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胃肠安丸对复合性腹泻大鼠小肠消化酶和胃肠激素的调节作用
目的 研究胃肠安丸对番泻叶联合束缚应激所致复合性腹泻大鼠小肠消化酶和胃肠激素的调节作用.方法 40只Wistar大鼠随机分成对照组、模型组和胃肠安丸高、中、低剂量组,每组8只.对照组未做任何处理,其余各组采用ig番泻叶水煎剂联合肢体束缚应激的方法制备腹泻动物模型,连续4d.在造模同时,模型组大鼠ig蒸馏水,胃肠安丸高、中、低剂量组分别ig胃肠安丸混悬液3.2、2.4、1.6 mg/mL(给药剂量分别为80、60、40 mg/kg),每天给药1次,连续4d.给药期间每日观察大鼠粪便性状；实验结束计算动物免疫器官脏器指数,比色法检测小肠黏膜乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和乳糖酶活性,放免法检测结肠组织血管活性肽(VIP)、P物质(SP)水平.结果 模型组大鼠100％出现腹泻,胸腺和脾脏指数、小肠酶活性显著下降,VIP、SP水平显著升高,与对照组相比具有统计学差异.胃肠安丸中剂量可降低大鼠腹泻指数,改善模型大鼠的胸腺和脾脏指数,提高小肠酶活性,调节VIP和SP水平,与模型组比较具有显著差异.结论胃肠安丸可通过提高小肠酶活性、调控紊乱的胃肠激素水平,达到治疗腹泻的目的.
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黄芪多糖对大鼠肌组织能量代谢的影响
目的 观察黄芪多糖(APS)对游泳大鼠糖代谢相关酶的影响,探讨APS对大鼠能量代谢影响的作用机制.方法 采用实验法检测腹腔注射APS大鼠(APS组)游泳力竭时间和不同状态下骨骼肌琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及乳酸水平的动态变化,并与腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液的大鼠(对照组)进行比较.结果 (1)对照组(24只)和APS组(24只)大鼠游泳力竭时间分别为(6.1±1.8)h和(9.3±2.9)h,差异有统计学意义(t=2.35,P＜0.05).(2)对照组大鼠安静状态下骨骼肌SDH活性[(12.2±2.8)U/mgprot]、MDH活性[(0.56±0.05)U/mgprot]及力竭即刻骨骼肌乳酸水平[(0.74±0.21)mmol/gprot]与ASP组[分别为(15.7±2.9)U/mgprot、(0.77±0.10)U/mgprot和(0.42±0.09)mmol/gprot]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)对照组大鼠游泳力竭即刻SDH活性[(9.3±1.1)U/mgprot]、运动1 h时MDH活性[(0.68±0.11)U/mgprot]、力竭即刻MDH活性[(0.44±0.04)U/mgprot]、力竭即刻LDH活性[(191±22)U/100 gprot]与安静状态下SDH、MDH、LDH活性[分别为(12.2±2.8)U/mgprot、(0.56±0.05)U/mgprot和(258±50)U/100 gprot]比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 APS可以提高大鼠机体有氧代谢酶SDH、MDH的活性,使能源物质得到充分利用的同时减少了对机体有危害的代谢产物的生成,从而维持更长时间的运动;APS对骨骼肌LDH活性、LD水平影响不明显,但有利于代谢产物乳酸的清除,从而可以延缓疲劳的产生.
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千金子制霜前后提取物对肠道酶影响
目的:研究千金子生品和霜品对大鼠小肠黏膜中的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和乳糖酶3种消化酶作用的差异.方法:将56只Wistar大鼠随机分成空白对照组、生品高剂量组(23.3529 g·kg-1)、生品中剂量组(11.6764 g·kg-1)、生品低剂量组(5.8382 g·kg-1)、霜品高剂量组(23.3529 g·kg-1)、霜品中剂量组(11.6764g·kg-1)、霜品低剂量组(5.8382 g·kg-1),每组8只.对照组给予生理盐水,其余6个给药组分别灌胃千金子制霜前后提取物高、中、低剂量的混悬液,每天给药1次,连续给药4d,取材并处理后采用比色法检测大鼠小肠黏膜LDH、MDH和乳糖酶活性.结果:千金子生品和霜品均会降低大鼠小肠黏膜LDH、MDH和乳糖酶的活性(P＜0.05),且酶的活性随着给药剂量的增大而减小,相同剂量下,千金子霜品实验组大鼠的3种肠道酶活性大于千金子生品实验组大鼠的3种肠道酶活性(P＜0.05).结论:千金子生品和霜品可以降低小肠3种消化酶的活性,且与给药剂量有一定的关系,同种剂量下,千金子制霜后对肠道酶活性的降低程度小于生品,表明制霜后毒性降低,从肠道酶的角度可以证明千金子制霜减毒的科学性.
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人参根生长发育过程中5种脱氢酶活力比较
目的 对五年生人参根生长发育过程中苹果酸脱氢酶(MDH),乳酸脱氢酶(LDH),乙醇脱氢酶(ADH),葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH),α-磷酸甘油脱氢酶(α-GPD)5种脱氢酶的活力进行比较.方法 分别于展叶期、开花期、结果期、果熟期、枯萎期采取人参根样品；采用中性磷酸缓冲液提取粗酶液；应用分光光度法测定MDH、LDH、ADH、G6PDH、α-GPD的活力.结果 在人参根生长发育过程中,MDH、ADH、G6PDH活力均逐渐升高；LDH活力在结果期和果熟期分别出现活力峰值；α-GPD在展叶期和果熟期未期活力高.结论 MDH、LDH、ADH、G6PDH、α-GPD的活力比较可作为判断人参生长发育状况的评价指标.
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刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析
目的 克隆、表达刚地弓形虫苹果酸脱氢酶(TgMDH)基因,并分析其免疫原性. 方法 提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgMDH的基因编码序列(GenBank登录号为AY650028)设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落.重组质粒pET30a(+)-TgMDH转化至E.coli BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物.优化表达条件,获得大量可溶性蛋白.经镍亲和层析法纯化后滴鼻免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗重组rTgMDH蛋白血清.分别以小鼠抗rTg-MDH血清和兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析rTgMDH蛋白的免疫原性. 结果 Tg-MDH基因RT-PCR扩增产物约为951 bp.经双酶切、PCR和测序结果显示重组质粒pET30a(+)-TgMDH构建成功.SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约36 000的可溶性重组蛋白.Western blotting分析结果显示,rTgMDH蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和兔抗弓形虫血清识别. 结论 本研究克隆的TgMDH基因序列能在原核表达系统中高效表达,且具有免疫原性.
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牛带绦虫亚洲亚种苹果酸脱氢酶基因的生物信息学分析
利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY)中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析工具,结合其他生物信息学分析软件包进行分析.牛带绦虫亚洲亚种苹果酸脱氢酶(MDH)基因是全长基因,长度为1 212 bp,编码区为30～1 028 bp,编码332个氨基酸,无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白理化性质稳定;预测3个主要的抗原表位(aa95～aa100、aa322～aa327和aa117～aa122)在MDH空间结构上相距较远的分子表面,aa117～aa122属于带绦虫共有的线性抗原表位.预测胞桨型苹果酸脱氢酶是一个潜在的诊断抗原.
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苹果酸脱氢酶的克隆、表达与生物活性的研究
根据大肠杆菌DNA中苹果酸脱氢酶的序列合成上下游引物,以大肠杆菌E.coli DH5α基因组为模板通过PCR扩增得到苹果酸脱氢酶的基因,将该基因与表达载体pET28a连接构建重组子,将该重组子转化入大肠杆菌E.coli BL21构建工程菌,通过IPTG诱导表达苹果酸脱氢酶,并初步测定了该菌株拆分DL-苹果酸的能力.
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血清/尿液中枸橼酸浓度自动化检测参数建立及评价
枸橼酸是重要的代谢中间物,人类枸橼酸经肾脏代谢及排泄.枸橼酸通过表面活性机制阻碍钙盐结晶的形成及聚集并阻止尿液中草酸盐及磷酸盐的过度饱和.国外研究表明,一些泌尿系统钙盐结石患者常有低枸橼酸尿症.目前测定枸橼酸浓度的方法主要是基于枸橼酸裂解酶,苹果酸脱氢酶,乳酸脱氢酶及NADH的连锁反应,我们对引进的测定尿液及血清枸橼酸浓度的试剂盒进行评估,报告如下.
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刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因编码蛋白主要特性与抗原表位的生物信息学分析
目的 用生物信息学方法分析刚地弓形虫苹果酸脱氢酶(TgMDH)基因编码蛋白的结构与抗原表位,预测该蛋白的免疫原性.方法 利用蛋白分析专家系统(ExPASy)提供的ProtParam、SOSUI、TMPRED、HNN、MotifScan和NCBI上的ORF finder、SignalP、Bcepred等生物信息学在线分析程序,结合Gene Runner和DNAMAN等生物信息学软件,分析并预测TgMDH蛋白的开放阅读框、理化性质、可溶性、信号肽、跨膜区、表面可及性、可塑性、亲(疏)水性、翻译后修饰位点、二级结构及抗原表位,通过CPHmodels程序预测该蛋白的三维空间结构.结果 TgMDH蛋白由316个氨基酸组成,分子式为C1498H2454N402O440S20,分子质量单位为33 777.5,等电点为6.01,波长280 nm时的吸光度(A)值为0.364,半衰期为30 h,有9个表面可及性参数≥1.9的区域、4个亲水性参数得分≥1.9的区域、7个柔韧性参数得分≥2的区域、14个翻译后修饰位点和14个潜在抗原表位,为可溶性表达蛋白.结论 TgMDH基因编码蛋白为可溶性蛋白,有多个抗原表位,具有免疫原性,可作为弓形虫病疫苗候选抗原.
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白念珠菌与LDH抗体的交叉免疫研究
目的 识别白念珠菌苹果酸脱氢酶(Candida albicans malate dehydrogenase,CaMDH)保守表位结构.方法 本研究利用生物信息学方法,预测CaMDH的结构、功能和进化关系,并选取同源序列中与CaMDH序列一致性较低的日本血吸虫乳酸脱氢酶(Schistosoma japonicum lactate dehydrogenase,SjLDH)免疫血清与白念珠菌总蛋白进行交叉免疫反应.结果 发现CaMDH与常见病原生物的同源序列一致性可达43％,其中与SjLDH一致性低(18.2％).CaMDH具有乳酸脱氢酶保守区域,7个主要的B细胞表位,其中3处与SjLDH表位相似.苹果酸脱氢酶活化点包含于NAD(P)结合部分中.白念珠菌总蛋白与SjLDH免疫血清交叉免疫反应阳性.结论 交叉免疫反应阳性提示识别结合位点为LDH/MDH同源序列高度保守的表位结构,为进一步从高度保守的抗原决定簇中筛选真菌疫苗表位、诊断特异抗体、抗真菌药物治疗靶点提供了实验基础.
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滇川钉螺的同工酶谱比较
目的研究滇川工地钉螺的同工酶谱特征及其亲缘关系,为钉螺分类提供资料.方法对采自四川省天全、绵竹、彭县;云南省大理、楚雄、洱源的钉螺分别进行解剖、匀浆,应用聚丙烯酰胺凝胶对匀浆物电泳,分别进行苹果酸脱氢酶(MDH)和酯酶同工酶(EST)染色.结果 MDH共分离出3条酶带,6地钉螺酶谱特征完全一致,Rf值为0.164,0.208,0.309,EST共分离出11～14条酶带,6地钉螺完全一致的酶带有8条,Rf值为0.074,0.296,0.373,0.408,0.497,0.520,0.601,0.651.结论 2省间曾被命名为不同种群的钉螺亲缘关系密切;同时因长期的地理阻隔,各隔离群钉螺酶谱特征已出现不同程度的分化.
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刚地弓形虫LDH-Like MDH cDNA的克隆和序列分析
目的获取弓形虫RH株速殖子苹果酸脱氢酶(MDH)的cDNA全长序列,并对推导翻译出的氨基酸(aa)序列进行分析.方法将NCBI GenBank中登录的弓形虫MDH EST序列进行比对、拼接和电子延伸,发现近5'末端的部分核酸序列缺失.基于分析,设计的上游、下游引物分别包含起始密码子ATG和终止密码子TGA(TGA→UGA),使经RT-PCR扩增出的片段对应完整的CDS或者ORF.之后对MDH CDS推导翻译出的aa序列进行了保守功能域和同源性分析.结果本研究克隆的MDH的cDNA全长951bp,推导翻译出的蛋白质有316个aa组成,约35kDa,与预期大小接近.保守功能域分析表明,弓形虫MDH接近类-乳酸脱氢酶型(lactate dehydrogenase-like)MDH,其准确定名缩写为LDH-like MDH,同时弓形虫MDH还具有其它脱氢酶类的特征.弓形虫MDH除与隐孢子虫和恶性疟原虫高度同源外,还与很多细菌等物种同源,但与人的同源性低(22%).弓形虫MDH cDNA序列在NCBI GenBank中登录号为AY650028,对应aa序列的登录号为AAT67462.结论本研究首次获得了弓形虫MDH基因的全长cDNA序列和对应的aa序列.MDH是三羧酸循环中的重要酶类,该酶活性的改变,将直接影响弓形虫的存活.弓形虫MDH aa序列与人MDH蛋白间的同源性很低,提示基于MDH蛋白作为药靶,经高通量技术筛选抗弓形虫药具有可行性.
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本草消渴丹对实验性糖尿病大鼠糖代谢酶活性的影响
目的 探讨中药复方-本草消渴丹对2型糖尿病大鼠糖代谢的关键酶己糖激酶、苹果酸脱氢酶活性的影响,为临床用药提供科学依据.方法 选择高脂、高糖饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ,25 mg/kg,腹腔注射)的方法建立大鼠2型糖尿病模型,分别以本草消渴丹和西药二甲双胍进行干预,每周末断尾取血检测空腹血糖值.治疗4周后检测大鼠空腹血糖值、肌肉己糖激酶(HK)和肝脏苹果酸脱氢酶活性(MDH).结果 本草消渴丹治疗可以显著降低糖尿病大鼠血糖,其肌肉组织HK、肝脏组织MDH活性与模型组对比有显著性差异.结论 中药复方-本草消渴丹降低血糖的作用机制之一可能是直接或间接提高了葡萄糖氧化分解的酶活性;本草消渴丹对对抗糖尿病体重降低有一定作用.
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苹果酸脱氢酶与p53蛋白相互调控对肿瘤进程的影响
p53基因是一种重要的抑癌基因,其肿瘤抑制机制十分复杂,p53基因编码的p53蛋白能通过多种途径抑制肿瘤的进程.苹果酸脱氢酶(MDH)是一种重要的代谢酶,但是MDH作用并不局限于代谢调节.p53蛋白与苹果酸脱氢酶的相互调控作用能影响肿瘤细胞的细胞周期、衰老和凋亡.同时,也对肿瘤细胞中葡萄糖、谷氨酸盐、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)、脂质等物质代谢有重要影响.文章拟对MDH与p53蛋白相互调控作用对肿瘤细胞进程的影响及其相关机制做一综述.
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殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及其重组蛋白的表达和活性测定
目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定.方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5α,酶切及PCR鉴定,测序.将重组质粒转入BL21 (DE3)中,选择佳表达条件,提纯及测定活性.结果:PCR扩增产物特异,全长1139 bp.测序结果包含MDH基因,并与GenBank中所报道的大肠杆菌MDH基因序列进行对比分析,其同源性为99％.MDH纯化后的蛋白活性值为0.4403 U/mL.结论:成功克隆殊异韦荣菌MDH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架.还获得了重组表达MDH蛋白的适表达条件,并测出韦荣菌苹果酸脱氢酶的活性.
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石榴花多酚对链脲佐菌素诱发2型糖尿病大鼠糖代谢的影响
目的:研究石榴花多酚(pomegranate flower polyphenol,PFP)对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠胰岛素抵抗(IR)作用以及糖代谢的影响.方法:高糖高脂饲料喂养加STZ一次性腹腔注射(45 mg·kg-1)建立2型糖尿病大鼠模型.分别以石榴花多酚100,300mg·kg-1干预4周后,检测空腹血糖(Fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素水平(Fasting insulin,FIns)、血清游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)浓度;白介素-6(Interleukin IL-6);肌糖原(Muscle glycogen,MG)和肝糖原(Hepatic glycogen,HG)含量及糖代谢中关键酶己糖激酶(Hexokinase,HK)和苹果酸脱氢酶(Malic dehydrogenase,MDH)活性.结果:与模型组相比,石榴花多酚各剂量组均可有效降低2型糖尿病大鼠FPG、Fins(P<0.05或P<0.01),显著降低FFA浓度、IL-6浓度和肝脏MDH活性,增加骨骼肌中HK的活性和MG的含量.对HG含量无显著影响.结论:石榴花多酚可有效降低2型糖尿病大鼠的FPG,缓解胰岛素抵抗.可能与降低血清FFA,增加糖代谢过程中关键酶HK的活性并增加MG的合成有关.
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不同产地、不同年限人参中3种同工酶活力比较
目的:对不同产地,不同生长年限(4年、5年)的人参中过氧化物酶(Peroxidase POD)、过氧化氢酶(Catalase CAT)、苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase MDH)活力进行比较.方法:采用中性缓冲液提取总蛋白,应用愈创木酚比色法测定过氧化物酶活力,过氧化氢比色法测定过氧化氢酶活力,草酰乙酸比色法测定苹果酸脱氢酶活力.结果:不同产地人参的同工酶活力存在一定差异,4年、5年生人参同工酶活力具有相似性,差异较小.结论:POD、CAT、MDH的活力可以作为人参品种鉴定及药材优选的评价指标.
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白念珠菌伊曲康唑耐药性与乳酸脱氢酶抗体结合水平的关系研究
目的:探讨白念珠菌与乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)抗体的结合水平与伊曲康唑耐药性的关系.方法:实验用白念珠菌临床株共30株,包括伊曲康唑耐药株、中介株和敏感株各10株,采用P0013B放射免疫沉淀分析裂解液提取白念珠菌总蛋白,应用ELISA法与LDH抗体反应,检测并比较三组菌株与LDH抗体结合的水平.结果:ELISA检测耐药株与LDH抗体相对结合量为348.71±34.36,中介株与LDH抗体相对结合量为327.00±85.60,敏感株与LDH抗体相对结合量为443.43±35.64,三组差异有统计学意义(F=8.52,P＝0.003).结论:白念珠菌耐药株与LDH抗体相对结合量较敏感菌株低,提示白念珠菌与LDH抗体相对结合量下降可能与菌株耐药的发生有关.
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酶学检测精氨琥珀酸酶方法的建立
论 所建立的酶学检测方法结果准确可靠,易自动化.
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生物信息学法分析猪带绦虫苹果酸脱氢酶结构与功能
目的:分析和预测猪带绦虫苹果酸脱氢酶的结构和特性,用于指导其生物学功能的实验研究.方法:利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的工具,结合Pcgene和Vector NTI suite生物信息学分析软件包,从猪带绦虫全长cDNA质粒文库中识别苹果酸脱氢酶基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等.结果:该基因编码332个氨基酸,为全长基因.GenBank中与细粒棘球绦虫苹果酸脱氢酶序列同源性高,理论分子量为36459.2 Da.预测编码蛋白无跨膜区,无二硫键,稳定性较好.与吸虫属的苹果酸脱氢酶进化关系近.结论:应用生物信息方法从猪带绦虫成虫Cd-NA文库中筛选出了猪带绦虫核糖体Cdna全长序列并预测得到其结构与功能方面信息.
