细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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HSP65-PSA融合蛋白的体内外抗肿瘤活性研究
目的:研究热休克蛋白65(HSP65)-前列腺特异性抗原融合蛋白在体外对人树突状细胞的活化作用以及在小鼠体内抑制PSA阳性肿瘤细胞生长的作用.方法:利用Westernblot方法对融合蛋白HSP65-PSA的特异性进行鉴定;利用共聚焦显微镜、流式细胞术(FCM)检测和斑点杂交的方法对PcDNA3-GFP-PSA稳定转染的B16细胞进行鉴定;用HSP65-PSA融合蛋白刺激来自于人外周血的未成熟树突状细胞,观察融合蛋白对树突状细胞的体外活化作用;用PcDNA3-GFP-PSA稳定转染的B16细胞种植C57BL/6小鼠,继而用HSP65-PSA融合蛋白来免疫小鼠以观察融合蛋白对PSA阳性B16肿瘤细胞生长的体内抑制作用.结果:Western blot检测显示融合蛋白HSP65-PSA具有PSA蛋白特异性.共聚焦显微镜、FCM检测和斑点杂交结果均显示PcDNA3-GFP-PSA转染的B16细胞转染情况良好.体外细胞实验显示,将HSP65-PSA融合蛋白作用于人外周血树突状细胞后可以明显促进树突状细胞表面分子CD86的表达,其上调率为52.93%.动物体内实验显示,HSP65-PSA融合蛋白可以明显抑制PSA阳性B16肿瘤细胞在小鼠体内的生长.10 μg蛋白免疫组的肿瘤体积(4.91±5.21)与对照组(10.56±6.10)相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:HSP65-PSA融合蛋白可以在体外活化树突状细胞,在小鼠体内抑制PSA阳性B16肿瘤细胞的生长.HSP65-PSA融合蛋白可能具有应用于PSA阳性肿瘤的免疫治疗作用.
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肾小管上皮细胞转分化过程中ILK的表达变化及大黄素对其的干预效应
目的:研究信号蛋白ILK在IL-1β诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)中的表达变化以及大黄素是否是通过抑制ILK的表达而影响IL-1β诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化.方法:以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、IL-1β加大黄素组.在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫双标法检测a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)和E-钙黏连素(E-cadherin)的表达;免疫单染检测ILK的表达;ELISA法测定培养细胞分泌的纤维连接蛋白(FN)含量.结果:IL-1β诱导细胞转变为明显类似成纤维细胞形态,增加a-SMA的表达[(65.5±1.7)vs(140.4±3.0),P<0.05],减少E-cadherin的表达[(82.5±1.0)vs(36.0±2.8),P<0.05),促进ILK的表达[(36.1±3.1)vs(82.4±1.2),P<0.05],促进FN的合成[(54.6±3.1)mg/Lvs(124.8±3.2)mg/L,P<0.05],加入大黄素后上述变化受到明显抑制.结论:在IL-1β诱导的TEMT中ILK的表达是明显上调的,大黄素可能通过下调ILK的表达而抑制IL-1β诱导的TEMT.
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重组人Era蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定
目的:为了得到可溶性表达的人Era(hEra)蛋白,并检测其生物学活性.方法:把人era的cDNA基因从pUC19质粒亚克隆人表达质粒pMAL-p2x中.pMAL-hEra转化大肠杆菌TB1,用异丙基硫代-B-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果:pMAL-hEra载体表达的融合蛋白是以可溶状态存在,表达量占菌体总蛋白的23.9%.再利用直链淀粉亲和色谱柱对表达的融合蛋白进行纯化,接着用因子X将融合部分切除,但切除后的hEra蛋白不稳定,随着时间的延长而被降解.活性测定结果表明人Era蛋白能与GTP结合,并具有GTP酶的活性.结论:可溶性表达了人Era蛋白,并用体外实验证实人Era蛋白是一种G蛋白,这对人era基因的功能研究具有重要意义.
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IL-18基因转染对小鼠卵巢癌OVHM体外增殖及体内成瘤的影响
目的:分析转染IL-18基因后,对小鼠卵巢癌OVHM细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响,初步探讨IL-18基因转染治疗卵巢癌的应用价值.方法:将逆转录病毒携带的小鼠IL-18基因成功转染至OVHM(OVHM/IL-18),以空载体转染的OVHM(OVHM/LXSN)和野生型(OVHM)作为对照.分别采用MTT、FCM检测体外培养细胞的增殖、凋亡及周期分布.于裸鼠皮下分别接种细胞,观察各组种植瘤生长情况,计算成瘤率;RT-PCR检测瘤组织中IL-18 mRNA表达;FCM和电镜分析肿瘤细胞增殖、凋亡状况.结果:3组细胞的体外增殖未见明显差异,均无明显凋亡现象,增殖指数、细胞周期分布均无明显差异(均P>0.05).接种后,3组裸鼠的成瘤率相同,但OVHM/IL-18组成瘤时间较晚,随瘤龄增长肿瘤生长缓慢,瘤组织中IL-18 mRNA阳性表达.OVHM/IL-18组裸鼠种植瘤细胞可见典型的凋亡现象,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,增殖指数明显降低,凋亡指数明显增高(P<0.01).结论:IL-18基因成功转染后,虽对体外卵巢癌细胞无直接毒性,但可能在体内借助非直接杀伤的其他途径,通过阻断细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡等抑制体内成瘤.
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IL-1受体拮抗剂对大鼠肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1 mRNA表达的影响
目的:研究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)对大鼠肝星状细胞(HSC)Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因表达的影响,探讨IL-1ra抗肝纤维化作用的机制.方法:原位分离、培养大鼠HSC,荧光显微镜观察及免疫细胞化学染色法鉴定.用1 μg/L、10 μg/L、100 μg/L 3个浓度的IL-1ra分别作用于HSC 48 h,实时荧光定量RT-PCR法检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和TIMP-1 mRNA的表达.结果:对照组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和TIMP-1mRNA的表达水平分别为1.97±0.29、2.70±0.57、3.83±0.30.加入1 μg/L、10 μg/L、100 μg/L IL-1ra后Col-Ⅰ基因表达水平依次为1.34±0.35、0.86±0.19、0.35±0.03;Col-Ⅲ基因表达水平依次为2.02±0.29、1.13±0.09、0.47±0.11;TIMP-1 mRNA的表达水平依次为3.12±0.25、2.53±0.38、1.98±0.18,与对照组比较,不同浓度处理组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和TIMP-1 mRNA的表达均明显降低(P<0.05).结论:IL-1ra以剂量依赖方式抑制HSC中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ及TIMP-1 mRNA的表达,具有抗纤维化作用.
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阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究
目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用.
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人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白的构建和表达
目的:构建和表达人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并测定该融合蛋白的生物学活性.方法:采用PCR和ovelap PCR方法构建人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用150 g/L SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产物;采用FACS法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性.结果:DNA序列测定结果表明:人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白已构建成功,表达可溶性产物的产量达4 mg/L以上,具有与Raji细胞(CD20+)和A549(4-1BB+)细胞结合的活性.结论:利用融合蛋白形式,首次成功地构建了人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白,并获得较高表达.表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性.
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NF-кB介导促红细胞生成素神经细胞保护作用的研究
目的:观察促红细胞生成素(EPO)对谷氨酸(Glu)诱导的大脑皮质神经元损伤的保护作用和核因子-кB(NF-кB)介导的细胞内信号转导机制.方法:采用1日龄Wistar大鼠皮层神经细胞体外原代培养技术,建立Glu兴奋性毒性神经细胞损伤模型.实验分为正常对照组、Glu组、EPO组和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC,NF-кB活化阻断剂)组.倒置显微镜下观察细胞的形态学改变;MTT法测定细胞存活率;流式细胞术测定细胞凋亡率评价细胞损伤程度.结果:Glu处理后神经细胞形态明显受损,EPO组神经细胞形态趋于正常,PDTC组细胞形态与Glu组相似;与正常对照组相比.Glu组神经细胞存活率明显下降、凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);而与Glu组相比,EPO组神经细胞存活率明显增高下降、凋亡率明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01).与EPO组相比,PDTC组细胞存活率明显下降、凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01),这些变化与Glu组相似.结论:EPO对Glu诱导的大脑皮质神经元损伤的具有保护作用,其胞内信号转导机制涉及到NF-кB的活化.
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人MASP1 N端片段原核表达载体的构建及其表达
目的:在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)N端片段.方法:采用PCR技术从含人MASP1 cDNA的质粒pGEM-MASP1中扩增MASP1-N端基因片段,将其插入原核表达载体pGEX4T-1,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP1-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与重组MBL-CLR、重组MBL的结合活性.结果:从pGEM-MASP1中扩增得到约860 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4 900 bp和860 bp片段,测序结果与预期的完全一致.纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR、重组人MBL蛋白结合.结论:获得了表达人MASP1 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP1 N端片段/GST融合蛋白,为MASP1分子的进一步研究提供了条件.
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乳杆菌肽聚糖调节小鼠免疫细胞基因表达的通路分析
目的:探索乳杆菌肽聚糖免疫调节作用的机制.方法:BALB/c小鼠腹腔注射乳杆菌肽聚糖,从腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞提取RNA,基因芯片分析基因表达情况,基于已知的基因网络数据库利用PathwayExplorer和GeneMAPP分析乳杆菌肽聚糖刺激特异性的基因网络.结果:PathwayEx-plorer分析得到的显著变化的基因网络是"细胞因子-细胞因子受体相互作用"和"辅助性T细胞表面分子".GeneMAPP分析得到显著基因网络是核糖体蛋白、炎性反应基因网络和血红素合成基因网络.结论:乳杆菌肽聚糖刺激引起大量蛋白表达,引起保护性炎性反应,激活Th细胞,可能引起Th1免疫反应.
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hTR-siRNA腺病毒的构建及其体外抗肿瘤的初步研究
目的:构建RNA干扰(RNAi)腺病毒,通过体外实验观察其抑制肿瘤细胞中人端粒酶RNA(hTR)基因表达、降低瘤细胞中的端粒酶活性、以及促进肿瘤细胞凋亡等作用.方法:首先用一种新的体外连接法构建腺病毒Ad-hTR-siR-NA,表达靶向hTR的小干扰RNA分子(siRNA),用100 MOI的重组腺病毒感染不同的肿瘤细胞系,再用TRAP-ELISA法测定细胞端粒酶活性、Real-time PCR测定hTR的mRNA水平、流式细胞术(FCM)测定肿瘤细胞凋亡率及人端粒酶反转录酶(hTERT)的蛋白变化.结果:感染了Ad-hTR-siRNA的肿瘤细胞的端粒酶活性明显降低,其中以HeLa细胞降低明显,其端粒酶活性抑制率达到58.87%,hTR的mRNA表达下调70.21%,细胞凋亡率为29.7%,但hTERT的蛋白表达并不被阻断.结论:Ad-hTR-siRNA可以有效、特异地抑制hTR基因表达,诱导体外培养的肿瘤细胞凋亡,具有抗肿瘤活性;此结果提示Ad-hTR-siRNA在肿瘤基因治疗方面具有潜在的应用价值.
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小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠过程中外周血血小板计数的动态变化及意义
目的:建立环磷酰胺(CTX)治愈荷膀胱癌T739小鼠的动物模型,观察外周血象特别是血小板计数在化疗治愈肿瘤中的动态变化及其意义.方法:给正常T739小鼠皮下接种小鼠可移植性膀胱移行细胞癌组织,建立荷膀胱癌的小鼠模型.接种后第7天,荷瘤小鼠腹腔内分别注入15、40、100 mg/kg的CTX,等量生理盐水对照,确定CTX治愈肿瘤的量效关系.然后再取12只荷瘤小鼠,随机分成2组,15 mg/ks CTX单次腹腔内注射,等量生理盐水对照,分别在用药后6 h、用药后第2、4、9、14天内眦静脉取血,进行血常规检测,分析荷瘤小鼠外周血象的动态变化.结果:15~100 mg/kg CTX治疗后2周内,荷瘤小鼠肿瘤生长受抑制或肿瘤结节缩小的速率与所用CTX的剂量呈正相关;CTX治疗后2月,荷瘤小鼠的存活率与所用CTX的剂量呈负相关.15 mg/kg CTX单次腹腔内注射在治愈多数荷瘤小鼠的同时对外周血象无明显抑制作用.用药后6 h治疗组荷瘤鼠外周血血小板计数为(1483.4±184.4)×109/L,明显高于对照组小鼠(1086.6±81.0)×109/L,两组数据比较具有统计学意义(P<0.01);用药后第2、4、9、14天治疗组荷瘤鼠外周血血小板计数与对照组小鼠比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:15 mg/kg CTX可治愈多数荷膀胱癌T739小鼠.单剂量CTX治疗后6 h荷瘤小鼠外周血血小板计数的一过性增高可能与其抗肿瘤作用有关.
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重组人IL-12在CHO细胞中高效表达克隆的筛选及产物的生物学活性分析
目的:重组人白细胞介素-12(rhIL-12)真核表达质粒(pcDNA6/v5-his-pT0)转染CHO细胞,筛选高效稳定表达克隆;并对表达产物进行生物学活性分析.方法:采用聚乙烯亚胺(PEI)将pcDNA6/v5-his-p70转入CHO细胞;用杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选阳性表达克隆,并进行单克隆扩增;RT-PCR进行表达鉴定;ELISA检测各克隆rhIL-12的表达量;应用淋巴细胞增生实验及细胞内细胞因子染色方法分析rhIL-12的生物学活性.同时,对筛选出的阳性克隆进行表达稳定性观察.结果:RT-PCR结果显示,选取的20个阳性克隆均可扩增出1 800 bp的特异性片段;ELISA表明,其中6个克隆rhIL-12表达水平较高(312.69~719.10 ng/L),高表达量达到719 ng/L(5×104个细胞,48 h);生物学活性分析表明,表达的rhIL-12可明显提高献血员外周血PBMC对PHA/HCMV反应的C34/IFN-γ及CD8/IFN-γ双标记阳性细胞克隆的频数;并且,可明显提高献血员外周血PBMC对PHA/HCMV刺激的增生反应效能.阳性克隆在维持量的筛选药物(2 ng/LBlasticidin)压力下传代6个月,其表达水平无明显变化.结论:rhIL-12真核表达载体(pcDNA6/v5-his-p70)能在CHO细胞中高效稳定表达;其表达产物具有良好的生物学活性.
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连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响
目的:分析连翘(FS)对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响.方法:无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记大肠杆菌DH5α,短期培养3 h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响.用LPS体外刺激活化腹腔巨噬细胞,Griess Reagent试剂盒检测并分析FS对巨噬细胞体外释放NO的影响.结果:FCM分析显示,终浓度为40、80、160 mg/L的FS对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬具有明显的促进作用(P<0.05).不同终质量浓度的FS对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞体外NO的释放均有抑制作用(P<0.05).结论:FS可以促进小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和抑制NO体外的释放.
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利用细胞块检测肾小球疾病患者尿中足细胞和巨噬细胞的应用研究
目的:探讨利用细胞块检测肾小球疾病患者尿中足细胞和巨噬细胞及其与肾脏病理及功能损害的关系,试图寻找一种反映肾损害的非创伤性指标.方法:利用免疫组化测定患者尿细胞块中足细胞和巨噬细胞数,并用HE和免疫组织化学双染技术观察肾脏活检病理切片,用化学法测定尿蛋白、血肌酐和尿肌酐.结果:肾小球疾病患者尿细胞块中足细胞和巨噬细胞数目比正常对照明显增多(P<0.01);尿细胞块中足细胞和巨噬细胞数目与蛋白尿程度、肾组织损害指数及肾功能损害明显相关(P<0.01).结论:肾小球疾病患者尿细胞块中足细胞和巨噬细胞明显增多,并且与蛋白尿程度、肾组织损害指数及肾功能损害明显相关,提示其作为一种监测肾小球疾病肾损害的非创伤性指标的可能.
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慢性苯中毒患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞分布和克隆性研究
目的:了解慢性苯中毒患者外周血T细胞的TCRV8基因谱系及其克隆性增殖情况.方法:利用RT-PCR方法扩增10例慢性苯中毒患者外周血单个核细胞中8个TCR Vδ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性.结果:8例健康人平均表达(6.63±0.52)个Vδ亚家族,外周血中未检测到Vδ4和Vδ5亚家族,慢性苯中毒患者工人表达(1.10±0.57)个Vδ亚家族(1例重度苯中毒工人8个Vδ亚家族均未表达),外周血中未检测到Vδ1、Vδ3、Vδ4和Vδ8亚家族,与健康人比较有显著性差异(P<0.01).6例慢性苯中毒患者存在1~2个Vδα亚家族T细胞出现克隆性增殖.结论:慢性苯中毒患者外周血出现TCR Vδ亚家族倾斜性分布和克隆性增殖T细胞,这可能是苯中毒后所引起的机体特异性免疫反应.
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Rh+血交换治疗对RhHDN患儿血清抗体的影响
目的:了解血清抗体检测指标在Rh新生儿溶血病(HDN)换血治疗时的参考判定价值.方法:采用Rh+血代替Rh-血对38例RhHDN患儿进行换血治疗,对换血前、后(30 min,24 h,72 h)进行检测患儿血型抗体相关指标.结果:4例换血后血清学阳性者进行了2次换血治疗,其余均进行了1次换血治疗.结论:血型抗体检测对临床评判RhHDN患儿换血频次有重要参考价值.
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Rh血型抗体的检测及结果分析
目的:调查Rh血型抗体的检出率及其特异性分布特点.分析Rh血型抗体的临床意义及产生规律.方法:采用微柱凝胶抗球蛋白技术筛查和鉴定红细胞血型不规则抗体,对鉴定为Rh血型抗体者,采用单克隆抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e鉴定红细胞Rh血型抗原,以确认抗体的准确性;检测抗体的效价、Ig类型及37℃反应性,以明确其临床意义;询问孕产史、输血史,如果为新生儿检测其母亲血浆中是否有相同特异性的抗体,以分析抗体产生的原因.结果:就诊者54000例,共检出Rh血型抗体47例,检出率为0.087%,其中有妊娠史者27例,有输血史者13例,既有妊娠史又有输血史者1例,抗体来自母体的新生儿6例;抗体的特异性为:抗-E 29例(61.70%)、抗-D 8例(17.02%)、抗-cE5例(10.64%)、抗-c 4例(8.51%)、抗-C 1例(2.13%);47例Rh血型抗体均为IgG或IgG+IgM类,37℃均可与具有相应抗原的红细胞反应,抗体效价介于1~4096.结论:被检就诊者Rh血型抗体的检出率低于白种人;在检出的Rh血型抗体中,抗-E占绝对多数,而抗-D的检出率呈逐步减少的趋势;妊娠和输血引起的同种免疫是Rh血型抗体产生的原因,新生儿自母体被动获得的Rh血型抗体是Non-ABO-HDN主要的致病抗体.
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Th2类细胞因子与乙肝病毒相关性肝病的关系
目的:探讨慢性肝病患者血清中Th2类细胞因子IL-4、IL-6和IL-10的表达水平及临床意义.方法:以ELISA法检测肝病患者(57例)和正常对照(25例)血清IL-4、IL-6和IL-10的水平.结果:肝病患者血清中IL-4和IL-6的表达水平均明显高于正常人(肝病患者vs正常对照,IL-4,t=3.19,P<0.01;肝病患者vs正常对照,IL-6,t=3.26.P<0.01;),但肝病患者各组间细胞因子水平无统计学意义(P>0.05).肝病患者和正常人的IL-10水平均低,亦无统计学意义.结论:慢性乙肝病毒相关性肝病患者血清IL-4和IL-6水平对判断病情程度及预后有重要意义.
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胃癌患者C型行为特征及其与机体免疫指标相关性研究
目的:探讨胃癌与C型行为的相关性,研究胃癌患者的心理行为因素对各免疫指标(IgG、IgA、IgM、C3、CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞含量)的影响.方法:总体样本140例,其中胃癌组70例,正常对照组70例按1:1配比.所有胃癌组在手术前和正常对照组均完成C型行为量表,并同时抽取静脉血检查免疫全套和NK细胞含量.用t检验、x2检验、多元逐步回归分析等方法,在计算机上完成数据的统计处理.结果:(1)胃癌组在焦虑、抑郁、愤怒、合理化、控制和愤怒向内等因子得分均明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01).而在愤怒向外、乐观、社会支持等因素得分明显低于正常对照组(P<0.05),胃癌组9个因子结果均符合C型行为特征.(3)胃癌患者外周血IgG、IgA的含量、T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+及NK细胞含量显著低于正常对照组(P<0.05或P<0.01).多元逐步回归分析结果显示,CD4+细胞的多少与抑郁、愤怒、合理化等因子得分值呈负相关(P<0.05或P<0.01),NK细胞含量与愤怒向外、乐观、社会支持等因子得分呈正相关(P<0.05或P<0.01).IgA的含量与经济状况呈正相关.结论:胃癌发病患者的心理行为特征与C型行为特征密切相关.C型行为因素对胃癌患者的免疫起着不可低估的作用.
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耻垢分枝杆菌glmU基因克隆、表达及多克隆抗体的制备
目的:制备抗耻垢分枝杆菌(Smeg)GlmU的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定.方法:用PCR技术扩增SmegglmU,构建可在大肠杆菌中表达的重组质粒pET29b-SmegglmU,用IPTG诱导表达,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备抗Smeg GlmU的多克隆抗体,并以间接ELISA方法测定抗体效价,以Western blot方法鉴定抗体的特异性.结果:在大肠杆菌中得到了可溶性表达的Smeg GlmU;以其免疫小鼠获得抗血清,Western blot鉴定显示获得了能特异性地作用于耻垢分枝杆菌GlmU的多克隆抗体,ELISA测定表明其效价高于1:6 400.结论:获得了能特异性地作用于耻垢分枝杆菌GlmU的高效价多克隆抗体,为应用反义RNA技术研究glmU基因的功能奠定了基础.
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抗人硫氧还蛋白-1单克隆抗体的制备与鉴定及初步应用
目的:制备抗硫氧还蛋白-1(TRX-1)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法:以原核表达的TRX-1为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合.采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲和力和进行表位分析,用Western blot法对mAb的特异性进行鉴定.结果:得到筛选出3株能稳定分泌抗TRX-1的杂交瘤细胞株B6、D5和E3,免疫球蛋白亚类均为IgG>(к),腹水mAb效价均在106以上,3株抗体分别针对不同抗原表位.用mAb建立的竞争抑制ELISA灵敏度达1.22 μg/L.结论:获得3株特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗TRX-1的杂交瘤细胞株,为研究TRX-1在人类细胞、血液、组织中的表达及定位提供了可能,并为探索相关炎症、癌症发病机制及新治疗方法提供了强有力的工具.
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抗人CD40 mAb 5H6的125I标记及其与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性
目的:研究抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6的125I标记及与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性.方法:氯氨-T法125I标记mAb 5H6(125I-5H6),纸层析法测定125I-5H6的标记率和放射化学纯度,三氯醋酸沉淀法分析125I-5H6体外稳定性,细胞结合饱和实验进行Scatchard分析,lindmo法及其改良方法计算125I-5H6的免疫活性分数,细胞结合实验分析125I-5H6同HO8910细胞的内化和滞留.结果:(1)mAb5H6的125I标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%.(2)125I-5H6存放于4℃磷酸缓冲液中7 d后其放射化学纯度为(80.3±4.7)%,在37℃血浆中存放24h后其放射化学纯度为(95.3±0.8)%.(3)125I-5H6与HO8910细胞亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L,大结合位点数(Bmasx)=(2.17±0.08)×105个/细胞.(4)125I-5H6免疫活性分数达(38.6±5.4)%.(5)4℃2 h125I-5H6同HO8910细胞滞留率为(89.8±6.0)%,37℃2 h125I-5H6同HO8910细胞内化率达(54.9±2.6)%.结论:氯氨-T法进行125I-5H6标记具有良好的标记率和放射化学纯度,以及良好的体外稳定性和较高的免疫活性分数,且125I-5H6与HO8910细胞具有很高的亲和力,可用于动物体内实验.
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抗HBs mAb的研制及其对野生与免疫逃逸变异HBsAg的交叉反应特征
目的:抗HBs G6 mAb制备及其对重组野生与免疫逃逸变异HBsAg结合能力与特点的评价.方法:常规制备并纯化抗HBs mAb,以纯化抗HBs mAb IgG包被,采用ELISA对17种野生及"a"决定簇替代性变异全基因重组表达HBsAg进行检测,并与几种市售HBsAg检测试剂进行比较.结果:该杂交瘤细胞生长与分泌特性稳定,其培养上清与腹水效价分别为2048及4096×103;对野生HBsAg检测(ELISA)敏感性不低于0.125 μg/L.该抗体可与15种变异抗原中12种发生反应(P/N≥2.5),反应信号强度分别为低反应组(2份,与野生株A值比较,下同)平均7.55%;中反应组(1例)为59.40%;高反应组(9种)分别为野生株的92.1%~109.4%,低反应或无反应表达产物的免疫逃逸变异部位集中在HBV"a"决定簇I环的起始部即120~124序列之间.部分表达产物采用市售试剂作同步检测,平均显色强度高于或明显高于几种国内应用为普遍的HBsAg ELISA(P<0.05).结论:抗HBs G6 mAb对多数免疫逃逸变异HBsAg有很强的结合能力,所针对的变异类型亦表现出某种特殊的规律.
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抗体新功能的发现:催化水的氧化作用
经典免疫学理论认为,抗体通过其Fab片段可变区与相应抗原特异结合,通过调理、中和、ADCC及激活补体等机制发挥免疫效应,清除病原微生物或引起机体病理性损伤.
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类风湿性关节炎潜在的治疗靶点-NF-кB
核转录因子NF-кB在RA发病中起着中枢的作用,其激活涉及许多致炎细胞因子的转录,这些致炎细胞因子与RA的发病密切相关.以NF-кB为主要靶点,抑制其活性,下调致炎细胞因子的表达,为RA治疗提供了新的途径和方法.
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重组人肝脏胶原样凝集素1在中国仓鼠卵巢细胞内定位
目的:使用已构建的真核表达载体pEGFP-CLL1转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,探讨CL-L1在CHO细胞内的定位.方法:使用免疫荧光标记技术和Western blot检测EGFP-CLL1融合蛋白在细胞内的表达部位.结果:融合蛋白主要存在于细胞质基质中,不存在于内质网、高尔基体和细胞核等部位.结论:CL-L1为已发现惟一存在于细胞质基质中的胶原样凝集素成员.
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罗格列酮对高糖诱导的人肾小管上皮细胞血小板反应蛋白1和BMP-7表达的影响
目的:探讨罗格列酮(RSG)对高糖环境下人肾小管上皮细胞(HK-2)血小板反应蛋白1(TSP-1)和骨形成蛋白7(BMP-7)mRNA和蛋白表达的影响.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞分为正常糖对照组(NG)、高糖组(HG)、渗透浓度对照组(MG)、分别含RSG 5、10、20 μmol/L的高糖DMEM培养基培养的RSG干预组(R5、R10、R20),并于培养48 h后终止培养.免疫细胞化学方法检测人肾小管上皮细胞TSP-1、BMP-7、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白的表达,RT-PCR法检测人肾小管上皮细胞中TSP-1、BMP-7、CTGF mRNA表达.结果:高糖环境下,HK-2细胞TSP-1、CTGF mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),BMP-7 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05),加入RSG后,HK-2细胞TSP-1、CTGF的表达较NG组明显降低(P<0.05),BMP-7的表达明显升高(P<0.05).结论:RSG可以抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞TSP-1、CTGF高表达,提高BMP-7的表达,具有一定的肾脏保护作用.
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HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
目的:构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E. coli BL21(DE3)中表达.方法:采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414~606 aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将融合基因克隆入含有Ω增强子的pTΩ-TE高效的原核表达载体中,构建重组质粒pTΩ-TTSE.将pTΩ-T7SE转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导后用Western blot鉴定融合蛋白.结果:获得全长为1 284 bp的融合的HBV/HEV的基因片段.已构建的重组质粒pTΩ-T7SE转化E.coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为50 000重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于胞质中,表达量约占全菌蛋白的30.52%.Western blot结果表明在Mr为50 000处可见特异性着色带.结论:成功构建了原核表达载体pTΩ-T7SE,并表达出目的蛋白,为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础.
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虾类和蟹类的过敏原组分分析
目的:分析虾类和蟹类的过敏原组分.方法:聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析虾类和蟹类的主要过敏原组分.结果:不同种类的虾其主要过敏原组分相对分子质量(Mr)在36 000附近,不同种类的蟹主要过敏原组分Mr在29 000、36 000、66 000、89 000附近.结论:不同种类的虾蟹存在共同过敏原.
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黑色素瘤抗原MAGE-A9基因在真核细胞中的表达研究
目的:克隆MAGE-A9基因并对其进行真核表达及鉴定.方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MACE-A9基因片段,将该片段克隆在真核表达载体pEGFP-C3中,转染NIH3T3细胞,经G418筛选,构建稳定表达细胞系,并用荧光显微镜和Western blot对其进行鉴定.结果:经RT-PCR扩增出945 bp基因片段,经测序分析并与GenBank的DNA序列比对分析后,在NIH3T3细胞中表达.G418筛选后,细胞荧光信号较强,Western blot检测,细胞中的融合蛋白能够与抗MACE-A9的多抗结合.结论:成功地扩增了肝细胞肝癌中的MAGE-A9基因全长cDNA并进行真核表达与鉴定.
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IL-12+重组卡介苗对新生期小鼠脾脏T细胞功能亚群发育的影响
目的:研究IL-12+重组BCG新生期接种对小鼠脾脏T细胞功能亚群发育的影响.方法:新生清洁级BALB/c小鼠24只,分对照组、BCG组和IL-12+重组BCG组.新生期接种,4周后取脾细胞用流式细胞术检测CD3+CD8+IFN-γ+、CD3+CD8-IFN-γ+、CD3+CD8+IL-4+、CD3+CD8-IL-4+、CD4+Foxp3+T细胞的比例,其分别代表Tc1、Th1、Tc2、Th2和调节性T细胞亚群.结果:BCG组、IL-12+重组BCG组Th1、Tc1细胞比例明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),BCG组与IL-12+重组BCG组比较没有统计学意义;Tc2、Th2和调节性T细胞比例各组间比较没有统计学意义;二接种组Th1/Th2、Tc1/Tc2和总IFN-γ/IL-4比值明显高于对照组(P<0.05或P<0.01);CD4+Foxp3+T细胞比例各组间比较没有统计学意义(P>0.05).结论:新生期BCG和IL-12+重组BCG接种组接种均能促进Th1、Tc1细胞亚群的发育,提高Th1/Th2、Tc1/Tc2比值,但不能影响CD4+FoxP3+Treg细胞的比例.
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人Qki-5基因重组腺病毒的制备
目的:构建针对Qki-5人重组腺病毒表达载体,并在能在转染该病毒的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中观察到该基因过表达效果.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-Qki-5-IRES-EGFP与骨架载体共转化到大肠杆菌BJ5183中,同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒.用获得的病毒感染Qki-5表达较低的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western blot方法检测细胞中基因表达的变化.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对Qki-5基因的重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR和Western blot方法证实,在MDA-MB-231细胞中,Qki-5基因在mRNA和蛋白水平均有上升.结论:Qki-5腺病毒载体够建成功并且可以在乳腺癌细胞MDA-MB-231内表达.
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和厚朴酚对肝癌HepG2细胞生长抑制及凋亡的作用
目的:研究和厚朴酚(honokiol)对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及诱导凋亡作用.方法:用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度和厚朴酚对HepG2细胞的增殖活性的效应,通过显微镜、荧光染色观察细胞形态学变化;DNA片段化检测细胞凋亡;流式细胞术检测和厚朴酚诱导细胞凋亡的凋亡指数(AI),caspase-3、8、9活性的变化.结果:和厚朴酚浓度为40~160 μmol/L时对HepG2细胞增殖有明显的抑制效应,且呈剂量依赖性;细胞加入和厚朴酚诱导24 h后AI明显高于未加入组(P<0.05),caspase-3、8、9活性增高.结论:和厚朴酚在一定浓度范围内能明显抑制HepG2细胞的增殖并能诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖性.它可能通过激活caspase途径诱导HepG2细胞凋亡.
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DC-SIGNR在人胎盘滋养层细胞中的表达及意义
目的:探讨DC-SIGNR在人胎盘绒毛组织中的定位及在体外培养滋养层细胞上的表达.方法:建立稳定的滋养层细胞原代培养体系,采用免疫组化单染及荧光双染的方法检测不同孕期正常胎盘绒毛组织及体外培养滋养层细胞上DC-SIGNR的表达.结果:DC-SIGNR主要表达于胎盘滋养层细胞、Hofbauer细胞及胎盘微血管内皮细胞的胞质及包膜,在原代培养的人绒毛膜滋养层细胞中的DC-SIGNR的表达与在体组织表达一致.结论:DC-SIGNR表达于不同孕期的胎盘组织及体外分离培养滋养层细胞,为研究滋养层细胞上该受体在宫内感染中的作用提供体外实验的细胞学基础.
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IL-15和TGF-β对人PBMC上LAIR-1表达的调节作用
目的:研究细胞因子IL-15和TGF-β对人外周血单个核细胞(PBMC)上LAIR-1表达的调节作用.方法:以IL-15和TGF-β作用于人PBMC,流式细胞术(FCM)检测PBMC上白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)的表达.结果:与单独PHA刺激组相比,IL-15刺激72 h后细胞免疫荧光强度明显减弱(P<0.05),阳性细胞百分率也有所下降;TGF-β刺激的PBMC上LAIR-1表达水平也有所降低.结论:IL-15和TGF-β都可以下调PHA活化PBMC上LAIR-1的表达.
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系统性红斑狼疮模型小鼠脾脏细胞凋亡及可能机制
目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠的脾脏细胞凋亡及其相关调控机制.方法:采用ConA活化的同系脾脏细胞诱导BALB/c小鼠SLE,通过检测其外周血自身抗体、肾组织病理学改变确定SLE小鼠模型诱导成功.脾脏细胞凋亡的检测采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法,免疫细胞化学法检测脾脏细胞Bcl-2和NF-кB的表达.结果:ConA活化的同系脾脏细胞成功诱导BALB/c小鼠发生SLE,与盐水对照组和未活化脾脏细胞组比较,SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡率明显降低,Bcl-2和NF-кB的表达均增加(P<0.01).结论:SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡率降低,可能是通过Bcl-2和NF-кB的表达增加所致.
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改造稀有密码子对rhFGF8a原核表达的影响
目的:构建重组人成纤维细胞生长因子8a(rhFGF8a)高效表达载体,提高该蛋白的表达量.方法:采用PCR技术设计引物替换rhFGF8a基因N端的稀有密码子以及稀有终止子,构建原核表达载体pET22b-mrhFGF8a,转化大肠杆菌,用异丙基β硫代半乳糖(IPTG)诱导表达,Sephacryl S-200纯化表达蛋白,MIT法检测其生物学活性.结果:表达产物经SDS-PAGE、Western blot鉴定,目的蛋白量占全菌蛋白的31%,Sephacryl S-200纯化后蛋白纯度可达97.28%,且具促进NIH3T3细胞增殖活性.结论:通过改造稀有密码子的方法有效地提高了真核基因在原核表达体系中的表达量.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |