细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人白细胞介素-3基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建
目的: 克隆人白细胞介素-3(hIL-3)基因cDNA, 构建其真核表达质粒pcDNA3/hIL-3.方法: 从人外周血单个核细胞中提取IL-3mRNA, 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增IL-3基因cDNA, 通过T/A克隆法, 首先构建pUCm-T/hIL-3, 然后构建其真核表达型载体pcDNA3/IL-3.结果: pUCm-T/hIL-3内插入片段序列与hIL-3基因序列一致; pcDNA3/IL-3经酶切鉴定与预期结果一致.结论: 成功完成了hIL-3基因克隆和pcDNA3/IL-3真核表达质粒的构建.
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小鼠骨髓成熟与不成熟树突状细胞中RelB基因的表达
目的: 探讨体外分离培养的小鼠骨髓来源的成熟与未成熟DC中核转录因子RelB(avian reticuloendotheliosis viral (v-rel) oncogene related B)基因的表达.方法: 无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞, 利用rmGM-CSF和rmIL- 4联合诱导骨髓前体细胞产生未成熟的DC, 未成熟的DC在培养结束前18 h经LPS刺激获得成熟的DC, 用流式细胞术分析它们的表型, 用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟与未成熟DC中, RelB mRNA和其蛋白的表达.结果: 流式细胞术分析显示未成熟的DC中 MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子(CD86和CD40)呈低水平表达; 而成熟的DC则呈高水平表达.RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示, RelB基因在未成熟的DC中呈低水平表达; 而在成熟的DC中呈高水平表达, 两者比较具有统计学意义(P＜0.01).结论: RelB基因的表达与小鼠骨髓来源的DC的成熟状态密切相关.抑制DC中RelB基因的表达, 有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC.
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小鼠TIM2基因真核表达载体的构建及鉴定
目的: 构建真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2, 并在小鼠肝癌细胞系H22中进行表达.方法: 用RT-PCR法扩增得到TIM2基因, 构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2, 并进行BamH I及Bgl Ⅱ双酶切鉴定和测序.通过脂质体法转染H22细胞, 用RT-PCR法检测H22细胞中TIM2 mRNA的表达.结果: 构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2, 用脂质体法转染H22细胞后, 用荧光显微镜观察和RT-PCR法检测, 可见细胞内有EGFP及TIM2 mRNA的表达.结论: 成功地构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2, 并在小鼠H22细胞中表达, 为进一步研究TIM2在肿瘤生物治疗中的应用奠定了基础.
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高胆固醇对兔oddi括约肌BK通道β1亚基蛋白表达的影响
目的: 研究高胆固醇作用下兔oddi括约肌(SO)钙依赖性钾通道β1亚基蛋白水平的变化.方法: 制备鼠抗兔SO细胞钙依赖性钾通道β1亚基抗血清, 进行免疫组化染色, 观察高胆固醇对oddi括约肌钙依赖性钾通道β1亚基蛋白表达的影响.结果: 免疫组化染色显示, 高胆固醇组SO细胞钙依赖性钾通道β1亚基的蛋白表达降低, 半定量分析显示, 高胆固醇兔oddi括约肌BKca通道β1亚基蛋白表达水平与对照组比较有统计学意义.结论: 高胆固醇可下调兔oddi括约肌BKca通道β1亚基蛋白表达的水平, 从而影响BKca通道的功能.
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单核细胞源性树突状细胞表达淋巴细胞趋化因子mRNA的初步研究
目的: 体外诱导、培养单核细胞源性树突状细胞(DC), 研究其淋巴细胞趋化因子(lymphotactin, Lptn)mRNA表达的动态变化.方法: 采用密度梯度离心的方法分离人外周血中的单个核细胞(PBMC), 用重组人粒细胞-巨噬细胞集落群体刺激因子(rhGM- CSF)、重组人白细胞介素- 4 (rhIL- 4)刺激贴壁的单核细胞, 诱导培养DC, 第6天用重组人肿瘤坏死因子- α(rhTNF- α)诱导DC成熟.用流式细胞术检测成熟和未成熟的DC表面分子CD1a和CD83; 在电镜下观察成熟DC的形态; 以RT-PCR法扩增其Lptn cDNA并克隆至pGM-T Easy T载体中, 测序; 以RT-PCR结合凝胶成像分析系统, 半定量分析培养3、 5及7 d DC的Lptn mRNA表达的强度.结果: 电镜观察培养7 d的细胞具有典型的DC形态, 流式细胞术检测DC表面分子CD83呈高水平表达.用RT-PCR法克隆的cDNA序列与GenBank中U23772(登陆号)提供的序列一致.培养3 d的DC不表达Lptn mRNA, 培养7 d的DC较培养5 d的DC Lptn mRNA表达增强.结论: 单核细胞源性DC能表达Lptn mRNA, 随着DC的成熟, Lptn mRNA的表达增强.
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GFP mRNA在树突状细胞中的转染及其影响因素分析
目的: 探讨绿色荧光蛋白(GFP)mRNA在树突状细胞(DC)中的转染及其影响因素.方法: 选用gfp报告基因, 在体外利用含T7 RNA聚合酶的mMESSAGE RNA转录试剂盒, 合成含有帽子结构的GFP mRNA, 通过酵母多聚A聚合酶加尾, 制备结构完整的GFP mRNA.与此同时, 从人的外周血液中分离单核细胞, 并在体外经GM-CSF和IL- 4刺激分化为DC.通过转染试剂介导将合成的GFP mRNA转染到DC内并使其表达.采用流式细胞术检测其转染效率和表达水平.结果: 体外合成GFP mRNA, 经转染试剂介导, 实现了gfp基因在DC中的表达.不同的转染试剂、 mRNA用量和细胞密度对mRNA的转染效率有较大的影响.采用Transmessenger Transfection Kit转染试剂, 1 μg GFP mRNA在200 μL X-VIVO-15无血清培养基中的转染密度为2.5×109/L的DC, 可获得较好的转染效果(转染效率达27%以上).结论: 在适当的条件下, 通过mRNA转染DC可获得较高的转染效率.
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高氧对早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化的影响
目的: 探讨高氧对早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(type II alveolar epithelial cells, AECⅡ)转分化的影响.方法: 原代培养早产大鼠的AECⅡ, 建立高氧细胞损伤模型.利用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞的形态变化.用免疫细胞化学染色法检测AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C(surfactant protein C, SP-C)及Ⅰ型肺泡上皮细胞(typeⅠ alveolar epithelial cells, AECⅠ)特异性水通道蛋白5(aquaporin5, AQP5)的表达.用RT-PCR和流式细胞术分别检测SP-C、 AQP5 mRNA及蛋白的表达.结果: 随着给氧时间的延长, 原代培养的AECⅡ伸展变平, 失去其板层体及微绒毛, 丧失AECⅡ的特性, 获得AECⅠ样外观.伴随其形态学改变, AECⅡ逐渐停止表达其特异性蛋白SP-C, 开始表达AECⅠ特异性蛋白AQP5.高氧组给O2后24、 48及72 h, SP-C mRNA、 SP-C+细胞的表达率及荧光指数(fluorescence index, FI)较同时间点的空气组明显降低, AQP5的上述指标在24 h和48 h则较空气组明显增加.高氧组给O2后72 h, AQP5的表达开始减弱, 与同时间点的空气组相比较无明显差异.结论: 高氧诱导的早产大鼠AECⅡ转分化在肺泡上皮细胞损伤的修复中起重要作用.
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需钙蛋白酶抑制剂I对LPS攻击的RAW264.7细胞中iκBα表达和细胞因子分泌的影响
目的: 探讨需钙蛋白酶抑制剂I(CI-I)对LPS攻击RAW264.7细胞后iκBα表达和细胞因子分泌的影响.方法: 用CI-I预处理RAW264.7细胞1 h后, 再用LPS攻击, 分别用Western blot和ELISA检测RAW264.7细胞iκBα蛋白表达和TNF-α、 IL-6的分泌.结果: CI-I预处理RAW264.7细胞后, 可抑制LPS导致的iκBα表达降低.LPS攻击RAW264.7细胞后4 h和8 h, TNF-α和IL-6的分泌均增加, CI-I和地塞米松(DEX)可抑制该效应, 并具有协同抑制作用.结论: CI-I 和DEX可抑制LPS攻击后RAW264.7细胞中iκBα表达和炎性细胞因子分泌, 从而有助于减轻细胞损伤.
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DST诱导外周耐受小鼠不同组织细胞内NF-κB p65的活性变化
目的: 探讨NF-κB在外周耐受发生中的活性改变及其意义.方法: 以BALB/c小鼠为供者, 输注1×108 个供者脾细胞3 d和7 d的C3H小鼠为受者, 建立皮肤移植模型.每天观察移植物的生长情况并于术后第7天取移植皮片和脾脏, 通过对移植物的存活时间、组织病理学检查和抗原特异性淋巴细胞增殖试验来了解免疫功能的改变; 以免疫组化染色法检测小鼠脾脏和皮肤移植物中NF-κB p65活性的变化.结果: 供者特异性脾细胞输注后第7天进行手术, 可使皮肤移植物的存活时间延长、抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显受抑制; 皮肤移植物中NF-κB p65的活性增加, 脾脏NF-κB p65的活性降低.结论: 输注供者特异性脾细胞诱导的外周耐受, 可能与不同部位的免疫细胞内NF-κB p65活性改变有关.
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IL-12基因不同亚基真核表达载体的构建及表达
目的: 克隆并构建含人白介素12(hIL-12)基因p35、 p40不同亚基的真核表达载体, 瞬时转染真核细胞并诱导IL-12的表达.方法: 人单核细胞白血病细胞株(THP-1)和人白血病细胞株(HL-60), 经DMSO、 IFN-γ和LPS诱导后, 用RT-PCR及SOE PCR扩增IL-12 p40、 p35及p40-p35融合基因; 并构建pcDNA-p35、 pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达载体.以3种重组质粒分别瞬时转染COS-7细胞后, 通过RT-PCR及ELISA法检测目的基因的表达.结果: 经诱导后, 从HL-60细胞中扩增到IL-12 p40和p35基因片段; 但从THP-1细胞中只扩增到p35基因片段, 未能扩增到p40基因片段; 经酶切鉴定、 PCR扩增及序列测定表明pcDNA-p35、 pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达质粒构建成功; 并在COS-7细胞中可检测到IL-12的表达.结论: 含hIL-12基因不同亚基的真核表达质粒的成功构建, 对进一步研究IL-12在免疫应答中的调节作用以及作为免疫佐剂改善BCG免疫保护效果的研究奠定了基础.
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重组减毒细菌运送CD8+T细胞表位的效应分析
目的: 分析重组减毒菌体外运送CD8+ T细胞表位的效应.方法: 以表达卵清蛋白(OVA)和淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV) CD8+ T细胞表位的重组菌13A(ptG2F)、 25A(ptG2F)和SL7207(ptG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb、 LLd和骨髓源树突状细胞(BMDC), 应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+ T细胞表位的提呈效应.结果: 感染试验证实, 减毒菌13A、 25A和SL7207对LKb细胞或LLd细胞均具有良好的侵袭能力, BMDC对重组菌具有很好的摄取功能.抗原提呈试验结果显示, 在感染的早期(2 h), LKb、 LLd细胞和BMDC均可提呈重组菌13A(ptG2F)或SL7207(ptG2F)运送的T细胞表位; 在感染的晚期(48 h), LKb细胞对OVA257-264 CD8+ T细胞表位的提呈效应降低, LLd细胞对LCMV 118-132 CD8+ T细胞表位的提呈效应增强.3种APC均不能提呈25A(ptG2F)运送的T细胞表位.另外, 在同样的作用条件下, BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb和LLd细胞.结论: 重组菌能运送CD8+ T细胞表位, 为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴.
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重组人sCD40L-IZ基因的克隆、原核表达及重组三聚体蛋白的鉴定
目的: 克隆并表达有生物学活性的CD40配体(CD40 ligand, CD40L)重组蛋白.方法: 应用PCR技术克隆CD40L胞外功能区(E107-L261)基因, 并在其N端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper, IZ)促使其形成三聚体活性形式, 同时为了后期纯化的需要, 在IZ的N端融合6个His, 将所融合得到的sCD40L-IZ克隆进入pET30a表达载体, 转化大肠杆菌BL21(DE3)表达体系进行诱导表达.结果: 重组蛋白sCD40L-IZ以包涵体形式在大肠杆菌(BL21)中得到较高水平的表达.通过蛋白的变性、复性和HiTrapTM亲和层析获得了纯度达95%以上的sCD40L-IZ重组蛋白.经凝胶过滤层析和非还原SDS-PAGE分析验证了其确有三聚体形式.激光共聚焦实验结果表明, 重组蛋白sCD40L-IZ可与骨髓瘤细胞株XG2表面CD40分子结合, 并促使其在膜表面发生聚集.结论: 人sCD40L-IZ重组蛋白在大肠杆菌体系得以成功表达, 并以三聚体活性形式发挥功能, 为今后进一步研究其与凋亡、疾病发病机制的关系及其在临床治疗中的应用奠定了基础.
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临床500例急性白血病诊断分析
目的: 准确判断急性白血病的类型.方法: 应用形态学、细胞化学、免疫分型及骨髓病理检查, 对500例初发的急性白血病进行综合分析.结果: 仅凭形态学能作出诊断的占21.2%(106/500), 形态学联合细胞化学能做出正确诊断的占66.2%(331/500), 形态学+细胞化学+免疫分型联合应用可对99.2%(496/500)急性白血病作出诊断, 结合骨髓病理, 可正确判断白血病细胞在骨髓中的分布程度以及骨髓结构的变化.结论: 应用形态学、细胞化学、免疫分型及骨髓病理检查进行综合分析判断, 对各型急性白血病的诊断是必要的.
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肿瘤引流淋巴结中免疫活性细胞分布的原位分析
目的: 观察人乳腺癌和胃癌局部引流淋巴结(LDLN)从无转移、微转移到晚期转移过程中, 免疫组织学变化及免疫活性细胞(ICC)的分布特征.方法: 采用传统的病理学方法, 对22例乳腺癌LDLN(71个)和7例进展期胃癌LDLN(28个)进行组织形态学分类, 并以抗穿孔素、抗颗粒酶B、抗CD8、抗CD56、抗CD68、抗S-100、抗CD134及抗CD25单克隆抗体(mAb)进行催化信号放大(Catalyzed signal amplification, CSA)免疫组化染色, 检测肿瘤LNDN中ICC的分布.结果: 肿瘤LDLN中以副皮质区增生和窦组织细胞增生为主, 细胞毒性T淋巴细胞(CTL)及树突状细胞(DC)的数量, 从无转移、微转移到晚期转移过程中有逐渐减少的趋势.在无和微转移的淋巴结内, 穿孔素+、颗粒酶B+及S100+DC的数量高于晚期转移淋巴结(P＜0.05); 而S100+DC不仅数量减少, 而且其形态也有变化, 呈多角形、星形, 并有胞质突起, 与周围淋巴细胞接触呈活化状态的DC变为椭圆形, 少有胞质突起或呈短突起的静止状态的DC. CD134+细胞及CD25+细胞的数量在晚期转移淋巴结中明显高于无和微转移淋巴结(P＜0.01).ICC在无和微转移的前哨和非前哨淋巴结中的分布无统计学意义(P＞0.05).结论: 肿瘤LDLN中ICC分布的变化, 提示随着肿瘤的进展, 其免疫微环境向抑制机体抗肿瘤免疫的方向偏移.
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细胞因子在慢性支气管炎和肺气肿大鼠气道炎症中的作用
目的: 探讨细胞因子在慢性支气管炎(慢支炎)和肺气肿气道炎症中的作用以及红霉素对其气道炎症的防治作用机制.方法: 复制慢支炎和肺气肿动物模型, 收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞学计数和分类检查, 并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组(正常组、对照组、模型组、红霉素治疗组、红霉素预防治疗组)血清和BALF中细胞因子(IL-6、 TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1)含量. 结果: 模型组有核细胞总数、中性粒细胞和单核巨噬细胞分类计数均较对照组显著增高(P＜0.05).而红霉素治疗组与预防治疗组能显著降低BALF中的中性粒细胞数.IL-6、 TNF-α、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1在模型组均较对照组有所增高(P＜0.05), 红霉素治疗组与预防治疗组TNF-α的含量不同程度低于模型组, 单核细胞趋化蛋白-1、 IL-6的含量不同程度高于模型组.结论: 多种炎症细胞, 尤其是中性粒细胞、肺泡巨噬细胞以及IL-6、 TNF-α、 MCP-1等细胞因子在慢支炎和肺气肿气道炎症中起重要作用, 红霉素对其气道炎症具有一定的防治作用, 其机制与抑制气道炎症中性粒细胞及TNF-α的分泌有关.
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狼疮肾炎患者血中巨噬细胞衍生趋化因子和IL-18水平的变化及意义
目的: 探讨不同病理类型的狼疮肾炎(LN)患者血中巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)和白介素18(IL-18)的变化及意义.方法: 应用ELISA法对不同病理类型LN患者血中MDC和IL-18进行测定.结果: (1)Ⅱ、Ⅲ型LN患者血中MDC的水平明显增高.MDC的水平与LN患者血中补体的变化呈负相关, 与抗ds-DNA抗体的变化呈正相关, 与系统性红斑狼疮的疾病活动评分(SLEDAI)呈正相关.(2)IL-18的水平在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型LN患者血中均明显增高, 且与补体下降呈负相关, 与抗ds-DNA抗体水平、 SLEDAI评分及LN患者的肾功异常呈正相关.③MDC的水平在Ⅱ、Ⅲ型LN组与IL-18水平的变化呈正相关, 在Ⅳ型LN组无明显相关变化.结论: MDC和IL-18在LN的发生发展中均有重要作用, MDC对病变过程中的病理损伤的程度及Th1/Th2细胞失衡的变化的探讨具有重要意义.IL-18在LN的发生发展、治疗及预后的监控上具有重要作用.
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前列腺素E1对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡的影响及其机制的研究
目的: 研究前列腺素E1(PGE1)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织细胞凋亡及相关蛋白Fas、 bcl-2表达的影响并探讨其机理.方法: 大鼠75只随机分为4组, 前3组用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病模型, 并分别给予PGE1、洛汀新和生理盐水, 第4组作为正常对照组.所有的大鼠在喂养101 d后处死, 取其肾脏, 观察细胞凋亡数量及Fas和bc1-2表达.结果: PGE1治疗组治疗前后肾小球和肾小管凋亡细胞均较糖尿病组显著减少, 具有统计学意义(P＜0.05).结论: PGE1可抑制糖尿病肾病大鼠肾组织细胞凋亡, 下调Fas的表达、上调bcl-2的表达, 其作用明显优于洛汀新.
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可溶性CD40在肝病患者血清中的表达及其临床意义
目的: 研究可溶性CD40(soluble CD40, sCD40)在急性肝炎、重型肝炎和原发性肝癌患者血清中的表达, 探讨其与生化指标和疾病预后的关系.方法: 使用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测急性肝炎(49例)、重型肝炎(22例)和原发性肝癌(13例)患者入院次日清晨空腹血清标本和健康体检者(44例)血清标本中sCD40浓度, 分析其与急性肝炎患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的关系, 并初步探讨sCD40水平与重型肝炎患者疾病预后的关系.流式细胞术检测患者血清sCD40与CD40配体(CD40L)的结合活性.结果: 三种肝脏疾病患者血清中sCD40水平(149.70±86.82) pg/mL较健康对照组(47.33±27.49) pg/mL显著升高(P＜0.001), 但各组患者之间无统计学意义(P=0.475).重型肝炎死亡患者血清sCD40浓度较存活患者显著升高(P＜0.05).急性肝炎患者血清sCD40浓度与ALT、 AST水平呈显著正相关(r=0.50, P＜0.001; r=0.47, P＜0.01).体外实验显示患者血清sCD40具有与CD40L结合的活性.结论: 肝脏疾病患者血清异常高表达sCD40, 这是评价急性肝细胞损伤的辅助指标, 有助于判断重型肝炎患者的病情和预后.CD40-CD40L作用可能参与了肝细胞损伤和免疫失调的病理过程.
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CyclinD1, Bax及MDR1在非小细胞肺癌中的表达及生物学特性
目的: 探讨细胞周期蛋白CyclinD1、促凋亡基因Bax及多药耐药基因MDR1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及生物学特性.方法: 用鼠抗人CyclinD1、鼠抗人MDR1及鼠抗人Bax单克隆抗体(mAb)对56例石蜡包埋的原发性NSCLC组织进行免疫组化染色, 并与20例肺良性病变作对照, 对其表达情况进行检测分析.结果: CyclinD1表达为恶性病变高于良性病变(P＜0.05), 与P-TNM分期及分化程度无关.Bax蛋白在NSCLC和肺良性病变中表达无明显差异性, 但在NSCLC中, 肿块≥3 cm时其表达高于肿块＜3 cm, 有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者, Ⅲ～Ⅳ期高于I～Ⅱ期, 中～高分化高于低～中分化(各组P＜0.05).MDR1在NSCLC中的表达高于肺良性病变(P＜0.05), 并且在肿块≥3 cm高于肿块＜3 cm(P＜0.05), 有淋巴结转移高于无淋巴结转移(P＜0.05).结论: CyclinD1的过表达与肺癌的发生有关: Bax在NSCLC发生的早期低表达, 而在中晚期高表达, 说明Bax在早期的抑制有诱癌形成的可能, 晚期则加速癌细胞凋亡, 参与机体的抗癌机制; MDR1的过表达与NSCLC的发展与预后有关, 并有利于NSCLC耐药的监测与评价.
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北京市房山区1999～2005年麻疹流行特征分析
麻疹是严重危害儿童健康具传染性的疾病之一.免疫接种是一种成熟而有效的控制方法.我国自1965年麻疹疫苗问世以来, 麻疹的发病率逐年降低, 但近年又有所上升.为此, 我们对北京市房山区1999～2005年麻疹的流行特征进行了分析.
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系统性红斑狼疮和梅毒患者抗磷脂抗体比较及意义
目的: 比较系统性红斑狼疮(SLE)和梅毒患者血清抗磷脂抗体(APA)的异同及其意义.方法: 应用ELISA和快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)法检测32例SLE和77例梅毒患者血中6种抗心磷脂(CL)、抗磷脂酸 (PA)、抗磷脂酰丝氨酸 (PS)、抗磷脂酰乙醇胺 (PE)、抗磷脂酰胆碱(PC)、抗磷脂酰肌醇抗体(PI) 的APA.结果: (1)梅毒患者血清RPR的滴度为1∶ 16、 1∶ 8和1∶ 1(抗PE抗体除外)及RPR的滴度为1∶ 4的6种APA IgG的吸光度(A)值, 以及RPR的滴度为1∶ 1的抗PA IgG抗体、滴度为1∶ 8的抗PC IgG抗体和滴度为1∶ 32、 1∶ 16及1∶ 8的抗PI IgG抗体的阳性率, 均显著低于SLE患者; (2)梅毒患者血清RPR的滴度为1∶ 4的4种APA IgM和滴度为1∶ 1的5种APA IgM的A值, 以及RPR滴度为1∶ 1梅毒患者抗CL、抗PS和抗PC IgM抗体及滴度为1∶ 32的抗PA IgM的阳性率, 均显著低于SLE患者.结论: SLE和梅毒患者血清的A值和阳性率均有所不同, 检测A值有助于SLE与梅毒患者的鉴别.
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CD80-IgG1 Fc融合蛋白修饰的HepG2细胞对淋巴细胞抗肿瘤免疫的影响
目的: 探讨CD80-IgG1 Fc段融合蛋白修饰的HepG2细胞对淋巴细胞抗肿瘤免疫的影响.方法: 应用福建省临床免疫研究所构建的CD80-IgG1 Fc段融合蛋白, 修饰肝癌细胞株HepG2细胞, 用流式细胞术检测修饰的HepG2细胞上CD80的表达.将修饰的HepG2细胞与健康人外周血淋巴细胞混合后进行培养, 分别应用MTT比色法、乳酸脱氢酶释放试验; 检测经CD80-IgG1 Fc段融合蛋白修饰的HepG2细胞对外周血淋巴细胞增殖及其细胞毒性的影响.结果: CD80-IgG1 Fc段融合蛋白可有效地结合于HepG2细胞膜上, 结合的量在一定范围内与融合蛋白的浓度呈正相关(P＜0.05).融合蛋白修饰的HepG2细胞可明显刺激外周血淋巴细胞活化增殖并增强CTL的细胞毒活性(P＜0.05).结论: CD80在抗肿瘤免疫中起着重要作用, 用CD80-IgG1 Fc段融合蛋白修饰的HepG2肿瘤细胞能明显增强淋巴细胞的特异性抗肿瘤免疫, 为CD80用于肿瘤免疫治疗的研究提供了实验依据.
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野生型p53基因在人肝癌细胞的表达及诱导其凋亡
目的: 探讨外源性野生型p53基因(wt-p53)对人源性肝癌细胞系生物学的影响.方法: 用脂质体转染法将真核表达质粒p53-pcDNA3转染人源性肝癌细胞系HepG2中, 用G418筛选细胞; 用生物素标记p53的cDNA探针, 通过RNA原位杂交方法, 检测p53-pcDNA3在细胞中的表达; 用流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡指数.结果: G418筛选出了阳性转染细胞; RNA原位杂交显示HepG2的胞质成棕黄色, 证明了p53的表达; FCM检测表明, 转染p53-pcDNA3的HepG2细胞, 其增殖能力下降, 细胞凋亡指数由转染前的10.03%上升为54.17%.结论: 外源性wt-p53可通过脂质体转染法在HepG2细胞中成功表达, 并诱导其发生凋亡, 有较好的临床应用前景.
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终末期肾病患者Th1/Th2型细胞因子的特征与外周血T细胞凋亡的关系
目的: 研究终末期肾病(ESRD)患者Th1/Th2型细胞因子的特征及其与外周血T细胞凋亡的关系, 并探讨不同透析膜对T细胞凋亡的影响.方法: 应用流式细胞术检测10例ESRD未透析(ND)患者, 维持性血液透析的患者45例, 分别采用醋酸纤维素膜(CA)、低通聚砜膜(PS-LF)、高通聚砜膜(PS-HF)进行透析, 以及8例健康对照组(HC)的外周血T细胞, 经PHA刺激培养24 h后锚定蛋白(Annexin V)的表达.用ELISA法检测细胞培养上清IFN-γ及IL- 4的水平.结果: ESRD患者未透析组及3种膜透析组T细胞Annexin V的表达高于健康对照组(P＜0.05) .各透析组患者T细胞Annexin V的表达以CA组高, PS-HF组低, 组间比较具有统计学意义(P＜0.05); ESRD患者各组IFN-γ的水平均低于健康对照组(P＜0.05), 与Annexin V的表达呈负相关; IL- 4的水平高于健康对照组(P＜0.05), 与Annexin V的表达呈正相关.结论: ESRD患者存在Th型细胞因子的失衡, 呈Th2型细胞因子占优势, T细胞的凋亡增加.
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FcγRⅡB1介导的信号传导异常与SLE患者B细胞的过度活化
目的: 观察系统性红斑狼疮(SLE)患者B细胞表面功能分子表达的特征及其功能状态, 评价以FcγRⅡB1(CD32)为代表的B细胞自身抑制调节机制在SLE发病中的作用.方法: 采用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞(PBMC), 并以免疫磁珠法(MACS)分离纯化B细胞.采用荧光分光光度法检测B细胞受不同激活物刺激后细胞内钙([Ca2+]i)的反应.用ELISA法检测B细胞与刺激物共同培养后所分泌IgG的量.采用流式细胞术及间接免疫荧光染色法, 检测B细胞膜表面CD32、 CD19及IgM的表达水平.结果: (1)以羊抗人μ链的F(ab′)2片段及完整IgG分别刺激SLE患者B细胞时, 其[Ca2+]i反应的比值显著低于类风湿性关节炎(RA)患者(P＜0.05)及正常人对照(P＜0.01).(2)分别用葡萄球菌A蛋白(SPA)单独刺激与SPA和羊抗人μ链的完整IgG抗体共同刺激SLE患者的B细胞所分泌的IgG的比值, 明显低于RA患者及正常人对照组(P＜0.05).(3)SLE患者与RA患者及正常对照组B细胞上CD19、 CD32及IgM的表达无统计学意义(P＞0.05).结论: SLE 患者B细胞上CD32抑制性信号传导的异常, 可能是导致B细胞过度活化的重要机制.
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白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠角膜移植物中细胞凋亡的影响
目的: 观察急性排斥反应期大鼠角膜移植物中细胞的凋亡, 探讨白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)对细胞凋亡的影响.方法: 建立大鼠穿透性角膜移植模型.实验分为4组, 即正常Wistar大鼠(A组), 同基因(Wistar大鼠→Wistar大鼠)角膜移植组(B组), 同种异体(Wistar大鼠→SD大鼠)角膜移植生理盐水处理组(C组)及IL-1ra治疗组(D组).应用TUNEL染色法, 检测术后7、 10及14 d各组角膜植片中细胞的凋亡, 并对染色结果采用全自动图像分析系统处理后, 计算阳性单位(PU)值.制备正常角膜及角膜植片的电镜标本, 在透射电镜下观察角膜植片中细胞超微结构的变化.结果: (1)C组角膜植片的平均存活时间为(10.38±1.85) d; 而D组为(13.56±1.94) d, 二者差异具有统计学意义(P＜0.01).(2)与正常角膜和未发生排斥反应的角膜植片相比较, 发生排斥反应的角膜植片中细胞的超微结构改变主要表现为细胞凋亡和细胞坏死共存的特征.(3)正常角膜上皮细胞层中仅有极少数凋亡的细胞, 基质层及内皮细胞层中几乎无凋亡的细胞.术后1周, B、 C和D组的角膜植片中的各层中均可见散在的细胞凋亡, 各组的平均PU值差异无统计学意义(P＞0.05).急性排斥期C组和D组的角膜植片在伤口附近及中央区凋亡的细胞均明显增多, 尤其是C组, 凋亡的细胞主要集中在上皮细胞基底层及浅层基质.结论: 在角膜移植免疫排斥反应中细胞凋亡发挥着重要作用.IL-1ra可通过抑制角膜植片中细胞的凋亡进而抑制角膜移植免疫排斥反应, 而延长植片的存活时间.
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重组人Ⅱ型胶原250-270多肽对特异性体液免疫的抑制作用
目的: 研究口服重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(CⅡ250-270)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠特异性体液免疫反应的抑制作用, 为应用口服CⅡ250-270治疗类风湿关节炎提供理论依据.方法: ELISA测定加强免疫后小鼠血清中抗原特异性抗体的表达, ELISPOT检测小鼠脾脏淋巴细胞中抗原特异性抗体形成细胞.结果: 口服重组人CⅡ250-270小鼠血清中抗CⅡ和抗CⅡ250-270的IgG抗体水平[A值分别为(0.82±0.02)、 (0.84±0.04)]比CⅡ免疫对照组[抗CⅡ的IgG抗体水平, A值为(1.01±0.06)]显著降低, 而且特异性抗CⅡ250-270的IgG抗体反应在口服多肽组被明显抑制(P＜0.01); 口服重组人CⅡ250-270小鼠的CⅡ和CⅡ250-270特异性抗体形成脾细胞的增殖频率分别为(158±9 计数/孔)、 (181±10 计数/孔), 比CⅡ免疫对照组[CⅡ特异性抗体形成脾细胞的增殖频率为(247±16计数/孔)]也显著减少(P＜0.05).结论: 口服重组人CⅡ250-270多肽具有抑制CIA小鼠的特异性体液免疫的作用, 可能是此疗法治疗CIA多发性关节炎的重要机制.
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缺氧-复氧诱导HK-2细胞黏附窒息新生儿中性粒细胞的作用机制
目的: 探讨在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)情况下, 人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)对窒息新生儿中性粒细胞黏附作用的影响及其胞内信号传导机制.方法: 以人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象, 实验共分为6个组: 缺氧4、 12、 24 h组和缺氧24 h后复氧4、 12、 24 h组, 每个实验组均设立空白对照组和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组.采用液体石蜡覆盖法造成缺氧环境, 分别对上述各组用生化法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量、测细胞悬液中髓过氧化物酶(MPO)活性, 判断肾小管上皮细胞介导窒息新生儿中性粒细胞的黏附能力; 免疫组化法检测HK-2细胞ICAM-1的表达.结果: 与对照组相比, HK-2细胞经过缺氧/复氧处理后, LDH含量升高, MPO活性增加, 细胞膜表面的ICAM-1表达明显增高, 在缺氧24 h达高峰, 具有统计学意义(P＜0.05), 而PDTC干预组上述指标, 无统计学意义(P＞0.05).结论: 缺氧/复氧可刺激人近曲肾小管上皮细胞诱导窒息新生儿中性粒细胞黏附作用, 其胞内信号机制可能涉及到NF-κB活化,进而诱导小管上皮细胞表面ICAM-1表达和合成增多.
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人工肝技术治疗前后慢性重症乙肝患者血清IL-18、总胆红素的变化及其临床意义
目的: 检测人工肝治疗前、后, 重症乙型肝炎患者血清IL-18、总胆红素、γ-球蛋白(γG) 水平的变化, 分析人工肝技术清除病理性有害物质的功能.方法: 34例慢性重症乙型肝炎患者分为两组, 18例为人工肝治疗组, 进行人工肝+内科综合治疗; 16例为对照组, 只进行内科综合治疗, 血清IL-18、总胆红素及γG的水平, 分别采用ELISA法、 BeckmanCX4生化仪及Sebia电泳仪进行检测.结果: 人工肝治疗组治疗前、后, 血清IL-18的含量分别为(499.11±230.24)ng/L和(313.78±83.28)ng/L, 差异显著(P＜0.05); 对照组治疗前、后血清IL-18的含量分别为(477.89±163.79) ng/L和(373.73±148.41) ng/L, 差异无统计学意义(P＞0.05).人工肝治疗组治疗前、后, 血清总胆红素含量的均值分别为(555.01±17.81) μmol/L和(305.92±62.19) μmol/L; 差异显著(P＜0.05).血清γG均值分别为(23.8±12.41) g/L和(22.47±2.28) g/L, 无统计学意义(P＞0.05).对照组治疗前、后血清总胆红素含量的均值分别为(543.12±21.77) μmol/L和(513.55±15.58) μmol/L; 血清γG均值分别为(21.66±13.48) g/L和(21.96±5.88) g/L, 均无统计学意义(P＞0.05).结论: 人工肝技术可有效地清除重肝乙肝患者体内IL-18、总胆红素等病理性物质, 提高患者的存活率, 为肝移植的治疗争取了时间.
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尿中IL-18水平与狼疮性肾炎肾脏病理改变参数关系的评估
目的: 探讨尿中IL-18的水平与狼疮性肾炎(LN)肾脏病理改变参数之间的关系.方法: 应用ELISA法测定19例正常人和55例LN患者晨间自由尿及24 h尿中IL-18的水平, 应用直线相关分析法分析晨间自由尿及24 h尿中IL-18的水平与LN肾脏病理改变的参数, 即活动指数(AI)和慢性指数(CI)的相关性.结果: LN组晨间自由尿及24 h中IL-18的水平均较正常对照组显著增高.两组晨尿中IL-18的水平分别为: (247.1±317.5) ng/L和(20.3±14.5) ng/L (P＜0.001); 24 h尿中IL-18的水平分别为(192.1±170.1) ng/d和(21.0±3.8) ng/d (P＜0.001), 晨间自由尿及24 h尿中IL-18的水平, 均与LN病理改变参数AI呈密切正相关(晨尿: r=0.602, P＜0.001; 24 h尿: r=0.461, P＜0.005); 但二者均与病理改变参数CI无相关性(P＞0.05).按AI值将LN患者分为高、中、低3个组, 各组尿中IL-18的水平差异显著.晨尿中分别为: (69.2±82.7) ng/L、 (193.5±106.1) ng/L和(580.7±453.1) ng/L (P＜0.001); 24 h尿中分别为(103.5±141.4) ng/d、 (188.8±124.0) ng/d和(333.1±183.2) ng/d.结论: 检测晨间自由尿中IL-18的水平很简便, 可作为评估LN肾脏病理活动程度的一种好方法.
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抗肿瘤转移相关蛋白Memo抗体的制备及组织表达谱分析
目的: 制备抗Memo蛋白的特异性抗体, 并鉴定其特异性, 检测其在小鼠组织中的表达.方法: 在大肠杆菌中表达GST-Memo融合蛋白, 常规免疫小鼠制备抗体.构建了带有FLAG标签的真核表达载体pcDNA3-FLAG-Memo.用Western blot检测抗体的特异性.结果: 构建了Memo的真核表达载体pcDNA3-FLAG-Memo, 制备的抗Memo抗体能特异性地识别Memo蛋白.Western blot检测表明, Memo蛋白在不同的小鼠组织中都有一定程度的表达.结论: 成功地获得抗Memo蛋白的特异性抗体并检测了其组织表达谱, 为进一步研究其与恶性肿瘤的转移性、侵袭性的关系及其相关机理的研究提供了重要的制剂.
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人源性抗角蛋白抗体Fab段在巴氏毕赤酵母菌中的表达及表达条件的优化
目的: 用巴氏毕赤酵母表达抗角蛋白抗体Fab段并优化表达条件.方法: 将抗角蛋白人Fab原核表达载体p3MH/Fab中的κ链和Fd段基因, 分别亚克隆到酵母菌表达载体pPIC9K和pPICZαA中, 构建成重组质粒pPIC9K/L和pPICZαA/Fd并测序鉴定.将重组质粒pPIC9K/L和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上, 经G418和Zeocin筛选得到高拷贝的转化子.对Mut表型鉴定后, 优化pH及甲醇浓度等表达条件.结果: 优化表达条件后, 成功地表达抗角蛋白Fab段抗体.Western blot分析证实, 表达产物具有良好的角蛋白结合活性和特异性.结论: 人源性抗角蛋白Fab段抗体在巴氏毕赤酵母菌中获得成功表达, 为其进一步的应用研究打下了基础.
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IgA类单克隆抗体血型定型试剂的实验室研究及临床应用
目的: 用实验室手段和大样本临床验证方法, 研究IgA类抗血型单克隆抗体(mAb)用作人血型定型试剂的可行性.方法: 根据<中国生物制品规程>、新药临床验证以及有关要求, 检测规模化生产的mAb的有关指标, 并在人群中用反向定型等方法进行验证.结果: 所有指标均达到或超过国家标准, 临床应用未出现错判和误判.结论: 所生产的mAb完全可以用于中国人ABO血型定型.
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抗人DR5抗体mDRA- 6细胞毒作用机制分析
目的: 探讨鼠抗人DR5 单克隆抗体(mAb)mDRA- 6对Jurkat 细胞的细胞毒作用及其机制.方法: 以流式细胞术测定mAb mDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用和细胞凋亡作用, 以及caspase 8、 9的抑制剂对mAb mDRA- 6诱导的Jurkat 细胞凋亡的影响.在荧光显微镜下, 观察mAb mDRA- 6对Jurkat细胞形态的影响.以琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞中的DNA片段化.结果: mAb mDRA- 6对Jurkat细胞具有显著的细胞毒作用, 并呈剂量和时间依赖性.经mAb mDRA-6处理后, Jurkat细胞可出现典型的细胞凋亡的形态特征: 细胞膜皱缩, 出泡, 染色质浓缩, 形成凋亡小体等.经mAb mDRA- 6处理后, Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂, 并可导致Jurkat细胞中的DNA片段化.caspase 8的抑制剂可明显抑制mAb mDRA-6诱导的Jurkat 细胞凋亡, caspase 9的抑制剂的影响很小.结论: mAb mDRA- 6可通过死亡受体信号传导途径诱导Jurakt细胞凋亡, 对Jurkat 细胞产生细胞毒作用, 其在以TRAIL/DR5系统进行的肿瘤治疗和探讨DR5功能结构域方面具有广阔的应用前景.
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FHL1抗体的制备与特异性鉴定
目的: 制备FHL1及其剪接体FHL1B、 FHL1C的多克隆抗体, 并对其特异性进行鉴定.方法: 融合表达GST-FHL1蛋白, 常规免疫小鼠, 制备多克隆抗体.分别构建带有FLAG标签的FHL1-5、 FHL1B、 FHL1C以及FHL1 N端和C端缺失突变体的真核表达载体.Western blot检测抗体的特异性.结果: 获得了FHL1-5、 FHL1B、 FHL1C及FHL1(1-169 aa)和FHL1(168-280 aa)的真核表达载体; 得到的多克隆抗体可特异识别FHL1、 FHL1B和FHL1C, 而不识别FHL2-5; 抗体与FHL1 N端反应, 而不与其C端反应.结论: 成功得到可特异识别FHL1、 FHL1B和FHL1C的多克隆抗体, 为进一步研究FHL1及其剪接突变体的功能奠定了坚实的基础.
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抗O型口蹄疫病毒VP1单克隆抗体的制备与鉴定
目的: 制备抗O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白VP1的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法: 以自行构建表达的O型FMDV-VP1表位重组蛋白(VP1epi)为抗原免疫BALB/c小鼠, 按常规方法进行细胞融合.采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株, 用Western blot、间接ELISA和斑点免疫测定法对mAb的特异性进行鉴定.结果: 成功地获得1 株分泌抗VP1epi重组蛋白mAb的杂交瘤细胞株"C7", 其分泌的mAb为IgG1亚类, 能特异性地识别VP1epi重组蛋白, 其腹水效价可达1∶ 12 800.斑点免疫测定法显示, 该mAb能很好地识别灭活的FMDV.结论: VP1epi重组蛋白可代替FMDV制备抗天然FMDV-VP1的mAb.抗O型FMDV-VP1 mAb的成功制备, 为进一步研究开发新型FMDV的检测方法奠定了基础.
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抗志贺样毒素Ⅱ型变异体单克隆抗体的制备及特性鉴定
志贺样毒素Ⅱ变异体(SLT-Ⅱe)是猪水肿病的主要致病因子之一, 为了制备SLT-Ⅱe单克隆抗体(mAb), 我们从TB1菌中用多粘菌素诱导提取了SLT-Ⅱe蛋白, 并且用硫酸铵盐析沉淀法对该蛋白进行了提纯, 以提纯蛋白免疫BALB/c小鼠, 利用杂交瘤细胞技术制备mAb.细胞融合后, 培养上清经间接ELISA检测, 共得到3株阳性杂交瘤细胞2E11、2H9和4F3, ELISA效价分别为1∶ 213、1∶ 213和1∶ 28, 3株杂交瘤细胞培养上清分泌的mAb在Western blot试验中均与提纯的毒素蛋白反应, 在Vero细胞中和试验中均能够中和毒素对Vero细胞的毒性作用, 从而为临床分离株SLT-Ⅱe产生的免疫学检测方法奠定了一定的基础.
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多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用
目的: 构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库.方法: 从正常人外周血中分离淋巴细胞, 以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因, 以重叠延伸PCR将VH、 VL组装成scFv基因, 并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中.以pCANTAB-5E电转化大肠杆菌TG1, 构建人源天然噬菌体抗体库, 测序分析抗体基因的家族信息和多样性, 并用多种抗原对其进行筛选.结果: 获得了库容为2×108的人源天然噬菌体抗体库.分别用5种抗原对其进行筛选, 均可获得特异性噬菌体抗体的富集.结论: 成功地构建了一个多样性良好的人源天然噬菌体抗体库, 可用于制备具有应用前景的人源抗体.
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人促血液血管细胞生成素的原核表达及兔抗体的制备
目的: 表达人促血液血管细胞生成素(hemangiopoietin, HAPO)蛋白并制备兔抗HAPO抗体.方法: 利用硫氧还原蛋白TrxA融合表达载体(pET32c), 表达可溶性HAPO.表达的HAPO融合蛋白经亲和层析快速纯化, 并通过Western blot进行鉴定.以纯化的人HAPO免疫新西兰大白兔, 制备抗体并测定其效价.结果: 获得高效表达并纯化的HAPO蛋白.制备的兔抗人HAPO抗体的免疫双扩散的效价为1∶ 8.结论: 建立了HAPO基因的原核表达载体和快速纯化体系并制备出兔抗HAPO的抗体, 为研制检测HAPO的ELISA试剂盒奠定了基础.
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盐析与疏水电荷诱导层析相结合快速纯化单克隆抗体
目的: 建立一种简便、快速纯化抗体的疏水电荷诱导层析(HCIC)方法.方法: 小鼠腹水先经硫酸铵沉淀处理, 然后经HCIC后得到单克隆抗体(mAb), 纯化的mAb的活性用间接ELISA法测定.同时比较了不同pH洗脱液对mAb纯度的影响.结果: 用pH为4.5的洗脱液进行洗脱, 获得的mAb纯度大于90%, 总的回收率为65%.结论: 盐析与HCIC相结合的抗体纯化法, 纯度高、生物活性好, 适合在基层实验室推广.
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灵芝孢子抗肿瘤的作用机制
灵芝是担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科(polyproraceae)灵芝属(Ganoderma)真菌.据考查约有200余种, 按其外部形态及颜色分类, 可分为青芝、赤芝、黄芝、白芝、黑芝和紫芝6类, 一般以赤芝(G.lucidum Karst)为代表种.灵芝作为一种药用真菌, 我国东汉时期的<神农本草经>就将它列为上药, 其有效成分如多糖类、三萜类具有广泛的药理作用而用于多方面的医疗保健中.近年来, 随着人工栽培技术和孢子破壁技术的发展, 得其孢子作为灵芝又一药用部位逐渐为人们所认识, 对灵芝孢子的研究也日益增加.大量的研究表明灵芝孢子具有显著的抑制肿瘤细胞生长和抗肿瘤作用.本文中将近年来国内外在这方面的研究作一简要综述.
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转基因植物口服疫苗研究的新进展
人和动物的许多疾病是通过病原微生物与消化道、呼吸道和生殖道的表面黏膜接触引起的, 如乙型肝炎、伤寒、霍乱、痢疾和胃肠炎等.在发展中国家, 因为缺少资金购买或生产昂贵的疫苗和医疗设备, 患病情况尤为严重.用植物作为生物反应器来生产重要的、有经济价值的药用蛋白, 不需要通过常规发酵反应器, 仅仅依赖于农业, 其成本低廉, 容易形成规模生产, Fischer等将此技术特称为"分子农业".目前, 已成功研制出多种转基因植物生产的医疗药用多肽和蛋白质, 尤其是作为口服疫苗在动物和临床应用中的试验成功, 提示这种新的用药途径将对人类的健康起到重大的作用.
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肝细胞极化的基础与临床研究现状
肝细胞是体内具有高度极化特征的细胞.正常的极化对于肝细胞发挥各种生理功能至关重要.肝细胞膜分为3个膜区, 极化的两极分别为面向血窦的基底侧肝窦膜和面向胆管的顶部毛细胆管膜, 连接相邻肝细胞的称为侧膜.不同膜区内包含特异的蛋白质或脂质.肝细胞在极化的产生和保持过程中需要细胞内特殊的分选机制和转运途径.本文中就近几年来有关肝细胞极化结构基础、发生机制及病理情形等研究现状和进展进行讨论, 在细胞水平探讨多种肝病发生机制, 为临床治疗提供理论基础.
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Notch信号途径: T细胞功能调控的新通路
Notch受体及其配体组成了脊椎动物和无脊椎动物胚胎发育中高度保守的Notch信号途径.近年来研究发现, Notch及其介导的信号转导与免疫系统也存在着密切的关系, 从多个方面参与T细胞功能的调控, 包括T细胞的活化和增殖, 细胞因子分泌和Th1/Th2分化, 也参与调节性T细胞的产生、扩增和功能发挥等.这说明, Notch信号途径不仅参与免疫系统发育, 同时在成熟的免疫细胞功能调节中也具有重要的作用.
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βig-h3对肝癌细胞黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶的影响
目的: 研究βig-h3对肝癌细胞SMMC-7721黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶(MMP)的影响.方法: 通过黏附、侵袭及明胶酶谱实验, 检测瞬时分别转染βig-h3基因和转染空载体的SMMC-7721细胞的黏附、侵袭能力和分泌MMP的变化.结果: 转染βig-h3基因的SMMC-7721细胞的黏附率、侵袭率及MMP-2、 MMP- 9的分泌量, 均明显高于转染空载体的SMMC-7721细胞.结论: βig-h3具有促进肝癌细胞浸润和转移的作用, 是肝癌发生发展过程中的促进因子.
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STAT5和Bcl-xl在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性分析
目的: 分析信号转导与转录激活因子5(Signal transducer and activator of transcripton 5, STAT5)与Bcl-xl(B-cell Lymphoma/Leukemia-xl)在非小细胞肺癌和肺正常组织中的表达及关系, 以进一步探讨STAT5和Bcl-xl与非小细胞肺癌发生与发展的关系.方法: 利用SABC免疫组织化学技术检测42例非小细胞肺癌(NSCLC)组织及15例肺正常组织中STAT5和Bcl-xl的表达.结果: (1)STAT5和Bcl-xl 在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于肺正常组织(P＜O.05).(2)STAT5和Bcl-xl的表达水平与非小细胞肺癌组织学类型有关, 在腺癌组织中的表达明显高于鳞癌, 与性别、年龄、肿瘤大小、组织分化程度、 TNM分期及淋巴结转移无关. (3)STAT5与Bcl-xl的表达呈显著正相关.结论: 本组资料提示STAT5与Bcl-xl可能在肺癌的发生发展中发挥重要作用, Bcl-xl的表达可能直接由STAT5调控.由此可望寻找到新的非小细胞肺癌的诊断方法和治疗靶点.
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鼠肝星状细胞的分离培养和鉴定方法
1982年, Knook等[1]成功地分离出肝星状细胞 (hepatic stellate cell, HSC).目前认为, HSC在肝纤维化的进程中起重要的作用[2].在慢性损伤因素(如病毒性慢性肝炎、酒精等)的持续作用下, 肝内大量分泌细胞因子, 其中主要的有肿瘤生长因子(tumor growth factor-β, TGF-β)、血小板源生长因子(platelet- derived growth factor, PDGF)等, 可使静止的HSC活化、增殖并产生大量的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)沉积于肝组织.同时, 细胞的表型也向成纤维样细胞转变, 组织学上表现为细胞内维生素A脂滴减少, 细胞多极化, 细胞质内微管微丝增多.功能上除产生大量的ECM之外, 还具有趋化性和收缩性.由于HSC在肝纤维化中的特殊性地位, 许多研究肝纤维化的学者都将目光集中于HSC, 因而体外分离、纯化和鉴定HSC显得尤为重要.但由于HSC比重与kupffer细胞、肝窦内皮细胞接近, 且易与肝细胞相吸附, 导致分离及纯化较难, 使之局限于肝原位组织、形态学的研究.近年来肝星状细胞的体外分离、纯化、培养和鉴定的方法有了很大进展, 迄今为止亦出现多种改良的HSC鉴定方法, 现综述如下:
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猪肌卫星细胞的分离培养及鉴定
目的: 建立一种有效的猪肌卫星细胞分离、培养及鉴定体系.方法: 取仔猪3只, 从三角肌群处切取骨骼肌, 分别用链霉蛋白酶、胰酶及胶原酶消化组织.用差速贴壁法纯化肌卫星细胞, 并比较3种酶消化所获得的细胞数和细胞的存活率.后采用Desmin免疫组化和MyoG和MyoD的RT-PCR鉴定肌卫星细胞.结果: 链霉蛋白酶消化所得肌卫星细胞数显著高于胰酶和I型胶原酶.3种酶消化所得细胞的存活率都较高, 无明显差异.Desmin免疫组化染色法的结果表明, 链霉蛋白酶消化所得肌卫星细胞中95%呈阳性反应.RT-PCR也检测到MyoG和MyoD的表达.结论: 链霉蛋白酶消化法是一种简便、高效分离猪肌卫星细胞的方法.
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金黄色葡萄球菌SPA基因的克隆、表达及纯化
目的: 构建携带Staphylococcal protein A (SPA)基因的原核表达载体, 诱导表达具有活性的SPA.方法: 用PCR从金黄色葡萄球菌基因组中扩增SPA基因并克隆入pET32a(+)载体中, 在大肠杆菌BL21〈DE3〉中表达.表达产物经亲和层析进行纯化.结果: 所构建的原核表达载体为高效表达载体, 工程菌表达的SPA约占菌体总蛋白的40%, 经亲和层析纯化后获得SPA, 纯度达到99%.结论: 成功地建立了制备及纯化SPA的方法, 为SPA大量生产以及构建SPA融合表达体系奠定了基础.
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Th17细胞:一种新的效应CD4+T细胞亚群
当CD4+ T细胞被激活以后, 通过不同的分化途径获得特定的生物学功能.根据产生细胞因子和生物功能的不同, 传统上将CD4+ T细胞分为Th1和Th2细胞亚群.Th1细胞产生IFN-γ和IL-2, 通过活化巨噬细胞清除胞内病原微生物并介导迟发型变态反应; Th2细胞产生IL- 4、IL-5和IL-13, 介导由嗜酸性粒细胞引起的炎性反应, 清除细胞外病原微生物并参与变态反应.IFN-γ和IL- 4相互拮抗, 调控着Th1和Th2细胞的扩增和功能.近研究发现一类不同于Th1和Th2的细胞亚群, 此亚群细胞产生IL-17、IL-6和TNF-α而不产生IFN-γ和IL- 4, 被称为Th17细胞亚群[1,2].Th17细胞介导炎性反应(防御胞外病原菌的感染)、自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥等的发生和发展.Th17细胞亚群的分化和功能均受Th1和Th2细胞因子的调控[3].在此拟就Th17细胞的分化、调控和生物学功能做一综述.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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