欢迎来到360期刊网!
学术期刊
  • 学术期刊
  • 文献
  • 百科
电话
您当前的位置:

首页 > 学术期刊 > 基础医学 > 细胞与分子免疫学杂志

细胞与分子免疫学

细胞与分子免疫学杂志

Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지

CSCD核心期刊
  • 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
  • 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
  • 影响因子: 0.81
  • 审稿时间: 1-3个月
  • 国际刊号: 1007-8738
  • 国内刊号: 61-1304/R
  • 发行周期: 月刊
  • 邮发: 52-184
  • 曾用名: 单克隆抗体通讯
  • 创刊时间: 1985
  • 语言: 英文
  • 编辑单位: 《细胞与分子免疫学杂志》编辑部
  • 出版地区: 陕西
  • 主编: 杨安钢
  • 类 别: 基础医学
期刊荣誉:
  • Apoptin基因通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡

    作者:董萍;咸丰;赵洪礼;李红扬

    目的:研究caspase-3在肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡中的作用.方法:用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色瘤细胞A375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-3的相对活性.结果:Apoptin基因瞬间转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术发现实验组细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0.01);转染后24 h实验组caspase-3的活性开始升高,72 h达高峰,明显高于其他各组(P<0.01).结论:Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡.

  • 小鼠MIP-1α真核表达质粒的构建及在HSV-Ⅱ核酸疫苗中的应用

    作者:邵文爱;李晓眠

    目的:构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的真核表达质粒,观察其作为分子佐剂对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)DNA疫苗免疫效果的影响.方法:以LPS刺激RAW264.7细胞提取总RNA.采用RT-PCR扩增出MIP-1α基因的全部编码序列,利用克隆载体pUCm-T,将其亚克隆入pcDNA3中,构建出小鼠MIP-1α的真核表达质粒Pm;将其转染COS-7细胞,并用Boyden趋化小室法检测MIP-1α的生物学活性.然后用其与HSV-ⅡgD的DNA疫苗一起免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠的特异性抗体、脾T细胞增殖反应及病毒攻击小鼠后对小鼠的保护率,观察MIP-1α对HSV-Ⅱ DNA疫苗免疫效果的影响.结果:成功构建了小鼠MIP-1α的重组真核表达质粒;免疫BALB/c小鼠发现,其作为分子佐剂可加强HSV-ⅡgDNA疫苗的免疫效果.结论:小鼠MIP-1α可作为HSV-Ⅱ gD DNA疫苗的分子佐剂,为研制新型有效的HSV-Ⅱ DNA疫苗提供一定的依据.

  • 免疫毒素基因DT390真核表达载体的构建及功能研究

    作者:陈文捷;李虹;贾怡;张林;吕梅励;李明远;蒋中华

    目的:构建一种新型免疫毒素DT390-mIP10(白喉杆菌毒素390-小鼠γ干扰素诱导性蛋白10)基因的真核表达质粒,并对其功能进行初步研究.方法:通过RT-PCR扩增mIP10基因,并插入到含有DT390基因片段的真核质粒SRα中,构建重组质粒.以PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,用免疫荧光检测重组质粒的表达;用MTT比色法测定重组免疫毒素质粒的生物学活性.结果:构建了DT390-mIP10的真核表达载体SRα-DT390-mIP10,并在NIH3T3细胞中获得表达.表达的DT390-mIP10在体外能有效地杀伤活化的T细胞.结论:免疫毒素基因重组真核表达载体DT390-mIP10的构建成功并在真核细胞中表达,为其在肿瘤及自身免疫性疾病治疗方面的进一步应用研究奠定了基础.

  • CIK细胞对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用及其机制

    作者:李香丹;孙抒;宋莲莲;杨万山;金铁峰

    目的:研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killing cells,CIK)对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用,并探讨其作用机制.方法:通过HE染色观察凋亡细胞ZK-75-1的形态学改变.应用TUNEL(TdT-mediated dUTPnick end labeling)法检测CIK细胞的凋亡.通过免疫细胞化学染色法检测ZK-75-1细胞中p53、p16、C-myc、Bcl-2及Bax的表达率.结果:HE染色显示,CIK细胞向ZK-75-1细胞靠近,形成典型的玫瑰花环状;肿瘤细胞的胞浆中出现颗粒状物,有的肿瘤细胞只见颗粒状碎片;而作为对照的乳腺癌细胞生长良好.TUNEL法检测显示,对照组细胞未染色或染呈均匀的淡蓝色;实验组凋亡的细胞缩小,核或核周染呈深蓝色.CIK细胞作用4~12 h ZK-75-1细胞的凋亡率上升,作用12~24h细胞的凋亡率下降,与对照组相比较有统计学意义(P<0.01).免疫细胞化学染色的结果表明,CIK细胞实验组p53、pi6、C-myc及Bcl-2蛋白随作用时间的延长均下降,Bax蛋白的表达上调,与对照组相比较均有统计学意义(P<0.01).结论:CIK细胞对乳腺癌细胞ZK-75-1杀伤作用的机制之一,可能与p53、p16、C-myc、Bcl-2蛋白表达的下调及Bax蛋白表达的上调有关,并与CIK细胞作用的时间关系密切.

  • 过氧化物酶体增殖剂激活受体α对小鼠T、B细胞发育的影响

    作者:杨谨;李昂;杨谦;李旭

    目的:研究过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)与小鼠免疫系统功能和发育的关系.方法:喂养含过氧化物酶体增殖剂(PP)的食物后,观察野生型C57B1/6小鼠和PPARα缺陷型小鼠胸腺、脾脏的重量及胸腺细胞、脾细胞数量的变化.用抗小鼠CD3、CD4、CD8a、CD19、IgM或CD45R/220单克隆抗体(mAb)进行细胞免疫荧光染色后,用流式细胞术分析骨髓细胞、胸腺细胞和脾细胞的表型变化.用刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)分别刺激小鼠的脾细胞,用3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖活性的变化.用RT-PCR检测小鼠骨髓、胸腺和脾脏中PPARα mRNA的表达.结果:与野生型小鼠相比较,PP对PPARα缺陷型小鼠胸腺、脾脏的重量和细胞数,以及ConA和LPS刺激对淋巴细胞增殖反应的影响很小.PP可致野生型小鼠胸腺中CD4+CD8+T细胞数,骨髓中B220+B细胞总数和原/前B细胞数明显减少,但对PPARα缺陷型小鼠的上述T、B细胞亚群无显著影响.PPARoα mRNA在小鼠胸腺和脾脏中呈低表达,在骨髓中不表达.结论:PPARα在PP诱导的免疫调节中起主要作用,其可通过间接途径影响T、B细胞的发育.

  • 人CXCR1基因Tet-on可调控载体的构建及其在NIH3T3中的表达

    作者:史曼;药立波;王立峰;李福洋;苏金;张健;李霞;刘新平

    目的:构建CXCR1-pTREhyg可调控性真核表达载体,检测其在NIH3T3细胞内的表达情况.方法:通过RTPCR的方法从原代培养的类风湿性关节炎患者滑膜成纤维细胞中克隆得到CXCR1的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTREhyg载体中.用脂质体将pTet-on质粒和CXCR1-pTREhyg共转染入NIH3T3细胞,以不同浓度的强力霉素诱导,用Western blot检测CXCR1蛋白表达水平.结果:Western blot显示,我们所构建的可调控性表达载体能在NIH3T3细胞内表达,不同浓度药物诱导的CXCR1表达水平明显不同;同时还观察到IL-8刺激后,NIH3T3细胞中Erk-1/2磷酸化水平升高.结论:成功构建了CXCR1-pTREhyg真核表达载体,并可在NIH3T3细胞内表达.经IL-8刺激的转染NIH3T3细胞中Erk-1/2活性发生变化.为进一步观察CXCR1与类风湿性关节炎损伤之间的关系奠定了基础.

  • 腺病毒细菌重组系统表达Crg-2蛋白的实验研究

    作者:宁寒冰;赵丽娜;李婷婷;王晓霞;李继昌;刘志国;樊代明

    目的:利用腺病毒的细菌重组系统表达同时具有免疫趋化及血管抑制活性的趋化性细胞因子Crg-2重组蛋白.方法:首先在大肠杆菌BJ5183中将穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与AdE1区基因缺失的骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,筛选后脂质体法转染入具有AdE1区组成性表达的293包装细胞中进行病毒包装、扩增;Western blot检测病毒感染293细胞的蛋白表达;趋化实验检测感染细胞上清对激活T淋巴细胞的趋化活性.结果:穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与骨架质粒pAdEasy-1重组后,经酶切及PCR鉴定获得重组腺病毒基因组质粒pAd/crg-2;病毒Ad/crg-2经包装并扩增后,用组织培养感染半数剂量法(TCID50)法测定病毒滴度达4×109TCID50/L,感染细胞经Western blot检测有一接近Mr10 000蛋白条带,分泌上清对激活的脾淋巴细胞有明显的趋化作用.结论:采用细菌重组法成功获得重组腺病毒Ad/crg2,可高效表达趋化性细胞因子Crg-2.

  • 肌苷对尾部悬吊大鼠比目鱼肌梭内、外肌纤维肌球蛋白重链表达的影响

    作者:石磊;樊小力;吴苏娣

    目的:探讨肌苷注射液对尾部悬吊大鼠比目鱼肌(SOL)梭内、外肌纤维肌球蛋白重链(MHC)表达的影响.方法:采用大鼠尾部悬吊法建立后肢骨骼肌废用模型,用免疫组化染色法检测肌苷注射液对大鼠SOL梭内、外肌纤维MHC表达的影响.结果:尾部悬吊14 d后,大鼠SOL肌梭内、外肌纤维中快缩型MHC的表达均有增加;而在吊尾期间注射肌苷后,SOL肌梭内、外肌快缩型MHC的表达没有明显变化.结论:肌苷注射液对尾部悬吊大鼠SOL肌梭内、外肌纤维MHC表型的转化有明显的对抗作用.

  • ctB和ureⅠ双基因融合表达及其免疫特性分析

    作者:王保宁;杨晓芳;施桥发;李明远;陈翠萍;曹康;李虹

    目的:构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(Ure Ⅰ)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ure Ⅰ,并初步研究融合蛋白Ct B/Ure Ⅰ的表达特性和免疫特性.方法:PCR从pUC18 ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureⅠ的ureⅠ基因5'端插入ctB基因,构建ctB和ure Ⅰ双基因原核表达质粒pET32a(+)ctB/ure Ⅰ,转该质粒于E.coli BL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌.IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-Pro Analizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠.用Western blot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性.结果:工程菌含完整的ctB和ure Ⅰ基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%.在22℃,1 mmol/L IPTG诱导4 h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%.Western blot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体.结论:成功构建了能表达CtB/Ure Ⅰ蛋白的大肠杆菌表达菌株.对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和Ure Ⅰ的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础.

  • 阻断MaxiK 通道对人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化的抑制作用

    作者:雷新军;马爱群;席雨涛;张葳;姚艳;杜媛

    目的:研究高电导钙离子激活钾通道(MaxiK通道)在人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化的过程中,其mRNA和蛋白的表达及作用.方法:采用密度梯度离心加贴壁黏附法,从男性健康志愿者的外周血中分离单核细胞,经5d培养后分化为巨噬细胞.在建立人巨噬细胞源性泡沫细胞模型的基础上,采用免疫细胞化学染色法、RT-PCR及蛋白印迹,研究MaxiK通道α-亚单位的表达,并观察其特异性阻断剂-Paxilline对摄取氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)的巨噬细胞中胆固醇代谢的影响.结果:将巨噬细胞同30 mg/L OxLDL于37℃孵育60h后,细胞体积增大,并有许多红色的脂质颗粒沉积于细胞质内,细胞内的总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)的含量均显著增加,CE/TC从(14.437±6.781)%提高到(57.946±3.507)%(n=7,P<0.05);而MaxiK通道α-亚单位mRNA及蛋白的表达水平没有明显改变(P>0.05).5和10 μmol/L的Paxilline能显著减少巨噬细胞内TC、FC及CE的含量,CE/TC分别降至(41.217±5.584)%和(18.017±11.559)%(n=7,P<0.05),细胞内沉积的红色脂质颗粒也明显减少.结论:阻断MaxiK通道能抑制人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化.

  • NO介导的小鼠胸腺细胞中线粒体的变化在细胞凋亡过程中的作用

    作者:王通;曾耀英;邢飞跃;贺芳;王炯坤

    目的:研究一氧化氮(NO)介导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电位(△ψm)和心磷脂(CL)含量变化的特点.方法:以S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)作为NO的供体诱导胸腺细胞凋亡,以地塞米松(DEX)作为阳性对照药物;设空白对照组、SNAP组和DEX组3个实验组;经膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ mAb)和碘化丙啶(PI)染色后,用流式细胞术(FCM)检测细胞磷脂酰丝氨酸(PS)外翻;用3,3'-二已基噁羰花青碘化物[DiOC6(3)]和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中△ψm变化;用壬基吖啶橙(NAO)和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中线粒体CL变化.结果:SNAP作用后6 h,胸腺细胞出现典型的细胞凋亡特征,多数annexin Ⅴ阳性的细胞出现皱缩.DEX组△ψm降低且未凋亡的细胞比例显著高于空白对照组(P<0.01);而SNAP组该群细胞所占比例与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).各组中约40%~50%的DiOC6(3)阴性细胞同正常细胞的大小.SNAP组CL含量降低的凋亡细胞所占比例显著高于对照组(P<0.01),未见CL含量降低且未凋亡的细胞群.空白对照组和SNAP组中分别有(48.32±3.96)%、(43.64±4.90)%的细胞CL含量降低但大小同正常细胞.结论:NO介导的小鼠胸腺细胞的凋亡过程,依次为磷脂酰丝氨酸外翻、线粒体去极化、CL氧化及细胞皱缩.同DEX模型组相比较,NO介导的小鼠胸腺细胞线粒体的变化为凋亡过程中较晚期的变化.

  • CVB3-VP1 siRNA对CVB3复制的抑制作用

    作者:陈杰斌;许从峰;虞勇;李丽;李双杰;陈瑞珍;杨英珍

    目的:观察柯萨奇B组病毒3型衣壳蛋白1(CVB3-VP1)特征性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对CVB3复制及VP1蛋白表达的抑制作用.方法:根据CVB3VP1基因的序列及其结构特征,设计并用化学方法合成小于扰RNA(siRNA).以CVB3感染HeLa细胞,通过脂质体介导以siRNA转染HeLa细胞.48 h后,观察细胞病变的程度,用TCID5o法测定病毒滴度,免疫荧光法测定CVB3-VP1蛋白的表达,RT-PCR法检测CVB3-RNA的水平.结果:化学合成的4对针对CVB3-VP1的siRNA,发现其中有两对(VP1-1、VP1-2)对CVB3的复制具有明显的抑制作用,同时VP1蛋白的表达明显减少;细胞病变的程度也明显减轻.结论:CVB3-VP1siRNA可有效地抑制CVB3在HeLa细胞中的复制及表达VP1.

  • MAD2 RNA干扰载体的构建及其对胃癌细胞生长的影响

    作者:杜昱蕾;尹芳;杨桂涛;谢华红;宋久刚;刘杰;樊代明

    目的:构建MAD2(有丝分裂阻滞缺陷蛋白2)特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制MAD2基因表达对胃癌细胞生长和细胞周期的影响.方法:构建MAD2 siRNA真核表达载体,脂质体法将pSilencer3.1空载体和pSilencer3.1/MAD2-siRNA1和pSilencer3.1/MAD2-siRNA2真核表达载体分别导入人胃癌细胞系SGC7901.稳定转染后Western blot和RT-PCR检测胃癌细胞内MAD2蛋白及mRNA水平的表达情况,挑选出抑制效果好的单个克隆.MTF法检测各实验组细胞生长情况,流式细胞术检测纺锤体抑制剂长春新碱作用后,胃癌细胞MAD2-siRNA转染组和空载体组细胞周期的分布.结果:成功构建MAD2 siRNA真核表达载体,转染胃癌细胞SGC7901可使其MAD2蛋白及mRNA表达显著下调.MAD2表达降低的胃癌细胞生长速度明显增快(P<0.01),经长春新碱作用后不能被阻滞于有丝分裂期.结论:小干扰RNA技术可以有效地特异性抑制胃癌细胞纺锤体检查点关键蛋白MAD2的表达.MAD2的抑制可使胃癌细胞SGC7901生长加速,增殖能力增强,同时减弱纺锤体抑制剂长春新碱阻滞细胞周期的作用.

  • Th1/Th2细胞对再生障碍性贫血CD34+细胞体外扩增和集落形成的影响

    作者:张涛;孙秉中;陈协群;朱华锋;乔庆大

    目的:探讨Th1/Th2细胞平衡偏离及平衡回复对重型再生障碍性贫血(sAA)骨髓CD34+细胞体外扩增和集落生成的影响.方法:以1例确诊的sAA患者为研究对象.(1)分离骨髓单个核细胞,用免疫磁珠法富集CD34+细胞、CD4+(Th)细胞.(2)以流式细胞术(FCM)检测CD4+细胞中Th1、Th2细胞比例.(3)扩增CD34+细胞并再次富集以获足量CD34+细胞,分为4组:对照组;Th细胞作用组;Th细胞+IFN-γ作用组;Th细胞+IL-4作用组.(4)各组扩增培养10 d,继以集落生成试验,测定各组CD34+细胞扩增率和集落产率.(5)患者经免疫抑制治疗后随访,用FCM监测Th1/Th2细胞比.结果:(1)患者经5个月治疗获缓解.(2)缓解前、后Th1/Th2比分别是22.47和12.27,正常对照组为8.98±4.45.(3)CD34+细胞扩增率,以对照组高,其次为Th细胞+IL-4组、Th细胞组,Th细胞+IFN-γ组的低.(4)各组CD34+细胞集落产率与其扩增率数值平行相关,即对照组多,其次为Th细胞+IL-4组、Th细胞组,Th细胞+IFN-y组的少.结论:Th1细胞反应亢进直接抑制sAA患者CD34+细胞在体外的自我更新和增殖分化,IL-4能拮抗这种造血抑制效应,这可能是通过调节Th1/Th2平衡而间接实现的.

  • 一种新型戊型肝炎病毒样颗粒的表达、纯化及其免疫原性

    作者:董晨;孟继鸿

    目的:以非包涵体形式表达含戊型肝炎病毒(HEV)中和抗原表位的新型HEV重组蛋白,并对其进行鉴定和分析.方法:将HEV开放阅读框架2(ORF2)编码452~617位氨基酸的基因片段连接到载体pET28a(+),转化大肠杆菌,获取表达克隆.以Ni-NTA层析柱纯化表达的蛋白,并用SDS-PAGE、Western blot和直接电镜负染等方法分析鉴定,后免疫小鼠检测特异性抗体的产生水平.结果:表达的重组蛋白天然可溶,相对分子质量(Mr)约为22 000,并可形成直径为20 nm左右的病毒样颗粒,能与戊型肝炎患者血清发生Westem blot阳性反应,免疫小鼠后可诱导产生高滴度的特异性抗体.体外中和试验显示产生的抗体具有中和HEV的活性.结论:原核表达的、含HEV中和抗原表位的、长度仅166个氨基酸的HEV ORF2近3'端编码蛋白能够形成病毒样颗粒,而且该新型病毒样颗粒具有良好的抗原性和免疫原性.

  • HCV核心蛋白在HepG2细胞中对COX-2表达的影响

    作者:刘艳丽;闫岩;白文涛;张芳琳;吕欣;张伟;徐志凯

    目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是否影响环氧化酶-2(COX-2)的表达.方法:用PCR从含HCV H77株全长基因组序列质粒中扩增HCV核心蛋白基因,并克隆至pcDNA3.1载体中,构建HCV核心蛋白基因的真核表达载体HCV-C/pcDNA3.1.用HCV-C/pcDNA3.1和含COX-2启动子的荧光素酶报告载体COX2pro1.5 kb/luc瞬时共转染HepG2细胞,测定萤火虫荧光素酶的活性,并用Western blot检测COX-2蛋白的表达水平.结果:成功地构建了HCV-C/pcDNA3.1重组质粒.瞬时转染后的HepG2细胞中,COX2启动子荧光素酶的活性显著增强.Western blot检测,发现COX-2的表达明显升高.结论:HCV核心蛋白在HepG2细胞中激活COX-2启动子,并且明显诱导COX-2的表达,为进一步研究COX-2与HCV致病性的关系提供了新的实验依据.

  • 环孢素A对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响

    作者:黄俊;马瑞;杨培增;吴长有

    目的:研究在不同刺激条件下,环孢素A(CsA)对小鼠γ-干扰素(IFN-γ)产生的影响.方法:小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3单克隆抗体(mAb)、抗CD3 mAb+抗CD28mAb及抗CD3 mAb+rIL-12刺激后,用ELISA法检测CsA对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响.在单个细胞水平上,用流式细胞仪检测CsA对脾细胞表面CD25和CD69表达及IFN-γ产生的影响.结果:CsA对不同条件下诱导的小鼠脾细胞IFN-γ产生,均表现为剂量依赖性的抑制作用,其抑制机制与细胞的活化有关.结论:CsA可以剂量依赖的方式抑制小鼠脾细胞表达CD25、CD69及产生IFN-γ.

  • 血清丙型肝炎病毒抗原的免疫酶斑点法检测

    作者:时红波;谢立;黄德庄;贺立香

    目的:建立一种可筛查早期HCV感染者的简单快捷方法.方法:制备特异性的抗HCV核心蛋白和抗HCV NS3的单克隆抗体(mAb)酶标记物,应用免疫酶斑点法检测各种类型肝炎患者和正常人血清中的HCV-Ag,并与双抗体夹心ELISA检测HCV-Ag及RT-PCR检测HCV RNA的结果进行比较.结果:免疫酶斑点法检测表明,HCV-Ag的检出率在抗HCV抗体阳性、乙肝和非甲非戊肝炎患者中,分别为15.4%(8/52)、1.73%(19/1 099)和1.03%(1/97);在81例甲肝和67例戊肝患者及50例正常人中均未检出.免疫酶斑点法与双抗体夹心ELISA及RT-PCR的检测的结果没有显著性差异,但其与RT-PCR检测结果有一定的相关性.结论:免疫酶斑点法特异性强,操作简便快捷,不需要特殊仪器设备,为HCV的早期诊断和常规筛查提供了有效的方法.

  • 冬虫夏草提取液对实验性病毒性心肌炎小鼠免疫功能的影响

    作者:李锋;高兴玉;饶邦复;刘利;董波;崔连群

    目的:了解早期应用冬虫夏草提取液(CSAE)治疗对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌病变、血清IFN-γ水平及脾脏T细胞亚群的影响.方法:100只成年雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(CG)、感染组(IG)和CSAE治疗组(CTG).IG及CTG小鼠腹腔感染柯萨奇病毒B3(CVB3),于感染CVB3后第7天和第14天,计算小鼠的生存率,然后并分批处死,观察心肌组织的病理变化及用ELISA法检测血清IFN-γ的水平.用流式细胞术分析脾脏中CD3+、CD4+、CD8+T细胞的百分率.结果:与CG组相比较,IG小鼠血清IFN-γ的水平及脾脏中各T细胞亚群的百分率均降低;而CD4+/CD8+T细胞的比例升高.CTG小鼠的心肌炎症坏死较轻,感染病毒后14 d的存活率为85%,显著高于IG的55%(P<0.05).血清IFN-γ的水平及脾脏中CD3+、CD8+T细胞的百分率显著高于IG组.CTG小鼠脾脏中各T细胞亚群的百分率及CD4+/CD8+T细胞的比例与CG组无显著差异.结论:CSAE可诱导VMC小鼠IFN-γ产生并调节细胞免疫功能,对VMC有一定的治疗作用.

  • 链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠胸腺中CD4+CD25+调节性T细胞的变化

    作者:赵召霞;刘阳;于春雷;李一

    目的:探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠胸腺中CD4+CD25+调节性T(Tr)细胞数的变化.方法:将40只健康昆明小鼠随机分为4组,每组各10只.Ⅰ组小鼠腹腔注射枸橼酸钠缓冲液(0.2 mL/只)作为对照;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠分别腹腔注射20、40、80 mg/kg的STZ连续5 d,每天1次.用尿糖试纸检测小鼠尿糖.用葡萄糖测定试剂盒检测小鼠血糖.用间接ELISA法检测小鼠自身抗体的水平.用流式细胞术检测胸腺中Tr细胞数的变化.结果:Ⅱ、Ⅲ组小鼠血糖、自身抗体的水平明显高于对照组(P<0.05),胰岛中有淋巴细胞浸润,胸腺中Tr细胞数低于对照组.结论:STZ可诱导小鼠产生糖尿病,但不同剂量的STZ所引起的胰腺和胸腺的病理变化不同.其中,中等剂量的STZ既可诱导小鼠发生糖尿病,又可使胸腺中Tr细胞数减少.后者可能与小鼠自身免疫性糖尿病的发生有关.

  • 全反式维甲酸下调慢性阻塞性肺病患者NGAL、MMP-9/TIMP-1比率的研究

    作者:陈明;董亮;于钦凤;李丽珍;许晓群

    目的:探讨慢性阻塞性肺病(COPD)患者外周血中性粒细胞(PMN)中NGAL活性和血浆中MMP-9、TIMP-1与COPD病变的关系及体外ATRA干预后NGAL、MMP-9和TIMP-1的变化,以揭示ATRA逆转的作用机制.方法:以30例COPD患者为实验组,20例发作期哮喘为阳性对照组,20例健康成年人为健康对照组,均进行肺功能检查,RT-PCR测定COPD组及哮喘组和健康对照组PMN中NGAL mRNA的表达强度,ELISA测定其血浆MMP-9和TIMP-1的表达水平.COPD组PMN分为ATRA组和未干预对照组,RT-PCR测定细胞沉淀中NGAL mRNA的表达强度,ELISA测定上清液中MMP-9和TIMP-1的表达水平.结果:COPD组和哮喘组血浆中MMP-9、NGAL水平和MMP-9/TIMP-1比例显著高于未干预对照组(P<0.05);TIMP-1水平显著低于未干预对照组(P<0.05).COPD组与哮喘组间有统计学意义(P<0.05).COPD组患者肺功能与MMP-9和NGAL成负相关,与TIMP-1成正相关.ATRA干预后,COPD患者中MMP-9、NGAL水平较前下降,TIMP-1较前上升,MMP-9/TIMP-1比例降低.结论:COPD组NGAL、MMP-9和MMP-9/TIMP-1摩尔比例升高,TIMP-1降低;可作为COPD患者PMN活性的诊断依据.ATRA通过下调MMP-9、NGAL,上调TIMP-1的表达,纠正MMP-9/TIMP-1失衡,可能对肺气肿的治疗提供新的途径.

  • 雌激素对急性心肌梗死前后去卵巢大鼠干细胞及心功能的影响

    作者:郑小璞;马爱群;韩克;刘宇;张炜;王锐

    目的:去卵巢大鼠发生急性心肌梗死前后,应用雌激素干预,观察其外周血干细胞的变化及其对心功能的影响.方法:将30只SD雌性大鼠分为:正常对照组、急性心肌梗死组、去卵巢心肌梗死组、去卵巢雌激素替代组及去卵巢雌激素治疗组.用流式细胞术检测各组CD90+细胞的百分率;用POWERLAB4.12系统测量左室收缩末压(LVESP)、左室舒张末压(LVEDP)、+dp/dt max及-dp/dt max.结果:去卵巢心肌梗死组外周血CD90+细胞的百分率显著低于急性心肌塞组及去卵巢雌激素替代组(P<0.01);而去卵巢雌激素替代组心梗后第1天外周血CD90+细胞的百分率即显著升高(P<0.05),第3天达峰值,且数值较高.去卵巢雌激素治疗组与去卵巢心肌梗死组相比较,仅在心梗后7 d外周血CD90+细胞的百分率才开始升高;但与去卵巢雌激素替代组相比,心梗术后7 d内各时点均较低.各组LVESP均有所下降,以急性心肌梗死组为著;而LVEDP均有升高,以去卵巢心肌梗死组及去卵巢雌激素治疗组明显(P<0.01).结论:去卵巢大鼠在心肌梗死之前应用雌激素替代治疗,外周血CD90+细胞的百分率较高,且心功能明显优于去卵巢大鼠在心肌梗死后应用雌激素替代治疗.

  • 重组融合蛋白GX1-rmhTNFα的克隆、表达及鉴定

    作者:曹珊珊;吴开春;颜真;万一;韩宇;赵丽娜;樊代明

    目的:构建胃癌新生血管导向性肽GX1与新型人肿瘤坏死因子(GX1-rmhTNF)基因的原核表达载体,表达GX1-rmhTNF蛋白.方法:利用基因工程方法将胃癌血管特异性结合肽融合在新型人肿瘤坏死因子α的氨基末端,构建GX1-rmhTNF原核表达载体,在大肠杆菌进行表达.对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析.结果:成功构建了GX1-rmhTNF重组融合表达质粒,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在相对分子质量(Mr)约18 000处出现了1条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TNFα单克隆抗体特异性的结合能力.结论:成功构建了GX1-rmhT-NF基因的原核表达载体并在原核细胞中表达了该产物,为下一步GX1-rmhTNF的纯化奠定了基础.

  • PMA对THP-1细胞和RA患者单核细胞及培养上清中CD147表达的影响

    作者:李鸿明;朱平;樊春梅;王彦宏;郑朝晖;李晓燕;卢宁

    目的:研究豆蔻佛波醇乙酯(PMA)刺激前后,体外培养的人单核细胞系THP-1细胞和类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞(human peripheral blood monocytes,HPBM)上及培养上清中CD147的表达.方法:以贴壁法分离RA患者HPBM.用PMA刺激体外培养的RA患者HPBM和THP-1细胞,采用流式细胞术动态检测THP-1细胞、RA患者HPBM膜表面CD147的表达.用双抗体夹心ELISA法检测培养上清中CD147分子的含量.结果:PMA刺激前,THP-1细胞膜及RA患者HPBM表面CD147分子的表达均较高,培养上清中均可检测到CD147分子.PMA刺激后,THP-1细胞培养上清中CD147的含量升高,THP-1细胞上CD147的表达先升高后降低,后进入稳定期;RA患者的HPBM上CD147的表达下降,培养上清中CD147的含量升高,于刺激后2 d进入稳定期.结论:THP-1细胞、RA患者HPBM膜表面CD147分子可从细胞上脱落或由细胞直接分泌到培养液中.PMA可上调可溶性CD147的表达.

  • EBV转化慢性乙型肝炎患者B淋巴母细胞系的建立

    作者:张明霞;刁志宏;何海棠;侯金林;骆抗先

    目的:体外建立慢性乙型肝炎患者永生化的B淋巴母细胞系(LCL).方法:用EB病毒感染自慢性乙型肝炎患者外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CpG DNA免疫调节基序以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性.光学显微镜下观察LCL的形态特征,利用流式细胞术分析LCL细胞膜表面分子CD19和CD23的表达水平.结果:46例患者PBMC经EBV感染4周后,42例转化成永生化B淋巴母细胞系,成功率为91.3%.转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养.结论:转化后的LCL保持了成熟B淋巴细胞的生物学特性,可作为体外研究HBV特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.

  • NF-κB/IκB信号通路在乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中的表达

    作者:于艳;王汉民;张静;陈威;崔继红;刘彦仿;连耀国

    目的:探讨核转录因子-κB(NF-κB)/IκB在乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中的表达及其在HBVGN发病机制中的可能作用.方法:采用免疫组化染色法,检测42例HBVGN、20例原发性膜性肾病及5例正常肾组织中NF-κB p65、IκB-α蛋白的表达.结果:NF-κB p65蛋白在HB-VGN组织中的表达,明显高于在原发性膜性肾病(P<0.01)及正常肾组织(P<0.05)中的表达,且细胞核和细胞质中都可检测到NF-κB p65的表达;相反IκB-α在HBVGN组织中的表达低于原发性膜性肾病肾组织(P<0.05).结论:HBVGN肾组织可能有IκB-α蛋白降解及NF-κB核转移.NF-κB/IκB可能参与了肾组织的病理损害过程.

  • 抗二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的制备与鉴定

    作者:鞠艳芳;杨金菊;刘蓉;高媛;柳晓兰;高建恩;孙启鸿

    目的:制备抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(Dicarbonyl/L-xylulose reductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原.结果:获得1株可稳定分泌抗人DCXR mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验.结论:成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具.

  • 抗CD20嵌合抗体的构建与表达

    作者:王玉刚;黄英;谷欣;于鸣;冯健男;孙瑛勋;黎燕;沈倍奋

    目的:构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达.方法:采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定.还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-28的轻、重链蛋白,切取轻链及重链条带,质谱测定氨基酸序列,Biolynx和pepeseq软件分析可信度.对比所测DNA序列与蛋白序列,确定所钓取基因的正确性.将mAb 1-28轻重链可变区基因,连接至表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体C1-28的轻链真核表达载体C1-28L及重链真核表达载体C1-28H.PCR、酶切及序列测定以确定连入基因的正确性.脂质体介导法将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,RT-PCR检测mRNA水平的表达,夹心ELISA法检测蛋白表达量,Western blot检测目的蛋白的大小.结果:钓取到mAb1-28基因.mAb部分蛋白序列测定结果与根据所钓取基因推出的蛋白序列相对应.成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达,表达量可达257 mg/L,其相对分子质量(Mr)与人IgG的Mr一致.结论:为后续研究嵌合抗CD20抗体对非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一定的依据.

  • 抗O139群霍乱弧菌单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

    作者:张君;张娟;唐霓;张秉强;陈维贤;黄爱龙;郑建

    目的:制备抗O139群霍乱弧菌(vibrio choleraeO139)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为进一步研制检测O139群霍乱弧菌的胶体金免疫试纸条创造条件.方法:以灭活的O139群霍乱弧菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗O139群霍乱弧菌的mAb.采用间接ELISA方法和Western blot对mAb的特异性进行鉴定.采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、检测其腹水效价及相对亲和力,并进行表位分析.结果:获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(O4D7和O4D10),其Ig亚类分别为IgG2b和IgG3;腹水mAb的效价均为1:107;mAb O4D7的相对亲和力在1×105以上,O4D10在1×104以上.ELISA相加实验的结果显示,2株mAb可识别不同的抗原表位.结论:成功地制备抗O139群霍乱弧菌的两株mAb,为建立快速特异检测O139群霍乱弧菌感染的试验方法提供了有力的工具.

  • 兔抗MDA-7/IL-24多克隆抗体的制备和特异性鉴定

    作者:马群风;江红;刘锟;朱捷;郑晓飞

    目的:制备兔抗MDA-7/IL-24抗体,并鉴定其特异性.方法:从经PHA刺激培养的人外周血淋巴细胞中用RTPCR扩增mda-7/IL-24基因,构建带His6-tag的原核表达载体pET-28a(+)-mda-7/IL-24,并在大肠杆菌中表达.将表达产物进行SDS-PAGE后,切下含有目的蛋白的胶条,免疫新西兰纯种大白兔,收集免疫兔血清,用Western blot检测抗血清与大肠杆菌表达的重组蛋白His6-MDA-7/IL-24和肺癌细胞A549中重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24表达产物的反应性.结果:经IPTG诱导表达的His6-MDA-7/IL-24融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为28 000,主要为包涵体形式.Western blot证实,表达产物可与抗His6单克隆抗体(mAb)特异性结合.1:5 000的抗血清仍能结合His6-MDA-7/IL-24融合蛋白;稀释为1:1 000时,能与重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24在A549细胞中的表达产物结合.结论:成功地制备兔抗MDA-7/IL-24抗体,该抗体能够识别体外过表达的MDA-7/IL-24蛋白.

  • 小鼠脂多糖应答蛋白LRP的大肠杆菌表达及其兔抗血清抗体的制备

    作者:代忠明;陈苏民;杜可军;陈南春;宋庆贺;骆文静;陈景元

    目的:原核表达小鼠脂多糖应答蛋白并制备兔抗mLRP抗血清.方法:参考GenBank中已登录的人lrp-cDNA序列,对小鼠的同源表达序列标签(EST)序列进行拼接,预测mlrp cDNA序列.用设计的引物,进行RT-PCR,从脂多糖刺激的NIH3T3细胞中扩增mlrp的cDNA序列,克隆入pTAT载体中,构建mlrp的原核表达载体.以其转化在大肠杆菌中诱导表达后,将获得的His-TAT-mLRP融合蛋白免疫家兔,用丙酮沉淀全菌蛋白吸附法制备纯化的抗mLRP血清,用Western blot鉴定抗体的特异性.结果:预测的mlrp cDNA的长度为1 905 bp.将克隆获得的1 554 bp大小的mlrp-cDNA编码区序列插入pTAT质粒中,在大肠杆菌中表达出His-TAT-mLRP融合蛋白.以其免疫家兔,制备了特异性兔抗mLRP的血清.结论:mlrp的原核表达及特异性兔抗mLRP血清的制备,为进一步研究mLRP的功能奠定了基础.

  • 抗吗啡疫苗抗体的制备及其特性鉴定

    作者:马丽霞;周起;郑海波;李生斌

    目的:制备高效价的抗吗啡疫苗的抗体,并对其特性进行鉴定.方法:将人工合成的6-琥珀酰吗啡(M-6-S)与BSA在pH 9.0碳酸盐缓冲液中交联成M-6-S-BSA.经凝胶柱过滤和硫酸铵法纯化后,用两种不同方案免疫BALB/c小鼠和SD大鼠,用ELISA法和中和抑制试验分别测定抗体的滴度和进行特异性鉴定;用辐射热甩尾(TF)反射试验检测M-6-S-BSA疫苗的免疫效果.结果:用合成的M-6-S-BSA疫苗连续免疫小鼠8次,所获抗血清的效价可达1:200 000,大鼠免疫4次后抗血清的效价超过1:20 000.中和抑制试验表明,抗M-6-S抗体对吗啡和与吗啡有共同母环结构的6-单乙酰吗啡、海洛因及可待因具有较高的特异性.免疫大鼠腹腔注射2 mg/kg的吗啡后,其甩尾(TF)反射受到明显抑制,大效应百分率(%MPE)减少了74.7%,TF潜伏期回到基线水平的时间明显快于对照组.结论:成功地制备M-6-S-BSA疫苗,用其免疫小鼠和大鼠均可产生高滴度和特异性抗吗啡抗体.该抗体可明显减低大鼠对吗啡的抗伤害感受,为进一步研究吗啡疫苗抗体对抗吗啡的成瘾作用奠定了基础.

  • 猪苓多糖协同卡介苗对巨噬细胞表达CD11b、CD18以及协同刺激分子的影响

    作者:曾星;蔡萃;王镓;黄羽

    目的:了解猪苓多糖协同对巨噬细胞J774 A.1CD11b、CD18及协同刺激分子表达的影响.方法:应用流式细胞术检测猪苓多糖协同卡介苗刺激J774 A.10.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h及48 h后,其CD11b、CD18及协同刺激分子CD86、CD40表达的变化.结果:BCG(50 mg/L)组作用1 h后,J774 A.1 CD11b、CD18的表达高于空白组;联合应用PPS(50 mg/L)组刺激12 h,其CD11b、CD18的表达明显高于BCG组(P<0.05).BCG组0.5 h、3 h、12 h、24 h、48 h,其协同刺激分子的表达增高;联合应用PPS协同刺激J774 A.10.5 h、1 h、3 h、6 h,协同刺激分子的表达高于BCG组.结论:卡介苗能提高巨噬细胞CD11b、CD18及协同刺激分子的表达,联合应用猪苓多糖可使其作用增强.

  • 化学发光磁酶免疫法检测O157:H7大肠埃希菌

    作者:郭小英;王永宁;顾林岗;刘和平;贺艳峰;陆祖宏

    目的:建立灵敏稳定检测O157:H7大肠埃希菌的化学发光磁酶免疫法.方法:利用AMPPD-ALP化学发光体系,通过磁珠酶联免疫法对O157:H7大肠埃希菌进行检测.结果:其检测灵敏度达到850个,线性范围为1 000~50 000个,批间变异小于15%,批内变异小于20%,与人工计数培养检测相比相关系数达0.9807.结论:化学发光磁酶免疫分析法操作简便,检测精密度和灵敏度高,是一种很有发展前景的可靠方法.

  • 不同年龄大鼠脑组织中MHC、CD4及CD8分子的表达及其意义

    作者:阎蓉;曾水林;张建琼;李升;宋嵬;朱建宝;王磊

    目的:探讨MHC、CD4及CD8分子在不同年龄的大鼠脑组织中的表达及其意义.方法:将实验大鼠按胎龄和日龄分为7组:E15、E19、P0、P7、P14、P28及老年组(24月龄);采用免疫组化方法,检测MHC、CD4和CD8分子在大鼠脑组织中海马区、脉络丛、大脑皮质及结缔组织的表达.结果:(1)E15d大鼠脑组织未见MHC Ⅰ类分子的表达;其他年龄组在结缔组织和脉络丛有MHC Ⅰ类分子的表达.其中从P0 d组~P14 d组大鼠的海马和部分大脑皮质神经元上MHCⅠ类分子的表达逐渐升高,P14 d组的表达高(P<0.05);P28 d组的表达明显下降(P<0.05);老年组大鼠海马神经元上的表达再次升高(P<0.05).(2)E15 d组大鼠脑组织中未见MHC Ⅱ、CD4和CD8分子的表达;其他年龄组MHC Ⅱ、CD4和CD8除在结缔组织和脉络丛脉络膜表达外,在神经元上未见表达.(3)各年龄组在小脑皮质神经元上未见MHC Ⅰ、Ⅱ、CD4和CD8分子的表达.结论:胚胎后期脑内开始有MHC、CD4和CD8分子的表达,表明此时脑内已有可能出现免疫反应.在新生鼠及出生早期,部分皮质和海马神经元上有MHC Ⅰ类分子的表达,可能与调节神经元活动和突触可塑性连接有关.老年组大鼠MHC Ⅰ类分子在海马神经元上的表达升高,可能与神经元的功能衰退和记忆识别能力下降有关.

    关键词: MHC CD4 CD8 大鼠 脑组织
  • GFP基因转染示踪成肌细胞植入体内的转归

    作者:荣书玲;卢永昕;廖玉华;王晓林;常超;王裕勤;杨刚

    目的:实现绿色荧光蛋白(GFP)报告基因在成肌细胞中高效稳定持久的表达,观察成肌细胞作为基因的载体细胞植入SD大鼠体内后的转归.方法:构建携带GFP的逆转录病毒载体(pLgXSN),经PT67包装,G418筛选得到稳定的产毒克隆,用含GFP的病毒上清感染成肌细胞.被感染的成肌细胞植入同种动物的后肢的肌肉内,观察其在同种动物体内的转归.于术后4周取动物后肢肌肉,在共聚焦显微镜下观察GFP的表达,HE染色观察组织的结构.结果:经双酶切鉴定及测序鉴定证实重组逆转录病毒载体构建成功.转染成肌细胞后48 h,在共聚焦显微镜的激光激发下可观察到明亮的绿色荧光,转染效率33%,G418筛选后转染效率达90%.术后4周,在HE染色及共聚焦显微镜下观察可见SD大鼠骨骼肌中转基因的GFP荧光阳性的成肌细胞已与宿主的成肌细胞融合.结论:构建的重组逆转录病毒载体,能在成肌细胞中稳定持久的表达,成肌细胞可作为生物细胞工程治疗的载体细胞.

  • 可溶性CD14在酵母细胞中的分泌表达与LPS结合活性分析

    作者:侯本祥;王慧;张琛;荫俊

    目的:在酵母系统中实现可溶性CD14基因的分泌表达,并进行LPS结合活性分析.方法:将可溶性CD14基因克隆入表达载体pPIC9K,用SacⅠ将重组质粒线形化,电转化Pichia pastoris GS115细胞,筛选阳性整合子并进行甲醇诱导表达.结果:经过诱导表达条件的优化,sCD14在pH 6.5培养基BMMY中实现了分泌表达.免疫印迹和酶联免疫检测结果显示,重组产物可以结合其特异抗体.经流式细胞仪检测,重组产物具有结合细菌内毒素(LPS)的生物学活性.结论:具有良好LPS结合活性的重组可溶性CD14分子可以用于进一步的结构与功能研究.

  • 人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位磁分离酶联免疫方法的建立

    作者:刘振世;周昊;陈海生;谢晶;卢新;杨祥良

    目的:建立一种新的测定人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(hCGβ)磁分离酶联免疫分析法(MEIA).方法:用识别不同表位的两株单克隆抗体(mAb),一株mAb用FITC标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;以偶联羊抗FITC抗体的磁珠作为固相,以酚酞单磷酸酯溶液为底物,建立测定hCGβ磁分离酶免疫测定法.结果:本MEIA法的灵敏度为0.1 IU/L,批内CV小于8.5%,批间CV小于14%,平均稀释回收率为92.5%;与促黄体生成激素(leuteinizing hormone,LH)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)和促卵泡成熟激素(follicle stimulating hormone,FSH)均无交叉反应,与完整的hCG(1 000 IU/L)的交叉反应为1.2%,有效期不低于14个月.结论:本方法的性能优于现有的放射免疫(RIA)和ELISA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的hCGβ测定试剂盒.

  • 不同修复方法对免疫组化染色结果的影响

    作者:崔永兴;涂静宜;李冬梅;李红民

    目前,免疫组化染色技术已成为病理学诊断中不可少的重要手段,而进行抗原修复使抗原决定簇暴露则是免疫组化染色成功的关键.本研究中,观察了高压加热法、微波加热法、胰酶消化和胃酶消化4种抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响.

  • 联合应用活体染料CFDA-SE和SNARF-1检测混合淋巴细胞反应

    作者:肇静娴;曾耀英;刘毅;何贤辉

    目的:建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法.方法:BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进行混合培养.混合培养96 h后收获细胞,用流式细胞术进行检测,分析SNARF-1-CFSE+应答细胞的增殖情况,并用ModFitTM软件拟和以获得更多增殖相关指数.结果:随着应答细胞分裂代数的增加,CFSE荧光强度逐渐减弱直至与刺激细胞无法分开,通过划除SNARF-1阳性细胞以确定应答细胞,解决了这一问题.应用ModFitrM软件,获得应答细胞的前体频率和增殖指数等多项重要的增殖相关指标.结论:联合应用CFSE和SNARF-1染色,结合流式细胞术,可作为评价混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度的有力工具.

  • 脐带血、成人外周血中CD4+CD25high调节性T细胞分布的比较

    作者:刘清泉;洪沙;王平忠;王进;黄长形

    目的:比较成人外周血及新生儿脐带血中CD4+CD25+调节性T细胞(Tr细胞)的数量.方法:采集成年人外周血和新生儿的脐带血,以荧光素分别标记的抗CD4/抗CD25/抗CD3和抗CD4/抗CD8/抗CD3 mAb染色后,流式细胞术进行分析.结果:成人外周血中CD4+CD25 high Tr细胞的数量为(9.09±3.05)个/μL,占CD3+CD4+T细胞的(1.40±0.37)%.新生儿脐带血中CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25high Tr细胞的绝对数及其占CD3+CD4+T细胞的百分率,均明显高于成人外周血(P<0.01);而CD4+CD25intT细胞的绝对数及其占CD3+CD4+T细胞的百分率,则明显低于成人外周血(P<0.01).结论:新生儿脐带血中CD4+CD25high Tr细胞、CD4+CD25int T细胞及CD4+CD25-T细胞的数量明显有异于成人外周血.

  • 胰岛素对大鼠肝细胞损伤的保护及其抗炎机制

    作者:南瑛;李嘉;张昆茹;胡咏武;王胜春;刘杰;高峰

    目的:观察胰岛素对大鼠继发性肝细胞损伤是否具有保护作用并探讨其机制.方法:胶原酶原位灌流分离大鼠枯否细胞(Kupffer cell,KC)及肝细胞并原代培养,分别用脂多糖(LPS)及胰岛素处理KC 4 h,ELISA法检测KC培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)水平;将不同处理的KC培养上清液分别作用肝细胞,12 h后检测肝细胞损伤及存活率,并给予TNF-α单克隆抗体(TNF-α-mAb)阻断TNF-α,观察胰岛素对肝细胞作用的变化.结果:(1)LPS处理的KC培养上清液可引起肝细胞损伤,使丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)增高;胰岛素可减轻上述肝细胞损伤(ALT活性降低30.1%,AST活性降低21.2%)(P<0.01,n=8),提高肝细胞存活率(P<0.01,n=8);(2)胰岛素降低KC培养上清液中的TNF-α水平(P<0.01,n=8),同时增加了IL-10的水平(P<0.05,n=8);(3)LPS激活的KC培养上清中加入TNF-α-mAb(中和TNF-α),亦可减轻肝细胞损伤,而此时胰岛素对肝细胞的保护效应未见叠加增强.结论:首次发现胰岛素可通过抑制KC分泌促炎性细胞因子TNF-α,同时促进其释放抗炎性细胞因子IL-10,从而减轻肝细胞损伤,促进肝细胞存活.

  • 人红细胞血型糖蛋白GYPC的克隆与表达

    作者:陈琦;洪光;刘进;李厚达

    目的:克隆人红细胞血型糖蛋白C(GYPC)基因,构建GYPC重组逆转录病毒载体,以获得稳定表达GYPC的L929细胞.方法:RT-PCR扩增入GYPC基因,克隆入T载体后,将GYPC双酶切亚克隆入逆转录病毒载体pEGZ,用此重组载体转染L929细胞,Zeocin筛选得到阳性克隆;用RTPCR及流式细胞术等方法对重组载体进行鉴定.结果:克隆了人GYPC基因,并获得稳定表达GYPC的L929细胞系.结论:应用基因工程技术,成功构建了含人GYPC基因重组逆转录病毒载体和稳定表达人GYPC的细胞株,建立了红细胞血型抗原的异源表达系统,为血清中抗GYPC特异性抗体的检测及GYPC单克隆抗体的制备和研究奠定了基础.

  • 记忆CD8+T细胞亚群在感染和肿瘤免疫应答中的作用

    作者:吴长有

    在初次免疫应答的过程中,当抗原被清除以后,大多数效应T细胞凋亡,只有少数细胞存活并分化成稳定、长寿的记忆细胞.与初始T细胞相比,当再次接触同一抗原时,记忆T细胞能够介导快速、强烈、有效的免疫应答[1-3].记忆细胞高表达抗凋亡分子并以非抗原依赖的方式增殖来维持记忆细胞的数量.此外,记忆细胞对再次刺激的阈值下降,而且可以在缺乏抗原的情况下长期存在.根据归巢特征、增殖能力、细胞因子产生和效应功能等不同,可将记忆性T细胞分为中央型记忆T(central memory,TCM)细胞和效应型记忆T(effector memory,TEM)细胞亚群.研究表明CD8+TcM和TEM亚群介导的细胞免疫应答在预防和控制病原微生物感染以及在肿瘤的过继免疫治疗中发挥着不同的作用.本文拟就记忆CD8+T细胞亚群TEM和TcM在感染和肿瘤免疫应答中的作用做一综述.

细胞与分子免疫学分期目录
期数
2018 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2017 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2016 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2015 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2014 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2013 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2012 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2011 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2010 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2009 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2008 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2007 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
2006 01 02 03 04 05 06
2005 01 02 03 04 05 06 z1
2004 01 02 03 04 05 06
2003 01 02 03 04 05 06
2002 01 02 03 04 05 06
2001 01 02 03 04 05 06
2000 01 02 03 04 05 06
1999 01 02
1995 01 02 03
1994 01 02
1993 01 02 03 04
1992 01 02 03 04
1991 01 02 03 04
1990 01 02
1989 01 02 03 04

360期刊网

专注医学期刊服务15年

  • 您好:请问您咨询什么等级的期刊?专注医学类期刊发表15年口碑企业,为您提供以下服务:

  • 1.医学核心期刊发表-全流程服务
    2.医学SCI期刊-全流程服务
    3.论文投稿服务-快速报价
    4.期刊推荐直至录用,不成功不收费

  • 客服正在输入...

x
立即咨询