细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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大鼠IL-6受体基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
目的获取大鼠IL-6受体(IL-6R)的基因并高效表达.方法用PCR技术, 从正常成年大鼠脑的cDNA文库中, 获得编码IL-6R基因的序列.测序后, 通过PCR扩增和基因重组, 分别构建IL-6R基因全长和羧基端部分编码序列的表达载体, 并导入大肠杆菌DH5α中, 通过IPTG诱导表达重组融合蛋白.对表达的羧基端序列编码的融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化. 结果获得正常成年大鼠IL-6R(98～1 493位)的基因, 测序结果与已发表的基因序列相一致.重组蛋白以包涵体的形式进行表达.经SDS-PAGE分析, 在相对分子质量(Mr)为74 000和43 000处, 各有1条特异的蛋白带.对羧基端基因表达的包涵体形式的蛋白进行变性、重折叠及纯化后, 得到了高纯度融合蛋白.结论成功地克隆正常成年大鼠IL-6R基因, 并在E. Coli DH5α中高效表达, 为进一步制备抗IL-6R抗体和进行原位分子杂交研究创造了条件.
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重组SEA基因真核表达载体的构建及诱导小鼠抗肝癌免疫的效应
目的构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)真核表达载体, 并通过体内转染, 观察其诱导抗小鼠肝癌的免疫效应.方法采用基因工程技术构建SEA基因的真核表达载体, 使其表达SEA分子.通过阳离子脂质体介导的体内转染, 观察其对小鼠肝癌的治疗作用.用51Cr释放法测定治疗组与对照组动物脾淋巴细胞杀伤H22细胞的活性. 结果成功地构建了SEA真核表达载体pLXSN-SEA, 体内转染pLXSN-SEA的荷瘤小鼠肿瘤明显缩小, 生存期延长, 4/10小鼠肿瘤完全消退, 且长期无瘤生存.CTL杀伤活性实验表明, 瘤区内转染pLXSN-SEA可诱导强烈的CTL杀伤效应, 与对照组相比较差异显著(P<0.01). 结论超抗原SEA体内转染对肿瘤具有明确的治疗作用, 有望用于抗肿瘤的生物治疗.
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IFNγ-LTα与LTα诱导L929细胞凋亡信号转导的初步研究
目的研究融合蛋白IFNγ-LTα诱导L929细胞凋亡的信号转导机制, 并与LTα相比较.方法用结晶紫染色法观察细胞毒效应; 用检测试剂盒检测caspase 8和3活性的变化; 观察3种信号转导分子的抑制剂对IFNγ-LTα和LTα诱导的细胞毒效应的影响. 结果 IFNγ-LTα能诱导L929细胞凋亡及胞内caspase 8和3的活性变化, 但两种caspase产生的时间和幅度有所不同.PKC的抑制剂可促进IFNγ-LTα和LTα对L929细胞的杀伤; 而PLA2及Ca2+通道的抑制剂对杀伤则有明显的阻断作用, 但对LTα的阻断强于对IFNγ-LTα的阻断. 结论 IFNγ-LTα融合蛋白的抗肿瘤活性强于LTα, 其信号转导特征有别于LTα.信号分子caspase与PKC、PLA2、Ca2+之间可能存在关联.
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中国株HIV-1结构蛋白基因gag与gp120在巴斯德毕赤酵母中的融合表达
目的将中国流行株B亚型HIV-1结构蛋白基因gag和gp120在巴斯德毕赤酵母中进行融合表达.方法以酵母分泌型表达质粒pPIC9为载体, 构建含HIV-1 gag和gp120嵌合基因的重组酵母表达质粒pPICGP.用Sac I 将pPICGP线性化后, 电转化巴斯德毕赤酵母GS115, 用PCR的方法鉴定阳性酵母转化子.阳性转化子在巴斯德毕赤酵母中用甲醇进行诱导表达, 表达产物以SDS-PAGE和Western blot进行分析, 并对阳性菌株的遗传稳定性进行研究. 结果 12个酵母转化子中共筛选到了8个阳性酵母转化子, 其整合率为66.7%.SDS-PAGE和Western blot分析显示, 在相对分子质量(Mr)为57 000处有1条特异蛋白带, 且能与抗p24单抗(mAb)和抗gp120mAb发生反应.酵母转化子在YPD培养基上传代10次后, 其外源基因未丢失.结论在巴斯德毕赤酵母中成功地表达了HIV-1 gag-gp120嵌合基因, 且表达蛋白具有特异性, 但其Mr较预计计算的值要小, 说明嵌合基因中的gp120基因只有部分进行了表达.
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绿色荧光蛋白逆转录病毒载体的构建及其表达
目的实现绿色荧光蛋白(GFP)报告基因在组织工程化细胞中的高效、稳定、长久表达.方法构建重组逆转录病毒表达载体RV-GFP, 通过PT67包装细胞克隆, 经G418筛选、扩增, 获得大量含GFP基因的病毒液, 并直接感染靶细胞.结果转染细胞于48 h后,在荧光显微镜蓝光激发波长下, 可发出明亮的绿色荧光, 转染率达20%～50%.感染靶细胞内GFP的有效表达可维持2个月.结论构建的重组逆转录病毒GFP载体, 可作为组织工程化细胞标记, 用于细胞动态研究, 其方法简便、灵敏、可靠.
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永久性脑缺血神经干细胞迁移及nestin蛋白表达的变化
目的进一步认识神经干细胞(NSC)对脑损伤的反应性.方法以永久性大鼠脑缺血为模型, 采用免疫组化染色方法, 观察脑缺血1, 3, 7, 14和28 d时, NSC及其标记物nestin蛋白的变化.结果室管膜下区(SEZ)的NSC在缺血后沿胼胝体腹侧向缺血区方向发生了迁移.其中, 缺血7 d时达到远.缺血灶附近在缺血1 d时, 就出现较多的nestin+细胞, 缺血3 d以后逐渐减少.结论 NSC对缺血性脑损伤有一定的反应能力, nestin蛋白表达于缺血附近可能是一种对损伤的保护机制.
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OVA257-264肽-β2m融合基因的构建及体内特异性CTL 的诱导
目的构建融合基因OVA257-264-β2m的表达载体, 并以其表达产物作为免疫原,在体内诱导特异性CTL. 方法采用PCR技术, 从人肝癌细胞株SMMC-7721中克隆人β2m基因, 拼接上OVA(257～264)序列及linker后, 克隆入pET-42b(+)高效表达载体进行诱导表达.对表达产物进行纯化与复性后, 用其作为免疫原诱导特异性CTL, 并构建H-2Kb-OVA四聚体检测特异性CTL . 结果成功地获得融合蛋白 OVA257-264-β 2m及H-2Kb-OVA四聚体, 应用H-2Kb-OVA四聚体对特异性CTL检测结果与经典的细胞毒试验一致. 结论 OVA257-264-β 2m的表达产物, 可有效的在体内诱导特异性CTL应答.在体外构建的MHC I类分子四聚体, 为特异性T细胞的检测提供了有利的工具.
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CEA-rV对小鼠巨噬细胞抗原呈递功能的影响
目的探讨癌胚抗原重组痘苗病毒(CEA-rV)对巨噬细胞(MΦ)抗原呈递功能的影响.方法采用混合淋巴细胞反应(MLR), 检测接种CEA-rV小鼠MΦ的抗原呈递功能.采用流式细胞术(FCM)检测MΦMHC-Ⅰ(H-2Kb)、MHC-Ⅱ(I-Ab)及B7(B7-2)分子的表达.采用荧光抗体直接染色法, 检测CEA+肿瘤细胞H-2Kb和I-Ab分子的表达. 结果腹腔接种CEA-rV小鼠MΦ组(CEA-rV MΦ组)T细胞分泌IL-2的水平较接种W-VV株及NS组显著增强(P<0.01).小鼠腹腔MΦ上I-Ab和B7-2分子的固有表达较低(分别为41.7%和13.7%).接种W-VV株后, I-Ab及B7-2分子的表达改变不明显(分别为44.3%和15.1%); 而接种CEA-rV后, I-Ab及B7-2分子的表达明显增强(分别为87.2%和39.5%).各组CEA+肿瘤细胞MHC-Ⅰ分子呈强表达, 但却无MHC-Ⅱ分子. 结论腹腔接种CEA-rV 小鼠的MΦ, 可使MΦ其抗原呈递功能显著增强.MΦ的MHC-Ⅱ与B7-2分子表达的增强, 可能是其抗原呈递功能增强的主要原因, 提示MHC-Ⅱ与B7-2分子可能与CEA-rV的抗瘤作用密切相关.
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人类免疫缺陷病毒B亚型代表株候选疫苗的研究
AIDS传播速度快、死亡率高, 但目前尚无有效的治疗措施, 为此我们把希望寄于预防该病的发生上.核酸疫苗的发现为AIDS的预防提供了一个崭新的思路, 但核酸疫苗的免疫原性较弱, 为了增强HIV基因免疫的效果, 我们协同应用了IL-2基因.IL-2是一种多功能的细胞因子, 具有诱导T、B细胞分化和增殖的能力, 并能增强CTL和NK细胞的杀伤活力[1].
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亚急性衰老小鼠脾脏T细胞CD137表达的研究
目的探讨CD137分子在衰老小鼠脾脏T细胞表面表达的规律. 方法通过注射D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型.分离衰老模型组小鼠及正常对照组小鼠的脾脏T细胞, 经Con A刺激后进行培养, 采用流式细胞术检查Con A刺激后不同培养时间的T细胞上CD137的表达, 并进行比较. 结果小鼠脾脏T细胞经过Con A刺激后, 正常对照组小鼠T细胞上CD137分子的表达高峰出现于刺激后第6天, 平均表达率为48.5%, 之后迅速下降.1个月和2个月衰老模型组小鼠T细胞上CD137分子在表达高峰的表达率平均分别为39.1%和32.8%, 均显著低于正常对照组小鼠(P<0.01), 其中1个月模型组小鼠T细胞上CD137分子表达高峰的出现时间及下降规律与正常对照组小鼠相同; 而2个月衰老模型组小鼠T细胞上CD137分子的表达高峰出现于刺激后第4天, 第9天缓慢下降至与正常对照组相同时间的水平. 结论亚急性衰老小鼠T细胞上CD137分子的表达低于正常水平.至衰老过程的后期, T细胞上CD137分子的表达高峰提前出现, 表达水平达到峰值后下降速度较正常小鼠缓慢, 提示CD137分子在机体抗衰老过程中, 具有调节T细胞功能的作用.
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康莱特注射液对胃癌患者细胞凋亡、增殖及T细胞亚群的影响
目的探讨康莱特对胃癌细胞凋亡与增殖及胃癌患者T细胞亚群的影响. 方法进展期胃癌患者30例, 随机分为3组(每组各10例): A组(对照组): 手术前后常规给予全胃肠外营养(total parenteral nutrition, TPN)治疗; B组(康莱特治疗组): 术前5 d及术后9 d, 给予康莱特注射液200 mL/d静脉滴入加常规TPN治疗; C组(化疗组): 术前给予5 d化疗, 甲酰四氢叶酸钙(calcium folinatefor, CF)200 mg及5氟脲嘧啶(5-FU)750 mg/d静脉滴注加常规TPN治疗.分别于治疗前及术后1 d、5 d及10 d, 采集外周静脉血, 应用免疫荧光法检测CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群.手术中取胃癌病理组织, 用末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法和免疫组织化学染色法检测胃癌细胞的凋亡(AI)与增殖(PI)及二者之比(AI/PI). 结果 B组与C组相比较, 胃癌细胞的AI、PI及AI/PI, 无显著差异(P>0.05); B组与A组相比较, 上述3种指标则具有显著差异(P<0.01).治疗前3组CD3+、CD4+、CD8+ T细胞亚群的百分率无显著差异(P>0.05); 术后1 d、5 d 3组CD3+、CD4+、CD8+ T细胞亚群的百分率差异显著(P<0.01); 术后10 d, CD3+、CD4+、CD8+ T细胞亚群的百分率, B组与A组以及B组与C组相比较, 差异性分别为显著(P<0.05)及非常显著(P<0.01). 结论康莱特可明显促进胃癌细胞凋亡和抑制其增殖, 有助于提高围手术期患者的免疫功能.
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MMP-2、bFGF在子宫内膜异位症和子宫腺肌病中的表达及意义
目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和碱性成纤维生长因子(bFGF)在子宫内膜异位症发生发展中的作用. 方法应用免疫组织化学法(SABC法), 检测70例异位内膜组织和30例正常子宫内膜组织(对照组)中MMP-2和bFGF的表达. 结果在异位内膜组和对照组中, MMP-2的阳性表达率分别为71.43%和40.00%, 强阳性表达率分别为40.00%和6.67% (P<0.01); bFGF的阳性表达率分别为65.71%和40.00%, 强阳性表达率别为20.0%和0% (P<0.01).而MMP-2和bFGF在卵巢子宫内膜异位症和子宫腺肌症中的阳性表达率, 两组间差异均无显著性(P>0.05). 结论异位内膜组织中MMP-2的过度表达与异位内膜组织的侵袭力有关, bFGF与子宫内膜异位症的血管生成密切相关, 提示MMP-2和bFGF在子宫内膜异位症的发生发展中发挥作用.
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急性出血性脑血管病患者红细胞免疫功能变化的意义
国内外对缺血性脑血管病患者红细胞免疫功能的变化已进行了大量研究,但对急性出血性脑血管病(acute hemorrhagic cerebrovascular disease,AHCVD)与红细胞免疫关系的研究所获结果不一,争论较大.为此,我们应用红细胞免疫粘附实验,观察了AHCVD患者的红细胞免疫粘附活性,以及红细胞免疫粘附促进因子(RFER)与红细胞免疫粘附抑制因子(RFIR)水平的变化及其意义.
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基质金属蛋白酶-7在卵巢浆液性肿瘤中的表达
目的探讨MMP-7在卵巢浆液性肿瘤中的表达情况.方法采用免疫组化SP法对6例正常卵巢、12例卵巢浆液性囊腺瘤、6例交界性囊腺瘤及22例卵巢浆液性囊腺癌MMP-7的表达进行了研究.结果正常卵巢不表达MMP-7.大部分卵巢浆液性肿瘤的胞浆及间质中都有MMP-7的阳性表达.MMP-7在卵巢良性、恶性及交界性浆液性肿瘤胞浆中的表达无明显差异; 而在肿瘤间质中, 恶性及交界性卵巢浆液性肿瘤中的表达远高于良性肿瘤(P<0.05).在交界性及恶性浆液性卵巢肿瘤中, 部分肿瘤细胞的细胞核中也有MMP-7的表达, 为国内外首次报道.结论 MMP-7可能在卵巢浆液性肿瘤的进展中发挥重要作用.
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环磷酰胺冲击治疗对狼疮肾炎患者血中淋巴细胞凋亡的影响
狼疮肾炎(LN)是系统性红斑狼疮(SLE)患者死亡的主要原因之一.SLE患者中约有50%～80%可出现肾炎性改变, 几乎全部出现肾损害[1].因此, LN的早期及有效治疗, 已成为SLE治疗中的关键环节.环磷酰胺(CTX)是目前治疗LN过程中应用较多的药物之一, 我们就其对LN患者血中淋巴细胞凋亡的影响进行了研究.
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哮喘豚鼠气道上皮细胞原癌基因c-fos活化与ET-1释放相关性的研究
目的探讨哮喘豚鼠发作时气道上皮细胞原癌基因c-fos的活化与上皮细胞释放内皮素-1(ET-1)的相关性. 方法将豚鼠随机分为哮喘组、地塞米松组和正常对照组.以卵蛋白致敏建立哮喘动物组模型; 再给予肌注地塞米松(0.5 mg/kg)治疗则为地塞米松组.利用Dot blot与Northern blot及免疫组化染色法, 研究c-fos在气道上皮细胞中的表达; 利用放射免疫法测定各组支气管-肺泡灌洗液(BALF)中ET-1的含量. 结果正常对照组有低水平的c-fos基因表达和ET-1合成.哮喘组豚鼠在激发30 min后, 气道上皮细胞c-fos mRNA表达及Fos蛋白染色阳性颗粒都达到高峰, 持续2 h左右.同时, BALF中ET-1的含量在30 min后也达到高峰, 持续2～3 h .地塞米松组的c-fos mRNA及蛋白表达水平均明显低于哮喘组(P<0.01), 但高于正常对照组; 并且该组BALF中ET-1的含量也低于哮喘组(P<0.01). 结论 c-fos基因活化与ET-1释放在哮喘豚鼠发病中都具有重要作用, 两者密切相关.ET-1的释放可能受控于c-fos基因的活化.
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NADH对L02细胞Bcl-2、Bax、P53、CD95及CD95L表达的影响
目的研究抗氧化剂NADH对体外培养的正常人肝细胞系L02缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制. 方法实验分组: 将培养的L02细胞分为: 缺血再灌注损伤组(I/R), 缺血再灌注损伤+NADH(I/R+NADH)及对照组(未经处理的L02细胞).用流式细胞仪观察细胞处理后6、12 、18 及24 h细胞的凋亡率及12 h时, Bcl-2、Bax、P53、CD95及CD95L的表达, 并以透射电镜观察细胞凋亡的超微结构. 结果 NADH可明显抑制缺血再灌注损伤细胞的凋亡, 并能上调Bcl-2表达,下调Bax、P53、CD95及CD95L的表达, 与I/R组相比较差异显著(P<0.05). 透射电镜下可见典型的凋亡细胞的特征. 结论 NADH对缺血再灌注损伤诱导的L02肝细胞有明显地保护作用.其作用机制可能与通过调节Bcl-2、 Bax、 P53、CD95及CD95L的表达有关.
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黄芪和药饼灸对5-Fu治疗中所致荷结肠癌小鼠免疫功能低下的正向调节作用
目的研究黄芪、药饼灸对经5-FU抗瘤治疗引起免疫功能低下小鼠的正向调节作用. 方法 C26小鼠结肠癌细胞株5×105于BALB/c小鼠皮下注射建立小鼠结肠癌实验模型.接种肿瘤细胞后24 h开始治疗实验.实验共分5组, 分别为生理盐水组(A组): 即穴位(足三里)注射生理盐水0.1 mL, 隔d 1次, 共2 wk; 5-FU治疗组(B组): 腹腔注射5-FU 0.25 mg/0.1 mL(12.5 mg/kg), 每隔2 d 1次, 共2 wk; 5-FU联合黄芪组(C组): 腹腔注射5-FU 0.25 mg/0.1 mL(12.5 mg/kg), 每隔2 d 1次, 同时隔d穴位(足三里)注射黄芪注射液0.1 mL(2 g/mL), 共2 wk; 5-FU联合药饼灸组(D组): 腹腔注射5-FU 0.25 mg/0.1 mL(12.5 mg/kg), 每隔2 d 1次, 同时中腕、神阙、关云穴位用药饼灸, 每穴灸3壮, 隔d 1次, 共2 wk; 5-FU联合黄芪加药饼灸组(E组); 治疗方法同上.治疗结束后, 获取小鼠脾脏单个细胞, 分别采用流式细胞术(FACS)测定脾淋巴细胞中T细胞亚群及NK细胞表面标志.采用4 h LDH释放法, 检测小鼠淋巴细胞(NK、CTL)的杀伤功能. 结果本实验结果表明, 药饼灸加黄芪联合5-FU组的上述免疫指标(包括CTL、NK细胞的杀伤活性)与5-FU治疗组相比较具有统计学意义. 结论黄芪注射液加药饼灸联合5-FU, 对单经5-FU治疗所致免疫低下的荷瘤小鼠的免疫功能具有正向调节作用.
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大鼠面神经切断及修复后面神经核内STAT3的变化
目的探讨面神经损伤及修复条件下, 面神经核运动神经元STAT3 mRNA和蛋白的变化规律. 方法采用原位杂交和免疫组化染色法, 观察成年大鼠面神经切断和即刻端端吻合后面神经核STAT3 mRNA和蛋白的时程变化. 结果面神经切断后损伤侧面神经核STAT3 mRNA信号的强度增加, 在术后第21 d和35 d, 面神经单纯切断组和面神经切断后端端吻合组间STAT3 mRNA信号的强度相差显著(P<0.05). 结论面神经损伤后, 面神经核运动神经元内由STAT3介导的细胞因子的信号转导增加.在面神经无再生状态下, STAT3表达上调呈持续性; 而在面神经再生状态下, 随着面神经的成功再生, STAT3可逐渐恢复至正常水平.
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温和加热诱导人卵巢癌细胞热休克蛋白70的表达
目的探讨人卵巢癌细胞系HO- 8910在受热不同时间后及相同温度加热后间隔不同时间细胞内热休克蛋白70表达的异同; 探讨卵巢癌细胞对热耐受的敏感程度. 方法体外常规培养人卵巢癌细胞HO- 8910于盖玻片上, 加热温度为42℃, 实验分成两部分: ①加热时间分别设为15、30、60、90、120、150 min, 加热后即刻固定细胞; ②将细胞加热120 min后, 置于37℃细胞培养箱中复温不同时间, 收集复温后1、4、6、12、24、48、72、96、120及144 h后的细胞爬片.将上述细胞爬片固定后行HSP70的免疫组化检测, 观察热疗前后HSP70表达的变化. 结果正常HO- 8910细胞胞浆内仅有少量HSP70的表达, 随加热时间延长, HSP70的表达逐渐增多; 加热后间隔4 h 细胞内HSP70的表达强, 随后逐渐减少, 5- 6 d后, 恢复至正常状态. 结论①温和加热时间过长可诱导HSP70的大量产生, 且HSP70的消失有一定的时间依赖性, 从而使肿瘤细胞对热疗产生热耐受作用; ②HO- 8910细胞对温和加热有较强的耐受性.
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用抗合成多肽抗体分析呼吸道HAdV六邻体保守区抗原表位
目的分析人类腺病毒(HAdV)六邻体保守区氨基酸序列, 合成保守区多肽并制备抗多肽抗体, 以确定型间共同的特异性表位.方法用ClustalX、Antheprot等软件, 对HAdV六邻体进行分析, 确定保守区并分析其抗原性.合成抗原性多肽, 免疫家兔制备抗肽多克隆抗体.用间接免疫荧光法和Western blot法, 检测所制备的抗肽抗体与病毒抗原的反应性.结果根据HAdV-2六邻体的保守区合成9种肽段, 分成3组免疫家兔, 共获得3组抗肽抗体.所有的抗肽抗体在1∶ 1 000稀释度时, 与3个型别的HAdV感染细胞裂解物中相对分子质量(Mr)约为116 000的六邻体亚单位具有特异性反应.抗肽抗体对HAdV感染细胞有特征性荧光染色.3组抗肽抗体中, 有7个抗体与3个型别的HAdV感染细胞均具有阳性染色反应. 结论合成的保守区多肽能够诱导抗肽抗体产生, 诱导产生的抗体与HAdV-3、-4、-7具有免疫反应性.通过分析预测抗原表位并制备抗肽抗体是可行的.
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抗人FKBP52分子单克隆抗体的制备和鉴定
目的研制抗人FKBP52单克隆抗体(mAb), 并分析其免疫生物学特性.方法采用纯化的人FKBP52蛋白免疫BALB/c小鼠.用ELISA法鉴定mAb的特异性; 用Western blot鉴定制备的9株mAb所识别的抗原相对分子质量(Mr)及结合人FKBP52分子的功能区. 结果共获得9株分泌抗人FKBP52 mAb的杂交瘤细胞.抗人FKBP52 mAb可识别相对Mr为52 000在原核系统中表达的人FKBP52蛋白, 也可识别Jurkat细胞浆中Mr为52 000的天然FKBP52蛋白.两株mAb均可识别人FKBP52分子中的第2功能区.其余7株mAb可识别人FKBP52分子中的第3功能区. 结论成功地制备了抗人FKBP52分子mAb.
关键词： 人FKBP52分子 抗人FKBP52单克隆抗体 -
以反向 PCR 扩增抗人宫颈癌单克隆抗体重链可变区基因
单克隆抗体(mAb)V区cDNA序列的克隆是构建单链抗体(ScFv) 的关键一步[1].通常是在抗体V区序列两头-5′和3′端设计带简并碱基的引物, 用普通PCR法进行扩增[2].该法虽看似简单, 但局限性很大, 若遇到同源性差且复杂的序列, 则难以获得.同时, 因带有简并碱基, 可使PCR产物不纯, 而影响蛋白的表达及其功能.我们在构建抗人宫颈癌ScFv过程中, 用常规PCR法扩增出VL cDNA序列, 经多种方法尝试, 均未获得VH cDNA序列.随后, 采用反向PCR技术扩增并经测序证明, 确为VH cDNA序列, 为重组制备ScFv奠定了基础.
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抗角蛋白抗体进入活细胞的共聚焦显微镜观察
目的观察抗角蛋白抗体能否进入活细胞. 方法以鼠单克隆抗体(mAb)IgG作用于培养中的人Tca8113细胞, 以黑素瘤细胞和抗HBsAg抗体作用的Tca细胞作为阴性对照.细胞固定后与FITC标记的羊抗鼠IgG结合, 用荧光显微镜及共聚焦显微镜, 观察细胞的荧光着色. 结果抗角蛋白mAb作用的Tca8133细胞胞浆呈亮绿色, 着色较均匀, 细胞核未见着色.两种对照均未见着色. 结论抗角蛋白mAb可进入活细胞, 并结合于胞浆成分.
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抗恶性疟原虫HRP-II单链抗体的筛选与特性分析
目的筛选抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白2(HRP-II)单链抗体(ScFv)并对其进行鉴定.方法从抗恶性疟原虫HRP-II ScFv库中, 挑取单菌落鉴定重组噬粒, 采用ELISA法筛选能与重组抗原HRP-II结合的阳性克隆, 并选其中2株强阳性克隆进行序列分析.结果筛选到8株具有HRP-II结合活性的阳性克隆, 所测2株克隆的基因序列一致, 其重链及轻链分别属于鼠抗体基因家族中第I及κVI亚群.结论从抗体库中成功地筛选出阳性克隆, 为基因工程抗体在恶性疟诊断试剂中的应用奠定了基础.
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抗单链DNA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定
凋亡细胞内由于组蛋白- DNA的稳定性受到破坏或染色质受到修饰, 使得凋亡细胞的DNA对热变性敏感.在适宜条件下, 凋亡细胞的DNA能被热变性为具有足够长度、形成一定构像的单链DNA(single- stranded DNA, ssDNA), 从而被ssDNA特异的单克隆抗体(mAb)染色; 而非凋亡细胞的DNA则不被热变性, 或变性的DNA部分不足以形成与抗ssDNA mAb结合的单链构象决定簇.因此, 用抗ssDNA mAb能敏感、特异地检测到凋亡细胞[1,2].
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判定肿瘤抗原特异性T细胞反应的新方法
几十年来, 人们致力于肿瘤疫苗的研究, 旨在激活患者自身的免疫系统, 产生持久有效的抗肿瘤免疫.在肿瘤疫苗治疗前后, 如何准确地定量、定性判定肿瘤抗原特异性T细胞应答, 评价疗效, 是影响抗肿瘤疫苗发展的关键.51Cr释放法和有限稀释法(limiting dilution analyses, LDA), 一直被认为是评价特异性T细胞反应的金标准, 但实践证明这两种方法费时、费力且敏感性低.近5、 6年来, 一些评价T细胞功能和特异性的新方法逐渐建立起来[1,2], 由于这些方法更加敏感, 提供的信息更有意义.尤为重要的是, 有的方法能够对淋巴细胞直接进行检测, 勿需体外扩增, 因而更能准确地反映机体的免疫状况.
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HIV外膜蛋白的结构与功能研究进展
人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV) env基因编码的前体分子gp160(HIV-1)或gp140(HIV-2) 经蛋白酶剪切加工后, 成为成熟的外膜蛋白gp120(HIV-1)/gp105(HIV-2) 和跨膜蛋白gp41(HIV-1)/gp36(HIV-2).在病毒表面, 外膜蛋白和跨膜蛋白以非共价键结合成Env异二聚体, 3个异二聚体组成包膜超分子结构, 形成病毒表面的突起[1].
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抗DNA抗体的免疫学特性
作为自身反应抗体的一个重要组成成分, 抗单链DNA抗体一经发现, 便在免疫学领域引起诸多学者的关注.关于自身抗体的产生, 机体对DNA抗原的免疫应答等研究, 有助于揭开自身免疫病的奥秘.而对抗体-抗原相互作用的研究, 则可填补对核酸抗原了解的匮乏.在这方面的研究中, 发现了许多颇有意义的现象, 如亲和力成熟过程中, 抗原特异性的改变以及其与类别转换的联系等.本文仅对这些研究和发现进行了简要的综述, 以期对抗单链DNA抗体的生物学和免疫学特性有所了解.
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日本脑炎病毒基因疫苗的研究进展
日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)是一种由蚊虫传播引起的人类和马中枢神经系统感染性疾病.人类每年的发病总例数约3.5万以上, 其中约有1万例患者死亡.日本脑炎病毒(JEV)为黄病毒科黄病毒属的成员之一.其他重要的人类病原性黄病毒包括: 黄热病、登革热1～4型、蜱传脑炎和圣路易脑炎病毒等.疫苗是预防黄病毒感染的有效手段.
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体外大量扩增CIK细胞的研究
目的探讨影响CIK细胞体外增殖的因素(如共刺激、培养时间和血清等), 以对其进行无血清培养. 方法用乳酸脱氢酶分析细胞毒活性, 用流式细胞术分析细胞表型. 结果培养至第14 d, 在胎牛血清、自身血浆或无血清3种培养条件下, CIK细胞的纯度分别为: 21.68%、 28.28%和29.50%; 增殖倍数分别为: 31.7、 33.3和27.1倍.培养21 d后, CIK细胞的纯度分别为: 36.73%、 37.29%和29.7%, 增殖倍数分别为: 58.2、 67.4和52.7倍.3种培养条件来源的CIK细胞, 对K562细胞的细胞毒活性分别为: 63.4%、72.3%和53.6%; 而对Raji细胞的细胞毒活性分别为: 47.6%、56.2%和43.4%.效应细胞 :靶细胞为10∶ 1时, 培养14 d和21 d的CIK细胞, 对K562细胞的细胞毒活性分别为68.13%和56.4%; 而对Raji细胞的细胞毒活性分别为49.9%和39.2%.在共刺激或无共刺激信号存在的条件下, 效应细胞∶靶细胞为10∶ 1时, 对K562细胞的细胞毒活性分别为69.7%和41.9%; 而对Raji细胞的细胞毒活性分别为42.6%和37.8%. 结论共刺激和培养时间的延长, 有利于增强CIK细胞的细胞毒活性.用无血清培养基可促进CIK细胞体外增殖.
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多肽转移电泳时间探讨
转移电泳是将凝胶电泳分离的结果, 通过电泳装置转移到固相支持物(如硝酸纤维素膜)上的一种电泳技术, 可用于DNA片断的分析(Southern blot)、RNA的分析(Northern blot)和蛋白质的研究(Western blot).由于转移到固相支持物上的样品可进行多种分析, 且操作简便、灵敏度高和特异性强, 目前广泛应用于生物化学、分子生物学和免疫学等研究领域.
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唐古特大黄多糖对小鼠脾细胞增殖的作用
多糖作为非特异性免疫调节剂, 在抗肿瘤、抗肝炎及抗衰老等方面具有明显作用, 受到广泛关注[1].大黄在我国药用已久, 是中医常用的药物之一.近年研究发现, 大黄除具有泻下作用外, 还有增强免疫功能、抗肿瘤等多种作用, 其机制与其多糖成分有关[2,3].我室从唐古特大黄中提取、分离得到水溶性多糖(Tanguficum Maxim polysaccharide, TMP), 进一步分离纯化得到TMP1和TMP2两种组份, 并比较了这两种多糖组份对小鼠脾细胞增殖反应的影响, 为进一步研究其活性奠定了基础.
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蝎素SCVIII对荷瘤小鼠淋巴细胞转化及TNF-α水平的影响
具有增强或调节机体有效抗病能力的药物,称为生物应答调节剂(biological response modifiers,BRM)[1].国内学者在寻找中药BRM方面已经做了大量工作.近年来,中药全蝎及蝎毒的抗肿瘤作用已引起了广泛注意,已有许多体外研究证明,蝎素对Hela细胞、Eca109细胞等多种细胞株的生长具有抑制作用.但目前关于蝎素对机体免疫功能的影响研究较少,我们通过研究蝎素对机体免疫功能的影响,证明蝎素确为一种生物应答调节剂.
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鼻咽癌患者T细胞对EB病毒肽段特异性反应的酶联免疫斑点法检测
EB病毒感染是鼻咽癌的主要致病因素之一.由于T细胞可识别由MHC分子提呈的多肽, 在控制病毒感染中扮演着重要的角色[1], 因此, 鼻咽癌患者的T细胞对EB病毒, 尤其是该病毒肽段的特异性反应能力是近年探讨的热点.我们采用酶联免疫斑点法(Elispot), 检测了鼻咽癌患者外周血T细胞对EB病毒抗原LMP1、LMP2和EBNA3中部分表位的特异性反应能力.
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抗栓II号综合治疗对足重度冻伤兔红细胞免疫粘附功能的影响
重度冻伤可引起机体一系列生理生化改变, 其中机体的免疫功能发挥着增强抵抗和适应能力的作用.红细胞作为数量多的血细胞, 广泛参与机体的非特异性和特异性免疫应答, 其中免疫粘附水平的高低与其免疫功能密切相关[1].为观察兔足在重度冻伤后的治疗过程中, 红细胞免疫水平的变化, 特进行了如下实验.
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急性心肌梗死患者溶栓前后血清VEGF水平的变化及临床意义
血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是近年发现的一种促血管生长因子, 其相对分子质量(Mr)为3.5×104～4.5×104属于糖蛋白, 由两个Mr为1.7×104～2.2×104相同的亚单位经二硫键形成二聚体[1].心肌细胞、平滑肌细胞及肿瘤细胞均可分泌VEGF.
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CFU-GM在含不同中药血清的培基中增殖情况的初步研究
随着社会的发展, 人民生活水平的不断提高, 贫血患者中特别是在城市人口中, 单纯由营养不良引起的贫血逐年减少, 而由于外界环境因素引起的机体造血机制障碍所致贫血可能增多.当归、川芎、熟地和白芍均为传统医药中常用的补血调血药, 由此4味药组成"四物汤"更是其代表方剂.
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HBV血清免疫学标志和PHSAR与HBV DNA关系的研究
随PCR技术的推广应用, 以HBV DNA作为判断HBV感染、病毒的复制状态、传染性及监测抗病毒疗效的一个重要标志,越来越受到人们的重视.本研究应用PCR和ELISA, 对1 484例HBV感染者的HBV DNA和人血清白蛋白受体(PHSAR)进行了检测, 旨在探讨HBV血清免疫学标志物(HBV-M)常见模式、HBV DNA和PHSAR三者之间的相互关系及其临床检测的意义.
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过度扩张对血管内皮细胞与中性粒细胞粘附性的影响
目前认为, 内膜增生并不局限于粥样斑块部位, 而突出表现在正常血管段, 它是对球囊扩张或成形术的一种非特异性反应[1], 即环向过度牵张对内皮细胞(EC)的作用.因此, 本研究通过一种模拟血管持续过度扩张的体外细胞模型, 对内皮细胞粘附分子的表达, 以及其与中性粒细胞的粘附性进行了研究, 旨在探讨在过度环向牵张条件下, 上述病变发生的分子机制.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
