细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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新生大鼠神经干细胞的分离培养与观察
目的建立神经干细胞的分离、培养及分化鉴定技术; 观察神经干细胞的生长、增殖及分化的特点.方法分离新生SD大鼠脑室下区的组织, 经消化及机械吹打后, 采用原代贴壁及传代悬浮的方法, 培养获得细胞克隆.应用免疫细胞化学方法及透射电镜检测技术, 鉴定神经干细胞和分化的神经细胞.结果从新生SD大鼠脑室下区分离的组织, 经原代和传代培养均可形成细胞克隆, 并具有增殖的能力.原代和传代细胞抗原-nestin呈阳性.分化后的细胞可表达神经元、星形角质细胞和少突角质细胞的特异性抗原.结论用此方法分离的细胞具有自我更新和分化潜能, 有很强的增殖能力, 是属于中枢神经系统的干细胞.
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rhIL-15表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
目的获得rhIL-15基因工程菌.方法从肺癌细胞株A549中提取细胞总RNA,用RT-PCR法扩增编码人IL-15成熟区基因的片段.经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,插入融合表达质粒pGEX-4T-2的相应酶切位点,构建重组融合蛋白表达质粒,并转化感受态大肠杆菌BL21而得到工程菌.结果重组质粒插入片段核酸序列测定的结果,与文献报道的IL-15蛋白成熟区的核酸序列相一致.该工程菌所表达的融合蛋白多数以包涵体的形式存在,占菌体蛋白总量的39%.复性后,纯化的rhIL-15蛋白经MTT比色法初步测定,具有促进CTLL-2细胞增殖的能力.结论获得了具有生物学活性的rhIL-15高效表达菌株.
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免疫应答中非对应性激发现象的研究
目的观察机体的特异性免疫细胞克隆, 在受到非对应性抗原刺激后的反应情况.方法首先用定量的卵白、牛乳和牡蛎提取液(依次简称为EW、MI、OE抗原), 分别对家兔做基础免疫, 再分别用EW、MI、OE 3 种抗原对家兔做交叉免疫.采用酶联免疫法, 定量检测各组交叉免疫前、后的基础抗体的变化.结果采用与基础免疫不同的抗原做交叉免疫的各组家兔, 其基础抗体均有10%~25%的提高, 较对照组有显著差异(P<0.05).结论免疫特异性反应细胞克隆可被非对应抗原激活.
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外源HSV-TK和B7双基因在大鼠乳腺癌细胞中的共表达
单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK),能将无毒或低毒的前药羟甲基无环鸟苷(ganciclouvir,GCV)磷酸化,并进一步在胞内代谢生成三磷酸GCV.后者可抑制细胞内的DNA聚合酶,通过阻断DNA的合成而杀伤肿瘤细胞,并具有"旁观者效应"[1].共刺激分子B7可为T细胞的活化提供辅助信号,参与机体的抗肿瘤免疫应答.本研究构建了含TK和B7双基因的重组逆转录病毒载体,并以其转染大鼠乳腺癌细胞,观察重组基因的共表达.
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大鼠趋化素样因子对成肌细胞促增殖作用的研究
目的探讨大鼠趋化素样因子1和2(rCKLF1、2)对成肌细胞的增殖促进作用. 方法构建pcDNA3.1/rCKLF1和pcDNA3.1/rCKLF2真核表达载体,并瞬时转染293T细胞, 收获培养上清.分别以3H-TdR掺入和MTT比色法,分析rCKLF1和rCKLF2对小鼠肌母细胞系C2C12和原代肌卫星细胞增殖的促进作用. 结果成功地构建了rCKLF1和rCKLF2的真核表达质粒, 并在SV40转化的293T细胞中瞬时表达rCKLF1和rCKLF2.瞬时转染上清能够使C2C12细胞的3H-TdR的掺入值增加2倍或3倍.MTT比色法分析表明,rCKLF1和rCKLF2的转染上清,对Wistar大鼠乳鼠肌卫星细胞具有增殖促进作用. 结论 rCKLF1和rCKLF2能够促进骨骼肌细胞的增殖, 为进一步探讨CKLF家族分子在骨骼肌细胞增殖分化中的作用提供了实验依据.
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人热休克蛋白70基因的原核表达
目的表达人热休克蛋白70(HSP70)并进行鉴定.方法用PCR方法扩增人HSP70基因片段,经T-A克隆法克隆到载体pUCm-T中,并进行DNA测序.将人HSP70基因片段从载体pUCm-T中酶切后,构建重组表达载体pGEX- 4T-1-HSP70,并转化大肠杆菌JM109,用IPTG诱导.收集细菌,菌体裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测.结果人HSP70基因的PCR产物约为1.9 kb.序列测定结果证实,所获目的序列与文献[3]报道的相一致.经EcoR I和Xho I酶切鉴定证实,人HSP70基因已成功地克隆到表达载体pGEX- 4T-1中.构建的表达载体pGEX- 4T-1-HSP70,能很好地在大肠杆菌中表达相对分子质量(Mr)为96 000并具有抗原特性的融合蛋白.结论成功地克隆并表达人HSP70基因,为研究HSP70的结构、功能与临床应用提供了必要条件.
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人PDGF-A基因的克隆、表达及表达产物的纯化
目的克隆血小板衍生的生长因子A链(PDGF-A)的基因,并在大肠杆菌中表达.方法利用RT-PCR法,从人肝癌细胞系(HHCC)的总RNA中,扩增PDGF-A的全长cDNA,再用PCR法扩增PDGF-A成熟蛋白的全长编码序列.编码序列经测序验证后,克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建PDGF-A的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白,并进行谷胱甘肽(GST)亲和层析纯化.结果以RT-PCR扩增的PDGF-A基因的全长为1 255 bp,以PCR扩增得到其成熟蛋白的编码序列为531 bp.构建了PDGF-A基因的原核高效表达载体pGEX-PDGF-A,表达产物主要位于包涵体内.对包涵体蛋白进行变性和复性处理后,利用亲和层析法获得纯化的目的蛋白.结论成功地扩增到PDGF-A成熟蛋白的编码序列,并在大肠杆菌高效表达,为进一步对PDGF-A功能的研究提供了有利的工具.
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p27Kip1反义寡核苷酸对B淋巴瘤细胞WEHI-231细胞周期的影响
目的探讨p27Kip1在抗原受体介导的B淋巴瘤细胞WEHI-231细胞周期停止信号中的作用.方法用抗IgM抗体诱导WEHI-231细胞细胞周期停止.用合成的p27Kip1反义寡核苷酸抑制p27Kip1基因的表达.采用流式细胞仪,分析细胞核的DNA含量和细胞周期的变化.用体外激酶实验检测Cdk2的活性, Western blot检测Rb蛋白的磷酸化水平.结果合成的p27Kip1反义寡核苷酸能阻断抗IgM抗体诱导的p27Kip1基因表达的上调.用p27Kip1反义寡核苷酸处理WEHI-231细胞,可恢复抗原受体交联引起的周期素依赖性激酶Cdk2活性的降低,以及Rb蛋白磷酸化水平的下降,并使细胞周期恢复运转.结论 p27Kip1可能在抗原受体信号介导的WEHI-231细胞的细胞周期停止中发挥主要作用.
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补体膜攻击复合物刺激血管内皮细胞胞浆游离钙离子浓度的变化
目的在单个细胞水平,观测亚溶破补体膜攻击复合物(MAC)诱导的血管内皮细胞i的动态变化.方法将原代培养的人脐静脉内皮细胞,以Fluo- 4/AM(1~6 μmol/L)和0.02% Pluronic F-127进行细胞钙荧光指示剂负载后,于0℃组装亚溶破剂量的MAC.在37℃条件下,以LSCM实时监测MAC沉积引起的胞浆钙荧光强度的变化.结果 MAC沉积后,多数细胞的钙荧光强度迅速增强,以后随时间的推移,升高的钙荧光逐渐下降,直至恢复至静息水平.定量分析选定的胞浆区域钙荧光强度的变化发现,不同细胞在i的变化高度、持续时间和胞内钙振荡的特征等方面存在异质性.结论 MAC沉积到内皮细胞表面后,可诱导胞浆游离钙离子的浓度增高,且不同细胞i的变化存在明显的异质性.
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逆转录病毒载体介导的GFP基因在四种细胞株中的表达
基因治疗中,所用的目的细胞通常为哺乳动物的细胞,体外培养条件要求高.传统的转基因细胞的筛选对细胞损伤大,且比较费时.GFP是一种新型的报道基因,目前已在多种细菌和真菌中有效表达,如果GFP能在多种哺乳动物细胞中广泛而高效的表达,我们就可以利用流式细胞仪等设备,将其用于基因治疗的转基因细胞快速分离.利用逆转录病毒载体,对哺乳动物细胞进行基因转移是一种高效的方法.我们利用同时含有新霉素抗性基因(NeoR)、GFP报道基因和HSVTK目的基因多顺反子重组逆转录病毒载体GCGPTKSN,转染K562、NS-1、EL4及Sp2/0细胞株,通过荧光显微镜观察,研究了GFP作为报道基因在各种哺乳动物细胞株中的表达.
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重组葡萄球菌B型肠毒素超抗原的制备及抗肿瘤活性分析
目的采用基因工程技术制备葡萄球菌B型肠毒素(SEB), 并对其体内外抗肿瘤活性进行分析.方法对SEB在大肠杆菌中进行高效表达和分离纯化, 并对其超抗原活性和免疫学活性与天然SEB进行比较研究.观察重组SEB对人肝癌细胞的体外抑制作用, 以及对小鼠肝癌和肉瘤的体内抑瘤效果.结果 SEB获得高效表达, 并一步将其纯化至均质.与天然毒素相比较, 重组SEB的免疫学活性与超抗原活性基本相似.首次证明, 即使SEB的浓度为10 ng/L, 仍然对人肝癌细胞有显著地抑制作用, 其对小鼠体内的肝癌和肉瘤有一定的抑制作用.结论重组SEB在体内外均有一定肿瘤抑制作用, 是潜在的肿瘤免疫治疗药物.
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Notch信号途径效应分子HES1的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定
目的原核表达HES1分子,并制备其特异性多克隆抗体,以研究该分子在肿瘤细胞中的表达情况.方法诱导表达GST- HES1融合蛋白和GST,经谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和纯化后,用GST偶联预激活的Sepharose 4B,以GST-HES1为免疫原制备兔抗血清.得到的抗血清经GST-Sepharose 4B吸收抗GST成分,以间接ELISA和Western blot鉴定抗体特异性,以Western blot分析胃癌、结肠癌及其相应非癌变组织中HES1的表达水平.结果成功地表达并纯化了GST-HES1融合蛋白.制备的抗HES1多克隆抗体具有很高的特异性,与GST或大肠杆菌成分无交叉反应,用于进行天然HES1分子的Western blot检测时效果良好.初步检测发现,胃癌和结肠癌中HES1的表达水平明显高于相应的正常组织.结论通过原核表达并纯化HES1,成功地制备了该分子的特异性多克隆抗体,初步应用效果满意.
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抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定
目的建立分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的 mAb进行鉴定.方法用成骨肉瘤细胞系(OSPS-9607)免疫Balb/c小鼠,取脾细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水mAb制备.取骨肉瘤手术标本(60例)及正常组织(6种),用mAb进行免疫组化ABC染色.结果筛选出2株能持续、稳定分泌特异性抗骨肉瘤mAb的杂交瘤细胞株(6E5和3F7).2株杂交瘤细胞经过100 d连续培养,分泌mAb的特性稳定、mAb特异性强、效价高.免疫组化染色检测表明,mAb 6E5和3F7针对的抗原,在成骨肉瘤组织及成骨肉瘤细胞系均呈高表达(70%).针对mAb 6E5的抗原主要分布于细胞核上,针对mAb 3F7的抗原主要分布于细胞浆内.6种正常组织中除胃粘膜可见弱阳性反应外,其余未见明确的阳性反应.结论此两株杂交瘤细胞分泌的mAb对成骨肉瘤细胞具有特异亲和性,为成骨肉瘤的早期诊断、免疫治疗及发现成骨肉瘤新的标志物奠定了基础.
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高三尖杉酯碱通过激活Caspase-3诱导鼻咽癌细胞凋亡
目的了解高三尖杉酯碱(HHT)是否可通过激活Caspase-3诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡.方法将细胞分为4组:对照组、 1 mg/L HHT处理组(HHT组),以及分别用Caspase抑制剂(z-VAD-fmk)和Caspase-3抑制剂(DEVD-fmk)预处理2 h后,再用1 mg/L HHT处理的z-VAD-fmk+HHT组和DEVD-fmk+HHT组.采用流式细胞术及荧光染色法,检测4组细胞的凋亡率,以比色法检测它们中Caspase-3的相对活性.结果流式细胞术和荧光染色均发现,HHT组的凋亡率明显高于其它各组(P<0.01); Caspase-3的活性于2 h开始升高,8 h达高峰,明显高于其它各组(P<0.01),24 h时同其它各组的差异无显著性(P>0.05).结论 HHT可通过激活Caspase-3诱导CNE-2Z细胞凋亡,Caspase-3的活性升高具有时间依赖性.
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幽门螺杆菌Mr 26 000外膜蛋白编码基因的克隆及表达
目的构建含幽门螺杆菌(Hp)Mr 26 000外膜蛋白编码基因的重组载体,并在E. coli BL21中表达.方法用PCR从Hp染色体中,扩增Mr 26 000外膜蛋白编码基因片段.将目的基因与pET32a(+)同时经BamH I、Hind Ⅲ双酶切、纯化、连接后,构建含有目的基因的重组载体.以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21(DE30)并表达.表达产物经纯化后,用ELISA法检测其抗原性.结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp Mr 26 000的外膜蛋白编码基因,与Tomb等的报道相比较,有1.1%的bp发生变异,1.51%的氨基酸残基改变.经SDS-PAGE分析发现,融合基因表达的蛋白Mr为46×103,可溶性表达产物占细菌总蛋白的38.96%.重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上.ELISA法检测显示,该重组蛋白可被Hp阳性患者的血清所识别,具有良好的抗原性.结论成功地克隆并表达Mr为26 000的Hp外膜蛋白编码基因,为Hp蛋白疫苗的研制和快速诊断试剂盒的研究打下了基础.
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RC-160 对 NCI-H446 细胞生长抑素受体内化及调变的研究
目的探讨人小细胞肺癌细胞株NCI-H446的生长抑素受体体外调变的规律.方法采用体外放射配基结合分析法,以125I标记的生长抑素类似物(RC-160)为配基,在与NCI-H446细胞进行体外饱和及竞争结合实验的基础上,进行RC-160诱导下NCI-H446细胞株的生长抑素受体内化及上调实验.结果温育15 min时,内化组与对照组的内化率分别为(22.30±2.48)% 和(8.20±3.28)% (P<0.01),膜结合率分别为(43.83±3.97)% 和(12.37±1.61)%(P<0.01).低浓度的非标记RC-160暴露前13 h,上调率增加缓慢,仅为(20.00±1.30)%,其后上调率迅速增加,并于暴露后19 h达到顶峰[(76.50±2.60)%].结论 RC-160可使NCI-H446细胞表面生长抑素受体内化并上调,且具有一定的时相性.
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热休克蛋白70诱导抗肿瘤免疫的机制研究
目的研究肿瘤热休克蛋白70(HSP70)诱导的抗肿瘤免疫产生的机制.方法用液相色谱法提纯小鼠肿瘤细胞株中的HSP70.通过动物实验观察HSP70的抗肿瘤作用,并用流式细胞技术测定HSP70免疫后小鼠外周血中T细胞亚群的变化.用ELISA法测定HSP70免疫后小鼠体内细胞因子的水平.结果用HSP70免疫后,小鼠外周血中CD8+T细胞及几种主要Th1型细胞因子(IL-2、TNF-α、TNF-β和IFN-γ)均升高,与对照组相比较,差异显著 (P<0.01). 结论 HSP70免疫后,小鼠外周血中CD8+T细胞及Th1型细胞因子均有明显升高.此作用可能是其诱导特异性抗肿瘤免疫的重要机制.
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铁缺乏大鼠耳蜗肌动蛋白的检测及其意义
目的检测铁缺乏大鼠耳蜗肌动蛋白的变化,探讨铁缺乏引起耳蜗毛细胞损伤的发生机制.方法应用免疫组织化学染色法、SDS-PAGE和Western blot,检测正常及以缺铁饮食饲养8 wk大鼠的耳蜗肌动蛋白水平的变化并进行比较.结果出现感音神经性耳聋的铁缺乏组大鼠耳蜗肌动蛋白的相对含量降低、免疫组化的反应性明显减弱; 听力正常的铁缺乏大鼠组中两者无明显变化.结论耳蜗肌动蛋白含量及免疫组化染色反应性的变化,可能是铁缺乏引起的耳蜗毛细胞损伤的重要病理基础.
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抑癌蛋白PTEN对EGF诱导的子宫内膜癌细胞中ERK活化的影响
目的研究表皮生长因子(EGF)在子宫内膜癌细胞信号转导中,激活细胞外信号调节激酶(ERK)的情况,探讨抑癌蛋白PTEN在EGF诱导的对ERK的活化作用.方法构建野生型PTEN和突变型PTEN(G129E)编码基因的逆转录病毒载体,体外转染子宫内膜癌细胞Ishikawa,用G418筛选稳定表达的细胞系.用Western blot检测PTEN基因在Ishikawa细胞中的表达,以及EGF诱导Ishikawa-EGFP、Ishikawa-PTEN和Ishikawa-PTEN(G129E)中活化ERK的浓度效应和时相特点.结果 EGF可激活ERK,但以激活ERK2为主.以不同浓度的EGF作用于Ishikawa-EGFP和Ishikawa- PTEN时,10 μg/L的EGF可使ERK达到大活化,刺激5 min活化明显.与Ishikawa-EGFP相比较,EGF对Ishikawa- PTEN中ERK的活化作用明显减弱,但未降低到阴性对照的水平.10 μg/L的EGF刺激Ishikawa- PTEN(G129E)5 min,与Ishikawa-EGFP相比较无明显改变.结论 EGF可刺激子宫内膜癌细胞ERK活化,而脂质磷酸酶PTEN则能抑制EGF诱导的ERK活化.
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GCV和CTL对HSV-TK/B7基因转染的大鼠乳腺癌细胞杀伤的体外实验
目的观察羟甲基无环鸟苷(GCV)、CTL对逆转录病毒介导的转染单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和共刺激分子(B7)双基因的大鼠乳腺癌细胞的体外杀伤作用.方法应用基因重组技术,构建逆转录病毒载体GcTKpSN 、GcpB7SN 和GcTKpB7SN.以重组逆转录病毒感染细胞的培养上清液,感染大鼠乳腺癌细胞SHZ-88.经G418筛选阳性克隆并扩增后,给予GCV进行敏感性实验.将从正常SD大鼠脾细胞悬液中分离的T细胞(CTL),与转染重组基因的乳腺癌细胞按不同比例共育后,进行细胞杀伤实验.结果转染与未转染GcTKpB7SN基因的乳腺癌细胞相比较,前者对GCV的敏感性明显增强(P<0.01).T细胞对经GcTKpB7SN基因修饰的乳腺癌细胞的杀伤作用,明显强于未转染GcTKpB7SN基因的乳腺癌细胞(P<0.01).结论 GCV对转染GcTKpB7SN基因的大鼠乳腺癌细胞具有体外杀伤作用.经GcTKpB7SN基因修饰的乳腺癌细胞,在体外能被T细胞杀伤.
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B7.1、GM-CSF基因修饰的EL- 4细胞激发小鼠抗淋巴瘤免疫反应
目的研究B7.1、GM-CSF基因修饰的淋巴瘤瘤苗进行恶性淋巴瘤免疫基因治疗的有效性.方法用逆转录病毒载体分别将B7.1和GM-CSF基因导入小鼠淋巴瘤细胞EL- 4中,得到EL- 4/B7和EL- 4/GM转基因瘤苗细胞.观察EL- 4/B7和EL- 4/GM瘤苗细胞对荷淋巴瘤小鼠的免疫治疗作用,以及预先接种过EL- 4/B7或/和EL- 4/GM瘤苗的小鼠,对野生型EL- 4细胞致瘤性作用的影响,并检测接种EL- 4/B7或/和EL- 4/GM瘤苗的小鼠血浆IL-2及TNF-α的水平,及其脾淋巴细胞对野生型EL- 4的细胞毒效应.另外,检测经EL- 4/B7、EL- 4/GM刺激后的小鼠脾淋巴细胞的增殖程度.结果①经EL- 4/B7、EL- 4/GM细胞注射后,荷瘤小鼠的淋巴瘤生长速度变慢、生存时间延长,淋巴瘤组织中出现大量的炎症细胞; ②接种一定数量的EL- 4/B7、EL- 4/GM细胞的小鼠,能抵抗野生型EL- 4细胞的攻击; ③接种瘤苗的小鼠血浆IL-2的水平明显升高,而 TNF-α的水平无明显变化; ④接种瘤苗的小鼠脾淋巴细胞,对野生型EL- 4细胞有明显的细胞毒效应; EL- 4/B7、 EL- 4/GM细胞能刺激小鼠脾淋巴细胞明显增殖.结论 B7.1、 GM-CSF基因修饰的EL- 4细胞,能有效地激发C57BL/6小鼠的抗淋巴瘤免疫反应,且B7.1基因与GM-CSF基因具有协同作用.
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TLSFJM抑制大鼠心脏移植排斥反应的作用
目的在同种异体大鼠异位心脏移植模型中,探讨TLSFJM对急性移植排斥反应的抑制作用及机制.方法以F344大鼠作为心脏移植受体,以LOU/CN大鼠作为心脏移植供体,建立大鼠异位心脏移植模型.受体大鼠分为3组,于移植前后分别施以RPMI1640、CsA或TLSFJM.每天观察移植心脏跳动情况,并于停跳当天或之前解剖观察.分别取供体大鼠脾细胞作为刺激细胞,取受体大鼠脾细胞作为反应细胞,进行单向混合淋巴细胞反应. 结果 TLSFJM可明显延长大鼠异位移植心脏的存活时间:RPMI1640对照组移植心脏的存活期全部为6 d,TLSFJM治疗组长均可存活27 d,高剂量(15 mg/kg*d)CsA治疗组存活期超过 27 d. TLSFJM治疗组大鼠脾细胞增殖的cpm值均低于对照组. 结论 TLSFJM具有良好的抗急性移植排斥反应作用.TLSFJM对同种异体抗原诱导T细胞增殖的明显抑制,可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一.
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端粒酶在小儿急性白血病中表达的意义
目的探讨端粒酶在小儿急性白血病中的表达及作为预测病情、判断预后标志物的可能性.方法采用端粒重复序列扩增-微孔杂交法(TRAP-Kyb),检测16例急性白血病患儿骨髓和外周血单个核细胞的端粒酶活性.对照组为10例非白血病血液病患儿的骨髓及5例正常健康小儿的外周血单个核细胞.结果 16例急性白血病患儿表达阳性率83.1%); 10例非白血病血液病患儿有2例呈低度阳性表达,5例正常健康小儿外周血单个核细胞中未见阳性表达.结论端粒酶活性在急性白血病患儿骨髓和外周血单个核细胞中明显升高,表明端粒酶的活性与急性白血病的发生可能有着密切关系,检测其活性可能成为一种评估急性白血病病情及预后的有用指标.
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幽门螺杆菌cagA菌株感染对IL-8蛋白在胃癌组织中表达的影响
目的探讨胃癌组织中Hp cagA菌株感染对IL-8蛋白表达的影响.方法采用流式细胞技术,对27例胃癌及相应的癌旁正常组织中IL-8蛋白的表达进行定量检测.用PCR法,对27例胃癌组织中Hp cagA基因进行扩增.结果 27例胃癌组织中,有25例(92%)可明显表达IL-8蛋白;而相应的癌旁正常组织中,基本没有IL-8蛋白的表达或仅有弱表达. Hp cagA感染的胃癌组织中,IL-8的表达水平为64.27%,高于未感染Hp cagA的胃癌组织(39.86%). 结论IL-8在胃癌组织中的高表达与Hp cagA感染有关,即Hp cagA菌株感染可上调IL-8在胃癌组织中的表达水平.
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抗胶质瘤重组免疫毒素SZ39-PE40的原核表达、纯化及复性研究
目的构建抗胶质瘤重组免疫毒素SZ39-PE40基因并在大肠杆菌中表达.对主要以包涵体形式表达的产物进行变性和复性研究. 方法从质粒pVC85中克隆PE40基因,与抗胶质瘤的单链抗体(ScFv)-SZ39基因进行拼接,构建重组免疫毒素SZ39-PE40基因,并在大肠杆菌中表达.对表达产物(包涵体)进行分离、纯化、变性及复性处理后,以ELISA及免疫荧光技术,检查其对胶质瘤细胞的结合活性.结果 SDS-PAGE及Western blot分析显示,表达产物的相对分子质量(Mr)为68 000左右,与SZ39-PE40融合蛋白的理论推算值相符.凝胶灰度扫描显示,其表达量占菌体总蛋白的20%.ELISA及免疫荧光技术均证实,经复性的SZ39-PE40融合蛋白具有结合胶质瘤细胞SHG- 4的活性.结论成功地构建并在原核细胞中表达SZ39-PE40融合蛋白基因,复性的表达产物具有特异性识别胶质瘤细胞的活性,为进一步应用于胶质瘤的导向治疗奠定了基础.
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黄芪体外作用对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌SCF的影响
目的研究黄芪注射液(AMI)对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌干细胞因子(SCF)的影响.方法在贫血小鼠骨髓基质细胞培养体系中,分别加入0.1 mL不同浓度的AMI(终浓度分别为40 mg/L、400 mg/L)作为药物1组、药物2组,对照组加入等量的IMDM培养液,检测各实验组培养体系中骨髓成纤维细胞集落(CFU-F)数.同时,分别收集培养上清液,透析浓缩成冻干粉,经IMDM液稀释后作为条件培养液,分别加入到高增殖潜能的集落形成细胞(HPP-CFC)培养体系中,检测各实验组培养上清液中所含SCF的水平.结果与对照组相比较,药物组的CFU-F数及骨髓基质细胞条件培养液(BMSCM)中SCF的水平均明显升高.结论一定浓度的AMI可促进贫血小鼠骨髓CFU-F增殖,刺激其骨髓基质细胞分泌SCF.
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重组人Ⅱ型胶原蛋白免疫原性多肽表达的研究
目的构建编码人Ⅱ型胶原蛋白250~270多肽片段(HuC Ⅱ 250~270)的多聚基因,以获得高效表达、高度可溶和便于纯化的重组多肽基因.方法选用大肠杆菌(E.coli)偏爱密码子优化HuC Ⅱ 250~270的基因组成.通过化学合成和PCR法,获得HuC Ⅱ 250~270的基因,并利用Bam HI和BglⅡ同裂酶进行酶切位点串联获得6聚体.对影响重组HuC Ⅱ 250~270表达的各种因素进行系统研究,以获得优化表达的条件.对表达产物进行分离纯化.结果酶切分析和DNA测序证实,6聚目的基因的构建正确.融合表达的量明显高于非融合表达,在优化条件下,可达30%.表达产物的可溶性明显提高(在90%以上),其相对分子质量(Mr)与预期的相符,纯化后的纯度达90%以上.结论实现了HuC Ⅱ 250~270的高效表达,为研究类风湿性关节炎的发病机制和治疗提供了实验依据.为在原核细胞中高效表达的胶原蛋白的功能性小片段,提供了可供参考的借鉴.
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扶正、补肾及益气补肾方药对肾虚老龄小鼠免疫功能的影响
目的探讨补肾、扶正、益气补肾中药,对醋酸可的松所致肾虚老龄小鼠免疫功能的影响.方法用醋酸可的松致老龄小鼠肾虚,经分别灌喂补肾、扶正和益气补肾方药后,用MTT比色法测定小鼠脾淋巴细胞的增殖; 用胸腺细胞增殖法和ELISA法,观察脾淋巴细胞分泌IL-2和IL-12的水平; 乳酸脱氢酶法检测脾脏NK细胞的活性; RT-PCR法观察IL-2和IL-12 mRNA的表达.结果肾虚小鼠脾淋巴细胞的增殖活性,以及IL-2和IL-12的水平,均较正常小鼠明显下降(P<0.05),两种细胞因子mRNA的表达也受到抑制.经补肾、扶正和益气补肾方药治疗后,以上检测指标均有不同程度的提高,其中益气补肾方药组提高明显.结论益气补肾方药可能是改善外源性糖皮质激素所致肾虚及免疫衰老的较理想的药物.
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肝脏干细胞的研究进展
近年来,全球掀起了干细胞的研究热潮,其中肝脏干细胞(liver stem cells)的研究是引人注目的内容之一.在现代细胞生物学、分子生物学及遗传学研究的推动下,有关肝脏干细胞的定位、来源、发生、演变、功能及体外培养、鉴定技术等研究取得了较大进展,本文将近年来的主要进展进行了综述.
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胆石症患者有关免疫指标的检测
胆石症是常见病,发生于胆囊,肝内胆管和胆总管中.近年胆石症患者急剧增加,每年年增加约两倍.我国不同地区的检出率在3%~11%之间.我们通过50例胆石症患者术前、术后循环免疫复合物(CIC)、免疫球蛋白(Ig),T细胞亚群的变化研究,并通过结石的细菌培养观察,发现细菌、免疫复合物(IC)、IgG与胆石症有密切的关系,细菌作为抗原,刺激机体局部产生IgG,IgG与细菌抗原结合形成IgG型IC,沉积于胆道,是结石形成的原因.胆石症患者术前体液和细胞免疫处于抑制状态,术后随着CIC降低,体液和细胞免疫恢复正常.
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人endostatin体外诱导血管内皮细胞凋亡的实验研究
目的探讨人endostatin抑制血管内皮细胞增殖的作用机制.方法在含重组人endostatin蛋白和10%小牛血清的DMEM培养基中,培养人脐静脉内皮细胞ECV304.72 h后,采用透射电镜、流式细胞术细胞周期分析和细胞核DNA的1.5%琼脂糖凝胶电泳,检测重组人endostatin蛋白作用后,血管内皮细胞的凋亡.结果透射电镜下可见实验组ECV304细胞核染色质浓缩、边集、核碎裂及胞浆浓缩等,呈典型的凋亡细胞的形态学表现.流式细胞术细胞周期分析显示,在G1期峰前存在1个凋亡峰(20.6%).1.5%琼脂糖凝胶电泳显示,细胞核DNA呈梯状.对照组ECV304细胞表现正常.结论重组人endostatin蛋白可诱导血管内皮细胞凋亡,是其抑制血管内皮细胞增殖的原因之一.
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应用基因工程方法制备新型重组人肿瘤坏死因子-α
目的应用基因工程技术,制备一种新型的重组人肿瘤坏死因子-α(novel recombinant human tumor necrosis factor-α,nrhTNF-α),并对其生物学活性、理化性质进行鉴定,为进入临床前研究提供基础.方法应用PCR技术,将hTNF-α基因的5′端1~7个氨基酸的编码序列删除,基因中Pro8Ser9Asp10的编码序列用Arg-Lys-Arg的编码序列取代,同时Leu157的密码子被Phe的密码子所取代.将hTNF-α突变基因,插入原核高效表达载体pBV220中,构建高表达工程菌株.纯化表达产物,对连续3批制备的新型rhTNF-α,按人用<重组DNA制品质量控制要点>检定要求进行鉴定.结果DNA序列分析和蛋白质N末端、C末端部分氨基酸序列分析表明,nrhTNF-α与天然的hTNF-α相比较,N末端缺失了7个氨基酸,1~3位氨基酸为Arg-Lys-Arg,其后为天然hTNF-α 11位以后的氨基酸.157位Leu的密码子被Phe的密码子所取代.产物表达量占菌体蛋白的67.4%.经(NH4)2SO4沉淀、Q-Sepharose F.F.及S-Sepharose F.F.柱层析分离纯化后,产品的纯度达99%,比活性达1×109IU/mg蛋白.结论成功地制备了nrhTNF,对连续3批制备的nrhTNF-α按人用<重组DNA制品质量控制要点>检定要求进行鉴定,所有项目均合格.
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抗人白细胞介素- 4单克隆抗体的制备及应用研究
白细胞介素4(interleukin,IL- 4)又称B细胞生长因子(BCGF)或B细胞刺激因子-1(BSF-1),是一种主要由Th2细胞亚群产生的细胞因子.IL- 4可促进活化的B细胞增殖、IgE的产生及上调Fc εRⅡ(CD23)分子的表达.IL- 4水平的异常增高,见于某些过敏性疾病、传染病和自身免疫性疾病.IL- 4与Th1和Th2细胞的平衡也有密切的关系[1].因此,建立一种简便、灵敏的检测体液和细胞中IL- 4的方法,对IL- 4的基础及临床研究具有重要的意义.为此,我们制备了分泌抗rhIL- 4 mAb的杂交瘤细胞系,鉴定了其免疫学特性,并应用识别不同表位的两株mAb,建立了检测IL- 4的夹心ELISA.
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免疫亲和层析法纯化重组人促红细胞生成素的实验研究
目的以免疫亲和层析方法纯化重组人促红细胞生成素(rhEPO).方法以rhEPO作为抗原,免疫Balb/C小鼠,制备抗rhEPO单克隆抗体(mAb).以纯化的抗rhEPO mAb 2F12与预活化的Sepharose 4B偶联,制成抗体亲和层析柱,纯化rhEPO.结果经筛选共获得4株可分泌抗rhEPO mAb的杂交瘤细胞株,分别为:1A8、 2F12、 3D4和3F10.亲和层析纯化的rhEPO经SDS-PAGE显示单一条带; 2 g凝胶制备的层析柱一次层析可获得1.5 mg高纯度的rhEPO.利用纯化的mAb建立的ELISA法,用于检测rhEPO的蛋白含量可达ng水平.结论免疫亲和层析法纯化rhEPO的效率高、纯度好,用纯化的mAb建立的ELISA法具有灵敏度高、重复性和稳定性好等优点.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |