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雌、孕激素对人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞系中TMEM16A的表达调节
目的 探讨雌、孕激素在体外培养的人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞系中对跨膜蛋白16A(TMEM16A)的表达调节. 方法 通过免疫荧光技术检测TMEM16A在人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞系中的表达及定位.体外培养Ishikawa细胞系48 h后,根据加入药物的不同分为实验组:E2组、P4组和E2+P4组,而加入0.1％二甲基亚砜(DMSO)的作为空白对照组.采用实时荧光定量(Q-PCR)和免疫印记试验(Western blotting)检测各组Ishikawa细胞系中TMEM16A mRNA和蛋白的表达情况. 结果 免疫荧光结果显示TMEM16A主要表达定位于Ishikawa细胞系的细胞膜上,少量定位于部分细胞质中;Q-PCR和Western blotting结果显示,与空白对照组相比,E2组、P4组及E2 +P4组的TMEM16A mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P均＜0.05).E2+P4组的TMEM16A mRNA和蛋白表达水平较E2和P4组均显著升高(P均＜0.05);P4组的TMEM16A mRNA和蛋白表达水平显著高于E2组(P均＜0.05). 结论 E2和P4可能通过上调人子宫内膜TMEM16A的表达来调节子宫内膜容受性.
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跨膜蛋白16A分子结构及调控机制研究现状
跨膜蛋白16A(TMEM16A)是一种钙激活氯通道,参与人体多种生理及病理过程,如腺体分泌、高血压和癌症等.TMEM16A电流具有复杂的电压以及钙离子依赖性,但其调控机制并不十分清楚.本文基于新发现的TMEM16A晶体结构,阐述具有10个跨膜域的TMEM16A二聚体结构,详细介绍TMEM16A通道的钙离子结合位点以及孔道结构以及各种分子亚型,进而总结钙离子/钙调蛋白、跨膜电压、磷酸化、细胞内分子(如膜脂质、质子氢)等对TMEM16 A的调控机制.本文通过对TMEM16 A分子结构及调控机制研究进展的探讨,有利于深入理解TMEM16A参与的生理过程和病理机制.
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miR-9靶向调控跨膜蛋白16A基因对胶质瘤T98G细胞增殖和侵袭的影响
目的 探讨miR-9和跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16,TMEM 16A)基因在胶质瘤T98G细胞中的表达,阐明miR-9对TMEM16A基因的靶向作用及其对T98G细胞增殖和侵袭的影响.方法 运用生物信息学方法对miR-9和TMEM16A基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统鉴定;脂质体2000转染miR-9模拟物及干扰RNA后,Real-time PCR检测miR-9与TMEM16A mRNA在癌细胞中的表达,Western blot检测TMEM16A蛋白在癌细胞中的表达,平板克隆形成实验检测癌细胞的增殖情况以及Transwell小室检测癌细胞体外的侵袭性.结果 生物信息学软件TargetScan和miRanda显示miR-9与TMEM16A基因靶向配对良好,荧光素酶报告系统鉴定发现miR-9能够抑制TMEM 16A mRNA表达.Real-time PCR和Western blot检测结果均表明过表达miR-9能够降低TMEM16A mRNA和蛋白的表达.平板克隆形成实验和Transwell实验发现过表达miR-9能够分别抑制T98G细胞的增殖和侵袭.结论 miR-9通过负性调控胶质瘤T98G细胞中TMEM16A基因的表达抑制癌细胞的增殖和侵袭.
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miR-144-3p靶向调控跨膜蛋白16A基因抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和侵袭实验
目的 阐明骨肉瘤143B细胞中miR-144-3p与跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16,TMEM16A)的表达关系,明确miR-144-3p与143B细胞增殖和侵袭的关系.方法 预测miR-144-3p和TMEM16A基因的互补配对关系,转染miR-144-3p模拟物后,Real-time PCR检测各组癌细胞中miR-144-3p和TMEM16A mRNA的相对表达水平,Western blot检测各组癌细胞中TMEM16A蛋白的相对表达,MTT法检测各组癌细胞的增殖,Transwell检测各组癌细胞体外的侵袭情况.结果 TargetScan和miRanda均显示miR-144-3p与TMEM16A基因互补配对较好.Real-time PCR和Western blot检测结果 表明miR-144-3p的过表达能够降低TMEM16A mRNA和蛋白的相对表达水平.MTT法和Transwell实验发现miR-144-3p的过表达能够抑制143B细胞的增殖和侵袭.结论 miR-144-3p通过下调骨肉瘤143B细胞中TMEM16A的表达水平进而抑制癌细胞的增殖和侵袭.
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大鼠背根神经节中卫星胶质细胞容量激活氯电流的分子基础及机制
目的:探讨大鼠背根神经节中卫星胶质细胞容量激活氯电流的分子基础及激活机制.方法:采用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节中卫星胶质细胞上容量激活氯电流并观察在螯合细胞内钙离子、阻断细胞膜嘌呤受体、特异性敲低跨膜蛋白16A(trans membrane protein 16A,TMEM16A)时对该电流的影响.结果:在细胞内高渗条件下,在大鼠背根神经节的卫星胶质细胞上可以记录到可被氯离子通道阻断剂阻断的内向电流即容量激活氯电流.利用慢病毒载体所携载的siRNA特异性敲低TMEM16A可显著抑制该电流.螯合细胞内钙离子浓度可抑制该电流的发生;阻断ATP受体对该电流的发生无影响.结论:大鼠背根神经节的卫星胶质细胞上存在容量激活的氯电流,其分子基础为TMEM16A介导的钙激活氯通道,激活机制可能与细胞内钙离子的释放有关.
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TMEM16A基因参与小鼠功能性便秘的机制研究
目的研究功能性便秘小鼠模型中 TMEM16 A 在结肠的表达及其参与功能性便秘的相关机制.方法建立功能性便秘小鼠模型,观察小鼠排便粒数,生物机能测定仪检测小鼠结肠的肌电改变,利用 qPCR 及 Western 印迹方法检测 TMEM16 A 在小鼠结肠的基因及蛋白表达.结果功能性便秘小鼠出现腹胀、体重减轻、皮毛枯槁乍立、倦怠蜷缩、反应迟缓、粪便干硬等征象.与对照组相比,排便粒数减少,结肠肌电出现慢波频率减慢、振幅增加的现象(P<0.05).同时发现在小鼠结肠,TMEM16A 及 ATP2B2 的基因及蛋白表达均减少(P<0.05).结论 TMEM16A 的表达减少与功能性便秘小鼠的结肠运动功能下降有关, TMEM16 A 可能通过调控 ATP2 B2 参与便秘的发病机制,成为功能性便秘的治疗靶点.
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MTDH、Tmem16a在脉络膜黑色素瘤中的表达及意义
目的 研究异粘蛋白(MTDH)和跨膜蛋白16a (Tmem16a)在脉络膜黑色素瘤中的表达及临床意义.方法 选择25例(25只眼)确诊的脉络膜黑色素瘤术后组织为实验组,另取瘤旁正常脉络膜组织15例(15只眼)作为对照组,采用免疫组化法检测其MTDH 、Tmem16a蛋白表达情况,分析MTDH、Tmem16a蛋白表达情况和患者临床特征之间的关系.结果 实验组MTDH、Tmem16a阳性表达率分别为60％、52％,均明显高于对照组(P＜0.05).MTDH、Tmem16a蛋白表达与脉络膜恶性黑色素瘤巩膜浸润程度及远处转移相关(P＜0.05);与年龄、性别、肿瘤大小无关(P＞0.05).结论 MTDH、Tmem16a在脉络膜黑色素瘤中呈高表达,且与巩膜浸润程度及远处转移相关,可能成为临床诊治脉络膜黑色素瘤的重要指标.
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TMEM16A:钙激活氯通道研究进展
钙激活氯通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)组织分布广泛,参与了众多生理过程,如感觉传导、神经和心肌兴奋性调节、腺体和上皮分泌等,甚至可能参与细胞分裂周期与细胞增殖.钙激活氯通道生理病理意义如此重要,但直到2008年才报道了跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16A,TMEM16A)为钙激活氯通道的分子基础,同时研究揭示TMEM16A在一些肿瘤组织中表达明显上调.该文即对钙激活氯通道的生理、病理学意义进行综述.
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跨膜蛋白16a在心血管系统中的研究进展
钙激活性氯通道(CaCCs)在心血管系统发挥重要作用,参与多种生理功能,并且与多种疾病的病理过程有关.随着研究的深入,近来发现CaCCs的重要分子基础为跨膜蛋白16a(TMEM16A),且该蛋白在心血管系统中发挥重要作用.现综述TMEM16A在心血管系统研究中的主要进展和关键问题,讨论TMEM16A在心血管系统的表达、生理功能以及与某些心血管疾病的临床病理联系等问题,并在此基础上,对TMEM16A在心血管疾病的靶向治疗的研究前景方面进行展望.
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跨膜蛋白16A在胆汁淤积性肝硬化门脉高压大鼠血管重构中的意义
目的 探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)在胆汁淤积性肝硬化门脉高压大鼠门静脉重构中的作用及其机制.方法 将60只雄性SD大鼠随机分为模型组(n=40)及假手术对照组(n=20),模型组结扎胆管制备胆汁淤积性肝硬化门脉高压模型,4周后取材.通过肝脏苏木素-伊红(HE)染色和测量门静脉压力判断是否造模成功.HE染色观察大鼠门静脉组织学形态变化,采用免疫组织化学法、Western blot检测门静脉TMEM16A、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达的变化.结果 与对照组比较,模型组大鼠肝脏有假小叶形成,呈肝硬化改变,且门静脉压力升高[(16.79±2.65) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)比(8.86±0.53) mmHg,P＜0.05],其中膜厚度显著增加[(43.27±9.62) μm比(21.75 ±5.56) μm,P＜0.05],TMEM16A表达下降,p-ERK1/2表达增高,ERK1/2表达无明显变化.结论 TMEM16A可能通过影响丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/ERK通路活性来调控门静脉平滑肌细胞增殖,其下调可能在门脉高压导致的门静脉重构中起重要作用.
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跨膜蛋白16A介导感染后肠易激综合征中白细胞介素-4对Cajal细胞损伤的机制
目的 探讨感染后肠易激综合征(PI-IBS)中跨膜蛋白16A(TMEM16A)介导白细胞介素-4(IL-4)在Cajal细胞(ICC)损伤中的作用及机制.方法 将30只SD雄性大鼠随机分为模型组(n=15)及对照组(n=15).模型组以2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)溶液灌肠,对照组以等量生理盐水灌肠,4周后取材.分别运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法、免疫荧光、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及透射电镜检测各组大鼠IL-4、TMEM16A的表达分布与ICC超微结构的相关改变.结果 模型组结肠黏膜IL-4浓度[(2821.32±131.27) pg/g]较对照组[(2443.02±104.45) pg/g]明显上升(P＜0.01).TMEM16A在PI-IBS模型大鼠结肠中的分布密度及表达水平上均低于对照组.PI-IBS组中,ICC出现超微结构损伤,与周围细胞缝隙连接减少.结论 IL-4可能通过影响TMEM16A的表达分布造成ICC结构功能损伤,进而导致PI-IBS中胃肠动力的改变.
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跨膜蛋白16A对大鼠门静脉平滑肌细胞增殖的作用及其机制
目的 探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)对原代培养大鼠门静脉平滑肌细胞增殖的作用及其机制.方法 原代培养大鼠门静脉平滑肌细胞,慢病毒转染上调其TMEM16A表达,分别加T16Ainh-A01和U0126后用Western blot法检测蛋白表达变化,流式细胞术观察细胞周期变化,细胞计数试剂盒(CCK-8)观察细胞增殖.结果 成功培养出大鼠门静脉平滑肌细胞并转染了TMEM16A,转染效率约为80％,流式细胞术结果显示过表达TMEM16A组S期细胞比例为(34.44±3.72)％,高于对照组的(15.56±2.36)％,差异有统计学意义(t=7.423,P＜0.01).Western blot显示各组细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达水平差异无统计学意义(t=2.338,P＞0.05).各组磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TMEM16A可能通过影响丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-ERK1/2通路活性来调控门静脉平滑肌细胞增殖,其表达在原代培养的大鼠门静脉平滑肌细胞增殖中起重要作用.
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跨膜蛋白16A在人正常月经周期子宫内膜表达的初步研究
目的:研究跨膜蛋白16A(TMEM16A)在人正常月经周期子宫内膜的表达变化.方法:收集人正常月经周期增殖期及分泌期的子宫内膜,共48例.采用免疫组织化学染色法检测TMEM16A蛋白的定位表达,实时荧光定量PCR测定TMEM16A mRNA表达水平,Western Blot法测定TMEM16A蛋白表达水平.结果:TMEM16A蛋白主要表达于分泌中晚期子宫内膜的腔上皮和腺上皮细胞;与增殖期相比,分泌期子宫内膜中TMEM16A mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P＜0.05).结论:TMEM16A在人正常月经周期不同时期子宫内膜存在差异性表达,其可能受到卵巢雌孕激素的调节,并参与子宫内膜容受性的建立.
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TMEM16A在心肌成纤维细胞中的表达及意义
目的 研究小型猪急性心肌梗死(AMI)后,缺血对心肌成纤维细胞中跨膜蛋白16A(TMEM16A)表达及功能特征的影响.方法 采用三氯化铁(FeCl3)诱发左冠状动脉前降支(LAD)血栓形成的方法 建立AMI模型,AMI术后4h采用血清酶学,超声心动图评价AMI模型.AMI后24 h分离心肌成纤维细胞,用于实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、膜片钳检测,观察TMEM 16A的表达及形成的电流强度变化.结果 与术前和假手术组相比,AMI组肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌红蛋白(MYO)浓度明显升高;左心室射血分数(LVEF)显著下降[(53.4±1.9)％,P＜0.05];TMEM 16A基因表达显著升高[(1.59±0.15)％,P＜0.05];TMEM16A形成的电流强度明显增强(P＜0.05).刺激电压为+20、+40、+60、+80、+100mV时,电流强度分别为(1.58±0.67) pA/pF、(3.69±1.26) pA/pF、(7.60±2.14) pA/pF、(12.94±2.38) pA/pF和(22.19±2.61) pA/pF.结论 在小型猪心肌成纤维细胞中表达TMEM16A基因.缺血可上调TMEM16A基因表达,并通过影响心肌成纤维细胞中钙激活氯离子通道(CaCC),增强心肌成纤维细胞中钙激活氯电流(ICl,Ca).
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跨膜蛋白16A在顽固性功能性便秘患者结肠中的表达及意义
目的：探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)在顽固性功能性便秘患者结肠中的表达及意义。方法收集2014年2―6月间在南京军区总医院普通外科行外科手术切除的30例顽固性功能性便秘患者的结肠手术标本作为实验组(取材部位：乙状结肠全层标本)﹔选取30例经病理证实的非梗阻性结肠癌患者的手术标本作为对照组(取材部位：取距肿瘤至少5 cm以上的正常结肠组织)。分别采用免疫荧光染色、RT-PCR以及Western blot法检测TMEM16A和c-kit在结肠中的表达。结果实验组和对照组结肠标本中,均见TMEM16A蛋白及c-kit的表达,在结肠中的表达部位分布基本一致。实验组结肠组织中TMEM16A和c-kit的免疫荧光表达、蛋白含量及mRNA的表达均明显低于对照组(TMEM16A：吸光度值为1.84±0.25比3.65±0.32,灰度比为0.66±0.07比1.04±0.17,mRNA相对表达量为0.41±0.05比1.00﹔c-kit：吸光度值为3.38±0.24比5.06±0.31,灰度比为0.64±0.06比0.98±0.09,mRNA相对表达量为0.18±0.08比1.00﹔均P<0.05)。结论 TMEM16A在顽固性功能性便秘患者结肠组织中表达降低,可能通过调控c-kit的表达来调节结肠平滑肌的运动,并可能成为顽固性功能性便秘治疗的新靶点。
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TMEM16A在口腔癌前病变和鳞癌中的表达及意义
目的 检测跨膜蛋白16A(TMEM 16A)在口腔癌前病变组织及口腔鳞癌组织中的表达与分布情况,分析其在口腔癌变机制中的作用.方法 采用免疫组织化学染色法检测10例正常黏膜组织、10例上皮单纯性增生、30例上皮异常增生和45例口腔鳞癌标本中TMEM 16A的表达情况.结果 TMEM 16A在正常黏膜组织上皮中为阴性表达,在口腔癌前病变组织出现不同程度的表达,且随着上皮异常增生程度增加,TMEM16A蛋白表达逐渐增强.TMEM16A在口腔鳞癌中表达显著高于口腔癌前病变,在口腔鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中,TMEM16A的表达差异无统计学意义(x2=1.74,P＞0.05).结论 TMEM16A在不同级别口腔癌前病变及鳞癌中表达的差异提示其可能在口腔鳞癌发生早期有重要作用.
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钙离子激活的氯离子通道蛋白TMEM16A在女性生殖系统中的研究进展
作为钙离子激活的氯离子通道(CaCCs)分子基础的跨膜蛋白16A(TMEM16A)分布于人体多种组织器官中,对许多生理和病理过程具有重要意义.近年来,对TMEM16A在女性生殖系统中分布和作用的研究逐渐增多,比如参与子宫平滑肌的收缩、影响卵巢颗粒细胞雌激素的合成以及调节卵母细胞的形态等,这些都提示了TMEM16A在女性生殖系统中的生理重要性.现本文将就TMEM16A在女性生殖系统各方面的新研究进展进行综述.
关键词： 钙离子激活的氯离子通道 跨膜蛋白16A 女性生殖系统
