细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究
目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位.方法:以RT-PCR方法克隆人CTLA4基因,构建CTLA4-EGFP融合蛋白的表达载体.以其转染K562细胞后,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位.结果:从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA.通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码,成功地构建CTLA4-EGFP融合蛋白表达载体.以该质粒转染K562细胞24 h后,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为16%.表达的融合蛋白主要分布于胞内,细胞膜上分布较少.相反,转染空载体的细胞仅表达EGFP,且其在细胞内呈弥散样分布.以佛波醇酯加离子霉素刺激后,CTLA4-EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到29%,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变.结论:成功地构建CTLA4-EGFP融合蛋白表达载体,并在K562细胞中得到表达.表达的融合蛋白与天然CTLA4在活化T细胞中的定位和转运特点相似.
-
原核表达的超抗原SED的TCR Vβ特异性分析
金黄色葡萄球菌(金葡菌)超抗原家族由于涉及的疾病谱非常广泛,一直是比较活跃的研究领域.已取得的研究进展提示我们,超抗原尽管具有相似的生物学活性,但其免疫识别机制却存在明显不同.因此,为了揭示金葡菌超抗原家族免疫识别的全貌,针对该家族其他超抗原分子的进一步研究是十分必要的.葡萄球菌D型肠毒素(SED)是一种常见的毒性作用较强的金葡菌肠毒素,但对其免疫识别的研究相对较少.为了深入研究SED的免疫识别机制,我们已成功地构建了SED的原核表达系统,发现原核表达的SED具有促进人和小鼠淋巴细胞增殖的作用[1].在本研究中我们分析了SED的TCR Vβ的特异性,为阐明其免疫识别机制提供了实验依据.
-
肝细胞癌相关抗原编码基因HCA520与钙离子的结合分析
目的:分析肝细胞癌相关抗原编码基因HCA520与钙离子的关系.方法:通过PCR获得目的基因,构建至原核表达载体pGEX-4T-3中.在大肠杆菌中诱导表达后,用亲和层析法进行纯化.Western blot对所获蛋白进行鉴定,Dot blot分析GST-HCA520融合蛋白与钙离子的关系.结果:琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定表明,重组原核表达载体pGEX-4T-3中,HCA520基因的插入方向及序列完全正确.Western blot分析显示,纯化的蛋白均含有GST部分,是所需的目的蛋白.HCA520融合蛋白能够以剂量依赖的方式与钙离子结合.结论:HCA520基因原核表达的蛋白能够与钙离子结合,提示其可能是一种新的钙离子结合蛋白.
-
灵芝孢子粉碱提多糖对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用
目的:研究灵芝孢子粉碱提多糖(LZSBS)对小鼠巨噬细胞的激活作用.方法:用灵芝孢子粉碱提多糖刺激体外培养的小鼠巨噬细胞,用ELISA法检测巨噬细胞分泌至培养基中的TNF-α和IL-I β的含量;用Griess法检测培养上清中NO的含量.小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒的吞噬率用显微镜计数.结果:经灵芝孢子粉碱提多糖刺激后,小鼠巨噬细胞变大,颜色加深,并能显著刺激巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β,并产生大量的NO.小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒的吞噬功能也明显的增强.结论:灵芝孢子粉碱提多糖对小鼠巨噬细胞具有明显的激活作用.
-
荧光染料CFSE作为细胞标记的特性研究
目的:探讨荧光染料CFSE在作为细胞标记时的特性.方法:应用激光共聚焦扫描显微术,观察CFSE在细胞中的准确定位.利用MTT比色法测定CFSE标记的细胞及未标记细胞的增殖情况;通过细胞计数和流式细胞仪(FCM),测定细胞在不加任何刺激及诱导的情况下细胞数及平均荧光强度的变化趋势.结果:在共聚焦显微镜下,可见CFSE标记的细胞的细胞膜、细胞核及细胞质中都带有绿色荧光,以胞核荧光强.利用MTT比色法测定标记及未标记细胞的A值无显著差异.连续6d记录的细胞数与FCM测定的平均荧光强度呈负相关.结论:CFSE可作为细胞的标记物,用于细胞移植的体内检测、细胞增殖试验及细胞分裂周期的估算等研究.
-
P53与两型TNF-α介导的杀瘤效应的关系
目的:探讨p53与分泌型和跨膜型TNF介导的杀瘤效应的关系.方法:应用PCR-SSCP方法确定受试肿瘤细胞p53基因突变情况,并分别将野生型p53表达质粒转染p53突变细胞株,将突变型p53转染p53无异常的肿瘤细胞,检测转染对两型TNF杀瘤效应的影响.结果:多数S-TNF耐受肿瘤细胞株(Raji、HL-60、K562)均可检出p53突变;转染野生型p53可增强S-TNF-α对靶细胞的杀伤作用,转染突变型p53对S-TNF-α的胞毒效应有抑制作用;而TM-TNF-α的杀瘤效应不受野生型p53的影响.结论:TM-TNF-α与S-TNF-α相比有更广的杀瘤谱,TM-TNF-α的杀瘤效应并不依赖野生型p53,这可能是TM-TNF-α比S-TNF-α杀瘤谱更广的机制之一.
-
血管内皮生长因子受体flk同源新基因的克隆及序列分析
肿瘤血管的形成受到多种因素的影响[1],目前已知血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR):flt(fms-like tyrosine kinase,VEGFR-1)和flk(fetalliver kinase,VEGFR-2)在其中起着重要的作用[2].在血管内皮细胞表面是否还存在着其他血管内皮生长因子受体尚未可知.为了更进一步地研究VEGFR在内皮细胞膜上的表达,寻找影响肿瘤血管形成的其他分子,探讨肿瘤血管形成的多分子作用机制,我们以flk胞外2～4区的免疫球蛋白样袢(Ig-likeloop)的cDNA作为模板设计引物[3,4],从小鼠骨髓干细胞中利用PCR技术成功地克隆到一段cDNA片段,在GenBank提供的nr及dbEST数据库中检索,证明其代表着1个与flk高度同源的片段,对其序列进行了分析.
-
雌激素对大鼠脾脏单核细胞衍生的树突状细胞分化和功能的影响
目的:研究雌激素是否可通过影响树突状细胞(DC)而调控实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)大鼠的免疫应答.方法:在细胞因子和不同浓度的17β-雌二醇存在下,从大鼠脾脏单核细胞培养DC,用流式细胞仪检测DC表面分子,通过抗原提呈实验观察雌二醇处理的DC(E2-DC)抗原提呈能力是否改变.用含髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP68-86)的佐剂免疫大鼠,观察皮下或静脉注射E2-DC对EAE大鼠免疫应答是否有影响.结果:17β-雌二醇可加速DC分化,特征性表现为CD11 c、共刺激分子B7-2和CD40的上调,而抗原提呈能力未有改变.在DC和T细胞共培养的上清液中,IFN-γ分泌下降而IL-10水平升高.给免疫5 d的EAE大鼠静脉注射E2-DC,可激活淋巴结细胞的免疫应答,如提高细胞增殖能力和细胞因子产生,而脾脏产生MBP特异性抗体的细胞数量减少.结论:雌激素能影响DC的分化和功能,导致Th2细胞因子产生,这可能与其对EAE的保护作用有关.
-
RhoC在胃癌细胞中的表达及其小干扰RNA表达载体的构建与鉴定
目的:检测RhoC在胃癌细胞系中的表达,并构建其小干扰RNA(siRNA)表达载体.方法:以Western blot方法检测RhoC在多株胃癌细胞系中的表达.利用计算机辅助设计RhoC特异性siRNA,体外合成siRNA基因并将其定向克隆人真核表达载体mU6pro.以脂质体法转染RhoC-siRNA载体至高转移的人胃癌细胞系AGS中,以Western blot方法鉴定RhoC-siR-NA对RhoC表达的作用.结果:RhoC蛋白在具有高转移潜能的胃癌细胞系中表达增强.利用Bbs Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切法鉴定重组载体后,DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确并已被准确克隆人mU6pro载体.RhoC-siRNA载体可特异性抑制AGS细胞中RhoC的表达.结论:RhoC特异性siRNA表达载体成功构建,为后期基因治疗的研究奠定了基础.
-
多参数流式细胞术对外周血白血病免疫分型的研究
目的:探讨多参数流式细胞术、CD45/SCC设门技术和三色荧光标记抗体,检测外周血在白血病免疫分型中的临床应用及其意义.方法:对检测标本以CD45-Percp/SSC设门技术及流式细胞仪多参数分析技术,采用单克隆抗体三色标记对白血病患者的细胞群体进行免疫表型分析.结果:195例白血病患者,其中急性白血病144例,慢性白血病51例.144例急性白血病患者中,137例出现可供分析的白血病细胞独立群体.免疫分型结果ALL 66例,AML 67例,未能分型4例.27例AL表达2个不同系列的免疫标记(20%).分析了各类白血病的免疫表型的特征,AL共表达不同系列的抗原是一种常见现象.结论:利用CD45-Percp/SSC设门技术及流式细胞仪多参数分析技术,可对白血病细胞群体进行准确的免疫表型检测和研究,有助于指导临床治疗及判断预后.
-
人钙周期素结合蛋白(hCacyBP)基因的原核表达及其鼠抗血清的制备
目的:原核表达hCacyBP并制备小鼠抗hCacyBP多克隆抗体.观察该蛋白组织分布情况,研究其可能在胃癌多药耐药形成中的作用.方法:将hCacyBP基因的全编码区克隆进原核表达载体pET28a中,转化E coli,以IPTG诱导重组目的蛋白的表达.以纯化的重组目的蛋白作为免疫原免疫小鼠,制备相应的多克隆抗体.以Western blot法检测hCacyBP在兔10种组织的表达情况;以Western blot和免疫组化染色法检测hCa-cyBP在胃癌耐药细胞SGC7901/VCR及其亲本药敏细胞SGC7901中的表达和分布.结果:成功地表达重组目的蛋白并制备了小鼠抗hCacyBP的多克隆抗体,Western blot分析显示,hCacyBP在兔的10种组织中均有表达,在脑和肝组织中表达略高;hCacyBP在胃癌耐药细胞SGC7901/VCR及其亲本药敏细胞SGC7901中的表达未见明显差异.结论:CacyBP是在多种组织中广泛表达的一种蛋白质.制备的小鼠抗hCa-cyBP多克隆抗体特异性较高,为进一步研究hCacyBP的功能提供了工具.
-
碱性成纤维细胞生长因子在前列腺增生和癌组织中表达的临床意义
目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)在前列腺增生和前列腺癌组织中表达的临床意义.方法:采用斑点杂交技术和免疫组化染色,测定40例正常前列腺(NP)、38例前列腺增生症(BPH)和36例前列腺癌组织(Pca)中b-FGF的表达.结果:BPH和Pca组织中,b-FGF的表达明显高于NP组织(P＜0.01).b-FGF表达升高的程度与BPH的分度、Pca的病理分级和临床分期均无明显关系.结论:b-FGF可能为BPH和Pca组织自身分泌,与其发生发展过程密切相关.
-
共表达MAGE-1与EGFP基因的小鼠黑色素瘤细胞系的建立
目的:构建黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)基因的真核表达载体,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中进行表达.方法:采用分子生物学的手段,构建了MAGE-1与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因共表达的质粒pIRES2-EGFP-MAGE-1,通过脂质体以共表达质粒转染B16细胞,用荧光显微镜检测细胞中EGFP的表达,用免疫组化染色法检测细胞中MAGE-1的表达.结果:成功地构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-1.以其转染B16细胞后,经荧光显微镜及免疫组化染色法检测,可见细胞内有EGFP及MAGE-1的表达.结论:成功地建立了可共表达MAGE-1与EGFP基因的B16细胞,为MAGE-1在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础.
-
生殖器疱疹患者治疗前后血清IL-2/IFN-γ水平及NK/LAK细胞活性的变化
生殖器疱疹(genital herpes,GH)是有Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染引起的一种疾病,由于HSV-2在人体内不产生永久性免疫力,故本病较易复发.我们通过测定治疗前后GH患者血清IL-2和IFN-γ的水平及NK细胞和LAK细胞活性的变化,来探讨其免疫功能的变化,并揭示GH发病的免疫学机制.
-
一氧化氮-NF-κB信号通路在人初始T细胞向Th1/Th2分化中的作用
目的:探讨一氧化氮(NO)-核因子κB(NF-κB)信号通路在人幼稚T细胞向1型辅助性T细胞(Th1)/2型辅助性T细胞(Th2)分化过程中的作用.方法:分离人脐血幼稚T细胞,分别加入不同浓度的NO供体硝普钠(SNP)、NO合成抑制剂左旋精氨酸甲基酯(NAME)和NF-κB抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC),通过流式细胞术检测细胞内IFN-γIL-4的表达,了解幼稚T细胞的分化.结果:在不同浓度的SNP和NAME和PDTC作用下,表达IFN-γ(即Th1)或IL-4(即Th2)T细胞的百分率与对照组相比较均无显著差异(P＞0.05).结论:NO-NF-κB信号通路对人幼稚T细胞向Th1和Th2细胞的分化均无显著影响.该通路在Th1/Th2型细胞因子表达过程中的调控作用可能主要发生于成熟的Th1和Th2细胞水平.
-
类风湿性关节炎滑膜组织中CD147表达的检测
目的:探讨类风湿性关节炎(RA)滑膜组织CD147的表达.方法:采用免疫组织化学SP染色,双重免疫荧光染色及激光扫描共聚焦显微镜分析检测RA患者受损关节软骨-血管翳汇合部(CPJ)滑膜组织中CD147的表达,并与骨关节炎(OA)滑膜组织CD147的检测相对照.结果:SP染色显示3例OA滑膜组织CD147的表达均为阴性,而11例RA滑膜组织中均检测到CD147的表达,表达CD147的细胞为单核-巨噬细胞、淋巴细胞和滑膜成纤维样细胞.双重免疫荧光染色及激光扫描共聚焦显微镜分析证实表达CD147的细胞为单核-巨噬细胞,中性粒细胞及T细胞.结论:RA滑膜细胞CD147的表达增高.CD147可能是导致RA受损关节软骨、骨基质降解的重要因素之一.
-
过继免疫联合化疗治疗肺癌的临床应用
癌症的生物治疗在20世纪80年代兴起,近年来已成为传统肿瘤治疗模式(手术、化疗和放疗)之外的第4种模式[1].我们采用脾、胸腺淋巴细胞作为前体细胞,体外用重组淋巴因子(rIL-2)诱导产生LAK细胞,并联合化疗治疗肺癌,取得比较理想的效果.
-
维持性血液透析尿毒症患者sICAM-1和E-选择素水平的变化
目的:测定维持性血液透析(MHD)的尿毒症患者血浆中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和E-选择素的水平,探讨MHD患者动脉粥样硬化的病理机制.方法:应用双抗夹心ELISA法,测定105例MHD患者和25例健康人(对照组)血浆中ICAM-1和E-选择素的水平,同时用B超测定患者颈动脉粥样硬化的情况,记录两组的血压并测定其血脂、血糖、血尿素和肌酐的水平.结果:①MHD组血浆ICAM-1和E-选择素的水平均明显高于对照组(P＜0.01).MHD组中,有颈动脉硬化者血浆ICAM-1和E-选择素的水平明显高于无颈动脉硬化组(分别为P＜0.01和P＜0.05).②MHD组血浆ICAM-1与E-选择素以及与甘油三酯(TG)均呈显著的正相关(r值分别为0.62及0.60).血浆ICAM-1的水平与舒张压也呈正相关(r=0.41).结论:MHD患者存在明显的血管内皮功能损伤.血浆ICAM-1和E-选择素可作为MHD患者血管内皮损伤的标志物,其与MHD患者的动脉粥样硬化密切相关.
-
肝病患者外周血红细胞表面CR1的表达水平及其意义
许多研究表明,肝病的发生发展与机体免疫功能的紊乱具有密切关系.为了探讨不同肝病患者的免疫功能状况,我们采用ELISA法,检测了86例急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化及原发性肝癌患者外周血红细胞上1型补体受体(CR1)的表达水平,并分析了其临床意义.
关键词： 红细胞膜补体受体1型分子 肝脏疾病 -
IDDM患者T细胞受体介导的信号通路受损
目的:进一步研究IDDM患者T细胞应答改变的机制.方法:用抗TCR抗体激活患者外周血T细胞,分析TCR介导的信号通路的水平.结果:与正常对照组相比较,抗TCR抗体诱导的增殖性应答较弱(P＜O.05);rIL-2能部分恢复对抗TCR抗体应答的缺乏;抗CD28抗体刺激不能恢复TCR介导的增殖性应答(P=0.03).结论:IDDM患者的T细胞对抗TCR抗体应答的缺乏与TCR介导的信号通路受损有关,但协同刺激信号通路正常.TCR信号通路的缺乏增加了IDDM患者T细胞对凋亡的敏感性或无反应性.
-
人IL-1RⅡ基因的克隆及其表达
目的:克隆人IL-1RⅡ基因,构建其逆转录病毒载体,以探讨其在IL-1主导疾病中的作用.方法:用RT-PCR法从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人的IL-1RⅡ基因.将其克隆到原核表达质粒PET22b中,构建重组质粒PET22b-IL-IRⅡ.将该重组质粒依次进行PCR、酶切鉴定及测序后,转化BL21菌,以IPTG诱导表达.表达产物用Western blot鉴定.另外,将以酶切重组质粒PET22b-IL-1 RⅡ所获IL-1 RⅡ基因的全长ORF,克隆到逆转录病毒质粒中并转染293细胞,用免疫组化染色法检查IL-1RⅡ基因的表达.结果:用RT-PCR法,从人PBMC中扩增出1 203 bp的cDNA,测序证实为人IL-1RⅡ基因.Western blot表明,重组质粒可表达IL-1RⅡ蛋白.免疫组化染色表明,IL-1RⅡ重组逆转录质粒可在293细胞中高效表达IL-IRⅡ蛋白.结论:成功地克隆了人IL-1RⅡ基因,构建了其原核表达载体和重组逆转录病毒载体,并在BL21菌中表达IL-1RⅡ重组蛋白,为进一步研究IL-1RⅡ基因在相关疾病中的作用创造了有利条件.
-
VEGF165反义RNA对人食管鳞癌细胞影响的实验研究
目的:观察血管内皮生长因子165(VEGF165)反义RNA对人食管鳞癌细胞EC109的影响,探讨其治疗食管癌的可行性.方法:采用亚克隆技术,构建并鉴定VEGF165反义RNA的真核表达载体.以重组质粒转染人食管鳞癌细胞EC109后,将其接种于裸鼠皮下,分别利用原位杂交、激光共聚焦、图象分析及微血管计数等方法,观察转染前后EC109细胞的生物学性状和致瘤性.结果:成功地构建了VEGF165反义RNA的真核表达载体,并在EC109细胞中获得表达.转染细胞中VEGF165的表达下降75%,其生物学性状不受外源基因表达的影响,但其在裸鼠皮下的致瘤性和和瘤组织中血管的生成明显下降.VEGF165反义RNA转染组、空载体转染组和对照组中肿瘤的体积,分别为(820±112.5)mm3、(7930±1035)mm3和(7850±950)mm3(P＜0.01);微血管的密度分别为(8.5±1.2)/mm2、(44.3±9.4)/mm2和(46.4±12.6)/mm2(P＜0.01).结论:VEGF165反义RNA能够明显减少食管鳞癌细胞内VEGF165的表达,具有抑制肿瘤生长和血管生成的作用,可望用于实体肿瘤的辅助治疗.
-
兔抗胃癌相关蛋白GCRG213抗体的制备及鉴定
目的:制备胃癌相关蛋白GCRG213的多克隆抗体.方法:在大肠杆菌中表达Thioredoxin/GCRG213融合蛋白,并以所获蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗GCRG213的抗体.抗体的效价及特异性,分别用ELISA、Western blot法鉴定.结果:在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量(Mr)约为29 400的Thi-oredoxin/GCRG213融合蛋白,经凝胶回收法得到纯度近100%的蛋白产品.制备了兔抗GCRG213的抗体.ELISA法检测抗体的效价达到1:256 000,Western blot证实该抗体可与原核表达的GCRG213蛋白特异性结合.结论:兔抗GCRG213抗体的成功制备,为进一步深入研究GCRG213的生物学功能及其在胃癌发生发展中的作用奠定了基础.
-
YggG截短蛋白的表达及其抗体的制备
目的:在大肠杆菌中表达截短的YggG蛋白,并制备兔抗YggG截短体抗体.方法:从含有大肠杆菌yggg基因全长DNA的质粒中,用PCR扩增截短的yggg基因序列,克隆人非融合表达载体pDH2中,构建YggG截短体的高表达工程菌,并温敏诱导表达非毒性的YggG蛋白,薄层扫描检测目的蛋白含量.免疫家兔制备兔抗YggG突变体抗血清,并以Western-blot检测抗体效价、鉴定抗体特异性.结果:大肠杆菌中表达的YggG截短突变体蛋白占菌体总蛋白的31.7%.抗血清效价约1:2 000,Western blot分析显示抗血清具有较高的特异性.结论:成功地获得了YggG截短体蛋白,并制备了兔抗YggG突变体抗血清.用制备的该抗血清可检测到野生型全长YggG蛋白的表达.
-
抗人整合素ανβ3单链抗体的构建和表达
目的:利用基因工程抗体技术构建抗人整合素ανβ3单链抗体(scFv).方法:从分泌抗人整合素ανβ3单抗(mAb)的杂交瘤细胞E10总RNA中,用RT-PCR扩增VH和VL基因,对其核苷酸序列分析后,通过PCR在VH和VL基因间插入柔性连接子(Gly4Ser)3,组装成scFv基因,并克隆至原核表达载体pTIG-TRX中.以重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导目的基因表达.结果:转化菌可表达相对分子质量(Mr)为31 000的scFv.Western blot证实,具有His6标签蛋白的表达.经低剂量的IPTG诱导和较低温度培养,scFv获得了可溶性形式表达.表达产物经Ni-NTA琼脂糖层析纯化后纯度达91%以上.ELISA鉴定证实,scFv具有良好的抗原结合活性.结论:成功地构建并表达抗人整合素ανβ3的scFv,为进一步临床研究奠定了基础.
-
抗人白细胞介素15单克隆抗体的制备及特性鉴定
目的:制备鼠抗人白细胞介素15(hIL-15)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法:自重组人白细胞介素15(rhIL-15)基因工程菌中,提取融合蛋白GST-IL-15,以120/LSDS-PAGE分离鉴定,切取含有目的条带的凝胶,免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及克隆化.对杂交瘤细胞株的稳定性及其分泌的mAb的特性进行鉴定.另外,以rhIL-15包涵体蛋白(rhIL-15IBP)免疫新西兰白兔,制备抗hIL-15的多克隆抗体(多抗).用抗hIL-15的mAb与多抗建立双抗体夹心间接ELISA.结果:获得1株可稳定分泌特异性抗hIL-15 mAb的杂交瘤细胞.建立了双抗体夹心间接ELISA,检测rhIL-15蛋白的敏感性达10μg/L.结论:成功地制备抗hIL-15 mAb,并建立了一种可用于hIL-15检测的双抗体夹心间接ELISA.
-
抗磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立
目的:制备抗磺胺嘧啶(SD)的单克隆抗体(mAb),并研制SD快速检测试剂盒.方法:以SD-BSA的偶联物作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗SD的mAb.并用抗SD mAb和SD-HRP酶标抗原,建立一种可检测样品中的游离SD分子的竞争法ELISA.结果:获得5株可分泌抗SD mAb的杂交瘤细胞1A1 1B8、1E4、2C1和3D9.其中1A1、1B8和1E4为IgG1,2C1和3D9为IgG2.试剂盒的半数抑制率(I50)为9.3μg/L,理论低检出量达到0.6μg/L,对于不同样品中SD的回收率均高于60%.除与SD反应以外,该试剂盒对其他磺胺类药物检测的交叉反应均小于3%.结论:成功地制备了抗SD的mAb,并建立了一种可快速检测各种样品中SD的竞争ELISA试剂盒.
-
杂交瘤细胞P35染色体丢失与其分泌单克隆抗体的特性
单克隆抗体(mAb)具有特异性强、均一性好、可大量生产等诸多优点,已被广泛用于各种实验研究.但分泌mAb的杂交瘤细胞长期保存于液氮中,其染色体会不会丢失?丢失染色体的杂交瘤细胞可否影响其分泌mAb的特性?尚未见有关深入的研究.为此,我们将在液氮中保存了10年(1992～2002年)的分泌抗人肺腺癌mAb的杂交瘤细胞P35,进行复苏并传代培养后,检查了其染色体的变化和分泌mAb N35的能力,并鉴定了该株mAb的部分特性.
-
抗多囊蛋白1氨基端单克隆抗体的制备和鉴定
目的:用杂交瘤技术制备抗多囊蛋白1胞外区氨基端的单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定.方法:以肾组织总RNA为模板,用RT-PCR扩增多囊蛋白1胞外区氨基端的编码基因PKD1 cDNA.将该基因克隆到融合蛋白表达载体pQE30中,转染大肠杆菌M15.以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达多囊蛋白1胞外区氨基端的组氨酸融合蛋白(PC1-e2),用亲和层析法纯化.以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株Sp2/0进行细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆,有限稀释法进行单克隆化.mAb的特异性用间接ELISA和Western blot鉴定.结果:克隆到两个编码多囊蛋白1氨基端的cDNA片段(502 bp和471 bp).构建的表达质粒经酶切和DNA测序证实,为所需要的质粒.表达出相对分子质量(Mr)分别为19 800和18 900的融合蛋白,经Western blot鉴定,均为多囊蛋白1的融合蛋白.用Mr为18 900的融合蛋白免疫小鼠,得到杂交瘤细胞株7B1.Western blot分析表明,该细胞株分泌的mAb能特异地与多囊蛋白1氨基端结合.结论:本实验表达了PKD1多拷贝区所编码的PC1-e2,成功地制备了抗多囊蛋白1胞外区N端的mAb.
-
Aβ42及亚单位疫苗诱导小鼠抗体产生及其中和Aβ42的细胞毒性
目的:探讨Aβ42及其亚单位肽疫苗接种小鼠后特异性抗Aβ42抗体的产生情况.方法:75只6 wk龄雄性BALB/c小鼠,随机分为5组:即对照组、Aβ42组,Aβ36-42组、Aβ1-15组和FAβ1-15组.分别用PBS+MF59佐剂,Aβ42+MF59,Aβ36-42+七聚赖氨酸(MAP)+MF59,Aβ1-15+MAP+MF59,Aβ1-15+MAP+福氏佐剂,免疫BALB/c小鼠4次.用间接ELISA法,检测各组免疫小鼠血清和脑组织匀浆上清液中特异性抗体的滴度.将Aβ42、Aβ36-42和Aβ1-15与培养的PC12细胞共同培养7 d,用MTT比色法检测3种抗原肽对PC12细胞的毒性.将各组免疫小鼠的血清加入到含20 mg/L Aβ42的培养基中,再与培养的PC12细胞一起培养7 d,用MTT比色法测定PC12细胞的存活率.结果:第2次免疫后,各实验组小鼠的免疫血清均有抗Aβ42抗体产生,且抗体滴度随接种次数的增多而增高.同时,在脑组织匀浆上清液中也可检测出低滴度的抗Aβ42抗体.Aβ42可降低PC12细胞的存活率;而不同浓度的Aβ36-42和Aβ1-15则对PC12细胞的存活率无显著影响.将4组疫苗免疫血清和20 mg/L Aβ42同时加入培养基中培养PC12细胞时,可显著提高其存活率.结论:Aβ42及其亚单位疫苗(Aβ1-15及Aβ36-42)结合MF59佐剂免疫BALB/c小鼠后,均可诱导小鼠产生特异性的抗Aβ42抗体,并能中和Aβ42的毒性作用.
-
抗rh-bFGF嵌合抗体真核表达载体的构建与表达
目的:构建并在真核细胞中表达抗人重组碱性成纤维生长因子(rh-bFGF)人-鼠嵌合抗体.方法:从分泌抗rh-bFGF鼠单抗(mAb)1F11的杂交瘤细胞中扩增、克隆V1、VH基因,从质粒pMDHC和pMDLC中扩增、克隆CL、CH基因,测序鉴定后插入真核表达载体,并转化二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢(CHO-dhfr-)细胞进行表达.采用间接ELISA检测表达产物的人源性和其抗原结合活性.结果:序列测定表明所克隆的抗体基因是功能性抗体的V区基因,在转化细胞的培养上清中可检测到抗rh-bFGF嵌合抗体的表达.ELISA试验证实,该嵌合抗体具有人源C区,并具有鼠mAb 1F11的抗原结合活性.结论:在真核细胞中成功地表达抗rh-bFGF的人-鼠嵌合抗体,为其临床应用研究奠定了基础.
-
草原兔尾鼠GST-LZP3融合蛋白的原核表达及其抗体制备
目的:在原核中表达并纯化草原兔尾鼠卯透明带3(zona pel-lucida3,ZP3),并以其作为抗原,制备抗ZP3的抗血清.方法:将LZP3基因的核心片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中.经酶切和序列分析后,用重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),并经丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-LZP3融合蛋白.以纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备抗血清.抗血清的效价及特异性采用ELISA和Western blot检测.结果:成功地构建GST-LZP3融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中高效表达特异性的GST-LZP3融合蛋白.以该融合蛋白免疫兔子获得抗GST-LZP3融合蛋白的高效价抗血清.结论:获得原核表达的GST-LZP3融合蛋白并制备了兔抗LZP3的抗血清,为采用免疫不育技术进行草原兔尾鼠生育控制的研究提供了重要的制剂.
-
增强树突状细胞抗原呈递功能的新进展
随着分子和细胞生物学技术的不断发展,基于树突状细胞(DC)的肿瘤疫苗在恶性肿瘤的临床治疗中已获得越来越广泛的应用.DC是功能强的专职抗原呈递细胞(APC),具有独特的刺激T细胞增殖的能力,是机体免疫应答的始动者,一种天然的"免疫佐剂".通过DC可诱导特异性抗肿瘤免疫应答,调动患者的免疫系统清除肿瘤或预防微小残留病灶的复发,是基础及临床研究追求的共同目标.为实现免疫介导的肿瘤治疗,需要重新启动机体抗肿瘤免疫的机制,构筑强大的肿瘤抗原递呈平台,并克服肿瘤产生的特异性免疫抑制作用.本文重点介绍了肿瘤免疫治疗中有关增强DC抗原呈递能力的研究新进展.
-
受四环素调控的人IL-17受体样分子基因重组质粒的构建及表达
目的:构建受四环素调控的hIL-17RLM基因的重组表达质粒,实现IL-17RLM基因在真核细胞NIH3T3中的可调控性表达.方法:将hIL-17RLM-L DNA片段从pcDNA3.0/hIL-17RLM-L中酶切回收,插入受四环素调控的载体pTRE2,以重组质粒转染NIH3T3细胞,表达产物用Western blot进行检测.结果:成功地构建受四环素调控的pTRE2/hIL-17RLM-L重组质粒,并可在NIH3T3细胞中表达.结论:构建了真核表达质粒pTRE2/hIL-17RLM-L,并使其可调控性表达,为进一步研究IL-17RLM的生物学功能奠定了基础.
-
猪苓多糖对S180细胞培养上清免疫抑制作用影响的研究
目的:研究猪苓多糖对肿瘤细胞系S180培养上清免疫抑制作用的影响.方法:用MTT比色法检测有或无猪苓多糖作用的肿瘤细胞S180培养上清(简称肿瘤上清),对ConA诱导的小鼠脾细胞增殖和IL-2产生,对小鼠脾细胞的杀伤活性,以及对CTLL-2细胞对IL-2反应性的影响.用流式细胞仪检测该培养上清对小鼠脾细胞表面IL-2Rα表达的影响.结果:无猪苓多糖作用的肿瘤上清可强烈抑制上述5项指标;而猪苓多糖作用的肿瘤上清则可明显上调上述方法中所测5项指标.若先用含猪苓多糖培养液培养肿瘤细胞24 h或48 h,而后洗去或不洗去猪苓多糖,再培养肿瘤细胞24 h,所获肿瘤上清也可明显上调上述5项指标.结论:猪苓多糖可抵消肿瘤上清的免疫抑制作用,下调肿瘤细胞S180合成和/或分泌免疫抑制物质.
-
氯胺酮对大鼠缺血/再灌注血清TNF-α和IL-6水平的影响
麻醉的免疫调节是现代麻醉的一个重要方面,即常用的麻醉药物通过影响细胞间的信号交流来调节机体对损伤、应激所产生的免疫应答.心肌缺血/再灌注损伤是临床麻醉面临的一种常见的病理生理变化,炎症反应是其中的重要机制之一.为此,我们研究了麻醉药氯胺酮对大鼠缺血/再灌注血清白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.
-
益气补肾药方对老龄小鼠T细胞中NF-κB活性的影响及作用机制
目的:探讨益气补肾药方延缓衰老的免疫学机制.方法:以老龄小鼠为衰老模型,用凝胶迁移率(EMSA)法,观察益气、补肾和益气补肾药方对抗CD3抗体诱导的老龄小鼠T细胞中NF-κB活性的影响.用Western blot分析该药方对NF-κB两个亚基(p65和p50)的表达.结果:老龄小鼠T细胞中NF-κB的活性低于幼龄小鼠,3种药方均可不同程度地提高老龄小鼠T细胞中NF-κB的活性;而对p65和p50的表达没有明显影响.结论:益气补肾药方可通过提高T细胞中NF-κB的活性,改善因衰老而导致的免疫功能紊乱.
-
不同浓度TFtb对淋巴细胞增殖的影响
移因子(transfer factor,TF)这种相对分子质量(Mr)小于1万的物质是从特定的抗原预激发机体内提取的,将它注射给受者,能使受者在首次接触该抗原时就发生继发性免疫应答[1].
-
非受体型酪氨酸激酶-Syk蛋白的提取与纯化
目的:从转染syk基因的Sf21细胞中提取、纯化免疫相关因子Syk蛋白.方法:将syk基因转染Sf21细胞,于28℃培养48 h,收集细胞,用超声波破碎仪裂解细胞,提取裂解液中总蛋白,用Yellow-3凝胶和Toyopearl-AF-Heptin-650M凝胶层析柱分离、纯化.层析液中的Syk蛋白存在和性质,用SDS-PAGE、免疫印迹实验和等电聚焦实验鉴定.结果:从25亿个Sf21细胞裂解液中提取了含有Syk的225 mg蛋白质.经Yellow-3凝胶层析分离,得到两个亚种的Syk蛋白,相对分子质量(Mr)均为72×103.进一步用Toyopearl-AF-Heptin-650M凝胶层析纯化后,得到两个纯的Syk蛋白,SDS-PAGE、免疫印迹实验结果显示,两种Syk的Mr均为72×103,与Syk的理论相对分子质量吻合.但等电聚焦实验显示,这两种Syk蛋白成分具有不同的pI值.结论:从25亿个转染syk基因的Sf21细胞中纯化出8 mg Syk蛋白,纯度高于95%.这两种Syk的Mr虽然相同,但具有不同的pI值,是两个亚种.这些Syk可用于研究Syk的作用机制、抗Syk抗体的制备和Syk诊断试剂盒的制备等.
-
地龙肽免疫药理作用的实验研究
地龙是我国传统的中药材之一,此药性味咸寒,可治疗多种疾病(包括一些感染性疾病、免疫性疾病和肿瘤等),可能与其调节机体免疫功能有关[1],但缺乏理论根据.我们实验室制备的地龙肽(Lumbricus peptides,LP)经实验证实,在一定剂量范围内,可提高小鼠Mψ、脾细胞分泌NO、TNF-α的水平,激活并促进NK细胞杀伤靶细胞.基于上述研究,我们又探讨了LP在体外对Mψ细胞毒效应的影响,以及LP灌胃后对小鼠腹腔Mp、脾细胞分泌TNF-αt和脾细胞分泌IL-2的影响.
-
Rh(D)抗原及Rh血型免疫性抗体检测的分析
Rh(D)抗原的抗原性仅次于ABO血型抗原,在临床输血及新生儿溶血病的防治中具有重要意义.为预防溶血性输血反应和新生儿溶血病的发生,我科自1989年起开展了产前及新生儿溶血病的血型血清学检查,并于2000年开始对所有拟输血患者常规进行了Rh(D)抗原检测及Rh血型系统免疫性抗体的筛检试验.
-
人源抗狂犬病毒单链抗体库的构建及体外亲和筛选
目的:构建人源噬菌体展示单链抗体(scFv)库,筛选抗狂犬病毒特异性、高亲和力的scFv.方法:应用重组噬菌体抗体技术,从经狂犬病毒WISTAR PM株疫苗免疫者的外周血淋巴细胞中,分离并构建scFv基因.将其克隆人噬粒载体pCANTAB-5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库.采用狂犬病毒Vero疫苗亲和富集法,淘选阳性重组噬菌体,经鉴定后对其进行序列分析.用竞争ELISA,初步检测重组scFv的特异性抗原结合活性.结果:成功地构建了库容量约为7×108抗狂犬病毒噬菌体scFv库,筛选到1株新的抗狂犬病毒的scFv-S12.结论:噬菌体展示scFv库的成功构建及人源抗狂犬病毒特异性scFv的获得,为进一步研制抗狂犬病毒的高特异性、高亲和力的基因工程抗体奠定了基础.
-
负载U937细胞冻融抗原的DC诱导CTL的特异性杀伤
树突状细胞(DC)作为重要的专职抗原提呈细胞,其抗原提呈能力远强于巨噬细胞和B细胞等抗原提呈细胞.因而,以DC为中心的免疫治疗是肿瘤生物学治疗的主要方向之一.我们应用当前普遍采用的rhGM-CSF、rhIL-4培养体系,自骨髓单个核细胞诱导产生CD14-CD1a+的前体DC,使其负载U937细胞冻融抗原(frozen-thawed antigen,FTA),致敏T淋巴细胞,产生CTL特异性杀伤U937细胞,观察其对所激发的T淋巴细胞表型及抗肿瘤免疫功能的影响.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
