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荧光定量PCR检测食品中沙门氏菌研究
实时荧光定量PCR技术（FQ-PCR）实现了PCR从定性到定量的飞跃，可对目标DNA分子起始拷贝数精确定量。因其检测方法精确、灵敏、污染途径少，已成为国际公认的核酸分子定量的标准方法，在食品中安全微生物的鉴定也有重要应用[1]。沙门氏菌是引起食物中毒为常见的致病菌，因此，建立食品中沙门氏菌中荧光定量PCR检测方法有重要的研究意义。材料与方法?1菌株：鼠伤寒沙门氏菌(C77-31)有中科院微生物所提供，肉类、奶制品等产品均购于农产品市场。2主要试剂和设备：DNA提取试剂购买于美国Invitrogen公司；Taq酶和缓冲液购买于日本TaKara；opction2荧光定量PCR购买于美国MJ公司；超速离心机购买于Eppendorf；细菌鉴定仪；所用的常规试剂均为分析纯，购买于国药化学试剂有限公司；方法，将标准菌株在XLD、三糖铁斜面和肉汤培养基上培养，从肉汤培养基中取一定量的菌液装入EP管中，离心，去上清，加入双蒸水，沸水浴、冰水浴，离心，取上清。食品样品采用沙门氏菌国标检测法(GB?4789.4-2010)中BPW前增菌之后的培养液装入EP管中，进行相同的操作。引物探针设计，在NCBI上搜索到目的基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象，然后用PrimerPremier5搜索引物和用Oligo验证评估引物。经过筛选进行特异性和灵敏度的实验。
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DR4-8.4C医用低速冷冻离心机的常见故障与维修
离心机是利用离心力分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械,应用于医学中的离心机就叫做医用离心机.医用离心机根据大转速可分为低速离心机(<10 000 r/min)、高速离心机(10 000～30 000 r/min)和超速离心机(>30 000 r/min),按有无制冷设备可分为冷冻离心机和普通离心机.
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一种简易的提纯甲状腺过氧化物酶的方法
1材料和方法1.1材料(1)甲状腺组织由锦州肉联场提供;(2)仪器55P-7型日立牌分离用超速离心机;HSC-20RB型低温高速离心机;(3)试剂均为国产分析纯试剂.
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用垂直转头密度梯度离心法研究硒对鼠肝核糖体合成的影响
目的:测定多聚核糖体含量及多聚程度的分布对研究生物组织的生理生化现象和代谢过程有重要意义.方法:我们把断奶一周的SD系大鼠(体重60～70 g)随机分为低硒组,加硒Ⅰ组和Ⅱ组,喂养8周,禁食12 h,断头取出肝脏,离心得去线粒体上清液,再加入DOC(脱氧胆酸钠),用差速和不连续梯度离心法分离得总核糖体和多聚核糖体.将制备的多聚核糖体铺放在15%～55%的S形蔗糖密度梯度液顶部,采用RPV50T垂直转头,10 ℃,40 000 r/min离心9 min(日立SCP-85H超速离心机).DGF-U型密度梯度仪上取法收集,同时检测260 nm处紫外吸收.结果:1.总核糖体,多聚核糖体含量(单位mgRNA/g肝组织):缺硒组总核糖体6.74±0.16,多聚核糖体3.61±0.18;多聚核糖体与总核糖体比值0.52±0.03;加硒Ⅰ组,总核糖体7.78±0.17,多聚核糖体4.72±0.09,比值0.61±0.02;加硒Ⅱ组,总核糖体7.93±0.18,多聚核糖体4.79±0.11,比值0.61±0.02;2.多聚核糖体沉降图谱表明(图略)缺硒组和加硒组均出现多个核糖体峰(n＞4),并且加硒组明显高于缺硒组.结论:本实验表明,加硒组多聚核糖体、总核糖及比值均高于缺硒组,图谱表明加硒组多聚核糖体聚集程度高.说明加硒组在蛋白质合成方面不仅合成能力增强,其活性也显著提高,提示硒有促进蛋白质合成和增强细胞修复的作用.本实验采用垂直转头密度梯度离心法,梯度在离心过程中的重定向作用使得离心路径大大缩短,离心管插放在转头靠边缘处,使大半径和小半径处的样品均受到较强离心场作用,因而分离时间大大缩短,核糖体降解随之减少;另外,该转头离心管容量大,加之重定向使梯度横断面进一步增大,梯度容量大大增加.该法为快速、大量制备及分析多聚核糖体提供一良好途径.
