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猴B病毒BVgD-多肽ELISA检测方法的建立
目的 建立猴B病毒抗体BVgD-多肽ELISA检测方法 .方法 以Western-blot分析猴B病毒糖蛋白D(BVgD)上的多肽抗原决定簇(BVgD-多肽)的抗原性,采用方阵滴定法,确定ELISA法的佳实验条件.用灭活BV全病毒、HSV-1和BVgD-多肽三种抗原系统对猴血清样品进行平行检测,比较分析了三种系统的抗原性特点.并且将检测结果 与美国BV抗体检测试剂盒的检测结果 进行了比较.结果 建立了猴B病毒抗体的BVgD-多肽ELISA法,研究结果 表明本方法 与BV全病毒和以HSV-1病毒为抗原的试剂盒相比,敏感性较低、特异性较好,避免了制备BV抗原对实验室要求高和HSV-1抗原引起的非特异性问题.检测结果 与美国实验室BV抗体检测结果 的符合率达85%.
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人和猴的B病毒感染
由于非人灵长类的遗传、解剖和生理与人类相似,被广泛用于生物医学研究,人时常会直接与猴或其组织和体液接触.猴疱疹病毒1型(B病毒)与单纯疱疹病毒(HSV)相似,携带B病毒的大部分猴没有明显的临床症状,但B病毒感染人可引起致死性脑脊髓炎和神经后遗症.了解B病毒的历史、结构及临床症状等,有利于进行早期的抗病毒治疗和预防严重疾病或死亡的发生.
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猴B病毒囊膜蛋白gD的B细胞表位预测及鉴定
目的：鉴定猴B病毒囊膜蛋白gD的抗原表位。方法利用生物信息学分析猴B病毒囊膜蛋白gD的二级结构、亲水性、表面可及性、抗原性指数以及柔韧性，得到可能的表位肽段；再利用合成肽与B病毒阳性血清进行ELISA验证，评价表位肽段的特异性和敏感性。结果在gD蛋白上预测得到7个表位肽段；ELISA测定结果显示，4个肽段（序列分别为46 LPPLEQKTD54、106 RGAPEATRSDA116、291 PELAPEERGTSRTPGD306和361 AVYLVRRRGR370）可与B病毒阳性血清发生免疫学反应，敏感性在40％～70％之间。结论 B病毒gD蛋白上至少存在4个线性化表位。
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猴B病毒抗体不同检测方法的比对
目的 猴B病毒(monkey B virus,BV),也称猴疱疹病毒I型(Cercopithecine herpesvirus 1),是重要的人兽共患病原.根据国家标准,猴B病毒作为抗原检测抗体,但由于生物安全问题,抗原制备受到很大限制,因此使用替代抗原进行抗体血清学检测并进行比对验证.方法 应用2种ELISA方法(抗原分别为BV和HVP2)和1种免疫酶法EIA方法(抗原为HSV-1)对本实验室135份送检恒河猴血液样品进行筛查,对阳性及可疑样品再以免疫荧光法IFA和Western blot方法(抗原为HSV-1)以及以HSV-1 gC1纯化糖蛋白为抗原的免疫印迹方法验证.结果 HVP2-ELISA、BV-ELISA和HSV-1-EIA阳性检出率分别为32.6%、37.8%和34.8%;3种方法检测结果一致的样品占91.1%(123/135),阳性结果可被IFA和WB确证;可疑样品12份,33.3%(4/12)的样品经验证检验为阳性.结论 与BV抗原相比,替代抗原HSV-1的敏感性和特异性较HVP2更为接近;阳性样品及可疑样品的确证检验应使用多种方法,避免漏检.
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简析猴B病毒在人类的致死性
非人灵长类动物与人类具有相似的遗传、解剖和生理结构,广泛应用于生物医学研究.猴B病毒(猴疱疹病毒1型)是一种非人灵长类所携带的人兽共患病原体,当感染其自然宿主恒河猴时没有明显的临床症状,但感染人类时,可引起人类致死性脑炎、脑脊髓炎和神经系统后遗症的发生.本文将简要分析猴B病毒感染人类造成严重后果的原因.
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猴B病毒gB基因在昆虫细胞中的表达
目的 研发猴B病毒ELlSA检测试剂盒中替代全病毒的抗原.方法 根据已报道的猴B病毒E2490株gB蛋白基因序列(GenBank登录号:AF533768)人工合成gB基因,通过XbaⅠ和EcoR I特异性酶切,将gB基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带gB基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB.结果 该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒bacmid-gB.在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,细胞变大变圊细胞核扩大,收获重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白.通过SDS-PAGE和Western blot分析及间接免疫荧光检测,结果表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为98 kDa.实验结果表明已成功构建了携带目的基因的重组质粒pFastBac- HTa-gB和转座的杆粒bacmid-gB,转染后在sf9昆虫细胞上得到表达.结论 研究结果为下一步以表达的gB蛋白为诊断抗原,替代现阶段以病毒作为抗原的猴B病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础.
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猴B病毒囊膜糖蛋白gD基因的克隆表达及其诊断价值评价
目的 克隆表达猴B病毒囊膜糖蛋白gD胞外区片段,评价其诊断价值,为猴B病毒快速鉴别诊断技术建立和疫苗研制奠定基础.方法 利用PCR扩增gD胞外区基因片段,测序正确后插入原核表达载体pET28b(+).重组质粒转化至大肠杆菌(BL21)DE3并进行诱导表达.纯化蛋白首先以His抗体和B病毒阳性血清进行鉴定,再用ELISA评价其诊断价值.结果 目的 蛋白为包涵体,占菌体总蛋白的35%,分子量约为48 kD.Western印迹显示,重组蛋白能与猴B病毒阳性血清和His单克隆抗体发生免疫反应;32份标准阳性血清和30份阴性血清的ELISA检测结果显示,该蛋白的检出率分别为93.75%和100%.结论 重组猴B病毒囊膜糖蛋白gD胞外区片段具有良好的反应原性,可作为猴B病毒血清学检测的候选抗原.
