汉滩病毒M、S基因部分片段嵌合基因真核载体的构建与基因免疫

目的在本室前期工作的基础上,进一步进行汉滩病毒M基因G2片段与S基因0.7Kb片段嵌合基因基因免疫的研究.方法构建汉滩病毒76-118株M基因G2片段与S基因5′端700bp片段的嵌合基因真核表达载体pcDNA3.1-G2S0.7.用该质粒免疫Balb/c小鼠,并用ELISA法及淋巴细胞增殖实验,检测基因免疫后的免疫应答效果.结果限制性内切酶鉴定结果表明真核表达载体的构建正确.用pcDNA3 1-G2S0 7直接免疫小鼠,可诱导产生抗汉滩病毒核蛋白(NP)及糖蛋白(GP)特异性的抗体,抗体效价分别为1:200及1:80.淋巴细胞增殖实验表明,嵌合基因免疫小鼠脾细胞对NP及GP的增殖指数,均明显高于对照组.结论汉滩病毒M基因G2片段及S基因0 7kb片段的嵌合基因,既可刺激机体产生特异性的抗汉滩病毒体液免疫应答,也可刺激机体产生特异性的细胞免疫应答,本研究为进一步进行汉滩病毒基因疫苗的研究奠定了实验基础.

正常和放射复合伤口血管再生中VEGF基因的表达及其意义

目的研究VEGF基因在正常和放射复合伤口愈合中的表达及意义,探讨其在血管再生中的作用.方法将48只Wistar二级大鼠背部皮肤造成圆形伤口后,以25Gy 60Coγ射线局部照射,于伤后2、5、10、15、21和28d活杀取材,采用免疫组织化学、原位杂交和原位PCR等方法,研究VEGF基因的表达及意义.结果单纯创伤组于伤后2d,新生血管内皮细胞浆内VEGF的表达呈强阳性;5d时毛细血管效明显增多,其内皮细胞胞浆内VEGF表达呈阳性;而于10d后,VEGF的表达逐渐减少.创伤+照射组则于伤后5d,VEGF的表达在血管内皮细胞胞浆内呈弱阳性,10d时阳性,15d后则呈弱阳性.原位杂交显示,VEGF mRNA于单纯创伤组伤后2～5d及创伤+照射组伤后5～10d,血管内皮细胞浆内阳性.原位反转录PCR则显示,VEGF mRNA于单纯创伤组伤后2～15d及创伤+照射组伤后5～28d,呈阳性反应.结论内源性VEGF基因的表达参与创伤愈合中血管再生过程.辐射使血管内皮细胞中VEGF的表达减少.原位反转录PCR方法较原位杂交能客观地反映内源性VEGF基因的表达情况.

我国登革2型/4型病毒株嵌合E基因免疫原性的研究

目的构建含有我国登革2型/4型病毒株嵌合E基因片段的真核表达质粒,观察重组质粒DNA的免疫原性,为登革多价疫苗的研究提供依据.方法首先将包含我国登革2型病毒43株E蛋白Ⅰ/Ⅱ抗原区和4型病毒B5株E蛋白Ⅲ抗原区的嵌合E基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1中,通过测序确定嵌合基因序列的正确性.然后将重组质粒以肌肉注射途径,免疫Balb/C小鼠。通过间接免疫荧光法对采集的鼠血清中的病毒特异抗体进行检测。结果 构建的含有我国登革2型/4型病毒株嵌合E基因的真核表达质粒pcDNA-D2/4,经序列测定表明，导入的嵌合E基因片段的序列是正确的。将重组质粒DNA免疫小鼠，在初次免疫后的第3周，可同时检测到针对登革2型和4型病毒的特异荧光。结论 所构建的含有不同血清型的甸登革病毒株嵌合E基因片段的真核重组质粒，可诱导小鼠同时产生针对两个血清型病毒的特异抗体，该研究为新型登革多价疫苗的研制提供了依据。

痢疾菌体内诱导基因表达文库的构建

目的构建筛选痢疾菌福氏2a体内诱导基因的融合基因表达文库.方法以自杀载体pGP704为骨架,用氯霉素乙酰转移酶基因作为报告基因,构建了用于筛选体内诱导基因的载体pGPcat.把痢疾菌福氏2a基因组DNA的随机酶切片段(0.6-1kb)亚克隆到pGPcat载体报告基因上游的Bgl Ⅱ位点,构建了融合基因文库.结果与痢疾菌福氏2a 2457T结合转移后,获得融合基因表达文库.以氯霉素为选择标记,经过体外初步筛选,得到3.2%的具有氯霉素抗性的菌株.结论构建的融合基因表达文库适用于筛选福氏2a痢疾菌的体内诱导基因.

重组白介素-4促进外周血淋巴细胞增殖和抗辐射的作用

目的研究重组人白介素-4(rhIL-4)对正常人外周血淋巴细胞亚群的促增殖和对离体照射淋巴细胞的保护作用.方法用MTT、碱性磷酸酶免疫组化和TUNEL方法,检测淋巴细胞的增殖,T、B淋巴细胞亚群和淋巴细胞凋亡.结果(1)在适当浓度PWM存在下,一定浓度的rhIL-4能明显促进正常人外周血淋巴细胞增殖,其中以无血清体系和培养后24 h的作用较强;(2)rhIL-4的促增殖作用主要表现在,促进TH、Ts细胞亚群和B细胞的增殖;<3)一定浓度的rhIL-4能明显抑制6Gy γ-线照射引起的淋巴细胞总数、TH、Ts细胞亚群和B细胞数量的减少;(4)rhIL-4能明显抑制急性照射引起的大量淋巴细胞凋亡,可能是减轻淋巴细胞辐射损伤和改善机体免疫功能的重要原因.结论rhIL-4能使正常人外周血T、B淋巴细胞数量增加,对致死剂量照射引起的淋巴细胞减少也具有明显的抑制作用.

副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的原核表达及产物的性质

目的实现副溶血性弧菌直接溶血毒素tdh基因在大肠杆菌中的表达,鉴定表达产物的生物学活性和免疫原性.方法构建tdh基因的原核表达系统NWⅡ(tdh/Trc99A/JM109),并在30℃条件下,用0.8 mmol/L IPTG诱导表达.用SDS-PAGE分析蛋白表达;溶血试验检测表达蛋白的溶血活性.将表达产物腹腔注射免疫兔,用试管凝集反应试验检测特异性抗体.用溶血抑制试验检测该抗体体外对TDH溶血活性的抑制作用.结果NWⅡ在上述条件下诱导后,TDH呈可溶性、融合性表达.SDS-PAGE表明,表达蛋白的相对分子质量(M1)约23 000.薄层扫描显示,细菌的周质腔中的蛋白量高,占总蛋白的13.4%.溶血试验表明,表达的蛋白具有溶血活性.用表达蛋白免疫兔产生的相应抗体,在体外具有抑制FDH溶血活性的作用.结论tdh基因在原核表达系统Trc99A/JM109中获得成功表达,为基因工程大规模制备TDH抗原,制备抗TDH的多克隆和/或单克隆抗体,构建基因工程菌苗,阐明该菌的致病机制打下了基础.

大肠杆菌O-157产生的VT2对中性粒细胞自发性凋亡的抑制作用

目的研究毒源性大肠杆菌(VETC)O-157产生的外毒素-VT2对中性粒细胞自发性凋亡的影响,探索VETC感染后并发的溶血性尿毒症(HUS)及相关疾病的发病机理.方法运用形态学观察、流式细胞仪(FACS)技术和DNA分离技术进行研究.结果在无VT2存在的情况下,经过24h体外培养,65%左右的中性粒细胞发生了凋亡,而浓度为10-6M的VT2使其凋亡发生率降至20%左右.结论VT2延长了中性粒细胞的功能性生命期限,使其胞浆内细胞毒性物质有更多的机会损伤肾小球血管内皮细胞,促进微血栓的形成,因而中性粒细胞可能参与了HUS的形成过程.

流感病毒核酸疫苗与粘膜疫苗研究（摘要）

流感病毒至今仍是引起人类死亡的主要病因之一.因为流感病毒易突变,人类至今无法征服流感.疫苗接种预防流感是一种有效的手段.随着现代医学工程的进展,核酸疫苗为我们提供了新的选择,特别是核酸疫苗容易快速制备,在爆发大流行时将是一种快速有效的手段.流感病毒核酸疫苗是指将含有流感病毒基因的表达质粒,通过肌肉注射,基因枪注射等方法将其导入机体内,在机体内表达抗原蛋白,从而激发机体免疫系统产生针对流感病毒编码蛋白的特异性免疫应答反应,有效保护小鼠抵抗致死量流感病毒感染.核酸疫苗的产生使疫苗由传统的灭活疫苗、减毒疫苗等第一代疫苗和亚单位等第二代疫苗发展至第三代.它不仅能应用于各种感染性疾病,而且还能应用于癌症和免疫性疾病的治疗,使疫苗由预防疾病转为治疗疾病.我们以小鼠为实验动物,流感病毒核酸疫苗为研究模式来阐述核酸疫苗抗病毒感染的作用机理.

登革2型病毒NGC株E基因扩增和部分序列分析

目的体外扩增、克隆登革2型病毒(NGC株)包膜糖蛋白E基因约1.5kb的基因片段,并对目的基因片段进行部分碱基序列测定和分析.方法采用逆转录聚合酶链反应扩增出E目的基因片段,经限制性内切酶Kpn1/Xbal酶切后用低熔点琼脂糖挖块回收法回收纯化,插入真核表达载体pcDNA3的多克隆位点,构建重组体pcDNA3-E,转化大肠杆菌DH5a,通过对目的基因片段的部分碱基序列测定鉴定克隆的正确性,并分析其氨基酸变异.结果从登革2型病毒(NGC株)中扩增出约1.5kb的DNA片段,目的基因片段的部分测序与参考序列的同源性为96.53%,7个氨基酸发生变异,4个变异氨基酸与登革2型病毒Jamaica株相应位置的氨基酸相同.结论体外成功扩增并克隆DV2(NGC株)全长E基因片段,其序列变异及与其他毒株的同源性研究为登革病毒致病机理和疫苗的研究提供材料.

表达自杀基因的减毒伤寒沙门氏菌对肿瘤的抑制作用

目的研究表达自杀基因的减毒鼠伤寒沙门氏菌对肿瘤的抑制作用.方法把表达自杀基因的质粒(pc-CD)导入减毒的鼠伤寒沙门氏菌,以荷瘤鼠为模型研究沙门氏菌/自杀基因与5-FC系统对肿瘤的抑制作用.结果该系统能抑制肿瘤生长,延长荷瘤鼠的存活期.结论鼠伤寒沙门氏菌可以作为基因治疗的候选载体.

真核表达单纯疱疹病毒糖蛋白模拟表位mgC及其基因免疫效果的观察

目的鉴定单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白C(gC)一个短肽模拟表位mgC基因作为HSV DNA表位疫苗的可能性.方法将mgC基因克隆入真核载体pcDNA3.1中,并在CHO细胞中表达,免疫荧光法鉴定表达效果.DNA免疫不同种属小鼠,ELISA法观察HSV gC特异结合抗体的诱生.结果含mgC的真核载体在哺乳动物细胞中可以成功表达外源蛋白.重组载体DNA在BALB/c小鼠体内可诱导抗天然HSV gC蛋白的抗体,而在C57BL鼠体内未见明显的抗体反应.结论成功构建了可表达模拟表位mgC的真核表达载体.证明了应用gC模拟短肽基因作为DNA免疫的基因源是可行的,但其对不同种属动物的反应性不同,提示DNA免疫还应针对不同免疫对象调整免疫策略.这一研究为HSV多表位组合多放疫苗的研制提供了一个新的备选组份.

汉滩病毒感染HUVEC细胞系炎症介质表达的检测

目的检测汉滩病毒陈株感染HUVEC细胞系ECV304中炎症介质的表达.方法用汉滩病毒陈株感染HUVEC细胞系ECV304,取感染后不同时间的细胞提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR检测感染细胞中ICAM-l、eNOS和IL-6基因的表达,并将扩增的ICAM-l和eNOS基因克隆,测定核苷酸序列.结果IACM-1的表达产物在病毒感染后较未感染细胞有明显升高,序列分析结果表明扩增的基因为特异性扩增产物;用扩增eNOS的引物从病毒感染细胞可扩增出表达产物,从未感染细胞不能扩增出任何产物,但序列分析结果表明扩增的基因与一新基因高度同源.结论汉滩病毒陈株感染ECV304细胞可上调炎症某些介质的表达.

柯萨奇病毒B3通过caspase依赖途径诱导HeLa细胞凋亡

目的评价柯萨奇病毒B3(CVB3)致HeLa细胞死亡的方式及分子机制.方法用CVB3作用于HeLa细胞,在不同时间收集细胞,通过相差显微镜、电子显微镜、流式细胞仪以及分子生物学手段,检测HeLa细胞的病变及caspase-3基因mRNA和蛋白质的表达.结果CVB3作用于HeLa细胞后,细胞很快发生变性和坏死,24h后较多细胞凋亡;caspase基因在病毒作用早期即被活化,表现在caspase-3 mRNA在病毒作用后6h内,迅速增高达峰值.在24h内,又降至接近病毒作用前的水平.caspase-3蛋白表达在42h内逐渐增高.结论CVB3可诱导HeLa细胞发生坏死和凋亡两种反应,坏死早于凋亡,细胞凋亡与caspase-3的表达密切相关.

表达CtxB的非抗生素标记载体的构建

目的构建用于表达CtxB的非抗生素基因作为选择标记的载体.方法用PCR从质粒pMT999中,扩增获得2.9kb的汞抗性基因,与pBR322的复制起始区(ori)相连,得到重组质粒pBRH02.然后将含有β-内酰胺酶启动子的CtxB基因插入pBRH02中,构建表达质粒pBRC09.结果pBRC09经转化大肠杆菌、痢疾杆菌,用GM1-ELISA均检测到CtxB在上述菌株中的有效表达.结论利用汞抗性基因和pBR322的复制起始区,成功地构建成以非抗生素为选择标记的表达CtxB的重组质粒.

活血通脉片对急性血瘀证大鼠血液流变性和红细胞免疫功能的影响

目的研究中药复方制剂活血通脉片(HXTMT)对急性血瘀证SD大鼠血液流变学及红细胞免疫功能的影响.方法用HXTMT混悬液给SD大鼠灌胃1wk后,于第8d晨建成血瘀实验模型,并采血测定血液流变学及红细胞免疫功能的各项指标.结果HXTMT能明显降低瘀血大鼠的全血粘度(ηb)、血浆粘度(ηp)、纤维蛋白原(Fib)(P＜0.01)及红细胞比容(HCT)(P＜0.05);提高瘀血大鼠红细胞C3b受体花环率(E-C3bRR),降低红细胞免疫复合物花环率(E-ICR)(P＜0.05);增强血清红细胞免疫粘附促进因子(RFER)的活性,并使其抑制因子(RFIR)的活性减弱(P＜0.05).结论 HXTMT不仅能改善血液流变性,而巨具有活血化瘀作用及促进红细胞免疫功能的作用.

由构建的基因组全长cDNA所回收的我国登革2型病毒株的鉴定

目的由构建的病毒基因组全长cDNA回收具有感染性的我国登革2型病毒株,为进一步阐明登革2型病毒的致病机制及其新型疫苗的研制奠定基础.方法用SP6 RNA聚合酶系统制备我国登革2型病毒(D2-43)株基因组全长cDNA的体外RNA转录物,纯化后经电穿孔法转染C6/36细胞,观察致细胞病变作用以判断其感染性.从病变的细胞和培养上清中提取总RNA,通过RT-PCR扩增及克隆测序的方法证实细胞病变确为RNA转录物感染所致.同时收集可产生细胞病变的培养上清,再感染C6/36细胞以进一步证实所回收的登革2型病毒感染的稳定性.结果以我国D2-43病毒株基因组全长cDNA为模板制备的体外RNA转录物可使C6/36细胞产生病变,从病变细胞和培养上清中可扩增获得病毒特异的基因片段.在培养细胞中进行连续传代仍可产生细胞病变作用.结论构建的我国D2-43株基因组全长cDNA的体外RNA转录物对传代蚊细胞具有感染性,表明可产生完整的病毒颗粒.本研究可为阐明登革2型病毒的致病机理及探索新的预防和治疗措施奠定基础.

病毒性乙型肝炎患者/血清sFas、TNF-α、IL-6和IL-8的检测及临床意义

目的探讨病毒性乙型肝炎患者血清sFas、TNF-α、IL-6、IL-8水平与肝细胞凋亡/坏死之间的关系.方法抽取各型乙型肝炎患者静脉血5mL,ELISA法检测sFas、TNF-α、IL-6和IL-8的水平.结果上述4项指标的检出水平基本上依次为:重型乙型肝炎(SH-B)>慢性乙肝重度(CHB-H)>慢性乙肝中度(CHB-M)>急性乙肝(AH-B)>慢性乙肝轻度(CHB-L),各组间差异显著.结论sFas、TNF-α、IL-6和IL-8,4项指标的水平,能够反映肝细胞损害的程度,且与病毒复制、肝细胞凋亡和坏死有内在联系.

藏族株TT病毒的分子生物学研究

目的初步探索青海少数民族地区输血后肝炎病毒(TTV)感染的分子流行病学和TTV DNA部分核苷酸片段序列的分析.方法采用ELISA聚合酶链反应(PCR)技术,检测藏族、蒙古族、土族人群TTV的感染性,TTW DNA应用荧光法测序分析部分核苷酸片段.结果 ELISA检测74例藏族TTV阳性率14.9%;57例蒙古族TTV阳性率1.9%;土族未检测到阳性.PCR检测13例TTV阳性血清,DNA阳性率53.8%;藏族TTV DNA部分核苷酸测序,对照BDH1.Shanxi13.Gla序列,同源性达90%以上.结论TTV在青海少数民族人群间有一定的感染性,不同区域的民族感染率有显著差异.藏族株TTV/DNA片段对照分析同源性为90%以上,属Gla亚型.提示民族间感染有输入性特征.

儿童血清乙型肝炎五项标志物检测结果分析

目的探讨儿童乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)血清学标志物的表达模式.方法对1687份申请乙肝五项的儿童血清标本采用快速酶联固相免疫法(ELISA)进行检测,以聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA.对HBV感染标本的血清学标志物设定其表达模式为:(1)乙肝表面抗原(HBsAg)、(2)乙肝表面抗体(抗-HBs)、(3)乙肝e抗原(HBeAg)、(4)乙肝e抗体(抗-HBe)和(5)乙肝核心抗体(抗-HBc),并以出现阳性项目的序号为该模式的代码.结果共获得335份HBV感染标本,占全部标本19.86%,HBV感染模式以HBsAg是否为阳性,分为感染期模式和恢复期模式,共发现13种.感染期模式中以"135"模式为主,占感染标本50.45%.抗-HBs单项阳性标本占53.23%(898/1687).结论儿童乙型肝炎病毒血清学标志物表达模式比较复杂,以"135"模式为HBV感染的主要模式.

西安地区一株TT病毒的基因克隆及序列分析

目的对TTV阳性扩增产物进行克隆及测序,以了解西安地区TTV基因型及基因结构的特点.方法采用巢式PCR从转氨酶活性异常增高的患者血清中,得到TTV阳性扩增产物,将其插入pGEM-T easy载体,进行克隆及序列分析.结果获得1个pGEM-TTV重组载体.序列分析表明,插入片段为196bp.该序列与AF065400株等对应位置的核苷酸同源性分别为:AF065400(中国株)94 9%、AF351132(中国株)98.0%和NC-002076(日本株)99.0%.结论西安地区TTV阳性扩增序列与报道的AF065400株、AF351132株和NC-002076株的序列具有高度的同源性,属同个基因型别.

高低浓度HBsAg血清中7项乙肝标志物的表现模式分析

目的分析不同浓度HBsAg血清中7项乙肝标志物表现模式,以揭示其在人群中的分布特征.方法对252份低浓度和387份高浓度HBsAg血清标本的7项乙肝标志物进行检测;为表述方便,将乙肝标志物检测项目的第1～5项,依次用1、2、3、4、5作为该模式的代码.结果高浓度HBsAg组和低浓度HBsAg组在人群中的比例分别为10.2%和0.7%左右,两组血清学乙肝标志物的表现模式分别有10种和7种,各模式在两组间的检出率不完全相同,且两组间各模式的Anti-HBc-IgM、HBV DNA检出率亦不尽相同,但两组各模式均以145模式为高,其次为135和15模式.低浓度组中,约70%的145、15模式分布在1.0～2.0/μg/L范围内,近65%的135模式分布在2.0～5.0μg/L范围内,其他模式则多数分布在≤1.0μg/L以下.结论高浓度和低浓度HBsAg携带者的血清学乙肝标志物表现模式在人群中具有不同的分布特征,低浓度HBsAg感染人群宜引起重视,应将包括Anti-HBc-IgG在内的乙肝标志物检测列为常规检查项目.

烧伤小鼠巨噬细胞功能变化及中药黄芪对其影响的研究

目的观察烧伤后120h内小鼠巨噬细胞(Mψ)功能的动态变化,并探讨中药黄芪对烧伤小鼠Mψ功能和小鼠存活率的影响.方法应用吞噬法、RT-PGR等方法分别测定了伤后不同时间及给予黄芪后Mψ各种功能的变化.结果①伤后Mψ的吞噬功能显著下降,酸性磷酸酶(AcP)活性显著减低,IL-15mRNA表达发生波动,TNF-αmRNA表达显著增高.②腹腔注射黄芪(2.5g@kg-1.d-1)连续5天后,Mψ吞噬功能和AcP显著升高(P＜0.01),对IL-15mRNA没有影响,不能降低TNF-α mRNA表达,不能提高烧伤小鼠的存活率.结论烧伤小鼠早期死亡的原因可能与TNF-α的增加有关.

1年以上血透患者HCV感染状况的调查

目的研究1年以上的长期血液透析患者丙型肝炎(HCV)感染状况.方法用ELISA法和RT-PCR法检测137例长期血透患者血清中的抗-HCV和HCVRNA,并且同时检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),计算其变动率.结果透析时间超过1年以上的137例患者中仅抗-HCV阳性8例,仅HCV-RNA阳性13例,抗-HCV与HCVRNA同时阳性者24例,感染率34.3%.且透析时间小于2年的,HCV感染率为15%,透析时间大于2年以上的其感染率增至37.6%.结论血透患者中HCV的感染应引起重视,透析的年限越长,被HCV感染的机率就越大.酶学指证的变动率不能作为长期透析患者HCV感染的敏感指标.

A组轮状病毒一步法RT-PCR检测技术的建立和应用研究

目的设计A组轮状病毒(RV)特异性引物,应用Tth酶,建立一步法RT-PCR扩增方案,检测西安地区腹泻幼儿196份粪便标本,并与本室研制建立的反向间接血凝法(RPHA),聚丙烯酰胺凝胶电泳,市售ELISA试剂盒平行检测对比分析.方法设计并合成第九基因序列保守区互补的特异性引物,在经典法RT-PCR试验成功的基础上,建立合理的一步法RT-PCR.结果四种检测结果阳性率分别为33.16%,23.47%,21.94%和25%,X2检验表明,RT-PCR为敏感.结论反转录和PCR由Tth酶一步完成,克服了经典法中AMV、RNasin等试剂昂贵,操作繁锁等缺点,很适合临检需要.

慢性乙型肝炎患者树突状细胞形态、表型和功能的变化

目的观察慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者树突状细胞(dendritic cells,DC)形态、表型和功能的改变.方法从13例慢性乙肝患者和11例健康人外周血中分离和培养DC,观察DC的形态.用流式细胞仪检测DC的表面标志,HLA-DR、CDla、CD80和CD86的表达.用3H-TdR掺人法,检测DC诱导混合性淋巴细胞反应(mixed leukocytes reaction,MLR)的能力.结果正常人的DC较慢乙肝患者的DC在形态上更为典型.前者的DC不规则,细胞可表达较多的HLA-DR、CD80和CD86分子(P＜0.05),诱导MLR的能力也较强(P＜0.05).结论慢乙肝患者外周血DC处于不完全成熟状态,其免疫刺激能力较低.

人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因在Sp2/0细胞中的初步表达

目的在前期工作的基础上,进一步将人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因转染到鼠骨髓瘤细胞Sp2/0并进行初步表达.方法将含人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因的真核表达载体VκEpSVneo,用脂质体法转染鼠骨髓瘤细胞Sp2/0,用RT-PGR法和免疫组化染色法检测转染及表达结果.结果RT-PCR和免疫组化染色结果表明人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因不仅已成功地转染进Sp2/0细胞,并得到了良好的表达.结论在鼠骨髓瘤细胞Sp2/0中成功表达人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因,对抗HFRS病毒抗体人源化的研究具有重要意义.

稀土离子诱导钙调蛋白构象变化的单克隆抗体制备（摘要）

钙调蛋白是广泛存在于生物体内的一种多功能的调节蛋白,它通过结合钙离子后自身的构象变化参与许多细胞代谢调控过程.已有文献报道,三价的稀土离子可以拮抗钙调蛋白的调节作用,原因可能是稀土离子和钙调蛋白结合后改变了它的构象变化.为了研究金属离子对钙调蛋白三级结构变化的影响,我们采用免疫化学的方法,制备稀土离子诱导钙调蛋白构象变化后的单克隆抗体,来研究金属离子诱导钙调蛋白构象变化后与抗体的分子识别能力差异.牛脑钙调蛋白经超滤脱钙后,用2,4-二硝基氟苯修饰,以增强其免疫原性,再与三价的铕离子饱和,以此作为抗原免疫Balb/c小鼠.免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选克隆制备单克隆抗体.结果表明,修饰后的蛋白免疫原性得到改善,小鼠免疫一周后即在尾血中检测到了抗体的产生,血清效价为1:12000;细胞融合后经筛选得到一株细胞株2C3;ELISA结果表明该抗体与铕离子饱和后的钙调蛋白的识别能力要高于脱去金属离子后的钙调蛋白与抗体的识别能力,说明钙调蛋白分子结合稀土离子后发生了较大的构象变化.该抗体可以用于进一步研究不同金属离子对钙调蛋白构象变化的影响,以及钙调蛋白抗原决定簇的定位.

四(4-三甲胺苯)卟啉诱导的抗体酶研究

卟啉衍生物是一类重要生命物质,对生物机体物质代谢活动有重要影响,卟啉类化合物与蛋白分子的作用为很多科学研究者所关注.卟淋类化全物为半抗原诱导产生具有酶活性的抗体是目前国际抗体酶研究领域的一个重要目标.但天然过氧化物酶都是从动植物特定的组织和器官提取的,步骤多操作时间长,易造成酶失活.抗体酶性质均一且稳定性高,因此我们针对过氧化物酶活性部位含有卟啉辅基的结构特征,应用自己合成的新型的具有辅基及底物结构特征的卟啉衍生物[1],诱导产生了具有过氧化物酶活性的抗体酶,并对其基本性质进行了探讨.

轮状病毒抗原基因在马铃薯细胞中的表达和活性检测

目的轮状病毒引起的婴幼儿腹泻病,在发展中国家有较高的发病率和病死率,因此,研制安全有效的轮状病毒疫苗成为当务之急.方法本文采用RT-PCR扩增截短VP4蛋白基因,克隆于殖物表达载体pBI221,再双酶切pBI221,将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11,通过三亲杂交方法,制备农杆菌转化载体pSB111-VP4,并对pSB111-VP4作点杂交检测,筛选鉴定重组子,并对马铃薯组织细胞进行转化.结果Westem印迹检测其免疫活性,且具有良好的抗原性.结论该转化系统的建立,为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备.

HBV与HCV的融合与联合基因免疫效果的研究

目的对比融合重组质粒CSpcDNA3.1单独注射,与SpcDNA3.1+CpcDNA3 1联合注射的免疫效果.方法大量提取质粒后免疫小鼠,剂量为每次150Xg,按0、2和4wk,共免疫3次.免疫后第1、3、5和7wk采血,用ELISA方法检测抗HBs和抗HCV抗体;用LDH法检测免疫小鼠脾细胞CTL的杀伤功能.结果无论从抗HBs和抗HCV抗体出现的时间、阳转率和应答强度,还是CTL水平,CSpcDNA3.1融合重组质粒都优于CpcDNA3.1+SpcDNA3 1联合基因的免疫.结论融合DNA疫苗,有望成为慢性病毒性肝炎预防和治疗的制剂.

抗溶藻弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定

目的研制抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体并进行免疫学特性分析.方法用溶藻弧菌外膜蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA鉴定mAb特异性,用BALB/c小鼠进行感染保护实验.结果共获8株抗溶藻弧菌单克隆抗体,其中两株具有很好的被动免疫保护抵抗溶藻弧菌感染的能力.结论本研究制备的抗溶藻弧菌单克隆抗体可作为溶藻弧菌感染的检验和被动免疫保护研究.

汉滩病毒感染中的抗体依赖性增强作用的初步研究

在某些病毒的感染过程中,存在着抗体依赖性增强(ADE)作用,即特异性抗体的存在可增强病毒的感染[1],这是某些病毒疫苗免疫保护效果不好及某些病毒病的发病机制之一.汉滩病毒是人类肾综合征出血热(HFRS)的病原,机体对该病毒感染的免疫以体液免疫为主.目前评价HFRS疫苗接种效果的主要指标是特异性抗体的产生及其滴度高低,因此,采用特异性单克隆抗体(mAb)治疗急性期HFRS患者也具有明显的疗效[2].但另一方面,也有文献报道,在汉滩病毒感染实验中,曾观察到似有ADE现象发生[3].为进一步探讨在HFRS感染中是否存在ADE现象,我们进行了以几项研究.

人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的体外成熟

目的提高人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的亲和力和特异性.方法以人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体为基础,通过合成部分随机化的突变引物和PCR等方法构建HCDR3和LCDR3的混合突变库,然后利用噬菌体表面呈现技术对抗体库进行筛选,并利用本实验室建立的单链抗体-碱性磷酸酶系统进行单克隆的鉴定.结果得到4株亲和力和特异性有明显改善的人源化抗体.结论构建CDR3突变库是抗体体外成熟的一个有效方法,该研究为研制低免疫原性的导向溶栓制剂奠定了基础.

炭凝集试验快速检测病毒的研究

目的探讨炭凝集试验(CAT)快速检测流行性出血热病毒(EHFV)和呼吸道合胞病毒(RSV)的可行性.方法用单克隆抗体(mAb)制备炭抗体,进行相对应的病毒(标本)检测,同时以免疫荧光(IFA)或细胞培养法为对照.结果用CAT与IFA对比检测40例EHF患者外周血单个核细胞(PBMC)中的抗原,阳性检出率分别为87.5%和82.5%,两者的符合率为95%.用CAT对已知病毒试验,结果所试18株RSV均产生凝集,其它8种病毒均不凝集.用CAT和细胞培养法,对83份临床标本中的RSV检测,CAT的阳性率为69.88%(58/83),细胞培养法为39.75%(33/83),表明CAT较细胞培养法敏感.结论 CAT法的敏感性高于IFA和细胞培养,可用于某些临床标本的检测.

Meso-四(α,α,α,α-0-苯乙酰苯)卟啉特异的人源性单链抗体的筛选和鉴定

我们用小分子Meso-四(α,α,α,α-0-苯乙酰苯)卟啉诱导产生了单克隆抗体(mAb)1F2[1],并对mAb 1F2的抗体酶学性质进行了测定,得到了具有较高活性的加卤酶[2].由于mAb 1F2是鼠源性抗体,对人体有免疫原性,如果把mAb1F2应用于甲状腺疾病的治疗,就必须对它进行人源化. 体外获得抗原特异的人源抗体的途径有三个:改造鼠源性抗体、从人源性噬菌体抗体库中筛选抗体、研制转基因动物.由于人源化的鼠源抗体仍存在免疫原性,因此不是理想的选择;转基因动物技术难度大,而且抗原特异的人抗体基因无法获得,所以也是不可行的.比较而言,只有从人源性抗体库中筛选抗体切实可行,不但可以得到人源性抗体,而且方法简便,筛选效率高,用卟啉筛选到人源性单链抗体才可以用来治疗甲状腺疾病.

创伤弧菌独特型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的研制创伤弧菌独特型单克隆抗体(mAb)并进免疫学特性分析.方法用纯化的抗创伤弧菌mAb 1A1免疫BALB/c小鼠,ELISA法鉴定独特型mAb的特异性,用牙鲆鱼进行感染保护实验.结果共获6株创伤弧菌独特型mAb,其中两株具有较好的模拟菌体抗原表位,并具有自动免疫保护抵抗创伤弧菌感染的能力.结论本研究制备的创伤弧菌独特型mAb可作为模拟菌体抗原用于免疫疫苗预防研究.

IgG Fab-BPI融合蛋白真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

目的构建抗抗LPS Fab-BPI真核表达载体,并在CHO细胞中表达.方法通过RT-PCR,获得广谱抗LPS mAb C3A2(IgG)的Fd和完整轻链(LC)cDNA片段.在分别构建了pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC表达载体的基础上,将包括BPI N端抗LPS活性中心的180bp DNA片段,通过一段长16个氨基酸的linker连接于上述Fab表达载体中Fd基因的下游,构建成Fab-BPI融合蛋白(FB)真核表达载体.将pcDNA3-LC质粒中包括hCMV启动子、LC和BGH polyA等序列在内的片段,插入到pcDNA3-Fd中hCMV启动子上游,从而构建成单质粒的Fab-BPI表达载体pcD-NA3-FB,转染真核细胞.结果序列测定表明,重组质粒构建正确.pcDNA3-FB转染CHO细胞后,经ELISA、免疫荧光和mRNA鉴定表达成功,免疫印迹试验显示,与抗κ轻链和抗BPI抗体反应的蛋白区带的M,均为60 000左右.交叉反应试验证明,Fab和FB与多种革兰氏阴性菌的LPS有交叉反应性.结论成功地在CHO细胞中表达出了抗LPS Fab-BPI(FB)融合蛋白.FB作为融合蛋白,集广泛交叉反应性和强大中和活性于一身,有可能成为更适于临床应用的新的抗LPS免疫制剂.

扩增鼠源性mAb和人源性抗体κ轻链基因中引物的作用

目的比较扩增鼠源性mAb和人源性抗体Vκ基因中引物的作用.方法从5株抗HFRS病毒鼠源性mAb杂交瘤细胞系和人PBL中提取细胞总RNA.逆转录后,用不同的引物进行PCR扩增,克隆后测定核苷酸序列并比较不同引物的作用.结果 5株mAb杂交瘤细胞的Vκ基因及人源性抗体的Vκ基因,需采用不同的引物组合才可得到.结论 5'端引物在PCR扩增抗体Vκ基因中起重要作用.

幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆与高效表达

目的克隆并表达幽门螺杆菌尿素酶B基因.方法提取幽门螺杆菌染色体DNA,用PCR方法扩增尿素酶B基因.将其克隆至表达载体pQE30,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达.结果分离得到了1.7kb的ureB基因片段,并在大肠杆菌中实现了该基医的高效表达.在37℃诱导表达4h后,表达产物约占细菌总蛋白的34.0%.表达以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,其中主要包涵体的形式,目的蛋白占不溶性蛋白的55.8%.结论幽门螺杆菌ureB基因的克隆与表达为Hp疫苗的研制打下了基础.

我国D2-43株PrM-E基因的复制型载体质粒DNA的免疫原性研究

目的通过观察含我国登革2型病毒株(D2-43)的PrM-E基因的复制型SFV重组质粒DNA的免疫原性,为登革新型疫苗的研制提供依据.方法将PrM-E基因自T载体上切下,插入复制型SFV病毒载体质粒DNA中.将此重组质粒DNA以电穿孔法导人BHK21细胞,表达产物的特异性用间接免疫荧光法进行鉴定.采用去除内毒素的质粒提取试剂盒制备重组质粒DNA,然后以不同剂量通过肌肉注射途径免疫Balb/c鼠,鼠血清中的抗体用间接免疫荧光法进行检测.结果含PrM-E基因的重组SFV质粒DNA在BHK21细胞中可表达登革2型病毒的特异蛋白;经免疫Balb/c鼠后,鼠血清可与登革D2-43感染的C6/36抗原片起特异的抗原抗体反应.结论含登革2型病毒PrM-E基因的复制型SFV病毒载体质粒DNA在Balb/c鼠中可诱导登革2型病毒特异抗体的产生,但抗体水平较低.

APC在结核杆菌低分子多肽抗原体外激活人外周血γδ+T细胞中的作用

目的探讨抗原递呈细胞(APC)在结核杆菌(Mtb)低分子多肽抗原体外激活人外周血γδ+T细胞中的作用.方法用平皿粘附和尼龙毛柱纯化法,从PBMC中分离单核细胞、B淋巴细胞,然后分别与纯化的T细胞共育,在Mtb抗原的刺激下,观察γδ+T细胞的增殖效应.结果Mtb低分子多肽抗原在激活γδ+T细胞时,需要单核细胞、B细胞等APC的存在,但APC并不起摄取、加工、递呈抗原的作用.结论γδ+T细胞具有与γδ+T细胞不同的独特抗原识别方式.

用原位杂交技术研究小鼠巨细胞病毒对巨噬细胞的感染

目的检测巨细胞病毒(CMV)是否能够感染并影响小鼠腹腔巨噬细胞.方法以小鼠巨细胞病毒(MCMV)攻击小鼠腹腔巨噬细胞后,用地高辛标记的152bp MCMV DNA探针进行原位杂交测定.结合受染细胞形态学改变,巨细胞包涵体检测,以及细胞表面Fc受体表达(Fc花环形成)的变化,观察MCMV对单核-巨噬细胞的作用.结果原位杂交技术检测表明受MCMV攻击的巨噬细胞的胞浆和核内,有杂交阳性的灰蓝色颗粒沉积,与阳性对照细胞片(小鼠成纤维细胞3T3)相一致;未受MCMV攻击的巨噬细胞片(阴性对照)中,则未见有着色颗粒.同时发现,受染细胞的形态改变,核呈现典型的嗜酸性包涵体;受染细胞表面Fc受体表达呈上调趋势.结论巨细胞病毒能够感染巨噬细胞并影响其形态和功能.

补充VA、VE对梭曼中毒大鼠体内抗氧化能力影响的初探

目的研究棱曼对急性中毒大鼠的自由基损伤作用,探讨维生素A、E的抗氧化作用.方法雄性大鼠,随机分为对照组、阳性组、VA组、VE组.灌胃10d,第11d除阴性组外其余各组大鼠均皮下注射0.9LD50梭曼,2h后取样,测定各组全血和肝组织的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、VE和总抗氧化力(T-AOC).结果梭曼中毒2h后,GSH-Px活性、T-AOC水平、VE含量降低.维生素A、E均有效的抑制其变化.结论梭曼对大鼠有自由基损伤作用,维生素A、E对梭曼中毒大鼠过氧化损伤具有保护作用,提示维生素A、E对梭曼中毒有预防作用.

活化补体诱生一氧化氮介导肝细胞损伤的实验研究

目的探讨活化补体对大鼠枯否细胞(KC)分泌一氧化氮(NO)的影响及其与肝细胞损伤的关系.方法大鼠KG+肝细胞(HC)联合培养分别与酵母多糖活化人血清(ZAHS),抗人C3、C5中和的ZAHS以及ZAHS+氨基胍(iNOS抑制剂)作用后,观测培养上清中不同时相点的NO和乳酸脱氢酶(LDH).结果 ZAHS作用组KC+HC联合培养的上清中NO和LDH各时相点的测值显著升高(P＜0.01);中和血清组和氨基胍组培养上清中NO分别下降53.4%～62.8%和68.1%～72.1%,LDH分别下降56.0%～66.5%和5l.2%～57.2%,与作用组相差显著(P＜0.01).结论 ZAHS中的C3、C5片断可激发KC生成NO,介导肝细胞损伤,这可能是某些病理情况下补体介导肝损伤的机制之一.

HEGF对体外人胎胰岛细胞增殖效应的实验观察

现已证实表皮生长因子(EGF)是由53个氨基酸组成的多肽链,对细胞DNA、RNA和蛋白质的合成,对上皮、间皮及内皮多种细胞的分化生长具有显著生物效应.为提高冻存复苏胰岛细胞的生物活性,本文采用人胎下颌腺HEGF提取物对冻存复苏及新鲜分离胰岛细胞进行了体外培养,对其增殖效应及胰岛素释放量进行了观测,现将实验结果报告如下.

肿瘤细胞HLA分子的表达及IFN-γ的调控作用

目的研究肿瘤细胞表面HLA分子表达及IFN-γ的调控作用.检测TIL细胞中T细胞亚群的变化,并与PBMC比较.方法采用FACS检测细胞表面的CD抗原,采用ABC免疫组化染色检测肿瘤细胞HLA-I、Ⅱ类分子的表达.以IFN-γ诱导建系的卵巢癌细胞表达HLA分子.结果肾细胞癌患者TIL细胞中的T细胞明显多于大肠癌患者.肿瘤患者PBMC中的T细胞数少于正常对照;肿瘤组织HLA-Ⅰ类抗原的表达明显低于正常组织,HLA-Ⅱ类抗原的表达高于正常组织.与正常组织相比较,大肠癌患者比肾细胞癌患者HLA-Ⅰ类抗原的表达更低.IFN-γ可诱导建系卵巢癌细胞表达HLA-Ⅰ类抗原,但不能诱导HLA-Ⅱ类抗原的表达.结论肿瘤组织HLA表达的变化与肿瘤组织中TIL的数有关;IFN-γ能选择性地诱导卵巢癌细胞表达HLA-Ⅱ类分子,在抗肿瘤免疫中具有重要的意义.

汉滩病毒囊膜蛋白及核壳蛋白与免疫保护力的关系

目的为了阐明汉滩病毒囊膜蛋白及核壳蛋白与免疫保护力的关系.方法采用区带离心及柱层析纯化汉滩病毒LR1株囊膜蛋白(GP)和核壳蛋白(NP),以GP、NP和GP+NP分别免疫家兔,测定其中和抗体和保护力.结果实验显示,GP和GP+NP免疫组家兔血清中和抗体滴度≥1:10,NP免疫组家兔血清中和抗体≤1:5;而保护性试验显示,GP、NP、GP+NP免疫组家兔均可保护100ID50同株病毒的攻击.结论上述结果表明,汉滩病毒GP和NP组份均与其保护力有关.

全血金标法筛选无偿献血者血中HBsAg的评价

用金标试剂检测献血者血中HBsAg,可大程度的满足无偿献血现场筛查的使用以及在广大乡村、边远地区简陋条件下检测的要求,且便于在家庭中开展个人自查.因此,有助于推动无偿献血的开展及<献血法>的顺利实施,乙肝传染源的及时发现、隔离及治疗,以及提高我国国民的健康水平.我们对金标试纸条的应用进行了评价.1 材料和方法血液标本来自无偿献血者.金标试纸条购自厦门新创公司;ELISA检测试剂盒购自上海科华和北京万泰公司.操作步骤严格按说明进行操作.

同个体中HCV高变区1序列变异的研究

HCV高变区1(hypervariable region one,HVR1)基因变异可能与病毒逃避宿主免疫选择作用有关,是病毒在体内持续存在及HCV感染易慢性化的重要原因之一[1].近年来研究发现,HVR1基因可能对HCV的免疫预防有重要作用[2,3].为此,我们选择了长期、多次进行血液透析的HCV感染者作为研究对象,动态观察了HVR1的序列变异.以研究其变异极其规律有重要意义.

HIV-1 gp41基因的分段克隆和表达

目的在大肠杆菌中表达HIV-1gp41 N肽和C肽基因.方法用PGR方法从含HIV-1 gp160基因的质粒中扩增HIV-1gp41 N肽和C肽基因,重组人pGEX-4T-1载体,并亚克隆入pGEM7zf(+)中测定核苷酸序列,限制性酶切鉴定后进行原核表达.结果成功地扩增到HIV-1 gp41 N肽和C肽基因,酶切鉴定及测序结果与已知HIV-1亚型的gp41 N肽区和C肽区基因序列一致,SDS-PAGE结果显示,表达出与预期分子量大小相同的蛋白.结论 N肽和C肽基因的成功表达,为进一步研究其结构和功能奠定了基础.

针对HIV-1 进入细胞过程的抑制剂研究进展

HIV-1进入宿主细胞的过程可简单归纳为:HIV-1首先通过其囊膜糖蛋白复合物gp120-gp41中的gp120与靶细胞上的受体CD4结合,使得gp120的构象发生改变,并继而与靶细胞上的辅受体CXCR4或CCR5结合,结果导致gp41的构型改变,暴露出其融合肽并插入到宿主细胞膜,从而启动病毒膜与细胞膜的融合,完成病毒进入宿主细胞的感染过程.1针对HIV-1 gp120与CD4结合反应的抑制剂1.1 可溶性CD4片段及其衍生物早期研究曾证明重组表达的可溶性CD4片段对体外培养的HIV-1具有明显的抑制活性,在此基础上研制的重组融合蛋白-CD4-IgG2则进一步延长了其在体内的半衰期;该制剂的I/II期临床试验结果表明,一次性静脉给予0.2～10mg/kg剂量时,受试者均能很好耐受,未发现其有免疫原性及其他副作用.

The human immunodeficiency virus type 1 (HIV - 1 ) envelope glycoprotein gp41 plays a critical role in the fusion of viral and target cell membranes. The gp41 extracellular domain, which contains fusion peptide (FP), N - and C - terminal hydrophobic heptad repeats (NHR and CHR, respectively). Peptides derived from NHR and CHR regions,designated N- and C- peptides, respectively, can interact with each other to form a six - stranded coiled - coil domain, representing the fusion-active gp41 core. Our previous studies demonstrated that the C- peptides have potent inhibitory activity against HIV- 1 infection.These peptides inhibit HIV- 1 -mediated membrane fusion by binding to NHR regions for preventing the formation of fusion- active gp41 core. One of the C - peptides, T - 20, which is in the phase Ⅲ clinical trails, is expected to become the first peptide HIV fusion inhibitory drug in the near future. However, this peptide HIV fusion inhibitor lacks oral availability and is sensitive to the proteolytic digestion.Therefore, it is essential to develop small molecular non -peptide HIV fusion inhibitors having similar mechanism of action as the C- peptides. We have established an ELISA- based screening assay using a unique monoclonal antibody, NC- 1, which can specifically bind to a conformational epitope on the gp41 core domain. Using this screening assay, we have identified a small molecular anti- HIV- 1 compound,named ADS-Jl, which inhibits HIV- 1- mediated membrane fusion by blocking the interaction between the NHR and CHR regions to form the fusion - active gp41 core. This compound will be used as a lead to design and develop novel HIV fusion inhibitors as new drugs for the treatment of HIV infection and/or AIDS.

一种由补体介导的抗菌蛋白-Ra反应因子

正常体液和组织中含有多种杀伤或抑制病原体的物质,当特异性抗体尚未形成之前,它们已发挥了抵御人侵病原体的重要作用.这一类物质主要包括补体、溶菌酶、以及补体介导的抗微生物蛋白或称之谓多聚蛋白(Lectin).本文介绍的Ra反应因子就是一种新发现的由补体介导的抗微生物蛋白,它的补体激活途径是一条非经典和替代的特殊途径,即Lectin-pathway,因为它的补体介导抗微生物反应中不需要补体成分C1,但需要C4、C2.目前已趋向将其归属于甘露糖结合蛋白质(mannan/mannose-binding protains,MBP or/mannan/mannose-bindinglectins,MBL),人体血浆中含量不等,可能与地区、人种以及检测方法不同有关.

微生物基因组研究进展

微生物基因组研究与人类基因组计划(Human Genome Project,HGP)是相得益彰的.由于微生物基因组相对较小,易于操作,它的研究往往先行一步,起到基因组研究中"先行官"的作用.早在人类基因组计划启动之前,Frank A等人(1980)就完成了花叶病毒基因组(8024 bp)的测序;Arrand JR等人(1981)完成了EB病毒的全基因组测序(172281 bp);Dunn JJ等人(1983)完成了T7噬菌体的基因组(39937 bp)测序;Peeters BP等人(1985)完成了大肠杆菌丝状噬菌体Ike的基因组(6883 bp)测序.在微生物基因组研究方面所取得的理论和技术进展,为人类基因组计划提供了极有益的借鉴.微生物基因组研究和人类基因组计划所用的策略是基本一致的.作为模式生物的微生物基因组(如大肠杆菌和酵母菌基因组)的研究本身就是人类基因组计划的研究内容.

Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒转染DC及特异性CTL的体外诱导

通过EB病毒LMP2A重组痘苗病毒转染的DCS体外诱导LMP2A特异性CTL,并通过GM-CSF、IL-4和TNF-a培养体系,我们诱导出了人外周血单核细胞来源的DC.同时选用在鼻咽癌患者中表达的EB病毒潜伏蛋白之一LMP2A作为靶基因,利用重组痘苗病毒转染诱导的DCS.DCS与自体PBMCS混合培养,在IL-2的刺激作用下获得特异性CTL.结果如下:

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书讯:《细胞和分子免疫学》第二版即将出版

第四军医大学实验动物中心开放公告

书讯:《现代基础医学常用实验技术》拟于2001年11月出版