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人类精子分离研究进展
目前全世界已发现300多种性连锁隐性遗传性疾病,如色盲、肌营养不良、血友病和G-6PD缺乏等.这些疾病主要通过携带致病基因的母亲传给男性子代.产前诊断及选择性流产曾经是唯一能避免患儿出生的方法.近年来发展起来的种植前胚胎性别诊断可以说是产前诊断的延伸.广义的种植前性别诊断还应包括受精前配子的性别诊断,即X和Y精子的分离和鉴别.
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不含钙镁离子操作液在胚胎种植前诊断中的应用
自1990年第1例经种植前遗传学诊断的婴儿成功分娩[l]以来,种植前遗传学诊断在遗传性疾病和染色体疾病诊断中得到越来越广泛的应用.然而种植前胚胎所能提供的遗传物质很少,如何在尽量不影响胚胎发育潜能的前提下,有效地获得足够的遗传物质用于诊断,是影响种植前遗传学诊断成功率的重要问题.人类胚胎活检多在6～10细胞期进行,此时部分卵裂球之间已有细胞间连接而给活检操作带来一定困难,本研究将不含钙镁离子的操作液应用于胚胎活检,观察其对活检结果及活检后胚胎继续发育的影响.
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7条印迹基因在人类种植前胚胎的表达
目的完善印迹基因在人类种植前胚胎的表达图谱.方法应用巢式RT-PCR技术检测7条印迹基因P57KIP2、LIT1、TSSC3、GRB10、PEG3、ARHI、ZAC1在人类卵子和种植前胚胎中的正常表达.结果卵子和各期种植前胚胎、囊胚中均存在P57KIP2、ZAC1的表达;LIT1自8细胞胚胎开始表达,持续至囊胚期;TSSC3于卵子及各期种植前胚胎中均未表达; 4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到GRB10正常表达;除4细胞胚胎未见表达外,卵子和其余各期胚胎均可测得ARHI表达;Peg3表达于4细胞、8细胞胚胎和囊胚.结论除TSSC3外的其余6条基因均表达于种植前胚胎,有助于开展种植前遗传学诊断,为探讨印迹基因与辅助生殖、先天性印迹疾病以及肿瘤的关系提供理论依据.
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植入前遗传学诊断在遗传性肾脏疾病的应用
植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)技术是一种建立在辅助生殖技术、分子生物学、细胞生物学和遗传学基础上的孕前诊断技术,主要是通过对配子或种植前胚胎的遗传物质进行分析,选择不致造成疾患的胚胎移植回母体子宫,达到生育健康后代的目的,以避免孕育遗传病胎儿给夫妇带来的痛苦,也避免选择性流产的风险及引起相关的伦理观念的冲突.可以说PGD从根本上实现了优生.
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印迹基因生长因子-受体结合蛋白10在人类卵子及种植前胚胎的表达
目的检测Silver-Russell syndrome(SRS)候选印迹基因-生长因子受体结合蛋白10(Grb10)在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,探讨Grb 10与胚胎发育以及辅助生殖的关系.方法应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因Grb10在人类卵子及种植前胚胎的表达.结果4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到Grb10基因的表达,2细胞胚胎中未见表达.结论印迹基因Grb10表达于种植前胚胎,与胚胎发育密切相关.
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黄体生成素在人类卵母细胞和种植前胚胎的表达
[目的]研究人类卵母细胞和种植前胚胎黄体生成素的表达.[方法]应用免疫荧光标记激光共聚焦显微镜方法对不成熟和成熟卵母细胞及种植前胚胎进行黄体生成素表达的观察.[结果]人类卵母细胞和种植前胚胎均存在黄体生成素的表达.不成熟和成熟卵母细胞及2～8细胞期种植前胚胎阶段主要分布在细胞膜;桑葚胚和囊胚阶段分布在细胞膜和细胞浆.多精受精组和正常受精组、新鲜胚胎组和冻融胚胎组黄体生成素的表达没有差异.[结论]人类卵母细胞和种植前胚胎存在黄体生成素的表达.黄体生成素可能以旁或/和自分泌方式影响人类卵母细胞和胚胎发育,并在种植过程胚胎与母体子宫内膜的对话中起直接作用.
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巢式聚合酶链反应-序列特异引物法用于单卵裂球HLA-A位点分型研究
目的评价巢式聚合酶链反应-序列特异引物法(polymerase chain reaction-sequence specific primer, PCR-SSP)用于人类种植前胚胎的单个卵裂球HLA-A位点分型的准确性和可靠性.方法通过扩增HLA-A第2外显子评价单卵裂球巢式第1轮扩增的成功率,用巢式PCR-SSP法进行单卵裂球HLA-A分型.结果从10个家系的体外受精剩余胚胎中获得120个卵裂球,巢式第1轮扩增平均成功率为86.7%,其中前期家系F1～F5为78.2%,后期家系F6-F10为93.8%;对80个卵裂球进一步做SSP分型,其中11个卵裂球HLA-A第2外显子扩增失败,无分型结果,而69个卵裂球HLA-A第2外显子扩增成功,都获得分型结果.除6个卵裂球因亲本纯合无法判断是否发生缺失外,剩下63个卵裂球中,基因型与根据亲本预测的结果相符的有59个,占93.6%;显示缺少部分亲本等位基因的有3个,占4.8%;显示部分亲本等位基因重复的1个,占1.6%.结论在第1轮扩增成功的基础上,巢式PCR-SSP法用于单卵裂球HLA-A分型准确可靠,可用于临床上筛选与需要造血干细胞移植的患儿HLA型等同的胚胎.
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胚胎植入前遗传学诊断技术及其相关问题
植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)是指对配子和种植前胚胎的遗传学诊断,把筛选遗传缺陷提早到早早期胚胎阶段.这是一项建立在体外受精-胚胎移植及现代分子生物学、细胞生物学和遗传学基础上新的诊断方法.这项技术从90年代开展以来,据统计目前世界上已进行了6000多个PGD周期,至少1000个左右的经PGD诊断后的正常孩子出生.十多年来,PGD在方法学上有不少新的改进,适应证也越来越广,解决了部分有染色体异常或单基因疾病的患者的生育问题,明显降低了自然流产率,减少了染色体异常的畸形儿、有遗传疾病的患儿出生,然而经PGD检测者的活婴出生率并没有明显的提高.究其原因,PGD的检测方法和技术还存在一些缺陷,仍然有异常核型或携带致病基因的胚胎植入宫腔.
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五个抑癌印迹基因在人类卵子及种植前胚胎的表达
目的:检测5个抑癌印迹基因在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,完善印迹基因在人类种植前胚胎的表达图谱.方法:应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因ARHI、LOT1、P57KIP2、Peg3、TSSC3在人类卵子和种植前胚胎中的表达.结果:卵子和各期种植前胚胎、囊胚中均存在LOT1、P57kip2转录;除4-细胞胚胎外,卵子和其余各期胚胎均可测得ARHI表达;Peg3表达于4-细胞、8-细胞胚胎和囊胚;TSSC3于卵子及各期种植前胚胎中均未表达.结论:除TSSC3外的4个抑癌印迹基因均表达于种植前胚胎,为探讨印迹基因与ART及肿瘤的关系提供理论依据.
