气凝胶作为吸附剂吸附水中的结晶紫,磁铁移除吸附剂,采用紫外分光光度法测定吸附后水中残留结晶紫的含量并计算去除率.结果 在中性条件下结晶紫的去除率可以达到90％以上;染料的吸附动力学符合拟二级动力学模型(R2=0.996);在298 k,pH =7的条件下,由Langmuir方程拟合的大吸附量为172.2 mg·g-1;Frendlich方程和Temkin方程结果为优惠吸附,而且非均匀表面为主要吸附位点.从热力学角度看,吸附过程是自发进行的吸热反应;并且该材料可多次重复利用.结论 磁性硅气凝胶吸附性能优良,具有快速分离和容易再生的优点,能够用于吸附废水中的结晶紫.
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黄芪对小鼠抗体形成细胞作用的实验研究
1 材料和方法1.1 仪器和药物 低温冷冻离心机:Beckman,美国;722分光光度计:上海光学仪器进出口公司.绵羊红细胞,新鲜豚鼠血清(补体),小牛血清,结晶紫溶液,羊抗鼠IgG.黄芪:购于滨州医学院附属医院中药房,取100g加水1000ml,文火煎煮1小时,去渣浓缩为100ml(浓度为100%)备用.
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重组人α-2b型干扰素生物学活性测定方法的改进
干扰素生物学活性测定是采用细胞病变抑制法[1]进行.此方法在显微镜下观察细胞病变百分比,用累积法计算结果.由于用肉眼观察结果,所以人为因素较大.当采用结晶紫进行细胞染色后,被干扰素保护的细胞将染成紫色,而在病变的细胞处形成空斑.脱色后用酶标仪测OD值[2]做标准曲线计算结果.染色法可提高结果的准确性.现将改进的方法报导如下:
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硫酸软骨素的结晶紫分光光度法测定
建立了分光光度法测定硫酸软骨素含量.在pH5.0醋酸一醋酸钠缓冲溶液中,结晶紫在583nm处有一特征吸收峰,其与硫酸软骨素生成的复合物在此波长下吸收强度降低,两者的吸光度差值与硫酸软骨素浓度在0.01～2.7μg/ml范围内线性关系良好,平均回收率为99.7%.
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氘代内标法测定药用牡蛎中的三苯甲烷类染料
目的 建立用液相-质谱串联联用仪,使用氘代内标测定药用牡蛎中三苯甲烷类染料残留的方法,以提高牡蛎药材的安全性.方法 样品溶液加入氘代混合内标,中性氧化铝固相萃取小柱净化后过WAX小柱分离,用乙腈对WAX小柱进行洗脱后吹干,残余物溶于50％乙腈水溶液,用液质串联联用仪测定,梯度洗脱,流动相为乙腈-5 mmol·L-1乙酸铵溶液.结果 各分子在0.5～10 μg·kg-1内线性关系良好,平均回收率为90.5％～102.6％,定量限为0.0543～0.2978 μg·kg-1.结论 此方法灵敏准确,专属性强,干扰少,重复性佳,对检测牡蛎药材中的三苯甲烷类染料残留极具参考价值.
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气管-支气管淀粉样变1例并文献复习
淀粉样变是指具有β片层结构的原纤维蛋白沉积造成组织器官结构和功能改变，引起相应临床表现的一组疾病。沉积物对结晶紫有异染性，可被过碘酸-雪夫( PAS )染色成紫色；对刚果红有嗜染色性，经刚果红染色，在偏光显微镜下呈特征性黄、绿二色性双折光体。该病临床少见，较少累及下呼吸道，我院2013年发现一例气管-支气管淀粉样变，介绍如下，并文献复习。
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结晶紫阻抑光度法测定果蔬中Vc的含量
目的 建立结晶紫阻抑光度法测定果蔬中Vc的含量.方法 以结晶紫为抑制剂,加入结晶紫后Vc的吸收峰有明显的降低,建立了一种测定Vc含量的新方法.结果 Vc量在1.0～50 mg·L-1范围内服从比耳定律,回收率为97.2%～99.0%,相对标准偏差0.35%～0.95%.结论 该方法用于测定果蔬中Vc的含量,结果令人满意.
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MTT比色法在干扰素生物学活性测定中应用的探讨
目的 探讨MTT比色法能否提高干扰素的生物学活性测定(细胞病变抑制法)结果的准确性.方法 比较在干扰素的生物学活性测定后期,采用结晶紫染色脱色后比色的方法(方法一)和采用加入噻唑蓝(MTT)后裂解比色的方法(方法二),经过6次的比较证明两种方法哪种测定的结果的准确性更高.结果 采用方法一测得的多次结果之间产生的偏差较大,单次结果的可信度较低;而采用方法二测得的多次结果之间产生的偏差较小,单次测定结果的相关系数R值不因方法的改变而有所降低,单次测定结果的准确度较高.结论 采用MTT比色法可提高干扰素的生物学活性测定结果的准确性.
关键词： 结晶紫 噻唑蓝(MTT) 干扰素生物学活性测定 -
结晶紫与牛血清蛋白相互作用研究
运用荧光光谱和紫外-可见吸收光谱研究了在缓冲溶液中不同温度下结晶紫(CV)与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用.实验结果表明,CV对BSA的内源荧光猝灭为静态猝灭过程.测定了该反应在不同温度下的结合常数KA,KA分别为1.49×105L·md-1(25℃)、1.15×105L·mol-1 (35℃)和1.01×105L·mol-1 (45℃),CV与BSA以摩尔比1∶1结合.根据Forster非辐射能量转移理论,求出了37℃时给体(CV)和受体(BSA)之间结合距离为r=6.48nm.计算出的热力学参数表明,CV和BSA之间的作用力主要是通过疏水作用力相互作用.
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UPLC-MS/MS法同时测定淡水鱼中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的方法研究
目的 本方法建立了UPLC/MS-MS测定淡水鱼中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐性孔雀石绿、隐性结晶紫残留量的测定方法.方法 样品用乙腈20 mL分两次提取,提取液经中性氧化铝固相萃取柱净化,用Shim-pack XR-ODS柱进行分离,电喷雾离子源串联质谱仪正离子(MRM)模式检测.结果 孔雀石绿、结晶紫和隐性孔雀石绿、隐性结晶紫在0.20 ng ～ 2.00 ng/mL之间有具有良好的线性关系,相关系数r为0.998 9 ～0,9997,检出限0.04μg～ 0.40μg/kg,加标回收率为69.8％～102.7％,相对标准偏差在1.27 ％～8.85％之间.结论 本方法在国标和行业标准的基础上进行了研究和改进,简化了样品前处理过程,缩短了检测时间,提高了效率,适合基层实验室特别是大批量样品时推广使用.
关键词： UPLC-MS/MS 孔雀石绿 结晶紫 淡水鱼 代谢产物
