细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
小鼠FasL基因的克隆和在软骨细胞中表达
目的: 获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆, 通过逆转录病毒表达系统pLNCX2在软骨细胞中进行表达, 并分析其功能.方法: 应用RT-PCR和T-A克隆技术, 从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中, 扩增mFasL cDNA并克隆到T载体中, 再亚克隆到pLNCX2 中.转染软骨细胞后, 以流式细胞仪检测mFasL蛋白的表达, 以单向混合淋巴细胞反应鉴定其活性.结果: 成功地克隆了0.855 kb的mFasL cDNA, 并经测序确证.通过pLNCX2转染软骨细胞, 转染率为60.64%.流式细胞仪检测到FasL蛋白的表达, 并能显著抑制同种异体的单向混合淋巴细胞反应, 刺激指数下调到未转染软骨细胞的11.71%.结论: 克隆到的mFasL基因, 并能通过pLNCX2有效表达.表达产物具有显著抑制同种异体单向混合淋巴细胞反应的活性.
-
新型人白细胞介素-13在大肠杆菌中的表达及生物活性分析
目的: 在大肠杆菌中表达人白细胞介素-13的新型拼接体蛋白.方法: 用植物凝集素(PHA)和刀豆凝集素(ConA)共刺激人Jurkat 细胞, 通过半巢式RT-PCR扩增在98位缺失Gln、不含信号肽的人IL-13新拼接体基因, 并克隆入pBV220, 构建pBVIL-13表达载体, 经温度诱导后在大肠杆菌DH5α中表达新型人IL-13蛋白.表达产物经S-200纯化、复性后, 用TF-1细胞进行MTT比色测定其活性.结果: 成功地分离了人IL-13新拼接体基因, 并在大肠杆菌中表达.分离纯化的新型IL-13蛋白, 其比活性为1.6×106 U/mg.结论: 获得具有生物学活性的新型人IL-13细胞因子, 为用其治疗肿瘤和脓毒症提供了新的手段.
-
两型TNF-α对单核细胞系U937细胞功能的影响
目的: 比较两型TNF-α对单核细胞系U937细胞功能的影响, 以探讨跨膜型TNF-α在炎症中的作用.方法: 通过吞噬、 RT-PCR、 Western blot及FACS等方法, 比较两型TNF-α对U937细胞生物学功能(包括吞噬、细胞因子mRNA、胞质IκB-α及ICAM-1表达等)的影响.结果: 分泌型TNF-α可明显促进U937细胞吞噬功能, 使TNF-α、IL-1β及IL-8 mRNA积累增加, 促进胞质IκB-α降解及提高黏附分子ICAM-1的表达; 而跨膜型TNF-α对上述U937细胞的生物学功能则无明显影响.当二者联用时, 跨膜型TNF-α与分泌型TNF-α亦无协同作用.结论: 分泌型TNF-α对U937细胞具有明显地激活作用; 而跨膜型TNF-α则无影响, 提示两型TNF-α在炎症过程中的作用不同.
-
MUC1基因疫苗诱导小鼠特异性CTL和体液免疫应答
目的: 观察MUC1基因疫苗诱导小鼠特异性杀伤性T细胞及体液免疫应答的作用. 方法: 采用股四头肌肌肉注射, 将构建的MUC1基因疫苗pcDNA3.1-MUC1免疫雌性BALB/c小鼠, 每次间隔3 wk, 共3次.后1次免疫后第3周, 接种表达MUC1的EMT6乳腺癌细胞进行免疫保护实验.用4 h 51Cr释放法检测小鼠脾细胞特异性CTL杀伤活性; 免疫组化染色法检测小鼠血清特异性抗体的水平.结果: 在效靶比为100∶ 1、50∶ 1、25∶ 1、12.5∶ 1时, MUC1基因疫苗免疫组特异性CTL对EMT6靶细胞杀伤活性分别为54.1%、39.8%、26.4% 和20.1%, 对照组分别为13.2%、10.0%、8.2%、7.2%和11.7%、9.8%、7.7%、7.0%, 前者与后二者差异显著(P<0.01).免疫组化染色检测显示, 人乳腺癌组织MUC1呈染色阳性; MUC1基因疫苗免疫组仅见40%(4/10)的小鼠有肿瘤形成, 而pcDNA3.1对照组和生理盐水阴性对照组100%可见肿瘤形成、生长, 表明MUC1基因疫苗免疫组小鼠具有一定的免疫保护作用.结论: MUC1基因疫苗可诱导小鼠产生特异性CTL及体液免疫应答, 对小鼠体内荷瘤可能具有一定的预防作用.
-
小鼠抗人TNF-α Fab基因的定点突变及其在大肠杆菌中的表达
目的: 对小鼠抗人TNF-α Fab基因进行人源化改造, 并获得人源化Fab段的可溶性表达产物.方法: 应用一步反向PCR法, 分别对小鼠VH、VL基因进行定点突变.将突变基因克隆入载体pComb3H并诱导表达.结果: 成功地将鼠抗VH 88位Ser突变为Ala, VL 17位Glu和18位Lys分别突变为Asp和Arg.成功地构建了人源化Fab的可溶性表达质粒, 并用Western-blot检测到其在上清液中有表达.结论: 得到人源化Fab的可溶性表达产物, 为进一步对其进行活性研究与纯品制备奠定了基础.
-
Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定
目的: 构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的表达质粒.方法: 将gag和gp120连接后的嵌合基因插入到真核表达载体pVAX1中, 构建真核表达质粒pVAXGE.用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞72 h后, 取转染的Hela细胞进行RT-PCR检测和和Dot-ELISA分析.结果: 重组质粒转染细胞的总RNA中, 可扩增出目的基因的转录产物.Dot-ELISA的结果显示, 目的基因在Hela细胞内得到表达.结论: 成功地构建了表达gag-gp120嵌合基因的核酸疫苗质粒, 为HIV-1核酸疫苗的制备奠定基础.
-
骨形成蛋白-7基因逆转录病毒载体的构建及其表达
目的: 实现骨形成蛋白-7(BMP-7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达.方法: 构建重组BMP-7逆转录病毒表达载体.通过PT67包装细胞克隆, 嘌呤霉素筛选、扩增, 获得含BMP-7基因的逆转录病毒液, 直接感染骨髓基质干细胞, 用免疫组化方法检测BMP-7的表达.结果: 成功地构建了重组BMP-7逆转录病毒表达载体, 并可在骨髓基质干细胞中表达BMP-7.结论: 重组逆转录病毒表达载体转染的靶细胞可表达BMP-7, 为组织工程中骨和软骨种子细胞的研究奠定了基础.
-
从噬菌体环肽库中筛选TNF-α表位模拟肽的研究
目的: 用具有中和活性的抗TNF-α单抗(mAb) J1D9筛选噬菌体环七肽库, 从中获得可模拟TNF-α表位的短肽. 方法: 筛选TNF-α表位模拟肽, 并用夹心ELISA法鉴定阳性克隆. 结果: 对环七肽库进行3轮筛选后, 随机挑选20个噬菌体克隆, 经ELISA鉴定出9个阳性克隆. DNA序列分析后, 推导的氨基酸序列共3种: c-RRPAQSG-c、 c-NKHNRKI-c和c-RGMSRKI-c. 结论: 筛选的环七肽克隆展示肽具有TNF-α的抗原性, 为TNF-α表位模拟肽.
关键词： 噬菌体肽库 TNF-α: 表位模拟肽 -
结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达
目的: 构建结核分枝杆菌(MTB) lhp基因原核表达载体并进行表达.方法: 用PCR扩增MTB lhp基因, 并克隆入pQE30质粒.测序正确后, 再亚克隆入pET32a(+)质粒, 构建pQE30-CFP10和pET32a(+)-CFP10重组体.结果: 以重组体分别转化DH5α和BL21(DE3)菌后, 经IPTG诱导, pQE30-CFP10未表达目的蛋白; 而pET32a(+)-CFP10则表达出Mr为 20 000左右重组蛋白.SDS-PAGE分析显示, IPTG诱导4 h重组蛋白的表达量高.表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中, 表达量占全菌蛋白质的38%, 用Western blot证实其具有良好的抗原性.经Ni-NTA柱纯化, 获得纯度为93%的重组蛋白.结论: 成功地构建原核表达载体pET32a(+)-CFP10, 并获得重组CFP10蛋白, 为MTB重组抗原的应用奠定了基础.
-
表达幽门螺杆菌NAP基因的减毒沙门菌疫苗株的建立
目的: 建立表达幽门螺杆菌(H.pylori)中性粒细胞活化蛋白(Hp-NAP)的减毒沙门菌疫苗株. 方法: 用PCR扩增Hp-NAP基因, 并克隆至原核表达质粒pTrc99A中, 经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列, 并与GenBank中相关序列的同源性进行比较.以重组质粒pTrc99A-NAP转化减毒伤寒沙门菌SL3261, 培养后筛选阳性菌落, 抽提质粒进行PCR及酶切鉴定.表达的Hp-NAP蛋白用SDS-PAGE进行鉴定, 用薄层扫描分析蛋白含量.结果: 核苷酸序列测定及同源性分析证实, 克隆的Hp-NAP基因与GenBank中相关序列的同源性为98%(397/402), 氨基酸序列的同源性为98%(131/133).以重组质粒pTrc99A-NAP转化的减毒沙门菌, 可表达Mr约15 000的Hp-NAP蛋白, 表达量约占菌体蛋白量的37.5%.结论: 建立了可表达Hp-NAP基因的减毒鼠伤寒沙门疫苗株, 为进一步研制Hp口服疫苗奠定了基础.
-
肝癌特异性超抗原SEA(D227A)基因表达载体的构建与表达
目的: 构建受AFP顺式作用元件调控的超抗原表达载体, 将SEA(D227A)特异性的表达于AFP 阳性肝癌细胞膜表面.方法: PCR扩增AFP基因启动子、增强子、linker-CD80tm和SEA(D227A).将上述片断插入逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点, 构建AFP基因顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原表达载体(pLXSN SEA(D227A)-linker-CD80 tm).通过脂质体介导, 以表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系, 用RT-PCR和间接免疫荧光染色, 检测SEA的表达.结果: 成功地将AFP基因的启动子、增强子、linker-CD80tm和SEA(D227A)克隆到逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点, 酶切鉴定和DNA序列分析无误, RT-PCR和间接免疫荧光法检测证实, SEA(D227A)能在AFP阳性的肝癌细胞膜特异性表达.结论: AFP顺式作用元件修饰的超抗原表达载体的构建, 为下一步用其强化肝癌的免疫治疗奠定了基础.
-
HV-CRRT对胰腺炎合并急性肾衰患者血中TNF-α的影响
目的: 探讨高容量的连续性肾脏替代治疗(HV-CRRT)在清除PBMCs产生TNF-α中的作用.方法: 选择胰腺炎合并急性肾衰患者13例, 进行连续性静脉-静脉血液滤过(CVVH)治疗.根据置换率不同将患者分为两组, 置换率为2 L/h 者8例(Ⅰ组); 置换率为 4 L/h者 5例(Ⅱ组).在治疗的0、1、2、3、6和24 h, 分别自滤器后采血1 mL, 用夹心ELISA法测定内毒素(ET)诱导的外周血单个核细胞(PBMC)产生的TNF-α含量.将超滤液标本与含ET的志愿者的全血共同孵育, 以测定超滤液中抑制细胞因子产生的抑制活性.结果: Ⅰ、Ⅱ组ET诱导的血中PBMC TNF-α的产生明显被抑制.在CVVH治疗过程中, 在开始3 h内受抑制的PBMC TNF-α的产生明显增加, Ⅰ、Ⅱ组相比较, Ⅱ组增加较多, 至24 h仍维持一个较高的水平, 以后逐渐下降.Ⅰ组超滤液中均未发现抑制活性; 而Ⅱ组24 h CVVH治疗过程中, 超滤液对全血中ET诱导的TNF-α产生具有轻度抑制作用, 抑制率为(15±6)%.结论: 高容量的CRRT清除TNF-α的作用较强, 其机制主要靠滤器膜的吸附作用, 部分可能通过对流作用清除.为增加清除效果, 可选用高容量、大孔径滤器进行CRRT治疗.
-
蛋白转导域介导BCR/ABL抗原对CML患者T细胞的活化作用
目的: 研究蛋白转导域(PTD)介导的BCR/ABL抗原对慢性髓细胞白血病(CML)患者T细胞的特异性活化作用. 方法: 利用基因工程技术, 将PTD基因与CML b3a2 bcr/abl基因融合并原核表达.将纯化的PTD-BCR/ABL融合蛋白与CML患者外周血单个核细胞(PBMC)体外共孵育, 用流式细胞仪分别检测CD4+、 CD8+ T细胞上活化抗原CD25的表达. 结果: 终浓度为100 mg/L的PTD-BCR/ABL抗原体外刺激4 d后, 10例CML患者中, 5例表现为CD8+ T细胞活化, 2例表现为CD4+ T细胞活化, 其中有1例CD8+和CD4+ T细胞同时活化; 而作为对照的BCR/ABL抗原刺激组无一例表现为CD8+或CD4+ T细胞活化. 结论: PTD能将外源性BCR/ABL抗原转导入抗原呈递细胞内, 加工呈递后激活抗原特异性CD8+及CD4+ T细胞, 为CML特异性CD8+、CD4+ T细胞的体外活化及细胞免疫治疗开辟一条新的途径.
-
慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞上CXCR3表达的初步观察
目的: 探讨趋化性细胞因子受体CXCR3在慢性乙型肝炎症发生机制中的作用.方法: 采用流式细胞术, 检测炎症活动程度不同患者外周血淋巴细胞表面CXCR3的表达, 及其在CD4+和CD8+ T细胞上的分布.结果: 慢性乙肝患者外周血CXCR3+淋巴细胞和单核细胞明显增多, 以CXCR3+ CD8+ T细胞的增加更明显.结论: 趋化因子受体CXCR3与其配体的相互作用, 可能在募集淋巴细胞及炎症形成过程中有重要作用.
-
BCG对哮喘小鼠气道炎症反应的影响
目的: 探讨卡介苗(BCG)对卵蛋白(OVA)致敏小鼠肺组织中T细胞的在体调节及其对气道炎症的作用.方法: 将30只BALB/c小鼠分为3组, 第1组吸入雾化的OVA(1次/d, 20 min/次, 连续10 d), 建立致敏模型.第2组(对照)吸入雾化的生理盐水(时间和次数同第1组); 第3组(治疗组)于致敏前10 d及14 d, 各皮内注射BCG 1次, 致敏后6 d 吸入雾化的纯蛋白衍生物(PPD).用SABC免疫组化法, 检测肺组织中CD4+、 CD8+及IFN-γ+细胞的变化, 以及肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞的变化.结果: OVA致敏组小鼠肺组织中CD4+ T细胞增加, CD8+ T细胞无明显变化, 主要表现为IFN-γ-/CD4+ T细胞数的增加, IFN-γ+/CD4+细胞的比例降低.BCG治疗后, 肺组织中CD4+ T细胞减少, CD8+ T细胞数大量增加; IFN-γ+/CD4+细胞的比例明显增大; BALF中炎性细胞数减少.结论: BCG可在体上调Th1细胞, 减轻实验性哮喘动物气道的炎症反应.
-
类胰蛋白酶阳性肥大细胞在大鼠马兜铃酸肾病模型中的分布及意义
马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephropathy, AAN)发病机制目前尚不十分清楚, 细胞免疫是否参与疾病的启动过程, 国内外尚有争论.虽然一般认为, AAN为少细胞性的间质纤维化, 但其病理证据来自于肾移植后的摘除肾[1].
-
紫丁香叶提取物及干扰素、肝炎灵抗乙型肝炎的比较研究
目的: 探讨紫丁香叶提取物对HepG2.2.15细胞存活率及其分泌HBeAg和HBsAg的影响, 并与干扰素和肝炎灵相比较.方法: 采用3H-TdR掺入法检测HepG2.2.15细胞的存活率.采用ELISA检测3种药物作用后HepG2.2.15细胞培养上清中HBeAg和HbsAg水平的变化(以抑制率来表示).结果: ①随着浓度的增加, 各药对细胞的存活率均显示抑制作用, 肝炎灵和干扰素对HepG2.2.15细胞存活的抑制率明显大于紫丁香叶提取物.②各药对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制率, 呈剂量依赖性.紫丁香叶提取物的抑制率介于干扰素和肝炎灵之间.结论: 紫丁香叶提取物是一种高效低毒的药物, 具有抗乙型肝炎病毒的作用.
-
参杞合剂对小鼠腹水型肝癌细胞株H22细胞周期及凋亡的影响
目的: 观察参杞合剂(SQ)在体内、外对小鼠腹水型肝癌细胞株(HcaF16A3)细胞周期及凋亡的影响.方法: 用SQ对荷瘤小鼠连续胃饲治疗10 d, 观察其NK细胞/Mφ的杀伤活性及细胞周期的改变. 用流式细胞仪检测SQ对HcaF16A3细胞增殖的抑制作用与诱导凋亡的作用.结果: SQ的抑瘤率为65.68%.流式细胞仪检测发现, SQ可使肿瘤细胞的细胞周期阻滞到S期, 并在体外诱导其凋亡.结论: SQ在体内、外均有抑瘤作用, 其机制与细胞周期阻滞继而诱发凋亡有关.
-
心力衰竭患者血浆sTRAIL和sDR5的水平及培哚普利对其影响
目的: 探讨充血性心力衰竭(CHF)患者血浆可溶型TNF相关的凋亡诱导配体(sTRAIL)和死亡受体DR5水平的变化及与培哚普利对心脏保护的关系.方法: 用ELISA法检测治疗前后30例服用培哚普利的CHF患者、28例常规治疗的CHF患者及20例健康人对照血浆中sTRAIL及sDR5的水平. 结果: ①58例CHF患者血浆sTRAIL的平均含量为(1.43±0.47) μg/L, 健康人为(0.93±0.12) μg/L, 两者无显著性差异(P>0.05); sTRAIL水平与心功能损害程度亦无明显关系.CHF患者血浆sDR5的平均含量为(39.67±6.78) ng/L, 较健康人(<6 ng/L)明显升高, 且随着心功能损害程度的加重而升高.②培哚普利组与常规心衰治疗组治疗后, 血浆中sTRAIL的水平均有所降低, 但无显著性差异.治疗前后培哚普利组血浆sDR5的平均水平, 分别为(31.23±10.16) ng/L和(8.50±2.14) ng/L(P<0.05); 常规治疗组分别为(48.81±8.74) ng/L和(26.64±6.27 ) ng/L(P<0.05).培哚普利组与常规治疗组相比较, 前者降低更明显(分别下降72.7%和45.4%).③与其他病因所致CHF患者相比较, 高血压心脏病所致CHF患者血浆sDR5的水平明显升高. 结论: sDR5可能在CHF患者心肌细胞凋亡的发生、发展中起着重要作用.培哚普利可降低CHF患者血浆sDR5的水平, 在减缓心室重塑的进程, 保护和改善心功能中可能具有重要作用.
-
我国青年人群血清中流感抗体的连续三年监测
目的: 了解青年人群血清中抗流感病毒的抗体水平和病毒变异程度.方法: 应用微量血凝素抑制试验, 对从1997～2000年在我国8个地区, 每年春、秋两季, 共采集3 000份血清标本进行抗流感病毒抗体水平的检测.结果: 发现人群中抗流感病毒抗体的水平, 在春、秋两季间波动; 抗甲3型流感病毒(H3N2)的抗体水平, 从1999～2000年保持了高水平; 而抗甲1型流感病毒(H1N1)的抗体水平, 从1998年以来呈梯形下降, 易感人群由15%上升到75%. 结论: 近3年中流感病毒甲3型、甲1型和乙型均曾在我国局部流行, 甲1型流感病毒(H1N1)发生了明显变异, 甲3型流感病毒(H3N2)将可能发生变异.
-
LFA-1与抗CD3 mAb共刺激对狼疮肾炎PBMC增殖和IgG合成的影响
目的: 探讨LFA-1与抗CD3 mAb共刺激对狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)增殖与免疫球蛋白(IgG)合成的影响.方法: 分离LN患者及健康人(正常对照)的PBMC, 采用Ficoll梯度密度离心法.细胞增殖实验采用 3H-TdR掺入法.IgG测定采用ELISA法.结果: 在抗CD3 mAb诱导下, 29例LN非活动期和活动期PBMC中, 3H-TdR的掺入量和IgG的合成均增加, 且活动期的增殖强于非活动期(P<0.01); 而单纯用抗CD3 mAb对12例正常对照的PBMC没有影响(P>0.05).抗CD3 mAb与抗LFA-1 mAb共刺激, 均可增加LN患者(活动期和非活动期)及正常对照PBMC 3H-TdR掺入量和IgG合成, 其中活动期增殖效应强于非活动期(P<0.01), 后者又强于正常对照(P<0.01).抗LFA-1中和抗体的加入, 可明显抑制LFA-1诱导的共刺激效应(P<0.01).结论: LFA-1促进LN患者PBMC增殖和IgG合成, 可能是其参与LN发病的机制之一.
-
人缺血脑组织中TNF-α和IL-1β的表达
目的: 检测人缺血脑组织中TNF-α和IL-1β的表达.方法: 将13例脑梗死的死亡病例按发病时间分成<2 d、 3～5 d、 >5 d 3个组, 以非缺血侧半球作为对照, 用免疫组化染色法检测缺血脑组织中TNF-α和IL-1β的表达.结果: 人脑缺血后缺血病灶中TNF-α和IL-1β呈高表达, 与正常侧脑组织相比较有极显著差异.TNF-α和IL-1β表达细胞的分布与缺血灶相一致, 呈局灶性分布.TNF-α的表达高峰在病后2 d内.IL-1β表达高峰在病后3～5 d.在病后5 d, 缺血侧TNF-α和IL-1β的表达与正常侧无显著差异.结论: 人类脑缺血组织中TNF-α和IL-1β的表达与动物实验的结果相似, 提示TNF-α和IL-1β参与了脑缺血损伤, 有助于临床建立新的有针对性的治疗措施.
-
NDRG2对肝癌细胞HepG2凋亡的诱导作用
目的: 探讨NDRG2对肝癌细胞HepG2凋亡的诱导作用.方法: 用RT-PCR获取NDRG2基因.测序判断正确后, 将其克隆入含绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pIRES2-EGFP中, 并转染NDRG2表达阴性的HepG2细胞.用光镜观察转染细胞的形态变化; 荧光显微镜观察NDRG2蛋白的定位; 流式细胞仪分析细胞周期的改变; 透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变.结果: 获得了NDRG2基因, 成功地构建了pIRES2-EGFP-NDRG2真核表达载体.转染HepG2细胞后, 细胞生长受抑, 结构破坏并死亡.荧光显微镜观察到NDRG2在胞质中表达, 流式细胞仪检测出现G1期阻滞和凋亡峰, 透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征.结论: NDRG2基因具有诱导HepG2细胞凋亡的作用, 其机制有待进一步研究.
-
B7家庭新成员
T细胞活化除需要TCR传导的第1信号外,还需协同刺激分子传导的第2信号.
-
干扰素-γ在支气管哮喘发病中的作用
干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)是一种对细胞功能具有调节作用的小分子多肽.
-
肝脏天然免疫系统对HBV感染及肝脏免疫致病的新解释
近期研究表明, 肝脏NK细胞、NKT细胞、γδT细胞占肝脏淋巴细胞总数的2/3左右, 如此庞大的肝脏天然免疫淋巴细胞在乙型肝炎病毒(HBV)感染及其免疫致病中发挥何种效应,引起了学者们的高度关注.传统理论认为CD4+ T细胞和CD8+ T细胞在抗HBV感染及其引起的免疫损伤中起主导作用[1], 但仅占肝脏淋巴细胞总数1/3的这类T细胞能否承担肝脏抗HBV免疫与损伤的全部职责, 值得重新定位.NK细胞、NKT细胞、γδT细胞和Kupffer细胞等是机体抗感染的"哨兵细胞", 在肝脏中应处于抗HBV感染的前沿.
-
结合脂蛋白136-150修饰抗原在体内外对4B.14a T细胞克隆的作用
目的: 通过研究结合脂蛋白136-150(PLP136-150)及其修饰抗原在体内外对T细胞克隆4B.14a的影响, 进一步探讨修饰抗原防治多发性硬化(MS)的可行性. 方法: 在体内, 为模拟MS复发的临床过程, 首先将SJL/J小鼠用X线辐射450R, 静脉转移无分裂增殖能力的4B.14a细胞(1×107/鼠), 再用50 μg/鼠PLP136-150修饰抗原免疫动物, 以触发被动实验性变态反应性脑脊髓炎( EAE ).在体外观察PLP136-150及其修饰抗原刺激4B.14a细胞的增殖作用和分泌细胞因子的作用. 结果: 除139A、143A、144A、145A和148A外, 其他修饰抗原均可在体内触发4B.14a T细胞引起被动EAE.对PLP136-150和其大多数修饰抗原, 4B.14a细胞表现为增殖反应, 分泌炎性细胞因子, 对143A、144A和148A刺激的反应较弱; 139A可抑制4B.14a细胞增殖. 结论: PLP136-150的某些修饰抗原在体内外对4B.14a T细胞克隆具有不同的作用, 选择使用修饰抗原防治MS复发具有可行性.
-
白细胞介素-2对培养的乳腺癌细胞Bcap-37增殖的促进作用
目的: 研究白细胞介素-2(IL-2)对人乳腺癌Bcap-37细胞系增殖的影响, 并探讨其可能的机制.方法: 以培养的Bcap-37细胞进行了以下实验: 用MTT比色法, 测定IL-2对该细胞增殖的剂量效应; 用免疫组化染色法, 检测其表面IL-2的表达; 用RT-PCR技术, 检测该细胞中IL-2Rα、β和γ mRNA的表达; 用流式细胞术, 观察IL-2对该细胞细胞周期各阶段DNA含量的影响; 用激光扫描共聚焦显微镜技术, 检测IL-2对该细胞内Ca2+水平的影响.结果: IL-2(1×105～1×106 U/L)可显著促进乳腺癌细胞Bcap-37的增殖.培养的Bcap-37细胞可分泌IL-2并表达IL-2Rα、β和γ.用流式细胞仪检测Bcap-37细胞中DNA的含量发现, IL-2(1×105 U/L)可提高该细胞由G1期进入G2和S期的比例.激光共聚焦法检测到IL-2(1×105 U/L)可使Bcap-37细胞内的Ca2+浓度降低.结论: IL-2参与了对乳腺癌细胞增殖的调节, 其促增殖作用与该细胞上IL-2受体的表达, 细胞中DNA含量的变化和Ca2+浓度的降低有关.
-
人重组TNF-α突变体471蛋白的初步纯化及生物学活性
目的: 在利用原核表达系统表达重组人突变体471 TNF-α蛋白的基础上, 对该蛋白进行初步纯化及生物学活性检测.方法: 利用佳发酵和表达条件, 诱导基因重组的人突变体471 TNF-α工程菌表达目的蛋白.收集菌体, 经超声破碎, 分离人突变体471 TNF-α的包涵体, 并观察变性剂及蛋白浓度对蛋白折叠的影响.采用MTT比色法检测并比较人野生型及突变体471 TNF-α的生物学活性.结果: 在适当的变性与复性条件下, 已成功地将突变体471 TNF-α折叠并聚合形成具有生物学活性的三聚体.突变体471 TNF-α对L929的细胞毒活性高于野生型TNF-α的15倍.结论: 原核表达系统中表达的人突变体471 TNF-α经复性处理后具有显著的生物学活性, 为进一步进行动物实验及临床研究奠定了基础.
-
可稳定表达HBV L蛋白的P815细胞系的建立
目的: 为检测HBV基因免疫BALB/c小鼠的CTL应答提供靶细胞.方法: 将已构建的含HBV膜蛋白 L 基因的质粒pcDNA3-HBV L以电穿孔法转染P815细胞.阳性克隆通过抗G418抗性进行筛选, 以已转染pcDNA3的P815细胞系作为对照, 用免疫细胞化学染色法进一步鉴定.结果: 通过第1轮筛选, 获得6株抗G418抗性P815细胞克隆, 其中1株稳定表达HBV L蛋白.结论: 建立了可稳定表达HBV L蛋白的P815细胞系.
-
NF-κB 激活蛋白2(NAP2)诱导白细胞介素-12分泌的研究
目的: 研究新克隆的编码NF-κB激活蛋白2(NAP2)基因的功能及作用机制. 方法: 采用NF-κB和IL-12启动子荧光素酶报告质粒及胞质内IL-12染色法, 观察NAP2基因产物在巨噬细胞中对NF-κB、IL-12启动子的激活及对IL-12合成的调控. 结果: NAP2可激活NF-κB和IL-12启动子, 而IκBαDN则可抑制他们的活化.在巨噬细胞系J774中, NAP2也可诱导IL-12表达. 结论: NAP2基因产物可激活IL-12启动子并诱导IL-12的合成, 提示NAP2可能是通过调控NF-κB转录因子而调节 IL-12的表达.
-
树突状细胞负载肝癌抗原肽疫苗体外诱导特异性免疫学反应的研究
目的: 研究树突状细胞(dendritic cell, DC)负载肝癌抗原肽EPVTKAEML体外诱导特异性CTL的能力及其抑癌效果.方法: 用顺序特异引物聚合酶链反应技术(PCR-SSP)选择HLA-B7表型供者, 从脾组织中分离、培养DC-EPVTKAEML特异性CTL.用 51Cr释放法检测CTL的杀伤活性, 并用抗HLA-I分子单抗(mAb)进行杀伤抑制实验.结果: 找到4例HLA-B7杂合子供者, 用DC负载HLA-B7限制的抗原肽EPVTKAEML可诱导特异性CTL反应, 对肝癌细胞HHCC有较强的杀伤作用.结论: DC负载抗原肽EPVTKAEML在体外可诱发较强的特异性免疫反应.
-
抗牛碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的: 制备抗牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体(mAb), 并鉴定其亚类, 建立ELISA检测bFGF含量的方法.方法: 应用基因重组的牛bFGF免疫BALB/c小鼠, 通过细胞融合, 建立分泌抗bFGF mAb的杂交瘤细胞株. 应用免疫沉淀技术鉴定抗bFGF mAb的亚类; 应用基因重组的牛bFGF免疫青紫蓝兔, 制备抗bFGF的多抗血清; 将抗bFGF mAb及兔抗血清用Protein A亲和层析纯化后, 建立检测bFGF含量的ELISA方法.结果: 共获得3株稳定分泌抗bFGF mAb的杂交瘤细胞株; 它们所分泌的mAb均为IgG1; 采用夹心ELISA法检测bFGF的敏感性达ng水平.结论: 抗bFGF mAb(IgG1)和多克隆抗体制备为临床应用及相关研究提供了必要的试剂.
-
TGF-βRⅡ/Fc融合蛋白的纯化及其生物学活性鉴定
目的: 用重组Bac-TRⅡ杆状病毒表达系统大量表达融合蛋白TGF-βRⅡ/Fc, 并对其进行纯化及鉴定; 验证该融合蛋白是否能够阻断细胞因子TGF-β1的生物学作用.方法: 采用病毒空斑形成试验测定病毒滴度, 并对其进行扩增.采用Protein G 柱和快速蛋白质液相层析法(FPLC)纯化目的蛋白.采用SDS-PAGE分析纯化后的目的蛋白, 并将蛋白电泳条带进行灰度扫描, 计算目的蛋白的含量.采用Western blot和夹心ELISA法, 鉴定目的蛋白是否表达.采用MTT比色法, 验证融合蛋白TGF-βRⅡ/Fc能否阻断TGF-β1对小鼠肺成纤维细胞(L929)生长的作用.采用Western blot技术, 验证融合蛋白能否阻断TGF-β1对L929细胞纤维黏连蛋白(FN)生成的促进作用.结果: 本实验室构建并保存的重组Bac-TRⅡ杆状病毒原液内病毒的滴度为2×1012 pfu/L.蛋白电泳后灰度扫描结果表明, 目的蛋白约占总蛋白的10%.夹心ELISA法和Western blot分析证明目的蛋白已表达.融合蛋白TGF-βRⅡ/Fc能够阻断TGF-β1对L929细胞生长的抑制作用, 以及对该细胞FN生成的促进作用.结论: 本室构建的重组Bac-TRⅡ杆状病毒表达系统, 能够表达融合蛋白TGF-βRⅡ/Fc, 表达水平为9 mg/L.纯化得到的目的蛋白具有一定的生物学活性, 可阻断TGF-β1对L929细胞生长的抑制作用和对FN生成的促进作用, 为该蛋白的成批生产及在肺间质纤维化基因治疗中的应用奠定了基础.
-
抗吗啡单克隆抗体的制备及其胶体金交联物的初步应用
目的: 制备吗啡特异性单克隆抗体(mAb).方法:将吗啡分子与兔血清白蛋白或牛血清白蛋白交联,免疫BALB/c小鼠并检测免疫效价后,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗吗啡mAb.将纯化mAb与胶体金颗粒交联后利用纸层析技术进行标本检测.结果:成功地制备了3株抗吗啡mAb,利用其中1株抗体制备的胶体金试纸条,检测样品灵敏度达200 μg/L.结论:吗啡mAb胶体金试纸条研制成功将为毒品的现场检测打下基础.
-
CD226分子参与内皮细胞黏附功能的形态学证据
目的: 提供CD226分子参与内皮细胞黏附功能的形态学证据. 方法: 体外培养人脐静脉内皮细胞, 加入融合蛋白CD226-Ig, 采用倒置显微镜和扫描电子显微镜观测CD226分子在活化内皮细胞和活化PBMC黏附过程中的作用. 结果: 融合蛋白CD226/Ig可显著降低活化内皮细胞与活化PBMC间的黏附. 结论: CD226分子是活化内皮细胞表面一种新的黏附分子, 可能具有重要的生理和病理功能.
-
HBsAg对树突状细胞免疫表型及CTL杀伤活性的影响
宿主的免疫反应在持续性HBV感染中起关键作用[1].近有人用HBsAg及其相关蛋白治疗慢性HBV感染, 取得了一定的疗效[2]. 提示HBsAg有可能作为治疗慢性持续性HBV感染的药物之一.
-
检测层黏连蛋白双mAb夹心ELISA的建立
慢性肝病通常发展为肝纤维化, 常规实验室检查对肝纤维化的诊断几乎毫无参考价值.肝组织活检对肝纤维化诊断是金标准, 但因其具有创伤性, 很难作为临床常规检查和动态观察. 近十几年来许多研究者致力于慢性肝病的血清学研究[1,2], 希望能找到良好的无创伤性血清学指标来替代肝组织活检.血清层黏连蛋白(laminin, LN)的水平与肝纤维化的程度密切相关, 并可作为肝纤维化早期诊断指标之一.
-
丙型肝炎病毒RNA与血清标志物的检测
临床上, 诊断丙型肝炎多采用检测血清中特异性标志物抗HCV抗体及非特异性标志物丙氨酸氨基转移酶(ALT), 而检测丙型肝炎病毒RNA(HCV RNA), 则是诊断HCV感染直接、可靠的指标.随着定量PCR的出现, 人们将其用于丙型肝炎的早期诊断和治疗监测中.我们利用荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测了HCV RNA, 并与血清性标志物(抗HCV抗体、ALT)进行了对比研究, 以探讨两者之间的关系.
-
荧光定量PCR法筛查混合血浆中的HBV及HCV的可行性
输血所致病毒感染一直受到国内外输血界的关注.因病毒感染初期"窗口期"(从病毒感染到血清标志物检出的时间)的存在, 采用现开展的ELISA检测可造成不合格血液的漏检.目前使用各种试剂的"窗口期"如下: HIV1/2抗体22 d, HCV抗体70 d, HBsAg约56 d, 其中HCV抗体的"窗口期"已大于70 d.通过ELISA法对抗-HCV抗体进行筛查, 仍有输血后HCV的感染, 这是目前多数输血相关传染病多为丙型肝炎的主要原因.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
