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肠易激综合征患者结肠黏膜Toll样受体4表达及信号通路的研究
目的 研究Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白(MD)-2与核因子κB在肠易激综合征(IBS)患者结肠黏膜的表达,了解TLR4在IBS发病机制中的作用及其信号传导通路.方法 采用免疫组化方法检测30例IBS腹泻型患者(IBS组)及12名健康志愿者(健康对照组)结肠黏膜TLR4、MD-2和核因子κB的表达,半定量分析TLR4平均A值,分析MD-2和核因子κB的刚性表达率.结果 IBS患者较健康对照者结肠黏膜TLR4 A值高(0.40±0.10 vs 0.30±0.05,P=0.001).正常肠上皮细胞(IEC)MD-2无表达,炎症部位MD-2低表达;IBS组肠上皮固有层MD-2阳性细胞数较健康对照组多(26/30 vs 7/12).IBS组核因子κB表达阳性率及强度均高于健康对照组(A值0.31±0.04vs 0.25±0.04,P=0.003).结论 IBS患者的肠道黏膜存在炎症因子核因子κB信号传导通路的活化,炎症在IBS的致病机制中发挥重要的作用;TLR4在IBS发病中可能起一定作用;MD-2在IEC低表达或无表达,可能参与肠黏膜对肠道菌群的耐受.
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2型糖尿病肾病患者血清toll样受体4及髓样分化蛋白-2与其相关性研究
目的:研究2型糖尿病肾病患者血清toll样受体4(TLR4)与髓样分化蛋白-2(MD-2)在肾脏损害不同阶段的表达水平,初步探讨两者与2型糖尿病肾病的关系.方法:采用酶联免疫法检测TLR4及MD-2在健康者与2型糖尿病肾病患者血清中的水平变化,同时测定空腹血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr),即时尿标本的白蛋白、尿肌酐.结果:4组受检者血清TLR4和MD-2的水平两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).TLR4和MD-2分别与病程、FPG、TG、TC、LDL-C、BUN、SCr、UACR、尿白蛋白呈正相关(P＜0.01),与HDL-C、尿肌酐呈负相关(P＜0.01).结论:2型糖尿病肾病患者血清TLR4与MD-2显著升高,并参与了2型糖尿病肾病的发生及发展.
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内毒素诱导肝损伤库普弗细胞活化的分子机制
肠源性内毒素是肝损伤发病机制中的一个重要因子.然而,内毒素发挥效应的确切分子机制至今尚未完全阐明.近年的研究显示炎性细胞介质在肝细胞损害中具有重要作用.在肝内,库普弗细胞是炎性细胞介质的重要来源.在内毒素的作用下,库普弗细胞的内毒素信号转导系统表达增加,进而引起库普弗细胞活化、合成和释放一系列的炎症介质,引起肝脏的损害.
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机体免疫应答内毒素的分子机制
天然免疫处在机体防御微生物病原体的第一线[1],其面临的主要挑战是如何识别病原体、快速做出防御应答以及激活获得性免疫应答[2].许多细菌成分能够激活天然免疫,其中包括LPS、肽聚糖、磷脂酸、脂肽和细菌DNA.
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MD-2--Toll样受体的重要辅助分子
MD-2是1999年发现的能与TLR4胞外区结合并能促进TLR4转导LPS信号的重要分子.它不仅能促进TLR4的表达、影响TLR4在细胞内的分布、促进TLR4与LPS的结合,还能直接与LPS结合,并通过与TLR4胞外区结合,促进细胞对LPS的反应性;而且MD-2还能通过与TLR2胞外区结合促进细胞对LPS、肽聚糖、磷壁酸、G+细菌及G-细菌的敏感性.
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早期脓毒症大鼠肝TLR4和MD-2基因的表达及丙泊酚对其的影响
目的 观察早期脓毒症大鼠肝Toll 样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白-2(MD-2)基因的表达,并以丙泊酚进行干预,比较肝TLR4、MD-2基因表达的差异.方法 采用大鼠尾静脉注射脂多糖复制脓毒症模型.按完全随机化原则分为正常对照组(N组)、脂多糖组(L组)、脂多糖+丙泊酚组(LP组),每组20只.每组再依照注药后1、2、4、8 h随机分为4个亚组,各亚组5只.分别于相应时间点处死动物,留取肝脏标本,取肝右叶制成肝组织匀浆液(-20℃保存备用).用凝胶定量分析软件Gel-Pro analyzer 4.0检测RT-PCR扩增产物电泳条带的光密度值,分析计算基因相对表达值.结果 (1)N组大鼠肝组织可见少量TLR4、MD-2 mRNA表达;(2)L组注射脂多糖后1 h TLR4、MD-2 mRNA 表达较N组明显升高(P<0.05),之后渐下降(P<0.05);(3)与L组比较,LP组各时间点肝TLR4、MD-2 mRNA表达明显降低(P<0.05),但高于N组水平(P<0.05);(4)各组组内比较,肝TLR4、MD-2 mRNA表达水平均于1 h高,之后逐渐下降(P<0.05);(5)TLR4 mRNA与MD-2 mRNA表达呈正相关(r=0.461,P=0.041).结论 (1)正常大鼠肝组织内可见少量TLR4、MD-2 mRNA表达,脂多糖可迅速上调肝组织中TLR4、MD-2基因的广泛表达,丙泊酚干预后TLR4、MD-2 mRNA表达明显下调,对脓毒症大鼠有明显的治疗作用;(2)肝组织中TLR4、MD-2基因的表达与早期脓毒症的发生、发展密切相关,两种基因的mRNA表达呈显著正相关,动态监测TLR4、MD2 mRNA改变对脓毒症发病及治疗过程具有一定的意义.
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MD-2基因启动子区-1064、-1625 SNP对启动子活性的影响
目的 探讨MD-2基因启动子区-1064、-1625 SNP位点碱基变异对启动子活性的影响.方法 通过PCR和定点突变技术,构建了含MD-2基因基础启动子及-1625 G和-1064 G突变启动子,以双荧光素酶报告系统观察SNP对MD-2基因启动子活性的影响.结果 化学发光结果显示,在U937细胞中,-1625 G突变启动子活性比MD-2基础启动子活性高11.4%,差异显著.而-1064 G 突变启动子与MD-2基础启动子活性无明显差异.结论 -1625 C→G碱基变异可增强MD-2基因启动子活性,但-1064 SNP对靶基因启动子活性无明显影响.
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MD-2的B细胞抗原表位预测
目的利用生物信息学预测髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)的B细胞抗原表位,为MD-2特异性抗体的制备提供实验基础.方法采用多种生物软件和互联网服务器,以单参数(亲水性、抗原性、可及性及可塑性)预测为基础,二级结构预测初步筛选,抗原指数终确定的方法预测MD-2的B细胞抗原表位.结果96～110序列(RGSDDDYSFCRALK)的亲水性和抗原指数(AI=0.043)显著高于其他候选片断;65～76序列(YIPRRDLKQLYF)和107～117序列(ALKGETVNTTI)的AI分别为0.0063和0.0036.结论96～110序列(RGSDDDYSFCRALK)是MD-2的B细胞优势抗原表位.
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基于分子对接方法的青藤碱对TLR4受体的分子作用机制研究
目的:研究青藤碱对TLR4的分子作用机制.方法:通过分子对接技术对青藤碱与TLR4-MD-2复合体间的相互作用进行研究.结果:TLR4-MD-2识别脂多糖的空腔主要为疏水区域,空腔较大,可以容纳3个青藤碱分子,它们均可稳定结合在疏水空腔内,通过构型互补的方式占据空腔.其中青藤碱与MD-2的活性位点残基Val48、Ile52、Leu61、Phe76、Ile94、Tyr102、Ile117、Phe151、Ile153形成较强的疏水作用;第三次对接的青藤碱与Tyr102形成氢键作用,氢键长度为2.80?.结论:青藤碱能够通过疏水作用和氢键作用结合TLR4-MD-2复合体,从而影响TLR4对脂多糖的识别.
