细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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嗜肺军团菌免疫原蛋白核酸疫苗诱导的小鼠免疫应答及其保护力
目的:研究嗜肺军团菌免疫原蛋白核酸疫苗诱导的小鼠免疫原性以及对LP感染小鼠的保护能力.方法:用嗜肺军团菌免疫原蛋白基因真核表达重组质粒pcDNA3.1-ip作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠, 检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、 IFN-γ产生水平和CTL特异杀伤活性等指标, 以评价疫苗的免疫原性.真核表达重组质粒pcDNA3.1-ip DNA疫苗重复免疫BALB/c小鼠2次, 末次免疫2周后, 用10倍LD50剂量攻击小鼠, 计数小鼠的存活数及小鼠肺中的细菌数, 观察感染鼠的肺部病理变化.结果:pcDNA3.1-ip免疫小鼠后诱导产生了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答, 免疫组的免疫原性和免疫保护性均高于对照组pcDNA3.1(+)组(P<0.01).结论:免疫原蛋白基因可作为嗜肺军团菌核酸疫苗的侯选基因.
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IFN-α和IFN-γ逆转MR2细胞维甲酸耐药的实验研究
目的:探讨IFN-α和IFN-γ与全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)联合逆转MR2细胞对ATRA耐药的可能性及其机制.方法:IFN-α、 IFN-γ及ATRA单独或两种IFN分别与ATRA联合作用于对ATRA耐药的细胞株MR2后, 采用MTT比色法检测细胞的增殖, 用光镜观察、 NBT还原实验及流式细胞仪检测细胞的分化, 用间接免疫荧光法检测早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia, PML)蛋白的表达.结果:两种IFN均能抑制MR2细胞的增殖; IFN与ATRA联合应用时抑制作用更加显著; 但两种IFN无论是单独应用还是与ATRA联合应用, 二者之间均无统计学意义(P>0.05).两种IFN也能诱导MR2细胞发生一定程度的分化; 二者分别与ATRA联合应用时作用更加显著, 但IFN-γ+ATRA组诱导MR2细胞分化的作用明显强于IFN-α+ATRA组(P<0.05).两种IFN都能诱导PML蛋白的表达.结论:IFN-γ与ATRA联合应用逆转MR2细胞对ATRA耐药的作用强于IFN-α与ATRA的联合, 可能与IFN-α和IFN-γ信号传导途径的不同有关.
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桑色素对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响
目的:研究桑色素(morin)对小鼠T淋巴细胞活化、增殖和细胞周期的影响.方法:以刀豆蛋白A(ConA)刺激培养的淋巴结来源的小鼠淋巴细胞, 再以不同终浓度的morin与T细胞共培养, 利用流式细胞术(FCM), 检测早期T细胞活化的标志CD69分子的表达, 以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色检测T细胞的增殖; 以碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期.结果:小鼠T细胞培养6 h后, 未经ConA刺激的对照组中CD69+T的细胞比率为(2.97±0.12)%, 经ConA刺激的CD69+T细胞的比率明显增高, 达到(72.52±0.66)%, 与对照组相比差别明显(P<0.01).终浓度为25、 50、 100 μmol/L的morin均下调CD69+T细胞的比率, 其中, 100 μmol/L的morin抑制作用强, 为(48.95±0.81)%, 与对照组比较具有统计学意义(P<0.01).CFDA-SE染色分析显示, ConA组培养48 h和72 h的T细胞的增殖指数(PI)分别为(1.58±0.04)和(1.95±0.02), 各浓度的morin对ConA刺激的T细胞增殖, 具有明显地抑制作用, 以100 μmol/L的morin抑制作用明显.培养48 h的ConA组T细胞的PI为(1.02±0.02)、培养72 h的ConA组T细胞的PI为(1.03±0.01), 与相应时间的对照组比较, 均有统计学意义(P<0.01).PI染色后流式细胞术分析的结果表明, ConA组处于S期的T细胞的比率为(27.05±0.39)%, 显著高于对照组的比率(5.10±0.07)%.morin组中S期的细胞比率较高. 结论:Morin可显著抑制ConA刺激的T细胞活化及增殖; 其对增殖的抑制作用主要表现为S期的细胞的阻滞.
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激动型抗4-1BB抗体3H3交联促进CD8+T细胞中Akt激酶活性
目的:研究4-1BB信号促进CD8+ T细胞增殖、存活及Akt活性的变化.方法:利用小鼠CD8α+ T细胞磁珠负性分选试剂盒制备高纯度CD8+ T细胞, 并通过体外抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激活化CD8+ T细胞.再通过流式细胞术(FCM)分析3H3交联与否, 四唑盐(WST-1)/ECS检测CD8+ T细胞的增殖程度, Annexin V检测抗凋亡能力, 免疫印迹法分析胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性.结果:3H3交联可以明显促进活化的CD8+ T细胞增殖和存活, 并且3H3介导的4-1BB信号可明显促进CD8+ T细胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性.结论:Akt途径可能参与了3H3交联介导的4-1BB信号对CD8+ T细胞增殖与存活的调节效应.
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转染人BTLA基因细胞株的建立及其生物学功能的初步研究
目的:构建B、 T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因转染的细胞作为免疫原, 并探讨该基因转染细胞在体外的生物学功能.方法:通过RT-PCR法从经PHA活化的人外周血T细胞中克隆出人BTLA编码区全长基因, 经EcoR I和BamH I双酶切后插入逆转录病毒载体pEGZ-Term中构建成重组载体pEGZ-Term/BTLA.用脂质体法以重组逆转录病毒载体转染293T细胞, 并用Zeocin抗生素进行长期筛选; 流式细胞术分析BTLA在基因转染细胞膜上的表达; 通过MTT法和流式细胞术探讨基因转染细胞在体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响.结果:流式细胞术检测表明BTLA基因转染的293T细胞膜上能稳定地高表达人BTLA蛋白.BTLA基因转染的293T细胞和T细胞体外共培养显示, 与未转染的293T细胞相比, 该基因转染的细胞能部分地抑制抗人CD3单克隆抗体(mAb)刺激的T细胞增殖; 流式细胞术和ELISA法分析揭示, 该基因转染的细胞能够下调T细胞表面活化标志CD25的表达并降低IFN-γ和IL-10 的分泌.结论:获得稳定高表达人BTLA基因转染的细胞株.该细胞株在体外对抗人CD3 mAb刺激的T细胞的增殖与活化具有部分地抑制作用.
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人IL-10基因的克隆表达及表达产物活性的初步鉴定
目的:构建含人IL-10全基因序列的原核表达载体, 并进行表达及产物活性的鉴定.方法:利用RT-PCR方法, 从人肝癌细胞系HepG2的总RNA中扩增IL-10的全长编码序列.编码序列经测序验证后, 将其克隆入表达载体PET-28 a(+), 构建IL-10基因的重组原核表达载体.在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白, 表达产物采用Western blot和ELISA进行鉴定.结果:表达产物主要位于包涵体内.经Western blot分析和ELISA检测显示, 表达产物的相对分子质量(Mr)同预期的结果相符, 有结合抗体活性.结论:成功地扩增人IL-10全基因序列, 并构建了含该基因序列的原核表达载体, 在大肠杆菌中高效表达的表达产物具有抗原活性, 为下一步制备抗IL-10的单克隆抗体(mAb)提供了必要的前提.
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构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体并在HEK293-16工程细胞株中定点整合表达
目的:构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体, 并在HEK293-16工程细胞株中定点整合表达.方法:用PCR法扩增肝癌相关抗原HAb18G胞外段基因, Sac I/Not I双酶切后插入真核表达载体pCEL2f中, 构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体基因的重组表达载体pCEL2f/HAb18GEF, 并经酶切和测序验证.将此重组表达载体与POG44载体(按1∶9的比例混合后), 在阳离子脂质体介导下共转染HEK293-16工程细胞, 用潮霉素B筛选定点整合表达EpoR/LR-F3/HAb18GEF cDNA的细胞克隆.用间接免疫荧光染色法、流式细胞术及Zeocin致死试验, 检测并验证稳定表达株中EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体的表达.结果:成功地构建pCEL2f/HAb18GEF真核重组表达载体, 共转染后EpoR、 HAb18GEF均高效表达于转染的HEK293-16细胞的胞膜上.经潮霉素B筛选得到12株可融合高表达EpoR/LR-F3/HAb18GEF的稳定株, 其表达EpoR的阳性率为99.93%, 平均荧光强度(MFI)为1036.39, 表达HAb18GEF的阳性率为99.51%, MFI为652.72, 且可被Zeocin致死.结论:成功地建立了表达EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体的HEK293-16工程细胞株, 为进一步利用哺乳动物蛋白质-蛋白质相互作用陷阱(MAPPIT)系统筛选HAb18G的作用受体奠定了基础.
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杜氏利什曼原虫amastin基因重组真核表达质粒的构建与表达
目的:构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白(amastin)编码基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin, 并研究其在NIH3T3细胞中的表达.方法:提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增.将扩增的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒pcDNA3.1(+)中, 构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin.以pcDNA3.1-amastin转染NIH3T3细胞, 采用免疫荧光染色法和RT-PCR分别鉴定pcDNA3.1-amastin的瞬时表达和稳定表达.结果:在细胞膜和细胞内均观察到较强的绿色荧光, 表明pcDNA3.1-amastin成功地转入NIH3T3细胞, 并在细胞膜和细胞内获得短暂表达.稳定转染的NIH3T3细胞的总RNA经反转录后, 用PCR扩增出无鞭毛体蛋白基因, 表明获得了稳定表达.结论:成功地构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的真核表达重组质粒, 并且该基因在NIH3T3细胞中获得了稳定表达.
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RNA干扰抑制MyD88表达对小鼠骨髓树突状细胞生物学活性的影响
目的:采用RNA干扰技术抑制小鼠骨髓树突状细胞(DC)髓样分化因子88(MyD88)的表达, 并检测其对细胞生物学活性的影响, 为DC的临床应用奠定基础.方法:针对MyD88基因, 采用化学合成法合成3对MyD88 siRNA(序列1、序列2及序列3), 并转染DC2.4 细胞.采用半定量RT-PCR及Western blot分别从mRNA和蛋白质水平检测DC MyD88的表达情况, 筛选其中一对高效RNA(序列3)转染DC2.4 细胞(RNA干扰组), 以未转染RNA的DC2.4细胞作为对照组, 分别给予1mg/L的脂多糖(LPS)刺激.流式细胞术(FCM)检测DC细胞表面CD80、 CD86及MHC-Ⅱ分子的变化, ELISA法检测DC分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-12(IL-12)的浓度, 免疫细胞化学检测DC核因子-κB(NF-κB)的表达, 混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力, 观察RNA干扰对LPS促DC成熟的影响.结果:与空白对照组相比, 序列2组及序列3组DC的mRNA和蛋白质表达分别降低90%和85%、 92%和88%, 差异有统计学意义; 脂质体对照组、无义siRNA对照组及序列1组DC的mRNA和蛋白质表达无显著差异.经LPS刺激后, 与对照组相比, RNA干扰组CD80、 CD86及MHC-Ⅱ分子的表达, TNF-α、 IFN-γ及IL-12的浓度及T细胞增殖能力均显著下降, 且未见明显NF-κB核转位.结论:RNA干扰技术能显著下调小鼠DC MyD88的表达, 并显著抑制LPS促DC成熟的效应, 为以DC MyD88为靶向、相关疾病的基因治疗提供了新思路和手段.
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广东省汉族人群与西藏自治区夏尔巴人群SP-A基因单核苷酸多态性研究
目的:通过对肺表面活性物质相关蛋白A(surfactant protein A, SP-A)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)在广东汉族人群和西藏夏尔巴人群中的分布特点的分析, 探讨其与高原低氧环境适应性的关系. 方法:应用序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primer, SSP-PCR)方法, 对90名广东汉族人和104例西藏夏尔巴人SP-A基因进行检测. 结果:在104例夏尔巴人和90名汉族人之间SP-A1基因1544位点各基因型和等位基因分布无统计学差异 ( P >0.05) ; 在SP-A1基因3241位点C/C, C/T和T/T 3种基因型的构成比在夏尔巴人分别为75.0%, 22.1%和2.9%, 而广东汉族人群为50.0%, 35.6%和14.4%, 夏尔巴人等位基因C、 T的分布频率为86.1%和13.9%, 而广东汉族为67.8%和32.2%, SP-A1 3241 基因型和等位基因分布频率在两组之间比较差异有统计学意义 ( P <0.05) ; 在SP-A2基因3265位点夏尔巴人C/C, A/C和A/A 3种基因型的构成比分别为37.5%, 53.8%和8.7%, 广东汉族为63.3%, 30.0%和6.7%, 两组比较差异有统计学意义 ( P <0.05) , 而且夏尔巴人等位基因C、 A的分布频率为64.4%和35.6%, 而广东汉族人群为78.3%和21.7%, 两组比较差异有统计学意义 ( P <0.05) .结论:夏尔巴人SP-A2基因的3265位点基因型和等位基因分布与广东汉族人均有显著性差异, 该位点SNP可能与夏尔巴人对高原低氧适应有关.
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血管特异结合短肽GNSNPKS受体在胃癌和结肠癌中的差异表达
目的:探讨血管特异结合短肽GNSNPKS受体 (GNSNPKSR) 在胃癌和结肠癌中的表达及与肿瘤分化程度的关系.方法:采用免疫组化SP法检测GNSNPKSR在胃癌和结肠癌中的表达及其分化程度.结果:GNSNPKSR在高、中、低度分化胃癌的血管中表达率依次为12/18 (67%)、 17/23 (74%)、 22/24 (92%); 在高、中、低度分化结肠癌的血管中的表达率依次为3/16(19%)、 5/21(24%)和7/23(30%).GNSNPKSR在胃癌组织中的表达明显高于结肠癌组织 ( P <0.05) , 在低分化胃癌组织中的表达明显高于高分化和中分化胃癌组织(P <0.05) .结论:GNSNPKS与胃癌的血管特异结合, 可作为肿瘤血管抑制治疗的靶向载体.
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A20在前列腺癌细胞中的表达
目的:探讨A20(肿瘤坏死因子可诱导的初级应答基因)在前列腺癌各细胞系中的表达及意义.方法:RT-PCR检测体外培养的前列腺癌细胞PC-3, PC-3M, Du145, LNcap和22RV1中A20 mRNA的表达, Western blot检测A20蛋白质(锌指蛋白A20)的表达.结果:RT-PCR和Western blot检测显示A20在前列腺癌5种细胞系中均表达, 但表达水平有差别, 在PC-3和PC-3M细胞中A20在mRNA和蛋白质表达水平均显著高于其余3种细胞系( P <0.01).结论:A20在各前列腺癌细胞系中的表达不尽相同, 对A20表达的研究对于下一步研究该基因在前列腺癌发生发展中的作用有重要意义.
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GM-CSF+IFN-α诱导CML患者骨髓单个核细胞分化的树突细胞的免疫应答
目的:为研究临床注射用IFN-α+GM-CSF诱导慢性髓性白血病(CML)患者的骨髓单个核细胞(BMMNC)向树突细胞(DC)的分化及其免疫效应.方法:将取8例CML慢性期患者的BMMNC, 接种于用含100 mL/L人AB血清的RMPI1640培养液中, 加入不同细胞因子的组合(A组:GM-SCF+IL-4; B组:临床注射用IFN-α+GM-CSF)后进行培养.培养8 d后, 在倒置显微镜下观察DC的形态, 用流式细胞术检测细胞上的表面标记.采用异基因混合淋巴细胞反应 (allo -MLR)检测DC刺激健康供者外周血淋巴细胞增殖的功能, 用MTT比色法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤白血病细胞的活性.结果:在不同细胞因子组合诱导下分别培养诱导8 d后的DC, 其特征性表面标记(CD80、 CD86、 HLA-DR、 CD83、 CD1a)的表达率均高于培养前的DC( P <0.05); 但培养8 d的两组DC表面标记的表达率无明显差异.allo-MLR在DC与淋巴细胞之比为1∶10时, B组的刺激指数高于A组( P <0.05).DC能够刺激异体T淋巴细胞产生特异性的CTL.结论:CML患者的BMMNC在GM-CSF+IFN-α诱导下培养后分化的DC可较强地刺激淋巴细胞增殖并可杀伤患者的白血病细胞, 有望用于CML的免疫治疗.
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新型重组免疫毒素DT390-mRantes治疗小鼠EAE的初步研究
目的:构建一种含有重组免疫毒素DT390-mRantes(白喉杆菌外毒素390片段-活化T细胞表达与分泌调节因子)的真核表达质粒, 并用于治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE).方法:利用自提的MBP诱导C57BL/6小鼠产生EAE, 将mRantes导入含有DT390的真核表达质粒SRα中, 经阳离子纳米脂质体包被后, 治疗小鼠EAE, 同时对其临床症状、脑部病理改变、外周血相关细胞因子及T/B细胞比例进行检测, 了解该重组免疫毒素的治疗效果.结果:成功构建真核表达质粒DT390-mRantes-SRα, 治疗组小鼠临床症状减轻, 脑部特异性淋巴细胞浸润减少, 外周T细胞相关细胞因子表达降低, T/B细胞比例降低.结论:新型重组免疫毒素DT390-mRantes治疗小鼠EAE有较为明显的效果, 为治疗人的多发性硬化(MS)提供有益的借鉴.
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青藤碱对大鼠心脏移植排斥反应期间ICAM-1和IL-2的影响
目的:观察大鼠同种异位心脏移植排斥反应期间的病理特征, 探讨青藤碱对大鼠心脏移植排斥反应的影响及其发生机制.方法:SD 健康大鼠为供体, Wistar大鼠为受体, 建立大鼠异位心脏移植模型.实验分4组:A组为健康SD大鼠心脏作对照组, B组为SD 大鼠到SD 大鼠的同基因移植组, C组为SD大鼠到Wistar大鼠异基因移植组, D组为清藤碱治疗组.以ELISA、免疫组织化学检测移植心组织中IL-2和ICAM-1的表达.结果:A、 B组未见排斥反应发生, 心脏组织中的ICAM-1和IL-2表达水平很低; C组有明显的炎症反应并见大量淋巴细胞浸润, 组织中ICAM-1和IL-2的表达水平明显升高( P <0.05); D组炎症反应有所减轻, 同时少有淋巴细胞浸润; 组织仅微弱表达ICAM-1和IL-2.结论:移植心脏ICAM-1和IL-2的表达水平与排斥反应的发生和发展有关, 青藤碱能显著抑制移植心ICAM-1和IL-2的表达和淋巴细胞的浸润, 减轻排斥反应, 明显延长移植物的存活.
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抗人可溶性间皮素相关蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定
目的:制备鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白(SMR)的单克隆抗体(mAb), 鉴定其生物学特性.方法:应用计算机通过综合预测对间皮素(MSLN)进行B-细胞表位预测.合成相应肽段并免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb, 利用免疫细胞化学和Western blot分析对所制备的mAb进行鉴定.结果:综合预测方法分析间皮素的抗原表位可能于153-162、 282-292及471-481氨基酸残基或其附近, 选择性合成了可能性高的位于471-481氨基酸残基的可溶性间皮素相关蛋白表位, 制备了mAb (2H10), 经免疫细胞化学和Western blot分析该抗体具有较高的特异性.结论:成功地制备了鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白的mAb(2H10), 该抗体具有较高的特异性, 为进一步利用ELISA对可溶性间皮素相关蛋白进行检测奠定了基础.
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QKI蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备与鉴定
目的:获得原核表达的RNA结合蛋白QKI-7蛋白, 并制备其兔抗QKI多克隆抗体.方法:将成功插入QKI-7编码区cDNA的PET32b(+)原核表达载体用热休克法转化BL21(DE3) 感受态细菌, 以IPTG诱导6×His-QKI-7融合蛋白的表达, 分别经金属鳌合柱、反向柱和强阴离子交换柱进行层析纯化.经SDS-PAGE和Western blot鉴定后, 应用纯化的融合蛋白, 分别以弗氏佐剂、聚丙烯酰胺凝胶、 NC膜作为佐剂免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体, 并以Western blot进行检测.结果:经表达并纯化的QKI-7蛋白纯度达到95%以上, 应用纯化的融合蛋白以弗氏佐剂作为佐剂免疫新西兰大白兔后获得高滴度, 特异性的抗QKI的多克隆抗体.结论:成功地表达并纯化了QKI-7蛋白, 并制备了高滴度、高特异性的抗QKI多克隆抗体.采用弗氏佐剂作为免疫佐剂进行免疫的效果优于聚丙烯酰胺凝胶和NC膜.
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抗人CD25分子单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定
目的:构建和表达抗人CD25分子单链抗体(scFv)蛋白, 并测定其生物学活性.方法:用RT-PCR方法从能分泌特异性抗CD25单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因.用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起, 构建抗CD25分子scFv的基因.将scFv基因克隆至pMD18T, 用限制性内切酶切以及测序鉴定.将scFv 基因连接到pBAD/gⅢA表达载体, 转化Top10表达菌.阳性克隆用左旋阿拉伯糖诱导4 h, SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度, 竞争抑制ELISA实验检测其活性.结果:scFv基因长度约为700 bp.通过DNA序列测定和分析, 构建出VL-(GGGGS)3-VH(但其中349位G突变为A, 使Linker其中一位Gly→Ser).其VH隶属于小鼠Ig重链可变区Ⅲ(C)亚类, 全长351 bp, 可编码117个氨基酸; 其VL隶属于小鼠Igκ轻链可变区Ⅳ亚类, 全长318 bp, 可编码106个氨基酸.TOP10中表达的scFv抗体加上同时融合表达的两个标签6×His和C-myc Mr约为31 000, 结果符合scFv的Mr.竞争抑制细胞ELISA实验显示表达的scFv具有活性.结论:此scFv基因的表达产物具有一定的特异结合活性.为抗CD25 scFv的临床应用打下了基础.
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ULBP4原核表达、生物学功能鉴定及其单克隆抗体的制备和初步鉴定
目的:在大肠杆菌中表达ULBP4重组蛋白, 并制备其特异性的单克隆抗体(mAb), 为γδT细胞对ULBP4的识别机制研究奠定基础.方法:根据GenBank中ULBP4的基因序列设计相应的引物, 用RT-PCR方法从HO-8910细胞中扩增得到ULBP4片段, 构建重组原核表达质粒pET22b(+)/ULBP4(前225aa胞外段), 在Rosetta-gamiTMB(DE3)大肠杆菌中获得表达且主要位于包含体中, 经纯化透析复性后, 分析其对NK细胞IFN-γ细胞因子分泌的影响.以ULBP4为抗原, 免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合, 依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化培养、荧光免疫检测和流式细胞术以及Western blot筛选和鉴定抗ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株.结果:构建了pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表达体系, 并检测到重组蛋白的有效表达; 纯化的重组蛋白在体外培养体系中可以刺激NK细胞IFN-γ细胞因子的分泌.此外, 还获得了4株可稳定分泌抗人ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株.结论:成功地构建并表达了具有生物活性的ULBP4, 为γδT细胞的识别机制研究建立抗原制备平台, 同时所制备的抗人ULBP4 mAb, 为后续研究奠定了基础.
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抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用
目的:制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法, 对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究.方法:将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠, 应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株.常规制备腹水, 用辛酸-硫酸铵法纯化, 并对纯化的mAb进行特异性鉴定.通过对不同抗体组合的分析和条件的优化, 建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法.结果:经细胞融合、筛选及克隆化, 共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株, 其中5株亲和力较高.建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法, 该方法灵敏度达到870U/L, 平均回收率为107.81%, 批内变异系数平均为6.7%, 批间变异系数平均为9.3%, 可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测.结论:成功地制备了抗青霉素的mAb, 并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法.
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基因工程抗体联合紫杉醇对BT474细胞的促凋亡作用
目的:探讨抗p185c-erbB-2/neu基因工程抗体联合紫杉醇促进p185过表达的人乳腺癌细胞系BT474凋亡的效应及其机制.方法:采用MTS法检测基因工程抗体联合紫杉醇对BT474细胞增殖的抑制作用.用AnnexinV-FITC/PI法检测BT474细胞的凋亡率; 以流式细胞术(FCM)分析DNA含量及细胞周期分布; 用EMSA分析NF-κB的活化水平.结果:基因工程抗体联合紫杉醇对BT474细胞增殖的抑制作用具有协同效应, 并可诱导细胞凋亡, 将细胞阻滞在G1期; 并可显著抑制BT474细胞中NF-κB的活化.结论:紫杉醇诱导乳腺癌细胞BT474凋亡的同时, 可活化NF-κB.基因工程抗体联合紫杉醇是通过抑制NF-κB的活化而增强紫杉醇诱导癌细胞凋亡的作用.
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抗MDV-1 VP22羧基端单克隆抗体的制备与免疫学特性鉴定
目的:制备抗血清I型马立克氏病病毒(MDV-1)VP22的单克隆抗体(mAb), 并鉴定其免疫学特性.方法:在原核系统中表达VP22 羧基端区域(94~243aa), 获得融合表达产物GST-VP22C.将该表达产物切胶免疫小鼠, 利用杂交瘤技术制备抗MDV-1 VP22C的mAb, 并通过ELISA、间接免疫荧光(IFA)、 Western blot鉴定其特性.结果:获得了2株可稳定分泌抗MDV-1 VP22C的mAb的杂交瘤细胞, 命名为3F7、 4E4.IFA鉴定表明, 两株mAb均能与感染MDV-1的成纤维细胞反应, 其中, 3F7 mAb染色呈现MDV空斑, 而4E4 mAb呈现整个单层的细胞核荧光.ELISA和Western blot分析表明, 3F7能与杆状病毒表达的VP22反应, 4E4不具备该特性.对3F7 mAb进一步鉴定, 确定了该mAb针对的具体位置在94~193aa处, 是蛋白转导域的预测位置.结论:成功地制备了抗MDV-1 VP22C的mAb, 为深入研究VP22蛋白的转导功能提供了有用的试剂.
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细胞芯片的研究进展
细胞芯片技术是以活细胞作为研究对象的一种生物芯片技术.它是适应后基因组时代人类对生命科学探索的要求而产生的.作为细胞研究领域的一种新技术,其既保持传统的细胞研究方法的优点如原位检测等,又满足了高通量获取活细胞信息等方面的要求.
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HLA-F的研究进展
人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)系统,是目前已知人类复杂的显性遗传多态系统,由主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因所编码.
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抗HCV中和抗体的研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)为具包膜的单股正链RNA病毒,属于黄病毒家庭.HCV是已知惟一能造成慢性感染的RNA病毒(除逆转录病毒外),据估计,目前全球约1.7亿HCV感染者中,60%~80%为慢性携带者,而持续性感染终发展为肝硬化/肝癌的机率高达3.5%~20%.
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rhBMP-7对人真皮成纤维细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响
碱性磷酸酶(ALPase)的活性是成骨细胞分化成熟的重要标志之一,其活性的高低可反映细胞钙化的能力和向成骨细胞分化的趋势.[1]
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一氧化氮合成酶和心钠素在豚鼠耳蜗的分布
目的:观察豚鼠耳蜗局部心钠素(ANP)和一氧化氮合成酶(NOS)免疫组化反应产物的分布及其相互关系, 为研究ANP和NOS在豚鼠耳蜗局部血流、淋巴以及神经调节中的相互作用提供形态学研究的依据.方法:采用免疫荧光组织化学双标法观察ANP和NOS在正常豚鼠耳蜗的分布特征.结果:在耳蜗各转螺旋动脉和血管纹均发现ANP和NOS双阳性表达, 螺旋缘、螺旋韧带和Corti器, 耳蜗神经节细胞有ANP和NOS双阳性染色.结论:ANP和NOS的分布特点显示, 二者在内耳血流调节, 内、外淋巴平衡调节以及神经信号传递等方面可能存在密切的相互作用.
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牛IL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其活性
目的:在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素-18(bovine interleukine-18, BoIL-18)成熟蛋白基因, 并鉴定其生物学活性.方法:设计一对特异性引物, 将编码BoIL-18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTb上, 构建重组质粒repFastBac HTb-18, 转化至DH10Bac感受态细胞中得到重组Bacmid(Bacmid-BoIL18).在Cellfectin作用下, 将Bacmid-BoIL18转染昆虫细胞sf9获得重组杆状病毒, 然后将重组杆状病毒感染sf9, 感染后不同时间收获sf9细胞, 进行SDS-PAGE电泳, 分析表达情况; 用BoIL-18的原核表达产物作为抗原制备的兔多克隆抗体进行Western blot分析; 将纯化的表达产物对牛外周血单个核细胞(PBMC)进行细胞增殖试验, 对健康牛脾进行IFN-γ诱生试验, 初步分析表达产物的生物学活性.结果:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达, 经薄层凝胶扫描分析证实, 表达量占总蛋白的21.3%; Western blot分析证明, 在相对分子质量(Mr)约为26000处有一条特异性条带.生物学活性分析表明, 纯化的表达产物可明显增强淋巴细胞增殖, 促进IFN-γ的产生.结论:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达, 表达产物具有良好的生物学活性.
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人肾小管上皮细胞血清饥饿法同步化方法的研究
目的:探讨采用血清饥饿法建立将人肾小管上皮细胞(HKC)的同步化方法.方法:将HKC分为6个不同低血清浓度组及对照组, 分别采用胎牛血清浓度为0、 1、 2、 3、 4、 5和100 mL/L的DMEM培养液培养24 h.根据流式细胞术结果选择的佳同步化HKC的胎牛血清浓度.将HKC的同步化处理时间分别延长为24 h、 48 h和72 h, 选择佳同步化时间.用MTT法绘制生长曲线观察血清饥饿处理对HKC生长的影响.采用免疫细胞化学方法验证血清饥饿同步化处理HKC的效果.结果:选择无血清(0 mL/L)和1 mL/L为HKC佳同步化的胎牛血清浓度, 选择48 h为HKC同步化佳时间.细胞生长曲线表明采用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h后恢复正常培养的HKC细胞, 其生长曲线更接近于正常培养的细胞.Brdu进一步证明, 用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可以使90%以上的HKC细胞处于G0/G1期.结论:用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可获得90%以上的G0/G1期HKC.
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Knockout血清替代品可提高C57BL/6J小鼠胚胎干细胞建系效率
目的:在培养液中添加knockout血清替代品(knockout serum replacement, KSR)代替胎牛血清(FBS)用于建立C57BL/6J小鼠胚胎干细胞(ESC)细胞系, 以便消除血清中的不确定因子对ESC增殖的影响.方法:以C57BL/6J小鼠3.5 d的囊胚为材料分离ESC, 比较KSR和FBS用于建立小鼠ESC细胞系的效率, 并通过体内、外分化验证所分离获得的小鼠ESC 的发育潜能.结果:培养液中添加KSR, 成功从13个小鼠囊胚中分离获得一个ESC细胞系(MES-1), 体外培养传代超过20代仍保持未分化状态, 核型为正常XX型,碱性磷酸酶及oct-4基因高表达, 悬浮培养可以生成拟胚体, 接种到裸鼠皮下可形成畸胎瘤, 注射到ICR小鼠3.5 d囊胚中, ESC可以参与胚胎发育并产生嵌合体小鼠.而培养液中添加FBS的对照组未能获得超过3代的ESC细胞系.结论:在培养液中添加KSR代替FBS适合于C57BL/6J小鼠ESC的分离与培养, 从而可避免实验前对所用血清的筛选.
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人血管生长素的真核表达及亚细胞定位
目的:建立人血管生成素(angiogenin, ANG)的真核表达系统并在细胞内亚定位.方法:采用亚克隆技术构建重组荧光真核细胞表达质粒pEGFP/ANG, 然后经脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并对转染细胞内pEGFP/ANG的表达用荧光显微镜和免疫组化染色进行鉴定.用共聚焦显微镜和免疫电镜观察ANG的亚细胞定位.结果:荧光显微镜观察可见转染的HUVEC内发出强绿色荧光.免疫组化染色检测显示, 转染的HUVEC中有棕色颗粒.共聚焦显微镜及免疫电镜检查显示, ANG集聚于细胞核区.结论:以构建的重组体pEGFP/ANG转染HUVEC后, 可表达人ANG蛋白; 表达的ANG定位于细胞核区.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |