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T1D发病中的双刃剑--iNKT细胞
1型糖尿病（ type 1 diabetes， T1D）是一种由遗传因素、环境因素和免疫调节因素共同参与的自身免疫性疾病。由于免疫系统的功能紊乱和调节异常，胰岛β细胞受损，导致胰岛素缺乏，糖代谢紊乱。恒定自然杀伤T （ in?variant nature killer T， iNKT）细胞是一种同时参与适应性免疫和固有免疫应答的特殊T细胞亚群。近年来发现iNKT细胞与T1D的发病密切相关，虽然有关报道众多但结论不一。旨在对这一领域的新研究进展进行综述。
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iNKT细胞对哮喘小鼠肺树突状细胞表面分子和促炎性细胞因子表达水平的影响
目的:观察iNKT细胞对哮喘小鼠肺树突状细胞(LDCs)表面分子和促炎性细胞因子表达水平的影响.方法:24只野生型BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组和过继转移组,每组8只;12只CD1d-/--BALB/c小鼠随机分为CD1d-/-对照组和CD1d-/-哮喘组,每组6只.哮喘组、过继转移组和CD1d-/-哮喘组小鼠以卵清白蛋白致敏和激发,正常对照组和CD1d-/-对照组以等量PBS替代,其中过继转移组在第1次激发前1 h给予iNKT细胞尾静脉注射.采用流式细胞仪检测各组小鼠LDCs及表面分子MHCⅡ、CD80、CD86和CD40的表达水平;ELISA法检测LDCs体外培养上清液IL-12p70、IL-6、TNF-α和IL-10水平.结果:过继转移组小鼠LDCs数量和MHCⅡ、CD40、CD80、CD86表达水平及LDCs体外培养上清液IL-12p70、IL-6、TNF-α水平明显高于哮喘组(P<0.05或P<0.01);CD1d-/-哮喘组小鼠LDCs数量和MHCⅡ、CD40、CD80、CD86表达水平及LDCs体外培养上清液IL-12p70、IL-6、TNF-α水平明显低于哮喘组(P<0.05或P<0.01),但明显高于正常对照组和CD1d-/-对照组(P<0.05或P<0.01).结论:iNKT细胞可以增强哮喘小鼠LDCs表面分子和促炎性细胞因子的表达水平.
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恒定自然杀伤T细胞在过敏性哮喘中的调节机制
恒定自然杀伤T (invariant nature killer T,iNKT ) 细胞是T淋巴细胞中独特的亚群,也是经典的自然杀伤T(NKT)细胞,既表达T细胞的表面标志,又表达自然杀伤(NK)细胞的表面标志CD161(NK1.1) 分子和NK细胞受体P1C.活化iNKT的经典抗原是糖脂类抗原α-半乳糖神经酰胺(α-galactosylceramide,α-GalCer),该抗原由作用类似于主要组织相容性复合物(MHC)Ⅰ类分子的CD1d提呈给iNKT并使之活化.
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脓毒症早期恒定自然杀伤T细胞活化对预后的影响
目的 探讨脓毒症早期外周血恒定自然杀伤T (iNKT)细胞活化对炎症及病情的影响.方法 取健康雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,分别为假手术组、盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症模型组和CLP模型+CD1d阻断性抗体预处理组(抗-CD1d组).CLP术后24 h应用流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏、胸腺iNKT细胞水平,ELISA法后检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、干扰素γ(IFN-γ)和IL-4等细胞因子水平,分析iNKT细胞与细胞因子的相关性,检测外周血和腹腔灌洗液中的细菌菌落数.观察各组小鼠CLP后10 d生存率.选取脓毒症确诊患者及健康志愿者各20例,年龄18～70岁,检测脓毒症患者及健康志愿者外周血iNKT细胞比例及细胞因子水平,分析iNKT细胞与细胞因子及急性生理和慢性健康(APACHEⅡ)评分的相关性.结果 脓毒症模型组小鼠的iNKT细胞和TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-4水平均高于假手术组(P＜0.05,P＜0.01),外周血及腹腔中细菌菌落数高于假手术组(P＜0.01),术后7d内小鼠全部死亡;与脓毒症模型组小鼠相比,给予抗-CD1d抗体预处理后,抗-CD1d组小鼠外周血、脾脏、胸腺的iNKT细胞比例下降(P＜0.05,P＜0.01),外周血TNF-α、IL-6、IFN-y和IL-4水平及外周血和腹腔液中细菌菌落数减少(P＜0.05,P＜0.01),术后第10天时小鼠仍存活4只.脓毒症患者的iNKT细胞及细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-y和IL-4水平相比健康对照组增加(P＜0.05,P＜0.01),且iNKT细胞与IFN-γ、IL-4水平及APACHEⅡ评分呈正相关(P＜0.05).结论 脓毒症早期外周血iNKT细胞水平明显增加并与脓毒症病情严重程度及预后有一定关系,提示iNKT细胞可能在脓毒症炎症反应中起重要调节作用.
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慢性HBV感染者血清IL-15、外周血恒定自然杀伤T细胞水平变化及临床意义
目的 探讨慢性HBV感染者血清IL-15、外周血恒定自然杀伤T细胞( iNKT)水平变化及临床意义.方法 选取HBV感染者87例,其中慢性乙型肝炎35例(慢乙肝组,病情为轻度15例、中度11例、重度9例),慢性HBV携带者52例(HBV携带组);免疫清除期30例,免疫耐受期57例.另选同期体检健康者50例为对照组.采用ELISA法检测血清IL-15,采用AU-680全自动生化分析仪检测ALT、AST和总胆红素(TBil)水平;采用流式细胞仪检测iNKT占CD3 +T细胞的比例(iNKT比例)以及分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4的iNKT细胞占总iNKT细胞的比例(简写为IFN-γ/iNKT、TNF-α/iNKT、IL-4/iNKT).结果 慢乙肝组、HBV携带组血清IL-15、ALT、AST和TBil水平均高于对照组,外周血iNKT比例及IFN-γ/iNKT、TNF-α/iNKT、IL-4/iNKT比例均低于对照组,且慢乙肝组上述变化均较HBV携带组显著,组间比较P均＜0.05.随着慢乙肝病情的加重,患者血清IL-15、ALT、AST和TBil水平逐渐升高,外周血iNKT比例及IFN-γ/iNKT、TNF-α/iNKT、IL-4/iNKT逐渐降低,组间比较P均＜0.05.与免疫耐受期慢性HBV感染患者相比,免疫清除期患者血清IL-15、ALT、AST和TBil水平均升高,外周血iNKT比例及IFN-γ/iNKT、TNF-α/iNKT、IL-4/iNKT比例均下降,组间比较P均＜0.05.慢性HBV感染者血清IL-15水平与外周血iNKT比例及IFN-γ/iNKT、TNF-α/iNKT、IL-4/iNKT比例均呈负相关(P均＜0.05),与血清ALT、AST及TBil水平均呈正相关(P均＜0.05);外周血iNKT比例与IFN-γ/iNKT、TNF-α/iNKT、IL-4/iNKT比例均呈正相关(P均＜0.05).结论 慢性HBV感染者血清IL-15水平升高,外周血iNKT数量下降,二者的水平变化与患者病情及免疫状态密切相关.
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α-半乳糖神经酰胺对哮喘小鼠肺树突状细胞表面分子和促炎细胞因子表达水平的影响
目的:观察α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)对哮喘小鼠肺树突状细胞(LDCs)表面分子和分泌细胞因子水平的影响.方法:将24只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组和哮喘α-GalCer组,每组8只.以卵清白蛋白(OVA)诱导哮喘动物模型,分别以α-GalCer或PBS干预.流式细胞术检测小鼠LDCs表面分子MHC-Ⅱ、CD40、CD86和CD80的表达水平,ELISA法检测小鼠LDCs培养上清液IL-12p70、IL-6、TNF-α和IL-10的水平;同时检测小鼠肺iNKT细胞数量和分泌细胞因子水平.结果:与哮喘组比较,哮喘α-GalCer组小鼠LDCs表面分子MHC-Ⅱ、CD40、CD86和CD80表达水平明显升高(P＜0.01),LDCs体外培养上清液IL-12p70、IL-6和TNF-α水平明显升高P＜0.01或P＜0.05);同时哮喘α-GalCer组小鼠肺iNKT细胞数量和分泌细胞因子水平明显增高(P＜0.01或P＜0.05).结论:α-GalCer可以增强哮喘小鼠LDCs表面分子和促炎细胞因子表达水平,这可能与其活化肺iNKT细胞有关.
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不同剂量链脲佐菌素诱导C57BL/6小鼠1型糖尿病模型的复制与iNKT细胞的检测
目的 腹腔注射不同剂量链脲佐菌素(STZ)于雌性C57BL/6小鼠,诱导建立与人类1型糖尿病相似的动物模型,研究适链脲佐菌素(STZ)建模剂量.方法 35只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(=5)和模型一、二、三组(STZ剂量分别为40、50和60 mg/kg),每组10只.模型组连续5 d腹腔注射不同剂量STZ,测定注射前、注射后1、2、3、4和5周的空腹血糖和体重,小鼠胰岛素自身抗体(IAA)阳性率,观察小鼠饮食、饮水和排尿情况.流式细胞技术(FACS)分析血和脾细胞悬液中恒定自然杀伤T细胞(iNKT)细胞比例;HE染色观察胰岛病理.结果 与对照组比较,模型三组饮水量、进食量和排尿量增加,体重减轻.与对照组比较,模型三组血糖变化明显,注射STZ后第1周迅速升高,第4周达高峰,随后下降,差异有统计学意义(<0.05).与对照组比较,模型组3组胰岛萎缩,胰岛细胞不规则,数目减少.模型二组和模型三组IAA阳性率分别达到30%和90%.与对照组比较,模型三组外周血CD4+NK1.1+淋巴细胞和脾CD4+NK1.1+淋巴细胞比例减少,差异有统计学意义(<0.05).结论 诱导建立雌性C57BL/6小鼠1型糖尿病模型的适STZ剂量为60 mg/kg.
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α-半乳糖神经酰胺对小鼠肺iNKT细胞数量、活性和气道炎症反应的影响
目的 观察α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)对小鼠肺iNKT细胞数量、活性和气道炎症反应的影响.方法 12只野生型Balb/c小鼠随机分为α-GalCer治疗组和正常对照组,每组6只;12只CD1d#-Balb/c小鼠随机分为CD1d-/-α-GalCer治疗组和CD1d-/-对照组,每组6只.野生型和CD1 d+α-GalCer治疗组小鼠单次腹腔注射c-GalCer 2 μg,并用等量PBS对照.分别采用流式细胞仪检测小鼠肺iNKT细胞、IL-4+和IFN-γ+ iNKT细胞的数量;HE和PAS染色观察肺组织炎症和气道杯状细胞增生;姬姆萨染色检测肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和分类计数;ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5、IL-10、IL-13水平和脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5、IL-13水平.结果 野生型α-GalCer治疗组小鼠肺iNKT细胞、IL-4+和IFN-γ+ iNKT细胞的数量明显高于野生型正常对照组(P＜0.05).野生型α-GalCer治疗组小鼠肺组织无炎症改变和基底膜杯状细胞增生;BALF中细胞总数和分类计数、BALF及脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5和IL-13水平与野生型对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).野生型α-GalCer治疗组小鼠BALF中IL-10水平明显高于野生型正常对照组(P＜0.01),但CD1 d-α-GalCer治疗组小鼠BALF中IL-10水平与野生型正常对照组和CD1d-/-对照组比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 腹腔注射α-GalCer可以增加小鼠肺iNKT细胞数量和活性,但不能诱导气道炎症反应.
