细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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NF-κB p50亚基同源结构域相互作用多肽的筛选
目的:应用酵母双杂交技术筛选获得与核因子κB(NF-κB)p50亚基同源结构域(RHD)相互作用的多肽.方法:应用酵母双杂交技术,以NF-κB p50 RHD为诱饵,筛选16肽cDNA文库,寻找与其相互作用的多肽,应用β-gal试验、酵母交配试验及一对一酵母回复性杂交等方法筛除假阳性克隆,确定阳性克隆.结果:经酵母双杂交及反复的排查,共获得8个阳性克隆.通过GenBank进行检索,未发现与之相匹配的蛋白序列.结论:获得8个与NF-κB p50 RHD相互作用的新型多肽,多肽的功能需进一步验证.
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RGDS四肽促进大鼠肝星状细胞胶原降解机制的研究
目的:观察精-甘-天冬-丝氨酸(RGDS)四肽对纤维连接蛋白(FN)刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其组织抑制因子(TIMP-1)表达的影响.方法:应用体外细胞培养技术,用RT-PCR检测HSC MMP-13 mRNA水平;原位杂交和Western blot技术分别检测上述细胞TIMP-1 mRNA和蛋白水平.结果:RGDS四肽干预2 h组MMP-13 mRNA的表达强度明显上调,同时TIMP-1 mRNA表达受抑制;RGDS四肽干预24 h组TIMP-1蛋白表达受抑制.结论:RGDS四肽诱导HSC MMP-13表达,抑制其TIMP-1表达是其抗肝纤维化的作用机制之一.
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人T-bet基因的表达、纯化及其免疫原性分析
目的:利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人T-bet基因全长序列,并对表达产物进行纯化、免疫动物和制备多克隆抗体.方法:利用PCR技术从克隆载体pGEM-T/T-bet获得人T-bet的全长编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pT-bet;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌JM109,测序鉴定后转化M15,经IPTG 37℃诱导4 h后,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色判断以包涵体形式存在的带有6×His标签的融合蛋白(表达产物),用Ni2+-IMAC层析柱对融合蛋白进行纯化;将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备人T-bet的多克隆抗体.结果:成功表达和纯化了人T-bet,并制备了多克隆抗体,ELISA和Western blot结果显示了血清抗体的高效价(1:100 000)和高度特异性.结论:成功构建了原核表达载体pT-bet,并在工程菌M15中获得大量表达,经纯化后获得高纯度的人T-bet蛋白,制备了效价和特异性良好的多克隆抗体,为进一步研究T-bet的生物学功能奠定了的基础.
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IL-4对肺腺癌细胞株ABCG2表达调节的研究
目的:探讨IL-4是否影响肺腺癌细胞株ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member2)的表达.方法:应用半定量RT-PCR检测不同浓度IL-4刺激对肺腺癌细胞株A549和SPC-A-1中ABCG2基因表达的影响.以Western blot检测不同浓度IL-4对A549和SPC-A-1肺腺癌细胞株中ABCG2蛋白表达的影响.结果:在不同浓度IL-4刺激下肺腺癌细胞株A549和SPC-A-1中ABCG2基因与蛋白的表达无统计学意义(P>0.05).结论:ABCG2在腺癌细胞株A549和SPC-A-1中表达,但IL-4对细胞株中ABCG2的表达不具有调节作用.
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PTN shRNA腺病毒载体的构建及其对大鼠DRGn神经突起的影响
目的:构建特异性shRNA腺病毒载体,使之干扰神经轴突过度生长因子(PTN)在胰腺癌细胞中的表达,探讨其对SD大鼠背根神经节神经元(DRGn)神经轴突的影响.方法:设计并合成4对靶向PTN单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后经脂质体介导转染胰腺癌细胞,通过RT-PCR方法筛选对PTN沉默效果佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,然后与腺病毒骨架质粒进行同源重组,筛选出正确重组子,用HEK293A细胞包装出表达shRNA-PTN的重组腺病毒并测定其病毒滴度,通过Western blot方法对腺病毒沉默PTN效果予以检测.shRNA-PTN腺病毒构建成功后感染胰腺癌PC-2细胞,然后和DRGn共培养,观察DRGn生长分化和形态特征.结果:测序结果提示所构建的pENTR/U6-shRNA质粒正确,并从4对ds oligos筛选出对PTN沉默效果佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,经同源重组后成功构建了介导shRNA-PTN复制缺陷型重组腺病毒.转染胰腺癌细胞后,Western blot检测显示shRNA-PTN腺病毒感染胰腺癌细胞后对PTN蛋白的沉默效果7 d后达佳效果.感染shRNA-PTN腺病毒的胰腺癌PC-2细胞和DRGn共培养,DRGn神经轴突的生长和延长受抑制,以第7天为明显.结论:成功地构建介导shRNA-PTN复制缺陷型重组腺病毒;感染shRNA-PTN腺病毒的胰腺癌PC-2细胞和SD鼠DRGn共培养可以抑制DRGn神经轴突的生长.
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DR5胞外段基因的表达及功能初步鉴定
目的:获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白.方法:通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因(55-183位氨基酸),克隆到pGEMR-T Easy 载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30a中,在E.coli BL21(DE3)实现蛋白表达.通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.ELISA法分析其与抗DR5单克隆抗体(mAb)结合能力.结果:克隆到人DR5基因的胞外段基因,测序结果和报道的一致;构建了人DR5胞外段基因的原核表达载体并实现在E.coli BL21(DE3)中大量表达;SDS-PAGE表明所表达蛋白与预期蛋白的相对分子质量(Mr)一致;Western blot及ELISA的结果表明该蛋白能与抗DR5抗体反应,竞争阻断试验表明DR5胞外段可阻断TRAIL对Jurkat细胞生长的抑制.结论:成功地制备了具有生物活性的DR5胞外区,为后续研究打下了基础.
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血小板第4因子对急性放射损伤小鼠骨髓细胞凋亡的影响
目的:研究血小板第4因子(platelet factor 4,PF4) 对用5.0 Gy 60COγ照射损伤小鼠骨髓细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:30只雄性BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组(6只)、PF4处理组(12只)和照射组(12只).在照射前26、20 h分别给PF4处理组小鼠腹腔注射40 μg/kg的PF4,再用5.0 Gy的60COγ射线全身均匀照射.照射后4、20 h应用流式细胞术(FCM)测定小鼠骨髓细胞的凋亡率;并用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax的表达.结果:照射后4、20 h PF4处理组的小鼠骨髓细胞的凋亡率低于照射组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).Western blot检测显示照射后4、20 h照射组小鼠骨髓细胞Bax的表达要比正常对照组和PF4处理组的表达要高.结论:PF4可以抑制辐射所致小鼠骨髓细胞的凋亡,此保护机制可能与促凋亡蛋白Bax表达的下调有关.
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伏马菌素B1对人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子表达的影响
目的:探讨伏马菌素B1(FB1)对体外培养的人外周血单个核细胞表面(HPBMc) HLA-Ⅰ分子表达的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)、Western blot及半定量RT-PCR方法,研究不同浓度FB1(10和50 μmol/L)处理后人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子表达的变化.结果:FCM定量分析结果表明,经FB1处理24 h后,两组FB1处理细胞HLA-Ⅰ的平均荧光强度均较对照组降低(P<0.05),但是在两个处理组之间无统计学意义.Western blot也证实了上述结果.在mRNA水平上,分别检测了HLA-Ⅰ分子3个等位基因HLA-A,HLA-B,HLA-C的表达情况.结果显示,FB1处理后,HLA-A、HLA-B mRNA的表达均没有明显影响,仅HLA-C mRNA的表达较对照组降低.结论:10和50 μmol/L FB1处理24 h可抑制人外周血单个核细胞表面HLA-Ⅰ分子的表达.
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HLA-A、B、DRB1等位基因多态性与中国南方鼻咽癌的相关性研究
目的:探讨南方人群中鼻咽癌(NPC)易感性与HLA多态性之间的关联.方法:应用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR-SSP)方法对35例NPC患者及60例正常对照进行HLA-A、HLA-B及DRB1基因分型.结果:NPC患者的HLA-A*02、HLA-B*58及HLA-DRB1*03基因位点的频率高于正常对照组,HLA-B*40基因位点的频率低于正常对照组.结论:HLA-A*02、HLA-B*58及HLA-DRB1*03可能是NPC的易感性基因,HLA-B*40可能是NPC的保护性基因.
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青少年吸毒者免疫细胞、细胞因子和生长激素的改变
目的:通过测定青少年吸食海洛因者外周血中T细胞亚群、Th1/Th2细胞因子和血清中的生长激素,从分子水平探讨吸食海洛因对青少年免疫功能和生长发育的影响.方法:用微量全血直接免疫荧光染色,用流式细胞术检测外周血中T细胞亚群;流式细胞(Cytometric bead array,CBA)技术测定Thl/Th2细胞因子;化学发光法测定生长激素.结果:青少年吸食海洛因组(n=20) CD3+、CD3++CD4+、CD3++CD4+/CD3++CD8+、Th1细胞因子(IL-2,TNF-α和 IFN-γ)和Th2细胞因子(IL-4,IL-10)低于健康组(n=23)(P<0.01或0.05);且Th1细胞因子下降程度大于Th2细胞因子(P<0.05);血清生长激素显著高于健康组(P<0.01).结论:海洛因降低青少年机体免疫功能,对细胞免疫的损伤大于体液免疫;海洛因能升高青少年血清生长激素,机制需进一步探讨.
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孕妇免疫功能检测及临床意义
目的:探讨孕妇免疫功能与妊娠的关系.方法:采用免疫荧光法和透射比浊法分别测定60例孕妇和20例正常人的细胞免疫及体液免疫功能.结果:T淋巴细胞与B淋巴细胞的比例虽无明显变化,但T淋巴细胞亚群的比率有明显改变.结论:孕妇存在免疫功能抑制.测定孕妇的免疫功能可以判断妊娠发展情况与预后.
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中性粒细胞增强类风湿关节炎滑膜细胞产生基质金属蛋白酶及其细胞侵袭力
目的:研究中性粒细胞表面CD147分子对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)产生基质金属蛋白酶(MMP)及细胞侵袭力的作用.方法:取自关节镜或骨科手术治疗的RA、骨关节炎(OA)患者的滑膜组织,体外分离培养FLS,通过流式细胞术(FCM)检测细胞表面分子及形态学方法鉴定.采用全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞(人早幼粒白血病细胞株)诱导中性粒细胞分化,并用硝基蓝四氮唑(NBT)还原反应测定其分化程度.进而以FCM测定分化前后的HL-60细胞及FLS表面CD147的表达,并通过明胶酶谱和重组基质侵袭实验检测分化前后HL-60细胞对FLS MMP表达和细胞侵袭能力的作用以及CD147拮抗肽(AP-9)对这种MMP表达和细胞侵袭能力的抑制作用.结果:成功建立了FLS分离培养和HL-60细胞分化的实验体系.培养的FLS具有典型成纤维细胞的形态,均一的高度表达CD90(>98%)而不表达CD14.分化后的HL-60细胞CD147表达上调,RA FLS细胞CD147表达水平低于分化前及分化后HL-60细胞(P<0.05).明胶酶谱试验显示:①与OA FLS相比,单培养的RA FLS表达较高水平的酶原及活化形式的MMP-2(P<0.05);②分化前/后的HL-60细胞分别与FLS共培养,酶原及活化形式的MMP-2和MMP-9的表达水平较这些细胞单独培养均显著升高(P<0.05),且分化后的HL-60细胞与FLS共培养酶原及活化形式MMP-2表达水平较分化前HL-60细胞与FLS共培养明显升高(P<0.05);③AP-9显著抑制两共培养组中MMP-2和MMP-9的上调作用(P<0.05).侵袭实验显示:RA FLS侵袭能力高于OA FLS(P<0.05);分化前后的HL-60均可增加RA FLS的侵袭能力(P<0.05),且分化后强于分化前(P<0.05);AP-9可抑制这一促进作用,降低FLS的侵袭能力(P<0.05).结论:中性粒细胞可能通过CD147促进RA患者滑膜FLS MMP-2、MMP-9的表达和活化,增强FLS的侵袭能力,这种促进作用可被CD147拮抗肽所抑制,将为RA关节软骨和骨损伤机制和治疗的进一步研究提供了重要的线索.
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抗血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型抗体对成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响
目的:研究抗血管紧张素Ⅱ 受体Ⅰ型(AT1受体)抗体对成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+ ]i)的影响.方法:用AT1受体胞外第2肽段合成肽免疫Wistar大鼠,以硫酸铵沉淀法粗提血清抗体后再以亲和层析法纯化抗体,并以ELISA和Bradford的方法对抗体进行定量.以Fluo-3AM作为细胞内游离Ca2+示踪剂,通过激光共聚焦显微镜检测分离的成年大鼠心室肌细胞[Ca2+]i的变化,以判断抗体活性,分AngⅡ组,抗AT1受体抗体组,抗AT1受体抗体+氯沙坦组和对照组.结果:AngⅡ刺激后引起[Ca2+]i快速上升至峰值,随后快速下降(157.4±52.5)%;而在抗AT1受体抗体刺激下,呈双相反应,[Ca2+]i快速上升至峰值,随后进入平台期(164.0±34.0)%,与AngⅡ组相比无统计学意义(P>0.05).其效应部分被氯沙坦阻断(79.7±13.2)%,与前两组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:抗AT1受体抗体可以引起大鼠心室肌细胞内[Ca2+]i浓度增加,呈快速的峰值和持续的平台期的双相反应,主要依赖于细胞内储存钙离子的释放.
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氧化砷和维甲酸对PLZF-RARa阳性U937细胞的作用
目的:研究氧化砷(As2O3)和全反式维甲酸(ATRA)对PLZF-RARα阳性细胞的作用.方法:稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞(U937/PLZF)经As2O3、ATRA处理后,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,MTT法检测细胞生长增殖状态,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b、CD64、CD14等的表达变化,荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达,细胞化学染色和硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况.结果:U937/PLZF细胞在去除四环素条件培养后,PLZF-RARα表达明显增加.As2O3 (0.5 μmol/L)联合ATRA(1 μmol/L)使U937/PLZF细胞核质比缩小,核仁减少但未消失;生长增殖受抑;S期细胞减少;CD11b表达增高;PLZF-RARα蛋白表达减弱,分布以胞核弥漫细小颗粒为主.细胞化学染色和NBT反应变化不明显.结论:0.5 μmol/L As2O3联合1 μmol/L ATRA可使PLZF-RARα阳性U937细胞产生轻微的形态学分化趋势,尚不足以引起其发生功能分化.
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提取人血浆中β2GPI的一种简便高效方法及其在自身免疫病诊断中的应用研究
目的:利用聚乙二醇(PEG)4000沉淀配合亲和层析和离子交换层析的方法从人血浆中提取β2GPI蛋白,并研究相关的临床意义.方法:用180 g/L的PEG4000从人血浆沉淀含β2GPI的组分,所得组分重溶后进行Heparin-Sepharose CL-6B亲和柱层析和Source 15 S离子交换柱层析,用分离纯化的β2GPI和购买的纤溶酶原(Plasminogen,PLG)建立反复妊娠丢失患者血清抗体抗β2GPI和抗PLG抗性的ELISA检测方法.结果:经SDS-PAGE和Western blot检测,本方法分离提取得到的蛋白为纯度大于95%的β2GPI.抗β2GPI和抗PLG抗性的检测结果呈正相关关系(r=0.750),且两者检出的阳性率无统计学意义(P>0.05).结论:结合了PEG沉淀和两步层析方法可以有效地从人血浆中提取得到β2GPI蛋白用于相关检测和研究.
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中国健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo特征的调节性T细胞频率
目的:初步确定健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo特征的调节性T细胞(Treg)频率,为临床相关疾病的研究及Treg的分选提供参考.方法:采集312名8~60岁(5个年龄组)、不同性别健康人的静脉血,经三重免疫荧光染色,用流式细胞术分析CD4+CD25nt/hiCD127lo Treg细胞频率,并观察细胞内Foxp3转录因子的表达.结果:健康人CD4+CD25nt/hiCD127lo Treg细胞在外周血中约占CD4+T细胞的(6.55±0.11)%,各年龄组之间有差异(P=0.015),组内性别之间也存在统计学意义(P<0.05);CD25nt/hiCD127lo细胞特异性地表达Foxp3转录因子.结论:初步确定了中国健康人外周血中具有CD4+CD25nt/hiCD127lo表达特征的细胞频率,为Treg细胞的临床研究奠定了基础;CD25nt/hiCD127lo作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,可在分选时排除其他细胞干扰,获得较完整的Treg细胞.
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乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备鼠抗人乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离出肝脏胞质总蛋白,用肝脏胞质总蛋白免疫BALB/c 小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特异性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱和Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原.结果:通过间接ELISA筛选获得杂交瘤细胞株ADB291,其分泌的mAb Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;对免疫沉淀获得的相应抗原回收、酶切、质谱鉴定为GRHPR.同时应用mAb ADB291对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为GRHPR;阳性克隆转化表达后的Western blot 结果确认该抗体识别Mr 35 000的表达蛋白.结论:mAb ADB291特异识别的抗原为GRHPR,该mAb在GRHPR的功能研究和二型原发性尿草酸盐过多遗传疾病的临床诊断等方面具有应用价值.
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兔抗人肥大细胞羧肽酶抗体的制备与鉴定
目的:以原核表达的人肥大细胞羧肽酶(hMC-CP)免疫家兔,制备兔抗hMC-CP多克隆抗体并进行鉴定.方法:在大肠杆菌中诱导表达重组hMC-CP,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备兔抗hMC-CP多抗,并以间接ELISA测定抗体效价,以Western blot鉴定抗体的特异性.结果:成功地表达并纯化了hMC-CP,以纯化的重hMC-CP组免疫家兔成功制备了兔抗hMC-CP抗体,ELISA结果显示效价达1:6 400,Western blot分析表明该抗体能特异结合hMC-CP.结论:以纯化的重组hMC-CP为免疫原,成功地制备了效价、特异性较强兔抗hMC-CP抗体,为进一步建立简便的hMC-CP检测方法及进一步研究hMC-CP生物学功能打下了良好的基础.
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T7噬菌体展示文库在鉴定单克隆抗体所识别的抗原及表位中的应用
目的:用T7噬菌体展示文库鉴定1株单克隆抗体(mAb)DBD02的特异性.方法:用Protein G Sepharose结合mAb后对T7噬菌体展示文库进行2轮生物淘洗,用洗脱的通过特异mAb富集的噬菌体铺板后,以DBD02为一抗进行Dot blot筛选,阳性克隆进一步通过Western blot检测,PCR扩增阳性噬菌体插入的肝脏cDNA片段,测序后,通过BLAST比对确定mAb DBD02所识别的抗原.结果:在2轮淘洗后得到了>50个阳性克隆,取其中2个点扩增后进行了Western blot检测,并对这2个阳性克隆进行了PCR,序列测定后鉴定了此mAb所识别的抗原为乙醇脱氢酶,并将此mAb识别的表位限定于22个多肽内.结论:T7噬菌体展示文库可应用于mAb特异性的鉴定,与cDNA表达文库的免疫筛选相比,具有省时、省力和经济的特点,是mAb特异性鉴定的有力工具.
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F10蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
目的:表达F10蛋白,并制备兔抗F10多克隆抗体.方法:利用PCR方法扩增F10基因片段,经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后连接入pET-GST原核表达载体,构建的pET-GST/F10融合重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达蛋白,并以亲和层析的方法进行纯化.表达产物用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定.以纯化的F10蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗F10的多克隆抗体,并以ELISA法检测抗体效价.结果:经酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的F10读码框.SDS-PAGE电泳分析显示pET-GST/F10诱导后表达一相对分子质量(Mr)约为61 000的融合蛋白,与预期结果相符.目的蛋白纯化后的纯度达90%以上,Western blot证实该蛋白是GST/F10的融合蛋白.将纯化的GST/F10融合蛋白免疫家兔,得到的兔抗F10抗体效价达1:20 000.结论:成功构建了人F10基因原核表达载体,并获得了高纯度的F10重组蛋白及兔抗F10抗体,为下一步研究F10基因功能奠定了实验基础.
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抗哈维氏弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定
目的:研制抗哈维氏弧菌特异性单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析.方法:以哈维氏弧菌GYC1108-1颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与Sp2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,并鉴定mAb特异性及敏感性.结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后,共获得5株抗GYC1108-1的mAb,其中1B7的细胞上清及腹水效价分别为1:3 200和1:32 000,交叉反应结果表明1B7除了与测试的多株哈维氏弧菌发生反应外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌等发生交叉反应.ELISA检测1B7腹水对GYC1108-1的敏感性达107/L.结论:制备的抗哈维氏弧菌mAb可为哈维氏弧菌的检测及防治等提供有用的试剂.
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鼠抗人FL单克隆抗体的研制及其生物学特性
目的:研制鼠抗人FL 单克隆抗体(mAb)以及对其生物学特性的研究.方法:以人FL基因转染细胞株L929-FL为免疫原,采用B细胞杂交瘤技术,获取分泌抗人FL mAb的杂交瘤细胞株.快速定性试纸法鉴定mAb亚类,体内诱生腹水法制备mAb,免疫亲和层析法纯化mAb,MTT法检测mAb对白血病细胞株U937和HL-60生长的影响,Annexin V/PI染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡.结果:建立了3株稳定分泌抗人FL mAb的杂交瘤,命名为3C2、3C6和8D10.快速定性试纸法鉴定3株mAb均属小鼠lgG2a亚类.3株mAb分别识别白血病细胞U937和HL-60上表达的FL分子.将3株mAb分别加入共表达FL/Flt3的U937和HL-60细胞的培养体系中,MTT法检测显示,3C2、3C6和8D10对白血病细胞的生长均具有抑制作用(P<0.05).Annexin V/PI染色FCM检测细胞凋亡,3C2和8D10均能增加白血病细胞凋亡的作用.结论:3C2、3C6和8D10是3株功能性抗FL mAb,对于研究FL/Flt3在白血病发生、发展中的作用具有潜在的应用价值.
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一株识别CD40分子新位点的单克隆抗体研制及生物学特性鉴定
目的:研制识别CD40分子新位点的单克隆抗体(mAb).方法:以转人CD40转基因细胞L929-CD40为免疫原,常规免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929-CD40转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用快速定性试纸法及竞争抑制结合试验分析了该mAb的亚类及抗原识别位点;采用MTT法分析mAb在体外对肿瘤细胞的促增殖效应、ELISA法测定细胞因子分泌以及PI染色分析细胞周期.结果:获得1株持续、稳定分泌鼠抗人CD40 mAb的杂交瘤细胞株(命名为2B6),该mAb能特异性地识别人CD40分子并较好的识别肿瘤细胞株HO8910表达的CD40分子并能够体外促进肿瘤细胞增殖.结论:成功地研制1株识别CD40新位点mAb,该mAb能够很好地识别肿瘤细胞表达的CD40分子并具有体外促进肿瘤细胞生长的作用.
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用于制备抗体芯片的抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及特性分析
目的:制备抗人甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(mAb),并用于制备抗体芯片.方法:利用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗人AFP mAb的杂交瘤细胞株;对抗体的亲和力、特异性等特性进行分析;利用抗体相加实验,双抗体夹心ELISA、胶体金免疫层析实验以及抗体芯片技术对抗体表位及其配对情况进行分析研究.结果:共获得16株稳定分泌抗人AFP mAb的杂交瘤细胞株,从中筛选出多组性能优良的配对抗体,结合抗体芯片技术,终筛选出适合制备抗体芯片的配对抗体.结论:当抗体包被材料或包被方法发生改变时,会引起mAb构象发生变化,从而影响抗体的配对效果.因此,筛选适合制备抗体芯片的配对mAb时,需要对mAb的特性进行综合分析,选取特异性好,亲和力高的mAb进行配对筛选.
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MAVS:连接线粒体与先天性免疫的桥梁
包括病毒在内的多种病原体能够触发细胞先天性免疫应答(innate immune response),它对于限制病原体的早期扩散是必不可少的.宿主细胞能够通过识别病毒早期复制中间产物,如:单链RNA或双链RNA(dsRNA),来激活多种信号途径,并终产生干扰素(IFNs)以及其他细胞因子,使先天性免疫向获得性免疫转换.
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血管生成抑制因子Arresten研究进展
肿瘤的生长、转移依赖于血管增生,抑制新血管的生成可使肿瘤细胞进入休眠状态并诱导其死亡.本文主要对血管生成抑制因子Arresten的结构、功能以及应用研究作了综述,并对其在肿瘤治疗和新药开发中的意义进行了展望.
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B、T淋巴细胞衰减因子的研究现状
B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)是近发现的Ig超家族成员,是T细胞表面的抑制性受体.在2004年第8届国际人类白细胞分化抗原会议上被命名为CD272[1].本文中就BTLA的分布、结构、功能及其配体作一综述.
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HIV致病机制的研究进展
获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)是由人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染所致的以循环CD4+T细胞显著下降、机会感染及恶性疾病为特征的继发性免疫缺陷综合征.据估计,截止2004年底,全球有3 940万人感染HIV,仅2004年,超过310万人死于AIDS,其中包括50万小于15岁的儿童[1].
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Notch信号通路与外周免疫
Notch信号通路是一个古老的信号传导途径,在无脊椎动物和脊椎动物中广泛存在且高度保守. Notch基因在被发现后很长的一段时间内并未引起人们的注意.
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载间充质干细胞海藻酸钠-壳聚糖微胶囊的制备及工艺优化
目的:以壳聚糖为囊材来制备间充质干细胞(MSCs)海藻酸钠-壳聚糖体系微胶囊.方法:通过研究羧甲基壳聚糖、低聚壳聚糖等不同种类壳聚糖的成囊性,以及壳聚糖溶液浓度对间充质干细胞活性的影响,来优化微胶囊制备工艺.结果:羧甲基壳聚糖不能成膜;低聚壳聚糖成囊性差;高相对分子质量(Mr)壳聚糖成囊性良好,但微囊粒径大且易破碎;Mr为100 000 ~250 000的壳聚糖具有良好的成囊性.结论:可用Mr 100 000 ~250 000的壳聚糖来制备载MSCs海藻酸钠-壳聚糖微胶囊.同时应控制壳聚糖溶液覆膜时间<10 min,以及1 g/L壳聚糖溶液来降低其对间充质干细胞活力的影响.
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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾细胞凋亡的研究
目的:探讨以多房棘球绦虫(Em)重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠再以Em的续绦期幼虫泡球蚴的原头节攻击后,鼠脾细胞凋亡的变化.方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠,免疫后8周用Em原头节进行攻击感染.感染后18周杀鼠取脾分离脾细胞,用流式细胞术检测脾细胞的凋亡,同时设空载体、BCG和PBS对照组.结果:疫苗接种组小鼠脾细胞的凋亡率明显低于感染对照组;鼻腔内接种组脾细胞的凋亡率显著低于皮下注射组.结论:泡球蚴的感染可引起小鼠脾细胞发生凋亡,Em重组BCG-Em14-3-3疫苗接种可抑制感染小鼠脾细胞的凋亡.疫苗鼻腔内接种是一种较好的免疫途径.
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血小板第4因子对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期的调控机制
目的:检测小鼠骨髓细胞p53、Cyclin D1及CDK4蛋白表达量的变化,以探讨血小板第4因子(PF4)对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞保护作用的机制.方法:雄性BALB/c小鼠随机分为3组,第1组(正常对照组)、第2组(单纯照射组)、第3组(PF4保护组),第3组在照射前26 h及20 h腹腔注射PF4 40 μg/kg,第2、3组全身一次性5 Gy 60Co-γ射线照射,照射后4 h取小鼠骨髓细胞,Western blot检测小鼠骨髓细胞内p53、Cyclin D1、CDK4蛋白量表达的变化.结果:第2组、第3组小鼠骨髓细胞p53蛋白量与第1组相比明显升高,而Cyclin D1、CDK4则明显降低(P<0.05);第2组与第3组p53蛋白表达量的表达有明显差异(P<0.05),而Cyclin D1与CDK4无统计学意义(P>0.05).结论:p53蛋白在PF4对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞周期调控作用中起一定作用.
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大豆肽的电荷及相对分子质量对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
目的:研究大豆肽的电荷及相对分子质量(Mr)对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.方法:分别采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、肽酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶6种商品酶,单独使用或将它们组合水解为大豆蛋白,测定其正电荷肽的含量和Mr的大小,并用MTT比色法检测大豆肽对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.结果:水解大豆肽的Mr平均小于1 000,其单独作用及与ConA协同作用,均对小鼠脾淋巴细胞的增殖具有促进作用.结论:脾淋巴细胞增殖的刺激指数与正电荷肽含量的相关性较好;而其Mr的变化对刺激指数的影响不大.
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接触抑制下调CD112和CD155在ECV304细胞上的表达伴有对NK细胞杀伤的抵抗
目的:研究细胞培养接触抑制条件下,ECV304细胞表面CD112和CD155表达的变化及其对NK细胞杀伤敏感性的变化.方法:以ECV304细胞接触抑制为模型,应用免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察CD112和CD155分子在对数生长状态和发生接触抑制状态ECV304细胞上表达情况的变化;采用51Cr-4 h释放试验,观察NK细胞对2种状态ECV304细胞杀伤活性的改变.结果:CD112和CD155分子在ECV304细胞发生接触抑制时表达水平明显低于对数生长期细胞.NK细胞对发生接触抑制的ECV304细胞的杀伤率比对数生长期的细胞有所下降.结论:接触抑制会使ECV304细胞对NK细胞杀伤有一定抵抗,同时伴有CD112和CD155分子表达的下调,两者间是否存在因果关系值得进一步深入探讨.
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hBPI与EGFP融合蛋白真核表达载体的构建及其在MCF-7细胞中的表达和定位
目的:探讨人细菌透性增加蛋白(hBPI)在哺乳细胞中的表达和亚细胞定位.方法:以本人克隆得到的质粒pBE1为模板,利用一对带有Kozak序列以及删除终止密码子的引物进行PCR,获得的产物与pEGFP-N1载体连接,构建pBE2哺乳细胞特异表达载体并稳定转染MCF-7细胞,获得了转基因细胞系.提取其基因组DNA,PCR扩增检查BPIcDNA片段和EGFP片段是否已整合入MCF-7细胞基因组中.提取总RNA,通过RT-PCR方法检查BPI-EGFP在转录水平的表达.Western blot进一步鉴定融合蛋白的表达定位.结果:荧光显微镜观察显示,BPI-EGFP融合蛋白分布在整个细胞质中,并且在核膜周围有高表达.PCR扩增证实了BPIcDNA片段和EGFP片段已整合入MCF-7细胞基因组中.RT-PCR证明了hBPI和EGFP的融合蛋白在MCF-7细胞中在转录水平的表达.Western blot分析显示hBPI-EGFP以定位于细胞质和分泌到MCF-7细胞外两种形式表达.结论:hBPI-EGFP融合蛋白与天然的嗜中性的多核粒细胞中的定位和转运特点是一致的.
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人参多糖和猪苓多糖对CIA大鼠肠道黏膜免疫细胞功能的影响
目的:观察人参多糖和猪苓多糖对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能的影响.方法:采用皮内注射Ⅱ型胶原(COL-Ⅱ)建立CIA大鼠模型,分离模型大鼠PP结淋巴细胞(PPL)、肠道上皮内淋巴细胞(IEL)和固有层淋巴细胞(LPL),分别与不同浓度的人参多糖和猪苓多糖共培养48 h后,检测培养上清中TNF-α和IFN-γ含量的变化.结果:与加入RPMI1640培养液的空白对照组比较,不同浓度的人参多糖和猪苓多糖,均可使PPL分泌TNF-α减少,但使IFN-γ的分泌增加;而IEL和LPL分泌TNF-α和IFN-γ的水平均有不同程度的降低.结论:人参多糖和猪苓多糖对CIA大鼠PPL具有不同的免疫调节作用;而对于IEL和LPL,则可导致其免疫活性降低.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |