细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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肝细胞生长因子基因表达载体的构建与鉴定
肝细胞生长因子〔 1〕 (hepatocyte growth factor, HGF)是近期发现的一种生长因子，由相对分子质量 (Mr)为 75 000的α链和 Mr为 30 000的β链借二硫键连接而成的异二聚体，广泛分布于肝、肾、脾、肺、脑、胸腺、胰腺、甲状腺和唾液腺等处。研究证明，用从人血浆提取并纯化的 hHGF，刺激原代培养的大鼠肝细胞合成 DNA的半大剂量为 1～ 2 μ g/L(或 10～ 20 pmol/L)。而已知表皮生长因子 (EGF)、转化生长因子 (TGF)和酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)，刺激原代培养的大鼠肝细胞合成 DNA的半大剂量为 0.1～ 5 nmol/L，较 HGF大几十甚至上百倍，表明 HGF在各种生长因子中是强的促肝细胞分裂剂〔 2〕。而且 HGF是一种多效性因子，具有多种生物学活性，如：促细胞分裂剂 (mitogen)、促细胞运动剂 (motogen)和促形态形成剂 (morphogen)等作用，还能抑制几种肿瘤细胞 (如黑色素瘤、鳞状细胞癌和肝细胞癌等 )生长。 HGF受体是原癌基因 c-met的产物，为跨膜蛋白 (Mr为 190 000)。由于 HGF在体内分布的广泛性及其生物学活性的多样性，故其已成为热门研究课题。
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克隆 MCF-7细胞凋亡差异表达基因的一种方法
目的克隆人乳腺癌 MCF-7细胞凋亡相关基因，分析验证所用方法的特点。方法采用基于 PCR的消减杂交技术，在已建立的全反式维甲酸诱导人乳腺癌 MCF-7细胞的凋亡模型中，克隆 MCF-7细胞凋亡的相关基因。结果从 13个克隆中，共筛选出 5个表达的基因。其中 4个为已知基因， 1个为新基因。新基因命名为 apmcf-1， Genbank登录号为 AF141882。 4个已知基因中 3个与凋亡关系密切。结论这种改良的基于 PCR 的消减杂交技术，为克隆差异表达基因提供了一种新的方法和思路。
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人肿瘤坏死因子α组合突变体生物学特性的研究
目的研究 hTNFα的结构与功能。方法比较了野生型 hTNFα与其单突变体 R2K-、 N30S-、 R32W-和 L157F-hTNFα及两种组合突变体 R32W-L157F-hTNFα和 R2K-N30S-R32W-L157F-hTNFα的细胞毒活性、受体结合能力，以及动物体内毒性。结果发现两种组合突变体基本保持了与野生型相当的对人肿瘤细胞的细胞毒活性，但对小鼠 L929细胞的活性明显下降；两种组合突变体与 hTR75的结合能力的下降程度要大于 hTR55；小鼠体内毒性测定实验表明，两种组合突变体的毒性显著降低，其中双突变体的 LD50为野生型的 300倍左右，而四突变体对小鼠的体内毒性比野生型下降了 700倍以上；四突变体对恒河猴的体内毒性也比野生型 hTNFα明显降低。结论获得具有潜在应用价值的 TNF-α四突变体。
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VEGF165 cDNA在酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究
目的研究人 VEGF165基因在 Pichia pastoris酵母中的表达，获得高效表达、具有生物学活性的重组 hVEGF165。方法采用 PCR扩增 hVEGF165基因，经 DNA序列分析后，插入含 AOX1 启动子和α分泌信号肽序列的 Pichia pastoris酵母表达载体中，构建重组质粒 pPIC9K/hVEGF165。经转化酵母宿主菌 KM71，筛选多拷贝整合转化子，摇瓶培养，用 10 mL/L甲醇诱导表达。表达产物经 Heparin-Sepharose CL6B亲和层析纯化后，以人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)测定其生物学活性。结果 SDS-PAGE分析显示，表达产物以可溶性分子的形式存在于上清中，诱导 4 d的表达量达上清中总蛋白的 60％以上。 Western blot表明，表达产物具有良好的抗原性和特异性。经 Heparin-Sepharose CL6B亲和层析纯化， rhVEGF165的纯度可达到 90％以上。生物学活性检测证实，其具有刺激脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖的活性。结论在 Pichia pastoris表达系统中，实现了 hVEGF165的高效分泌性表达。
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系统性红斑狼疮小鼠脾细胞中 IL-12信号传递途径的研究
目的探讨在狼疮小鼠脾细胞中是否存在 IL-12通过 Lck/p38/c-jun传递信号及其对脾细胞的影响。方法以慢性移植物抗宿主病 (graft versus host disease, GVHD)小鼠为狼疮小鼠模型，分别采用放射自显影、 Western blot和 Northern blot，检测培养的脾细胞中 Lck的活性、 p38磷酸化活化及 c-jun基因表达的变化。结果狼疮小鼠脾细胞经 IL-12刺激后，与正常对照组相比较， Lck的活性增高、 p38异常活化， c-jun mRNA的水平增高。加入 Lck抑制剂 PP1组 Lck的活性及 p38磷酸化消失，无 c-jun基因的表达；加入 p38抑制剂 SB203580组亦无 p38磷酸化及 c-jun基因的表达。结论狼疮小鼠的脾细胞异常， IL-12可通过 Lck/ p38/c-jun在细胞内传递信号，直接参与免疫损伤。
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从 HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库中筛选抗原表位
目的探讨病毒抗原序列研究的新方法。方法应用噬菌体展示技术，筛选 HCV核心蛋白的抗原序列。用抗 -HCV核心抗体单独阳性的血清，对已构建的 HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库进行 4轮筛选，检测筛选阳性的克隆数、插入阳性率和杂交阳性率来评价筛选的效果。测定和分析 7个杂交阳性克隆的 DNA序列。结果所测定的 7个序列中， 6个为 HCV核心蛋白序列，其中 5个被正确地展示于噬菌体表面， 1个可能被正确展示，这些序列均含有重要的 HCV核心抗原表位。另 1个为大肠杆菌 nrfa基因。结论噬菌体展示技术完全可应用于病毒蛋白抗原序列的筛选，并具有简便、快速、准确的优点。
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LVA钙通道的克隆鉴定及一级结构特征
目的从大鼠胰腺β细胞中，克隆 LVA钙通道 (即 T-型钙通道 )基因，并鉴定其一级结构的特征。方法用 RT-PCR, 3′ -RACE及 5′ -RACE法，从总 RNA中克隆 T-型钙通道全长基因；用 DNA序列测定与 DNA步移实验，分析基因一级结构及外显子剪接。结果克隆了 T-型钙通道的全长结构基因，命名为α 1G-INS。该基因由 6864个碱基组成，编码 2288个氨基酸，与从神经组织中克隆的钙通道α 1G 相比较：在氨基酸水平上有 96.3％的同源性，在 4个结构域的跨膜区内的氨基酸及 I、 II结构域间的胞内环链部分的氨基酸具有高度保守性；两者间具有 3个明显不同的结构区段，基因组 DNA步移法分析表明，这种差异是由于 mRNA前体的不同剪接所致。此外，尚有 10个氨基酸替代散在于分子内其它区域，这种替代是由于基因突变造成的。结论成功地从大鼠胰腺β细胞中，克隆到 LVA钙通道基因中的 1个新亚型 (isoform)α 1G-INS，对深入研究钙离子所涉及的许多重要的基本生命过程有着重要的意义。
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含凝血酶切点的 hTNFα -hPgnK5的原核表达及活性鉴定
目的在原核细胞中表达融合蛋白 hTNFα -hPgnK5并鉴定其活性。方法构建 hTNFα -hPgnK5基因的表达载体，并在大肠杆菌 DH5α中进行表达。以 MTT法测定该融合蛋白体外抑制肿瘤细胞或血管内皮细胞增殖的活性。结果成功地构建了 hTNFα -hPgnK5表达载体并获得表达。免疫印迹分析表明，该融合蛋白具有 hPgnK5的免疫活性。体外实验表明 ,该融合蛋白具有抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞增殖的活性。结论 hPgnK5蛋白可与 hTNFα可共同表达，表达产物可抑制肿瘤细胞和血管内皮细增殖。
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人整合素分子α 4亚基片段的克隆和表达
目的克隆并表达人整合素分子α 4亚基 1.2 kb cDNA片段。方法从 HL-60细胞系中提取总 RNA，以 RT-PCR法扩增人整合素分子α 4亚基片段 1.2 kb cDNA(1 753～ 2 934 bp)，并将该片段亚克隆至表达载体 pGEX-3X，用 IPTG诱导表达。结果克隆了α 4亚基 1.2 kb cDNA片段。序列分析表明，其所编码的氨基酸序列与文献相比较只有一处错义突变 (Arg→ Gln)，经分析该突变对抗原性影响不大。将该片段亚克隆至表达载体 pGEX-3X，经 IPTG诱导在大肠杆菌中获得高效表达。结论获得了α 4亚基 1.2 kb cDNA片段及其原核表达产物，对研究α 4整合素的功能具有重要的意义。
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骨髓基质细胞的造血支持作用等生物学特性的研究
目的研究人骨髓基质细胞体外长期培养的生物学特性和造血支持功能。方法①采用静置贴壁细胞培养法，体外长期培养胎儿、儿童和成人的骨髓基质细胞。②采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测法，分析细胞的表型。③将不同发育阶段的骨髓基质细胞体外培养，并扩增脐血造血干细胞。结果①建立了成纤维肌样细胞系，可传至 10代，维持 6个月，同时还培养出内皮细胞和巨噬细胞。②儿童骨髓基质肌样细胞的染色特征为：波形纤维蛋白 (viementin)呈阳性，第 VIII因子呈阴性；儿童骨髓基质细胞的表型为： CD33-、 CD34-、 CD38-和 CDW90＋ ; 成人为： CD33-、 CD34-、 CD38＋和 CDW90＋。③基质细胞能长期维持脐血中 LTC-IC的生存。若加入 IL-6、 IL-3和 SCF扩增体系，基质细胞对长期维持和扩增 LTC-IC的效果更为明显 (P＜ 0.01)，较无基质细胞的对照组所形成的 LTC-IC产率高 2～ 4倍。结论人骨髓基质细胞体外可长期培养，对脐血干细胞具有造血支持功能。
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IL-6在U937细胞中特异、持续激活 STAT3
目的探讨 IL-6在 U937细胞中产生生物学效应的信号转导基础。方法检测 IL-6对 U937细胞生长与分化的影响，并采用凝胶阻滞电泳法，检测 IL-6在 U937细胞中激活核因子的情况。结果 IL-6可诱导 U937细胞向巨噬细胞方向分化，分化的细胞酸性醋酸酯酶 (ANAE)活性、硝基蓝四唑 (NBT)还原能力及 CD54表达增强。 STAT3可被 IL-6显著激活，其活性呈一定的剂量与时间依赖性；而 NF-IL6、 NF-κ B、 AP-1及其它 STAT家族成员则无明显激活。结论 U937细胞的终末分化可能是 JAK-STAT3通路介导的。
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流式细胞术测定 PF4对放射损伤小鼠骨髓造血细胞的保护作用
目的研究血小板第 4因子 (PF4) 对 60Co γ射线辐射损伤小鼠骨髓的造血防护作用及其机制。方法小鼠腹腔注射 PF4后间隔 6 h第 2次注射； 20 h后，给予 7.5Gy的 60Co γ射线照射 1次 (全身照射 )，观察第 8天骨髓细胞 DNA含量的变化。结果照射后 8 d， PF4处理组小鼠的骨髓有核细胞中 DNA含量及细胞周期各时相，与照射组相比较有明显差异 (P＜ 0.01)，而与对照组基本相同 (P∧ 0.05)。结论 PF4能保护小鼠骨髓造血干细胞免受电离辐射引起的损伤。
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Fas与体外胸腺细胞自发凋亡的关系
目的探讨体外培养的胸腺细胞表达 Fas、 Fas-L与自发凋亡的关系。方法应用流式细胞术，检测体外培养不同时间的胸腺细胞的凋亡率及 Fas、 Fas-L表达的阳性率。结果体外培养的胸腺细胞自发凋亡率和 Fas表达阳性率，均呈时间依赖性增加， Fas-L在体外培养 24 h时明显增加。体外培养的胸腺细胞 Fas的表达与自发凋亡明显相关。结论 Fas是介导体外培养的胸腺细胞自发凋亡的重要分子。
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细胞因子联合激活的骨髓细胞的生物学特性研究
白血病自体造血干细胞移植面临的一个难题，就是移植后肿瘤的复发率高，自体骨髓净化目前尚缺乏满意的措施。我们采用 IL-1、 IL-2、 IFN-γ和抗 CD3单克隆抗体 (mAb-CD3)进行不同组合后激活骨髓，并比较激活前、后各组骨髓细胞在细胞形态、细胞增殖数量、细胞毒性和造血干细胞保存等方面的差异，以寻找既能高效激活骨髓杀伤白血病细胞，又能保留足够造血干细胞完成造血重建的细胞因子组合，为临床上进行自体骨髓净化提供实验依据。
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恶性肿瘤患者血清内皮素含量的检测及其临床意义
目的探讨恶性肿瘤患者血清内皮素 -1(ET-1)的水平及其临床意义。方法采用放射免疫法，检测了恶性肿瘤患者 85例、非肿瘤患者 30例和正常人 32例血清 ET-1的含量。结果正常人和非肿瘤患者血清 ET-1的平均含量分别为 (46.9± 23.1)μ g/L和 (51.1± 30.9)μ g/L,不同恶性肿瘤患者为 (190.1± 135.2～ 382.4± 190.1)μ g/L。正常人与非肿瘤患者相比较，血清 ET-1的平均含量无明显差异 (P∧ 0.05);而恶性肿瘤患者血清 ET-1的含量则明显高于前两者 (P＜ 0.001)。以正常人血清 ET-1的平均含量加两个标准差为阳性界值，则不同恶性肿瘤患者的阳性检出率为 72％～ 100％。结论血清 ET的含量是筛选和辅助诊断恶性肿瘤的一种良好肿瘤标志物。
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正常人与寻常型银屑病患者毛囊 CD1a＋树突状细胞的表达
目的探讨正常人和寻常型银屑病毛囊 CD1a＋树突状细胞 (dendritic cell,DC)的表达与分布。方法应用免疫组化 SABC法，对 10例寻常型银屑病和 10例正常对照皮肤 (8例上肢皮肤和 2例头皮 )CD1a＋ DC的表达进行检测、 AEC染色。结果 CD1a＋ DC在正常人上肢皮肤毛囊中，平均约为 13个、头皮中平均为 15个；在银屑病皮肤毛囊中， CD1a＋ DC稍增多，平均每个毛囊约为 16个，而在毛囊附近的表皮中，可见密度明显增高的 CD1a＋ DC，其数量为 46± 15/mm2。结论毛囊与 CD1a＋ DC的发生和再分布密切相关，毛囊可能对银屑病的发生、发展具有重要的影响。
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重组人血管内皮抑制素抗肿瘤效应的应用研究
目的探讨基因工程人血管内皮抑制素 (endostatin)抑制黑素瘤在小鼠体内生长和转移的作用及其作用机制。方法接种黑素瘤细胞悬液 (2× 106/鼠 )于小鼠皮下，成瘤后给予血管内皮抑制素 (8 mg/kg· d)，每天 1次，共 21次。给药期间观察荷瘤小鼠的饮食情况、体重变化，并测量肿瘤的大小。于第 26天处死，称皮下肿瘤的重量，并取脑、肺、肝、脾和肾切片做病理学检查。结果血管内皮抑制素治疗组的曲线下面积明显小于肿瘤对照组 (P＜ 0.01)。病理切片检查显示，治疗组肿瘤有大面积的坏死，瘤周毛细血管消失。结论血管内皮抑制素对小鼠黑素瘤的生长、转移，以及新生毛细血管的形成具有明显地抑制作用。
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原发性肝癌患者红细胞免疫和 T细胞亚群的变化及相关性分析
80年代初， Siegel[1]提出红细胞免疫的概念，引起国内外有关学者的关注。红细胞不仅参与呼吸功能，而且具有清除循环免疫复合物，增强 T细胞反应等多种免疫功能。此外，红细胞在肿瘤患者免疫方面亦发挥着重要的作用 [2]。我们测定了 59例原发性肝癌患者红细胞 C3b受体花环率 (RBC-C3bRR)、红细胞免疫复合物花环率 (RBC-ICR)及 T细胞亚群，以探讨患者红细胞免疫功能和淋巴细胞免疫功能的变化以及两者间的相互关系。
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乙型肝炎不同类型血清透明质酸及层粘连蛋白水平变化
透明质酸(HA)在肝病中的代谢变化,其血清水平对于评估肼病进展程度和患者的预后以后以及调控HA的变化,对肝硬化程度的判断和防治均具有一定的意义。
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细胞角蛋白 7和 19在肝细胞癌细胞系中的异常表达及其机制
正常肝脏中，肝细胞的中间丝细胞骨架 ,仅由细胞角蛋白 (cytokeratin, CK)8和 CK18构成；而胆管上皮细胞除含有这两种 CK外，还表达 CK7和 CK19。这两种细胞类型的 CK组型 ,曾被认为能在各种生理、病理状态下保持不变，因此， CK8和 CK18被称为“肝细胞型” CK， CK7和 CK19被称为“胆管型” CK。近研究表明，肝细胞的 CK组型在某些肝损伤和肝脏疾病状态下会发生一定的改变，肝细胞和肝细胞癌可额外地表达“胆管型” CK(CK19和 /或 CK7)，称为肝细胞 CK的异常表达 [1-5]，其机制尚不完全清楚。有的作者提出，体内生长的肝细胞和肝细胞癌中 CK19的异常表达 ,可能与层粘连蛋白 (laminin, LN)等细胞外基质成分的异常沉积有关 [3,4,6-8]。为进一步探讨肝细胞 CK的异常表达和可能机制，我们对体外培养的 6株肝细胞癌细胞系的 CK组型及 LN和 LN受体的表达进行了观察。
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新生儿败血症患者免疫功能观察
新生儿期易患各种感染性疾病，且易导致败血症，这与新生儿的免疫功能尚不成熟有关。我们检测了 17例新生儿败血症患者治疗前后血清可溶性白介素 2受体 (sIL-2R)水平，膜结合的 IL-2R(mIL-2R)表达及 IgM、 IgG水平的变化，以了解败血症患儿免疫功能的状况。
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CD226在猴睾丸分布的免疫组织化学研究
1985年， Burns等 [1]以活化的 T细胞为免疫原，制备了抗活化 T细胞表面抗原的单克隆抗体 (mAb)，并将其中 1株 mAb Leo-A1识别的抗原命名为人 T细胞谱系特异性活化抗原 1(T lineage-specific activation antigen 1, TLiSA1)。 mAb Leo-A1在混合淋巴细胞反应中，可抑制细胞毒 T细胞 (cytotoxic T lymphocytes, CTL)分化。随后 Scott等 [2]发现， TLiSA1也高表达于血小板表面，可刺激血小板的活化和凝集，遂将此抗原重新命名为血小板 /T细胞活化抗原 1(platelet and T cell activation antigen 1,CD226)。研究表明， CD226与免疫相关性疾病有密切关系，这些疾病主要包括：自身免疫性疾病、病毒性感染、肿瘤及移植排斥反应 [3]。人类生殖腺、生殖细胞及其所产生的激素都具有抗原性，当机体免疫功能紊乱时，可导致免疫反应，影响生殖过程。然而，关于睾丸组织能否表达 CD226及其可能与生殖免疫、男性不育等的相关研究，尚无有关文献报道。为此，我们采用小鼠抗 CD226 mAb 做 ABC免疫组化染色观察了 CD226在猴睾丸中的定位与分布。
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小鼠及家兔对丙型肝炎病毒多表位 DNA疫苗免疫应答的研究
目的探讨 HCV复合多表位 DNA疫苗的可行性。方法把 HCV多表位抗原基因 PCX克隆到真核表达载体 pREP9(RSV启动子 )及 pcDNA3 (CMV启动子 )中，构建真核表达载体 pREP9/PCX及 pcDNA3/PCX。将其肌肉注射免疫小鼠及家兔，检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平，并观察免疫小鼠的安全性。结果质粒 pREP9/PCX及 pcDNA3/PCX于免疫后第 6wk和第 10 wk时，开始可检测到抗 GZ-PCX IgG，随后抗体滴度逐渐升高，但水平较低，持续时间较短。 pcDNA3/PCX 肌肉注射免疫家兔后，于第 8wk开始出现特异性抗体，至 3个月后滴度升至 1∶ 3 200，随后也开始下降。免疫小鼠及家兔可诱发针对 GZ-PCX融合蛋白的迟发型超敏反应，并刺激淋巴细胞转化。免疫后小鼠的体重正常，肝脾脏未见明显肿大，具有良好的安全性。结论 HCV多表位基因可诱发特异性免疫应答且安全性好，为 HCV疫苗的研究提供了一定的理论及实验依据。
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肝癌相关抗原基因的筛选和阳性克隆的序列分析
克隆肿瘤相关抗原基因，从分子水平上研究其结构与功能，对于深入了解肿瘤的发生机制很有帮助。本研究利用自制的肝癌特异性单克隆抗体 (mAb)F11，筛选肝癌细胞 cDNA表达文库，获得 1个阳性克隆，并对其进行了序列测定及同源性比较分析。
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抗创伤弧菌单克隆抗体细胞系的建立及其特性鉴定
创伤弧菌感染是海水养殖及野生海水鱼的重要疾病之一，可通过伤口和食物链感染人类，引起较严重的疾病，出现发热、寒战等症状，严重者可发生败血症，其死亡率高达 50％ [1]。目前，尚缺乏对此种菌的快速检测及预防措施。我们采用杂交瘤技术，制备了抗创伤弧菌的单克隆抗体 (mAb)，以期为该菌的快速诊断及预防提供试剂。
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兔抗人 ERA抗血清的制备
目的在大肠杆菌中表达人 ERA蛋白 (h-ERA)和 h-ERA C端结构域蛋白，并制备兔抗 h-ERA抗血清。方法以 PCR扩增人 era基因 (h-era)全长 cDNA 和 h-ERA C端的结构域基因，并分别克隆到 (His)6融合表达载体 pRSET-C 和非融合表达载体 pDH中，诱导表达 (His)6-h-ERA融合蛋白和 h-ERA C端结构域蛋白。用 h-ERA C端结构域蛋白免疫兔，制备兔抗 h-ERA抗血清，并以 Western-blot对兔抗 h-ERA抗血清进行鉴定。结果大肠杆菌中表达的 h-ERA C端结构域蛋白和 (His)6-h-ERA融合蛋白，分别占菌体总蛋白的 40％和 80％。用兔抗血清可检出大肠杆菌中表达的 (His)6-h-ERA融合蛋白。结论 h-ERA和 h-ERA C端结构域蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，并成功地制备了兔抗 h-ERA抗血清。
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抗肝癌单链抗体融合 TNFα导向作用的初步实验研究
目的获得有效果的抗肝癌基因工程单链免疫细胞因子 (TNFα )。方法将抗肝癌单克隆抗体 (mAb)HAb25的单链抗体 (scFv25 )与人 TNFα基因偶联，构建抗肝癌免疫细胞因子 (scFv25-TNFα )，亚克隆入原核 GST融合表达载体 pGEX 4T-1中，在大肠杆菌中进行表达。对肝癌细胞 SMMC-7721涂片进行间接免疫荧光染色，测定纯化后目的蛋白的活性。通过对荷肝癌 (SMMC-7721)裸鼠进行的初步抑瘤实验，检测 scFv25-TNFα的导向治疗效果。结果 scFv25-TNFα具有与亲本抗体 HAb25类似的抗原结合特异性。 scFv25-TNFα对荷肝癌裸鼠体内直径 2 mm左右的肿瘤具有明确的导向杀伤作用 ,达到 3/3完全缓解，明显强于 TNFα对照组，该组有效者只有 2/3, 且无完全缓解。结论 scFv25-TNFα为具有一定效果的抗肝癌双功能抗体。
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应用 DNA疫苗制备猪瘟病毒单克隆抗体的研究
猪瘟病毒 (classical swine fever virus， CSFV)是影响畜牧业重要的病原体之一。单克隆抗体 (mAb)以其高度的特异性和敏感性而在 CSFV的生物学特性研究与诊断中起着重要的作用。由于不易获得高质量的 CSFV抗原，我国开展这项工作较晚，所建立的抗 CSFV mAb细胞株较少。这对于研究 CSFV的生物学特性及流行病学调查来说，在数量上还很不够，仍需继续研制抗 CSFV mAb。
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干细胞的研究进展
在美国《 Science》杂志评选出的 1999年度 10大科学进展中，干细胞 (stem cell， SC)的研究工作格外令人瞩目。这不仅因为在过去短短的一年里，科学家们在干细胞的功能研究方面发表了 10余篇具有里程碑意义的论文，更重要的是，这些突破性进展使得生物学家和医学家们更进一步地认识到： SC作为一类既有自我更新能力、又有多分化潜能的细胞，具有非常重要的理论研究意义和临床应用价值 [1]。这些成果一方面揭示了许多有关细胞生长和发育的基础理论难题；另一方面，可望将其用于创伤修复、神经再生和抗衰老等临床医学研究。另外，利用 SC再造组织和器官，治疗神经系统疾病，可使应用生物学进入一个崭新的领域。
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神经营养素与免疫细胞的关系
神经营养素家族(neurotrophin family)是近几年发现的神经营养因子(neurotrophic factor)家族，为一类对中枢和外周神经系统都有营养活性的蛋白质。其主要功能是促进神经系统的生长发育，维持神经元的存活，促进神经元的生长和分化。近发现，它们与其它系统尤其是免疫系统的关系非常密切。各种免疫细胞都有神经营养素及其受体表达，因此，神经营养素可能是神经系统与免疫系统相互联系、相互影响的重要物质基础。本文中就神经营养素及其受体，以及与某些免疫细胞的关系、相互作用的特点等进行了综述。
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白细胞介素18受体及其介导的信号转导
白细胞介素18(IL-18)是Okamura等〔1〕于1995年发现的一种新的细胞因子，因其能诱导T细胞产生IFN-γ，被称为IFN-γ诱导因子(IGIF)，后被命名为IL-18。此后，有关IL-18的研究十分活跃。研究发现，IL-18除了诱导细胞产生IFN-γ外，还能诱导GM-CSF，IL-2及TNFα等其它Th1型细胞因子的产生，具有促进Th1细胞发育、增殖和分化以及增强NK细胞活性的作用。多项研究提示，IL-18具有抗多种病原微生物感染及抗多种肿瘤的作用，中和或拮抗IL-18的效应可能在抗免疫排斥及在治疗多种自身免疫性疾病中发挥作用，因此具有潜在的临床应用前景〔2-4〕。对IL-18结构与功能的研究表明，IL-18与IL-12具有相似的生物学功能，且二者具有协同作用。对IL-18的氨基酸序列及其结构基序(motif)进行分析发现，IL-18与IL-1β在结构上为相似，因而将IL-18归为IL-1家族中的成员〔5〕。与IL-1β的前体相似，IL-18的前体也不含信号肽，也需经过IL-1β转化酶(ICE，又称为caspase-1)剪切才能形成有活性的成熟IL-18 〔6,7〕。近来，对IL-18受体(IL-18R)及其信号转导机制的研究也取得了较大进展。研究发现，IL-18受体属于IL-1受体(IL-1R)家族成员，由其介导的信号转导模式也与IL-1R相似。以下介绍了这方面的研究进展。
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新型人干扰素α 1c的纯化和活性测定
目的在大肠杆菌中表达和纯化一种新型的人 IFNα 1c。方法首先建立了表达和纯化 IFNα 1c的实验室生产流程。根据干扰素的抗病毒、抗细胞增殖以及免疫调节特性，体外测定这种 IFN的生物学活性。结果 ELISA和 Western免疫印迹均证实，表达产物具有干扰素的免疫反应性。 VSV-WISH系统的抗病毒测活表明，表达的 IFNα 1c (3.2× 107) 的抗病毒活性较 IFNα 1b(1.0× 107～ 1.8× 107)略高 ;而抗 A549细胞的增殖能力则与后者相当。此外 IFNα 1c还能增强 NK细胞的杀伤活性。结论本系统成功地在大肠杆菌中表达了人 IFNα 1c。这种高比活性的干扰素可能成为临床治疗的侯选者。
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液相色谱法纯化人血清 B因子
目的建立一种从血清中提纯 B因子的新方法。方法采用优球蛋白沉淀、离子交换色谱、 (NH4)2SO4沉淀和亲和色谱法进行纯化。结果成功地从 1 000 mL血浆中，提纯到 118.75 mg B因子。经 SDS-PAGE、薄层扫描及活性测定表明，纯度为 95％ ,比活性为 1.91× 109 IU/g，活性回收率为 59.28％。结论本法简单、产率较高，可用于实验室研究和大规模制备。
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用膜亲和层析法纯化小鼠腹水中的单克隆抗体
目的用膜亲和层析法 (MAC)纯化小鼠腹水中单克隆抗体 (mAb)。方法采用尼龙滤膜 ZBM作为介质吸附抗人血清白蛋白 (HSA)，将含 mAb的腹水滤过此 ZBM，再将吸附于 ZBM上的 mAb解离下来，获得纯化的 mAb。结果直径 50 mm吸附了 HSA的 ZBM，经 10 mL腹水循环滤过两次，即可达到大 mAb结合量。从 ZBM上解离 mAb，仅需解离液滤过 1次就可完成。纯化的 mAb经 PAGE检测，只显示 1条带。用纯化的 mAb做金标记斑点免疫渗滤法 (DIGFA)检测 HSA标准品时，其灵敏度较用未纯化的腹水时提高了 20倍。结论用尼龙滤膜 ZBM改进的膜亲和层析法，可用于纯化腹水中的单克隆抗体，且简便、省时、有效。
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尿素 -SDS-PAGE快速测定多肽的相对分子质量
随着电泳技术的不断改进和完善，该技术已成为现代分子生物学实验不可缺少的基本实验技术之一。然而进行小分子多肽的电泳分析时，由于其相对分子质量 (Mr)小，易受电泳条件 (电泳缓冲系统、凝胶浓度、电泳时间、染色和脱色等 ) 的影响，极易引起条带扩散、不易着色，使分辨率降低，因而直接影响多肽 Mr的测定。现有多肽 Mr的电泳测定法 [1,2]操作复杂，且结果也不理想。因此，我们经反复实验，建立了对 Mr为 2 500～ 17 000多肽的尿素 -SDS-PAGE快速测定法。
关键词： 多肽尿素-SDS-PAGE 相对分子质量 -
牛肾上腺毛细血管内皮细胞的长期培养及用于测定内皮细胞抑素活性
近年来，细胞培养技术的发展已有可能使血管内皮细胞在体外进行长期培养。文献 [1， 2]报道，目前大多数成功的例子取材于大血管内皮细胞 (如：牛或猪的主动脉和人的脐静脉 )，但早先长期培养毛细血管内皮细胞是不可能的。有人从鼠肾上腺皮层分离出毛细血管内皮细胞，然而这些细胞不能生长，在培养中只能存活几 wk。内皮细胞抑素 (endostatin)能特异性地抑制毛细血管内皮细胞的生长，对肿瘤细胞的生长也有抑制作用。通过基因工程方法，可制备重组的人内皮抑素，而为了测定内皮抑素的活性 ,必须在体外建立毛细血管内皮细胞长期培养的方法。通过改进他人的方法，在培养液中加入肿瘤细胞条件培养液、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)及使用覆盖明胶的平皿 [3]，我们已能对取自牛肾上腺的毛细血管内皮细胞进行长期培养。本文对长期培养的牛肾上腺毛细血管内皮细胞的特性及其在测定内皮细胞抑素活性中的应用进行了研究。
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基因工程抗体—从实验室构想到临床实践
被动的抗体治疗始于 100多年前，经历了异种抗血清、同种异体多克隆免疫球蛋白、单克隆抗体、工程化抗体等多个阶段。但直到基因工程抗体技术的出现，才真正使抗体治疗成熟起来。抗体治疗机制主要为：①中和作用，主要用于感染性疾病，使病原体或其产生的毒素丧失致病力；②示踪或导向作用，使与其相连的功能性分子特异性地激活或封闭、破坏靶细胞或靶分子；③竞争性抑制作用，抗体与体内产生或体外进入的物质结合，阻止其与靶分子作用产生毒性损害；④通过内影像作用模拟抗原，使疫苗更具安全性及广泛性。
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文献标识码的标识
为便于论文的统计和期刊评价，确定文献的检索范围，提高检索结果的适用性，每篇文章或资料应标识1个文献标识码(Documentcode)。按中国学术期刊(光盘版)技术规范设置5种标识：A—理论与应用研究学术论文(包括综述)；B—实用性技术成果报告；C—业务指导与技术管理性文章；D—一般动态性信息(会议活动和专访等)；E—文件、资料(包括统计资料、人物和知识介绍等)。不属于上述各类的文章以及文摘、补白、广告等不加文献标识码。（本刊编辑部）
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期刊基本参数(CS)的标识
为便于对某一种期刊某一期的一些参数进行统计，CAJ-CD编委会建议在期刊的目次下方排印该期刊的基本参数。参数共11项，排列顺序及格式为：国内统一刊号创刊年出版周期代码开本本期页码语种代码载体类型代码本期定价本期印数本期文章总篇数出版年月。参数前以“期刊基本参数:”或“〔期刊基本参数〕”作为标识。例：〔期刊基本参数〕CN81-1128/R1985b16100zhp￥8.001600382001-01参数中若有空缺，可以用1个空格代替。英文版期刊的基本参数以“Serialparameters:”作标识。出版周期代码为1位字母：m—月刊，b—双月刊，q—季刊。本刊编辑部
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如何撰写结构式摘要
本刊要求研究原著的中英文摘要统一写成结构式摘要，按目的(Aim)、方法(Methods)、结果(Results)、结论(Conclusion)4个层次书写。现分述如下：(1)目的简要说明研究的目的，说明提出问题的缘由，表明研究的范围和重要性。（2）方法简要说明研究课题的基本设计，使用了什么材料和方法，如何分组对照，研究范围及精确程度，数据是如何取得的，经何种统计学方法处理。（3）结果简要列出研究的主要结果和数据，有什么新发现，说明其价值及局限。叙述要具体、准确，并需给出结果的置信值、统计学显著性检验的确切值。（4）结论简要说明经过验证、论证取得的正确观点，其理论价值或应用价值，是否可推荐或推广等。(本刊编辑部)
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参考文献类型及其标识
参考文献是对期刊论文引文进行统计和分析的重要信息源之一。本刊采用CAJ-CD技术规范〔新出音(1999)17号〕推荐的顺序编码制格式著录，以单字母方式标识以下各种参考文献的类型：J—期刊文章，M—专著，C—会议论文集，D—学位论文，R—报告，S—标准，P—专利，Z—其他未说明的文献类型。本刊编辑部
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胎鼠肺细胞初代培养和上皮细胞的纯化
初代培养即从供体取组织后的首次培养。其大优点是：组织细胞刚离体，生物学性状未发生变化，能反映体内的状态，是研究基因表达，分析细胞的生物学特性和进行药物测试的理想方法。但初代培养的组织由多种细胞组成，成分较复杂，操作的难度较大。本文介绍了作者在加拿大多伦多病童医院新生儿研究所从事这方面工作的经验，可供同道者参考。
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
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| 1992 | 01 02 03 04 |
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| 1989 | 01 02 03 04 |
