细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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Flt3L及CCL5对prime/boost免疫策略中抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用
目的:研究Flt3L与CCL5作为联合佐剂在prime/boost免疫策略中对HBc抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用.方法:将两种细胞因子质粒与携带HBc抗原的DNA疫苗经肌内注射法共免疫小鼠, 免疫3次后再用原核表达的HBc颗粒蛋白或HBc DNA疫苗加强, 观察对稳定表达HBcAg 的小鼠黑色素瘤细胞(B16-HBc)的生长抑制作用;并分别采用MTT法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖、流式细胞术检测脾CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清IL-2、IL-4含量及乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL杀伤活性.结果:与对照组相比, 佐剂联合DNA疫苗免疫经蛋白加强组(DDP/Adj)显著抑制肿瘤生长;佐剂联合DNA疫苗免疫组(DDD/Adj)及DDP/Adj组均可促进特异性淋巴细胞增殖反应(P＜0.05), 且DDP/Adj 高于DDD/Adj组(P＜0.05);DDD/Adj 及DDP/Adj组小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、IL-2 表达水平及CTL杀靶活性均高于对照组(P＜0.01或P＜0.05), IL-4 表达水平在各组无显著区别(P＞0.05).结论:在prime/boost免疫策略中, 采用Flt3L与CCL5两种细胞因子联合应用可显著促进荷瘤小鼠产生抗原特异性免疫应答及抗肿瘤作用.
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阿司匹林对人γδT细胞杀伤消化系统肿瘤细胞的影响
目的:探讨阿司匹林对人γδT细胞杀伤消化道肿瘤细胞株的影响.方法:用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞.用不同浓度的阿司匹林诱导γδT细胞和消化道肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株, 用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性, 用流式细胞术(FCM)检测阿司匹林诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡百分率.结果:γδT细胞培养10 d时从扩增前4.21%增加到70.35%.阿司匹林0.4～0.8 mmol/L诱导24 h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性高, 浓度超过3.2 mmol/L时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的阿司匹林诱导24 h后除药物浓度在0.4 mmol/L时γδT细胞对SW-480、SW-1116和LOVO细胞株的杀伤活性略有增强外, 其他组与对照组比较无明显变化.3.2 mmol/L阿司匹林对γδT细胞诱导24 h的凋亡率(52.71%)明显高于SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株(分别为7.88%、8.89%、6.21%、4.47%和%3.67).结论:阿司匹林在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤肿瘤细胞作用, 超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加γδT细胞的凋亡率, 而对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株作用不明显.
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HBV X基因对成人肝细胞HL-7702线粒体功能的影响
目的:研究HBV X基因与线粒体COXⅢ基因相互作用以及对线粒体功能的影响. 方法:将HBV X基因真核表达载体pCDNA3-X及空载体pCDNA3转染成人肝细胞HL-7702细胞, 经过2周G418筛选, 获得稳定表达的新细胞株, 分别命名为HL-7702/HBx和H-7702/pcDNA3, RT-PCR和Western blot方法证实HBV X基因在HL-7702/HBx细胞内的稳定表达.抽提细胞总RNA进行半定量RT-PCR及分离细胞线粒体进行Western blot检测COX Ⅲ表达水平变化, 并通过酶动力学方法检测线粒体细胞色素氧化酶活性.结果:重组质粒pcDNA3-X转染后经G418筛选, RT-PCR和Western blot分析结果显示HL-7702-HBx细胞能够稳定表达HBV X基因.RT-PCR和Western blot结果发现HBV X基因下调COX Ⅲ蛋白表达而不影响mRNA水平表达.酶动力学检测发现线粒体细胞色素C氧化酶活性降低.结论:HBV X基因通过转录后水平调节COX Ⅲ表达, HBx通过与COXⅢ相互作用抑制线粒体细胞色素氧化酶活性.
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域多克隆抗体的制备和特性分析
目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD, 并制备兔抗β6LBD多克隆抗体.方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段, 经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体, 构建的 pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒, 转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株, 经IPTG诱导表达, SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体, 纯化目的蛋白.然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体, 以ELISA方法测定抗体效价, 并以Western blot鉴定其特异性.结果:SDS-PAGE电泳分析显示pGEX-4T-1-β6LBD诱导后表达一Mr约为42 000的GST-β6LBD融合蛋白, 与预期结果相符.目的蛋白纯化后, 在电泳图片上显示较为清晰的单一条带, 用纯化GST-β6LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12 800以上, 具有较高的特异性.结论:制备了具有高亲和性和特异性的抗猪源整联蛋白β6LBD多克隆抗体, 为深入研究整联蛋白β6在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础.
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人核迁移蛋C刺激人造血干细胞增殖分化为巨核细胞研究
目的:研究人核迁移蛋C(hNUDC)促进人脐血来源的CD34+细胞增殖、分化为巨核细胞的作用.方法:使用Dynal CD34体外分离系统收集人脐血CD34+细胞, 无血清甲基纤维素半固体法体外培养CD34+细胞12 d后, 显微镜下观察hNUDC对CD34+细胞分化增殖为小、中、大巨核细胞集落的形态、数目的影响;无血清液体培养体系培养CD34+细胞10 d后, 流式细胞术检测hNUDC对CD34+细胞分化增殖为CD41+细胞的表达率及其DNA倍性的影响.结果:hNUDC能够明显促进CD34+细胞分化增殖形成中小型CFU-MK集落, 可显著增加巨核细胞表面标志物CD41+的表达, CD41+细胞中DNA倍性显著地高于血小板生成素.结论:hNUDC对促进造血干细胞增殖和分化为巨核细胞具有重要作用.
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超抗原SEB活化耐受性NKT细胞亚群的研究
目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征.方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导, 收集体外扩增10 d的淋巴细胞为效应细胞, 与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3 d, 测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力.在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加效应细胞, 3 d后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激原的应答反应能力.用MTT染色方法记录细胞增殖的A值.以ConA活化的淋巴细胞做参照, 用流式细胞术(FCM)解析了耐受性效应细胞中NKT细胞亚群并显示分化来源与功能的相关性.结果:与正常淋巴细胞对抗原应答反应能力相比, SEB活化的效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低, 细胞生长的A值从正常组的0.80±0.04、0.60±0.03和0.55±0.07下降到0.60±0.05、0.30±0.05及0.27±0.04 (P＜0.01, n=3).效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述抗原的应答反应, 尤其抑制ConA 活化的T淋巴细胞的应答反应;A值分别由正常值降低到0.26±0.002、0.48±0.04及0.34±0.02(P＜0.01, n=3).效应细胞中CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+/NK1.1+NKT细胞亚群显著增加(P＜0.05和P＜0.01, n=4).ConA活化的淋巴细胞是T淋巴细胞并包括CD4-CD8-/CD3+ NK1.1+ NKT细胞.结论:超抗原SEB活化的耐受功能与CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+NK1.1+NKT细胞亚群有关, 它们由T细胞分化而来. CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞没有参与耐受性调节.
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原子力显微镜观察Jagged1对DC分化的影响
目的:探讨Jagged1对树突状细胞(DC)分化的形态学影响.方法:应用骨髓法诱导培养DC, 并利用原子力显微镜(AFM)观察细胞的超微结构.结果:与对照组相似, Jagged1组的细胞形态不规则, 伪足分化和突出的片状结构较为明显, 且表面粗糙;相反, DAPT组细胞的伪足不明显, 多数细胞趋于圆形, 表面相对光滑.此外, Jagged1组的细胞高于对照组和DAPT组, 而直径则与对照组相当.结论:Jagged1对DC分化形态的影响不大, 而DAPT组的细胞形态发生明显改变.
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脂肪来源的干细胞移植对大鼠脑缺血后微血管生成及bFGF和VEGF表达的影响
目的:探讨脂肪来源的干细胞(ADSC)移植对大鼠脑缺血后微血管生成的可能机制.方法:72只清洁级成年雄性Sprague-Darley大鼠, 随机分为假手术组(Sham组)、局灶性脑缺血组(MCAO组)、溶剂对照组(vehicle组)和ADSC治疗组(ADSC组), 每组18 只, 采用改良Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型, ADSC移植前用DAPI标记, ADSC 组于造模成功1 d后经侧脑室注射入30 μL的经DAPI标记的ADSC细胞悬液, 内含1×106细胞, vehicle组则注射同等剂量的PBS, 术后4 d、7 d和14 d分批处死实验动物, 并断头取脑, 采用免疫组织化学法和半定量RT-PCR法检测缺血区脑组织的新生血管及bFGF和VEGF表达的动态变化.结果:大鼠脑缺血后缺血区即可见大量的微血管生成, 2周达高峰.ADSC组较MCAO组和vehicle组缺血区微血管密度明显增高(P＜0.01);ADSC组术后4 d、7 d和14 d脑组织中bFGF和VEGF的表达水平较MCAO组和vehicle组明显增高.结论:ADSC移植促进脑缺血大鼠缺血区微血管的生成, 其机制可能与促进bFGF和VEGF的表达有关.
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培养前后脐血CD34+细胞在NOD/SCID鼠体内造血重建功能的比较
目的:以NOD/SCID小鼠为模型, 经半致死剂量照射后输注新鲜或培养后的造血细胞, 以比较培养前后脐血CD34+细胞的造血重建功能.方法:从新鲜脐血中分离单个核细胞(MNC), 采用干细胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)、Flt3配体(FL)、白细胞介素3(IL-3)和白细胞介素6(IL-6)细胞因子组合体外培养14 d.通过MiniMACS免疫磁性吸附柱从新鲜或培养后的MNC中分离CD34+细胞, 4×105个CD34+细胞和5×106CD34-细胞混合后通过尾静脉输注入NOD/SCID小鼠中.饲养过程中动态观察外周血象恢复情况, 6周后检测小鼠骨髓和脾脏细胞中人源细胞及各系造血细胞的含量.结果:体外培养MNC 14 d后, 总细胞扩增了1.78倍;细胞移植6周后, 输注新鲜和培养后造血细胞的小鼠均存活, 在小鼠骨髓和脾脏中均可检测到人源细胞及各系人源血细胞和人特异ALU基因序列, 小鼠外周血象恢复到辐照前水平.培养后CD34+细胞在小鼠体内的植入水平与新鲜CD34+细胞的相近, 而其各系人源血细胞的含量高于新鲜CD34+细胞. 结论:体外培养14 d后的CD34+细胞仍保持了体内植入和重建造血的能力, 且其多系造血重建能力优于新鲜CD34+细胞.
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ImmunoAIF△1-480融合蛋白对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用
目的:观察免疫促凋亡分子ImmunoAIF△1-480对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用.方法:利用PCR的方法将九聚精氨酸编码序列(R9)与AIF C-末端结构域编码区重组, 然后将R9-AIF△1-480基因与pCMV-e23sFv载体重组, 构建免疫促凋亡分子ImmunoAIF△1-480真核表达载体.用脂质体法转染CHO细胞, 经G418筛选, 建立稳定转染的细胞株, 通过RT-PCR、Western blot、流式细胞术(FCM)等方法检测重组基因在转染细胞中的表达及其对HER2阳性肿瘤细胞的特异性杀伤活性.结果:经过酶切鉴定与测序证实, 带有ImmunoAIF△1-480基因的真核表达载体构建成功, 经RT-PCR、Western blot可检测到培养上清中免疫促凋亡基因的表达, 用FCM检测发现融合蛋白ImmunoAIF△1-480对HER2阳性肿瘤细胞SGC-7901和SKBR-3有明显的促凋亡活性, 而对不表达HER2分子的ECV-304细胞几乎没有影响.结论:ImmunoAIF△1-480可以特异性杀伤HER2阳性肿瘤细胞.
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STAT3短发夹RNA表达载体的构建及对SiHa细胞增殖和凋亡的作用
目的:探讨信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(shRNA)真核表达载体对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用.方法:根据siRNA设计原则, 结合pSilencer2.1-U6-neo质粒特点, 针对STAT3基因设计并合成两条寡聚DNA片段, 退火后克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒, 脂质体法将重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞.RT-PCR和Western blot检测SiHa细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达水平;MTT法和流式细胞术(FCM)检测细胞的增殖和凋亡.结果:成功构建了STAT3基因shRNA真核表达载体, 转染人宫颈癌SiHa细胞.细胞STAT3蛋白及mRNA表达下降;同时SiHa细胞增殖能力下降, 细胞凋亡增加.结论:构建的STAT3基因shRNA真核表达载体能够通过下调STAT3基因表达, 抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖能力, 诱导细胞凋亡.
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人λ-干扰素在BHK-21中的表达及生物学活性的研究
目的:研究HuIFN-λ1和HuIFN-λ2真核细胞重组表达及其生物学活性.方法:用水疱性口炎病毒(VSV)刺激人宫颈癌HeLa细胞, 用RT-PCR克隆HuIFN-λ1和HuIFN-λ2基因, 与PCAGG-EGFP真核表达载体连接, 构建重组体PCAGG-HuIFN-λ1和PCAGG-HuIFN-λ2并进行鉴定, 后在BHK-21细胞进行表达, 采用VSV*GFP于人肺腺癌A549上进行表达产物抗病毒活性测定;并通过已构建的MDBK-Mxp-Luc细胞系对HuIFN-λ1和HuIFN-λ2诱导MxA抗病毒蛋白产生的特性进行研究.结果:HuIFN-λ1-PMD18-T Vector和HuIFN-λ2-PMD18-T Vector的SacⅠ、XhoⅠ和SacⅠ和SalⅠ双酶切鉴定, 均出现610 bp大小的带, 测序示与GenBank上报道的序列完全一致.PCAGG-HuIFN-λ1活性104 IU/mL, PCAGG-HuIFN-λ2活性为102 IU/mL, 且PCAGG-HuIFN-λ1诱导Mx抗病毒蛋白的表达一定时间内随时间延长表达不断增强, 9～12 h达高峰, 24 h后消失(P＜0.05).结论:成功构建了PCAGG-HuIFN-λ1PCAGG-HuIFN-λ2 的真核表达载体并在BHK-21细胞中得到表达, 其抗病毒活性与诱导Mx抗病毒蛋白密切相关.
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EBF3与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在HepG2中的表达
目的:构建早期B细胞因子3(EBF3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因真核表达载体pEGFP/EBF3, 使EBF3-EGFP融合蛋白在人肝癌细胞株HepG2中得到表达.方法:采用RT-PCR技术, 从人胎盘组织总RNA中逆转录并扩增出EBF3全长编码基因, 构建EBF3与EGFP的融合基因真核表达载体pEGFP/EBF3, 用脂质体转染技术将pEGFP/EBF3导入HepG2, 使EBF3-EGFP融合蛋白得到表达.结果:经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实, EBF3基因已正确插入pEGFP-N1中EGFP基因的上游, 获得融合基因表达载体pEGFP/EBF3.将pEGFP/EBF3导入HepG2细胞24 h后, 在倒置荧光显微镜下可观察到EBF3-EGFP融合蛋白主要表达于核内, 转染pEGFP/EBF3和pEGFP-N1后48 h的转染效率分别为52%和59%.Western blot证实转染pEGFP/EBF3后24 h和48 h细胞质和细胞核中均检出相对分子质量(Mr)为87 000的EBF3-EGFP融合蛋白, 转染pEGFP/EBF3后48 h和72 h, S期细胞比例均明显高于pEGFP-N1转染细胞组和未转染细胞组, 表明EBF3基因的导入可诱导细胞从G1期向G2期发展, 从而促进细胞增殖.结论:成功构建了真核表达载体pEGFP/EBF3, 并在HepG2细胞中进行了表达, 为进一步研究EBF3的功能提供实验基础.
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哮喘豚鼠模型肺和骨髓中CCR3及CD34的表达及意义
目的:观察哮喘豚鼠肺和骨髓组织CCR3及EOS不同时相表达的变化, 探讨哮喘发病的可能机制.方法:用卵白蛋白(OVA)和生理盐水致敏法制备豚鼠哮喘和对照模型, 分为正常对照组(N)及哮喘组(A、B、C、D、E), 每组8只, 于激发后30 min, 6 h, 12 h, 24 h, 48 h处死, 瑞氏染色计数骨髓涂片和外周血涂片中EOS比例, 免疫组织化学技术检测骨髓中CCR3及CD34蛋白的表达;制备豚鼠肺组织病理标本, 苏木精-伊红染色, 免疫组化检测肺组织中CCR3和CD34的表达.结果:(1)哮喘组骨髓和外周CCR3与CD34及EOS表达明显增加;(2)OVA激发后, 骨髓和外周CCR3、CD34及EOS表达:30 min变化不明显(肺内CD34表达增加), 6 h(肺内CD34表达下降)、12 h达到峰值, 24 h开始下降, 48 h恢复正常水平;(3)骨髓的变化早于外周, CCR3的表达高峰早于CD34表达与EOS的增多高峰, 且CCR3、CD34和EOS互呈线性相关(肺组织内除外).结论:哮喘豚鼠肺组织和骨髓之间存在骨髓CD34+祖细胞、EOS细胞到循环再到肺组织的通路, 骨髓和肺组织CCR3表达增强, 为CD34+细胞、EOS从骨髓快速募集到肺组织提供了可能.
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血管紧张素-(1-7)对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响
目的:研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响并初步探讨其机制.方法:采用WST法检测培养系膜细胞增殖;RT-PCR法检测细胞内信号传递分子Smad3/7基因mRNA的表达.结果:与对照组比较, Ang-(1-7)明显抑制TGF-β1诱导的GMC增殖(P＜0.05);同时, Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的系膜细胞内Smad3, Smad7基因mRNA表达有明显的抑制作用(P＜0.05).结论:Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的系膜细胞增殖有抑制作用, 其机制可能是通过下调细胞内信号传递分子Smad3/7的表达.
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他克莫司与环孢菌素A对肝移植受者CD4/CD8 T淋巴细胞亚群及共刺激分子的调节作用
目的:探讨他克莫司(Tacrolimus, FK506)与环孢菌素A(CsA)对肝移植受者T淋巴细胞亚群共刺激分子的调节作用.方法:采用荧光标记单克隆抗体(mAb)结合流式细胞技术, 测定移植术后使用FK506或CsA治疗2月末的肝移植受者外周血T细胞亚群及其表面共刺激分子CD28、CD152 和ICOS的表达情况.以健康志愿者(健康对照组)和患终末期肝脏疾病拟进行肝移植者(疾病对照组)为对照.结果:疾病对照组T细胞亚群平衡紊乱、共刺激分子表达异常(P＜0.05).治疗组肝移植受者T淋巴细胞亚群表达恢复至健康对照水平, T细胞表面CD28和ICOS分子表达显著降低(P＜0.05)而CD152分子表达明显升高(P＜0.05).比较不同药物治疗组:CsA治疗组CD4+T细胞表达和CD8+T细胞表面CD28、CD152分子表达均明显高于FK506治疗组(P＜0.05);其他指标无统计学意义(P＞0.05).结论:在常规血药浓度条件下FK506和CsA的对CD4/CD8T细胞亚群及共刺激分子的免疫调节作用存在差异.FK506对T细胞亚群的调节作用强于CsA.FK506可同时抑制正性共刺激分子CD28和ICOS表达并促进负性共刺激分子CD152表达, 而CsA对T细胞免疫抑制作用主要是通过促进CD152分子的高表达介导.
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芬太尼及曲马多术后镇痛对上腹部手术患者免疫细胞的影响
目的:观察芬太尼和曲马多术后镇痛对胃癌患者T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞的影响.方法:ASAⅠ或Ⅱ级在静脉全身麻醉下择期行胃癌根治术的患者(40例), 随机分为芬太尼组和曲马多组, 每组20例, 术毕以电子镇痛泵分别行芬太尼和曲马多自控静脉镇痛在麻醉前(基础值), 手术1.5 h, 术后24、48、72 h五个时间点测定T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)及NK细胞(CD3- CD16+ CD56+).在麻醉前(基础值)、手术1.5 h, 术后24、48、72 h五个时间点测定T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)及NK细胞(CD3- CD16+ CD56+).结果:两组CD4+、CD4+/CD8+、CD3- CD16+ CD56+在手术1.5 h降低(P＜0.05), CD3+在术后24 h降低(P＜0.05);术后48 h芬太尼组上述指标仍然较低(P＜0.05), 而曲马多组已经恢复至麻醉前水平, 两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);术后72 h两组上述指标均恢复至基础值水平.两组CD8+在各时点差异无统计学意义.结论:上腹部手术患者术后行自控静脉镇痛时曲马多对T淋巴细胞亚群及NK细胞的抑制比芬太尼小.
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CD4+CD25+/highCD127lowTregs及TGF-β在多发性骨髓瘤患者外周血的表达分析
目的:初步探讨CD4+CD25+/highCD127lowT调节性T细胞(Tregs)及TGF-β在不同病程阶段多发性骨髓瘤 (MM)患者外周血中的表达水平, 并研究患者血清TGF-β水平是否与CD4+CD25+/highCD127lowTregs具有相关性.方法:流式细胞术(FCM)检测50例MM患者及30例健康志愿者外周静脉血CD4+CD25+/highCD127lowTregs细胞的比例并分析比较.ELISA法定量检测血清TGF-β的表达水平.结果:(1)化疗后组CD4+CD25+CD127low、CD4+CD25highCD127lowT细胞的比例均显高于初诊组及正常对照组;初诊组与正常对照组的CD4+CD25+CD127lowT细胞相比无统计学意义, 但其CD4+CD25highCD127lowT细胞明显高于正常对照组.(2)化疗后稳定期CD4+CD25+CD127lowT细胞与活动期没有差异, 但其CD4+CD25highCD127lowT细胞明显低于活动期.(3)MM各组TGF-β水平均较对照组明显升高, 但各组比较无统计学意义.(4)TGF-β与CD4+CD25+CD127low、CD4+CD25highCD127lowT细胞的表达水平均不成相关性.结论:CD4+CD25+/highCD127low调节性T细胞MM患者外周血中比例明显升高, 且化疗及疾病进展程度可能影响其在外周血的比例.TGF-β可能不是导致其比例增加的直接原因.
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自体肿瘤特异性CTLs对裸鼠人乳腺癌移植瘤的抑瘤作用
目的:研究乳腺癌患者腋下淋巴结细胞诱导产生的肿瘤特异性CTLs在裸鼠体内对患者自身乳腺癌生长的抑制作用.方法:在裸鼠胸垫处种植人乳腺癌组织, 建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型.以细胞因子联合诱导乳腺癌患者腋窝淋巴结单个核细胞成为DC和肿瘤特异性CTL(sCTL)、非特异性CTL(nCTL)和异体CTL(vCTL);将不同CTLs注射到荷瘤裸鼠的肿瘤周围, 观察其对肿瘤生长的抑制作用.结果:人乳腺癌移植瘤在裸鼠体内的成活率为100%.组织病理学证实移植瘤为乳腺浸润性导管癌.与对照组相比, 荷瘤裸鼠移植瘤的体积在sCTL、nCTL和vCTL治疗组均明显减小(P＜0.05), sCTL对自体移植瘤的生长抑制作用强[平均瘤体积(82.70±2.09) mm3], 抑瘤率50.5%, 明显高于nCTL组[(96.15±5.35) mm3, 26.9%]和vCTL组[(96.93±4.51) mm3, 25.7%], (P＜0.01);不同CTL治疗组瘤组织内可见大量淋巴细胞和树突状细胞(DC)浸润.结论:乳腺癌裸鼠移植瘤模型成功率高, 病理学证实与人乳腺癌特征相符, 且有DC和大量特异性CTL浸润.自体特异性CTL对裸鼠体内自体乳腺癌移植瘤有较强的抑制作用.
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哮喘儿童血清白细胞介素-25、嗜酸细胞趋化因子的动态变化和意义
目的:通过监测哮喘儿童血清白细胞介素(IL)-25、嗜酸细胞趋化因子(Eotaxin)表达水平, 探讨其水平变化及其在哮喘发病中的作用.方法:收集哮喘急性发作期、缓解期儿童及健康儿童的静脉血标本, 用双抗体夹心ELISA法测定血清IL-25、Eotaxin的水平.结果:哮喘儿童急性发作期组血清IL-25水平(56.75±11.68) ng/L显著高于缓解期组(47.09±10.96) ng/L及健康对照组(45.77±10.43) ng/L, 差异有统计学意义(P＜0.05), 缓解期组与健康对照组比较差异无统计学意义;哮喘急性发作期组儿童血清Eotaxin水平(120.95±23.97) ng/L显著高于缓解期组(105.47±22.01) ng/L及健康对照组(105.01±18.47) ng/L , 差异有统计学意义(P＜0.05), 缓解期组与健康对照组比较差异无统计学意义.哮喘儿童血清IL-25水平与Eotaxin之间存在明显正相关关系(r=0.642, P＜0.01).结论:哮喘儿童血清IL-25及Eotaxin 水平能反应哮喘气道炎症活动情况及疾病严重程度, 两者存在正相关关系.
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IL-25的研究进展
IL-25是IL-17家族中发现的新成员之一, IL-17家族是由新近发现的一组与IL-17具有29%～50%的同源性, 由155～197个氨基酸组成的相对分子质量(Mr)大小在20 000～30 000之间的细胞因子组成.
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细胞色素C/心磷脂复合体和氧化心磷脂及细胞凋亡
多年来, 认为脂质通过构成细胞膜疏水性核而保持其完整性;但一直忽视了脂质其他重要功能, 尤其是信号机制.细胞内显著的多种类脂质和大量的特殊脂质分子种类不能简单地运用它们对适当膜流动性的保持是必须的观点加以解释[1].
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树突状细胞应用于肿瘤免疫治疗的新进展
树突状细胞(dendritic cells, DC)是目前所知的机体内功能强大的抗原提呈细胞, 它通过吞噬、表达、移动等一系列过程, 启动体内免疫系统.而与之相关的肿瘤免疫逃逸或肿瘤转移已成为DC研究的热点.现对DC与肿瘤免疫治疗方面的新进展做一简要综述.
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几丁质、壳聚糖及其降解产物对巨噬细胞的作用
巨噬细胞是重要的免疫细胞之一, 它既是免疫细胞, 又是辅佐免疫应答细胞, 它参与所有免疫效应细胞的产生、动员、活化和调节.本文中介绍了几丁质、壳聚糖及其降解产物等对巨噬细胞的作用, 以及它们的应用.
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DcR3对人肺成纤维细胞合成Ⅳ型胶原的作用
目的:探讨诱骗受体3(DcR3)对人肺成纤维细胞(HLF)合成Ⅳ型胶原的作用.方法:Over-PCR方法构建DcR3的真核表达载体, 脂质体法转染HLF细胞, Western blot检测HLF细胞合成Ⅳ型胶原的含量.结果:成功构建了pvax1-DcR3真核表达载体并转染HLF细胞;转染组细胞Col Ⅳ表达量明显升高, 从12 h开始持续到72 h, 与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);而转染+抗体组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);转染组不同时间Col Ⅳ表达量有统计学意义(F=34.25, P＜0.05).结论:DcR3促进HLF细胞合成Ⅳ型胶原的能力, 可能是加速肺纤维形成的因素之一.
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抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链的真核表达
目的:在Sp2/0细胞中表达抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链.方法:采用RT-PCR技术从稳定分泌抗人L-PGDS单克隆抗体(mAb)的小鼠杂交瘤细胞中扩增抗体轻链可变区基因VL, 并构建到人-鼠嵌合轻链表达载体pAG4622.重组质粒pAG4622/VL经DOTAP试剂转染入Sp2/0细胞, 酶酚酸筛选后用ELISA和RT-PCR检测表达产物.结果:在筛选后的转染细胞上清中检测到抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链蛋白, 且其细胞中存在相应嵌合轻链mRNA.结论:嵌合轻链的稳定表达, 为后续抗人L-PGDS人-鼠嵌合抗体的获得奠定基础.
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锌指蛋白265在大鼠睾丸Sertoli细胞中的特异性表达
目的:研究锌指蛋白265(ZNF265)在大鼠睾丸Sertoli细胞中的特异性表达.方法:分离培养SD大鼠睾丸Sertoli细胞, 以免疫荧光染色、流式细胞术(FCM)检测ZNF265在Sertoli细胞的表达, 且抽提Sertoli细胞总RNA, 用PT-PCR法检测ZNF265的表达.结果:经免疫荧光染色, 实验组Sertoli细胞核核周呈现明亮特异荧光, 对照组未见特异性荧光;FCM检测结果显示实验组Sertoli细胞ZNF265的表达较对照组明显增高;RT-PCR扩增出目的条带ZNF265.结论:大鼠睾丸Sertoli细胞特异性表达ZNF265, 且多表达于Sertoli细胞核核周胞质.
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苯中毒工人外周血TCR Vβ克隆性T细胞利用特点
目的:分析苯中毒工人外周血中克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点.方法:利用RT-PCR方法扩增11例苯中毒工人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的CDR3, 阳性产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而了解其克隆性.结果:健康者外周血中可检测到24个Vβ亚家族, 11例苯中毒工人仅检测到2～10个Vβ亚家族.11例苯中毒工人均存在1个或多个Vβ亚家族T细胞出现寡克隆及寡克隆趋势.Vβ2、4、5、6和Vβ21的寡克隆T细胞出现频率较高.结论:苯中毒工人外周血TCR Vβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖, 这可能是机体苯中毒后所引起的特异性免疫反应.
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重组人次级淋巴组织趋化因子(SLC)体外活性的研究
目的:对原核表达系统E.coli中表达的SLC进行体外活性的研究, 为进一步的体内实验和临床应用提供参考.方法:采用Boyden小室测定趋化活性.结果:对含有pALM-SLC质粒的E.coli菌株进行诱导表达, 产物经SDS-PAGE鉴定, 表达产物以可溶蛋白为主, 相对分子质量(Mr)在20 000左右.采用表达产物进行趋化性测定结果表明, 此蛋白对新鲜分离的外周血淋巴细胞具有明显的趋化作用, 其浓度为4～6 μg/L时对淋巴细胞的趋化指数高可达2.3, 与国外报道相比, 趋化作用有效浓度更低.结论:获得了具有生物学功能的重组SLC蛋白.
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IL-12和IL-10与实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠发病的相关性
目的:探讨IL-12及IL-10与实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠发病的相关性.方法:以豚鼠全脊髓匀浆与福氏完全佐剂为抗原免疫Wistar大鼠建立EAE模型.取脑、脊髓组织石腊包埋, 病理切片, 光镜观察;采用双抗体夹心法ELISA检测Wistar大鼠免疫后7、14、21 d不同时间段血清中IL-12、IL-10的含量.结果:EAE组免疫后第7天IL-12水平即出现明显上调, 早于临床症状的发生, 随免疫后时间的延长, IL-12表达呈逐渐增高后缓慢下降的变化趋势, 并且与EAE大鼠病情评分呈明显正相关(r=0.951, P＜0.01).免疫后第21天EAE组IL-10水平与CFA组和NS组比较明显升高(P＜0.01).结论:IL-12和IL-10分别与EAE的发病和缓解密切相关.
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T6-17细胞培养上清中肿瘤蛋白P185的表达
目的:从转染Her-2/neu基因的T6-17细胞上清中纯化p185蛋白, 研究其免疫原性和探究其在血清学诊断中应用的可能性.方法:采用溴化氰活化的Sepharose 4B为基质, 通过交联A18 mAb, 用亲和层析的技术纯化p185 蛋白.将收集的T6-17细胞上清循环过亲和层析柱, 经梯度盐溶液解离与抗体结合的p185 蛋白, 收集到蛋白洗脱峰, 浓缩后用ELISA检测p185的免疫反应性, 并经SDS-PAGE和Western blot 进一步鉴定.结果:ELISA检测p185保持了良好的与抗体反应活性, SDS-PAGE和Western blot进一步证实纯化蛋白的相对分子质量(Mr)约为185 000, 是HER-2/neu编码的肿瘤抗原.结论:从转基因细胞上清中成功获取p185肿瘤抗原, 可进一步用于乳腺癌的实验室诊断研究.
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不同剂量脂多糖预处理对哮喘小鼠肺部炎症的影响的研究
目的:研究不同剂量脂多糖(LPS)通过诱导肺泡巨噬细胞(AM)Toll样受体4(TLR4)的高表达, 探讨其对哮喘小鼠肺部炎症的影响.方法:BALB/c小鼠随机分为哮喘模型组(OVA)A, 低剂量LPS处理组(0.1 mg/L LPS+OVA)B, 高剂量LPS处理组(100 mg/L LPS+OVA)C, 对照组(生理盐水)D.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的含量, 实时荧光定量PCR法测定AM的TLR4的表达, 光镜观察肺组织病理变化.结果:与A组相比较, B组BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增高(P＜0.05), 而IFN-γ差异无统计学意义(P＞0.05), C组BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著降低, IFN-γ显著增高(P＜0.05);与A组相比, B组与C组AM的TLR4mRNA表达均明显增高(P＜0.05), 两组间差异无统计学意义;光镜下, A组支气管黏膜下水肿, 黏液腺增生, 可见大量以嗜酸性粒细胞为主的炎症细胞浸润.B组与C组上述情况未见减轻, 并出现肺泡腔及间质充血, 中性粒细胞等大量的炎症细胞浸润, D组管腔内无黏液栓, 气道周围无炎症细胞浸润, 肺泡壁结构完整.结论:低剂量LPS(0.1 mg/L)诱导哮喘小鼠AM的TLR4高表达, 使肺部炎症加重, 而高剂量LPS(100 mg/L)可能会减轻变态反应症状.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
