细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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核心蛋白聚糖对TGFβ1诱导的人肾小管上皮细胞产生胶原的影响
目的:探讨核心蛋白聚糖对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法:将体外培养的HK-2细胞分为:(1)阴性对照组;(2)10 μg/L TGFβ1组;(3)TGFβ1(10 μg/L)+(10 μg/L)核心蛋白聚糖组;(4)TGFβ1(10 μg/L)+(100 μg/L)核心蛋白聚糖组.倒置显微镜下观察加入刺激因子48 h后肾小管上皮细胞的细胞形态学改变;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察不同浓度的核心蛋白聚糖对HK-2细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达变化的影响.结果:加入刺激因子48 h后,(1)组细胞形态与正常HK-2细胞形态基本一致,大部分仍为椭圆形;(2)组细胞形态发生明显的变化,大部分细胞由椭圆形拉长为长梭形;(3)和(4)组,梭形样细胞明显减少,尤其是(4)组梭形样细胞减少更为明显.(2)组HK-2细胞Ⅰ型胶原mRNA表达上升到(1)组的27.86倍,Ⅲ型胶原mRNA的表达上升到(1)组的21.83倍.(3)和(4)组与(2)组相比,Ⅰ型胶原mRNA的表达分别下降了36.39%、 53.36%,Ⅲ型胶原mRNA的表达分别下降了26.35%、 47.96%(P<0.05),但仍未下降到正常水平.结论:核心蛋白聚糖能抑制TGFβ1诱导的人近端肾小管上皮细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,可能是核心蛋白聚糖抑制肾间质纤维化的原因之一.
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紫杉醇对骨髓细胞体外诱导分化的巨噬细胞影响
目的:研究紫杉醇对小鼠骨髓分化巨噬细胞的直接影响.方法:常规方法无菌制备BALB/c小鼠骨髓细胞,用含M-CSF的RPMI1640培养液培养7 d,同时加入不同浓度紫杉醇,通过流式细胞术对骨髓单核细胞分化的巨噬细胞的表型分子、吞噬功能进行测定,采用迟发型过敏反应(DTH)方法检测巨噬细胞免疫原性.结果:紫杉醇明显降低骨髓单核细胞分化成巨噬细胞的数量;F4/80+巨噬细胞表面分子CD80、 CD14表达升高,而I-Ad表达降低;紫杉醇提高分化的巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力;但使其免疫原性降低.结论:紫杉醇能使骨髓单核细胞分化的巨噬细胞细胞吞噬能力提高,但其免疫原性下降,提示紫杉醇可能具有调节巨噬细胞免疫功能的作用.
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NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组腺相关病毒载体的构建及鉴定
目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体.方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因,连接腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV,采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染HEK-293细胞获取重组腺相关病毒,Dot-blot法测定重组病毒滴度,MTT比色法观察重组腺相关病毒对A549细胞存活率的影响.结果:合成Ant-Shepherdin[79-87]基因,连接PBV220-NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321 bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因;得到高滴度的(3.4×1013pfu/L)重组腺相关病毒表达载体;带有融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒对A549细胞具有强烈的诱导凋亡作用.结论:成功构建了NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组腺相关病毒表达载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础.
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IL-10对大鼠原代肝细胞增殖的影响
目的:探讨IL-10对体外培养大鼠原代肝细胞增殖的影响.方法:胶原蛋白酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,RT-PCR法检测肝内不同细胞标志基因的表达情况,对比原代肝细胞与大鼠正常肝组织的检测结果,进行细胞纯度鉴定;RT-PCR法检测原代肝细胞IL-10和IL-10受体α(IL10Rα)的表达情况;原代肝细胞分3组培养:正常组(N组)、对照组(C组)和IL-10干预组(I组);通过MTT分析、台盼兰细胞计数以及流式细胞术检测DNA含量等方法,了解外源性IL-10对肝细胞增殖的影响.结果:细胞鉴定结果显示,所有的标志基因在肝组织都可检测到有较高的表达,原代肝细胞虽高表达肝细胞标志基因,而肝内其他细胞的标志基因则不表达或低表达.RT-PCR检测显示原代肝细胞可表达IL-10和IL10Rα.台盼兰细胞计数提示IL-10干预48 h,I组平均细胞数仅为C组的71.96%(P<0.05);MTT检测亦显示IL-10干预24、 48 h,I组吸光度值分别为C组的88.41%与90.24%(P<0.05);流式细胞术检测结果表明IL-10干预24 h,I组肝细胞峰DNA含量是C组的59.06%,I组较C组降低(P<0.01),甚至低于N组(P<0.01).结论:分离的原代肝细胞纯度较高,大鼠原代肝细胞表达IL-10/IL10R mRNA,IL-10抑制大鼠原代肝细胞增殖.
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共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因修饰原代人内皮细胞包被大鼠胰岛模型的建立
目的:建立以分离培养的原代人脐静脉内皮细胞包被大鼠胰岛细胞模型.方法:分离培养原代人脐静脉内皮细胞,并分别通过免疫组化试验检测人Ⅷ因子相关抗原,透射电镜观察Weible-palade小体,荧光显微镜观察DiI-Ac-LDL的吞噬效果,对所分离的人脐静脉内皮细胞进行鉴定.分离大鼠胰岛细胞,然后在肝素化培养皿中进行共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被.对包被后的胰岛细胞进行形态学观察并检测其包被前后的功能.结果:分离培养的内皮细胞表达人Ⅷ因子相关抗原,电镜下可以观察到Weible-palade小体,荧光显微镜下可以观察到内皮细胞对DiI-Ac-LDL的吞噬.共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被胰岛模型可以观察到内皮细胞的绿色荧光,未包被胰岛和内皮细胞包被胰岛的胰岛素释放指数分别为4.09和3.94,与未包被胰岛实验组相比,内皮细胞包被胰岛对高糖刺激反应无明显差异,但胰岛素释放量有所减少.结论:成功分离培养并鉴定了原代人脐静脉内皮细胞,并成功建立内皮细胞包被胰岛细胞模型,包被后胰岛功能正常.
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人NK细胞体外高效扩增的实验研究
目的:建立人NK细胞体外大量扩增的方法.方法:采用基因工程方法,在K562细胞上同时表达IL-15、 IL-18、 4-1BBL 3种基因,构建特定的K562工程细胞作为刺激细胞.IL-15、 IL-18基因分别与一段特殊的跨膜蛋白基因融合,4-1BBL直接跨膜表达,使这3种蛋白在K562细胞中表达后锚定于细胞膜表面.其次,以照射致死的该K562工程细胞作为刺激细胞,以人外周血单个核细胞(PBMC)为扩增培养对象,通过与IL-2的共刺激作用,使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增.结果:经过21 d的刺激培养后,CD56+CD3-细胞数量扩增了(520±75)倍.CD56+CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的7%±4%到扩增后占总细胞比例的93%±3%.PBMC中的T细胞基本上没有得到扩增,扩增后的细胞中CD3+细胞只占2%±1.2%.扩增的细胞具备了NK细胞的基本特征和生物学特性,除了CD56+CD3-外,还对扩增的NK细胞上NKG2D、 NKp46、 NKp44、 NKp30、 CD94、 CD158b、 CD158a、 NKB1、 NKAT2等标记进行了验证.细胞毒实验表明,在效应细胞∶靶细胞为5∶ 1时,扩增的NK细胞的杀伤率达到了95%±4%.结论:建立的NK细胞体外扩增方法,达到了较高的扩增水平,且扩增的细胞活性较好.本方法以PBMC为原始材料,能够实现NK细胞体外的大规模制备,这将为抗病毒与抗肿瘤的NK细胞免疫治疗奠定基础.
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DC-SIGN特异性适配子的筛选及鉴定
目的:筛选高特异性、高亲合力结合DC-SIGN的单链DNA适配子,为开发抗HIV、 HCV和结核杆菌感染的新型预防和治疗试剂奠定基础. 方法:采用基于细胞表面展示的SELEX技术(TECS-SELEX),筛选出具有高亲合力结合DC-SIGN的单链DNA(ssDNA)适配子;运用流式细胞术(FCM)检测该适配子的亲合力;对高亲合力适配子库进行克隆和测序;ELISA和FCM方法检测单适配子ZD8与DC-SIGN蛋白结合的剂量相关性;MTT法测定IC50观察适配子对细胞的毒性. 结果:第14轮筛选的适配子库亲和力高;DC-SIGN抗体能抑制适配子结合表达DC-SIGN蛋白的细胞;第14轮库中筛选的单适配子ZD8 与DC-SIGN蛋白的结合率呈剂量依赖性;所筛选的单适配子对肝细胞几乎无毒性.结论:成功筛选出DC-SIGN蛋白的ssDNA适配子,为防治HIV、 HCV和结核杆菌感染等DC-SIGN相关性疾病,提供新型预防和治疗的候选试剂和小分子药物.
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RNA干扰技术抑制人内皮细胞非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(MYH9)表达的研究
目的:构建人MYH9(非肌肉肌球蛋白重链ⅡA)的siRNA 表达体系,抑制原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MYH9 基因的表达.方法:针对人MYH9 基因序列,构建siRNA 表达质粒,通过酶切和测序鉴定确定其序列正确性.分别转染重组质粒pGCsi-MYH9-1/2/3 至HUVEC 细胞,通过半定量RT-PCR 和蛋白质印迹,分别检测在转染后24 h、 48 h、 72 h MYH9 在mRNA 转录水平及蛋白表达的变化.结果:在构建的3种重组质粒中,pGCsi-MYH9-2、 pGCsi-MYH9-3在转染后24 h 均表现出一定的干扰作用,转染后48 h干扰作用强,转染后72 h 干扰作用减弱;pGCsi-MYH9-3的干扰作用明显,转染后48 h,能明显下调HUVEC 的MYH9 蛋白表达,抑制率平均可达71.2%,此时MYH9 基因mRNA 转录明显减少,抑制率为86.5%.结论:在转染后48 h pGCsi-MYH9-3 可明显抑制HUVEC 细胞内源MYH9 的表达,为进一步研究MYH9在相关疾病中的功能奠定基础.
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重组人Jo-1自身抗原的克隆、原核表达及抗原特异性鉴定
目的:旨在获得高纯人Jo-1抗原(即组氨酰-tRNA合成酶).方法:利用RT-PCR从人胎盘总RNA中获得Jo-1的编码基因,并分别用IMPACT-CN和pMAL系统的pTYB11、 pMAL-c质粒,构建了表达载体,转化至大肠杆菌ER2566、 BL21.结果:经筛选与鉴定,得到阳性重组子诱导表达后均获得Jo-1融合蛋白.Western blot显示,这两种融合蛋白都具有Jo-1抗原特异性,即仅与含Jo-1抗体的多肌炎和皮肌炎自身免疫病患者血清反应,而与正常人以及188例含有其他自身抗体(分别为RNP阳性、 Sm阳性、 Ro/La阳性和RNP/Ro阳性)的患者血清均为阴性反应.结论:在两种表达载体中,pMAL-c-Jo-1的表达量超过菌体蛋白的50%,而且以可溶性形式存在,有利于分离纯化,为临床检测创造了条件.
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Neuropilin-1+T细胞与CD4+CD25+调节性T细胞的比较
目的:分析Neuropilin-1+T细胞(Nrp-1+T细胞)与经典CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的关系并比较二者的免疫调节作用.方法:流式细胞术分析BALB/c小鼠脾脏T细胞上Nrp-1与CD4、 CD25的表达关系并分选Nrp-1+T细胞及CD4+CD25+Treg,通过B16-F10-luc-G5黑色素肿瘤细胞体外培养实验并利用萤光成像系统,观察比较两种细胞对NK细胞杀伤B16-F10-luc-G5黑色素瘤细胞的影响.结果:CD4+CD25+Treg中表达Nrp-1的比例为(27.28±1.17)%,明显高于CD4+CD25-T细胞的(1.63±0.08)% (P＜0.01);在体外实验中,Nrp-1+T细胞与CD4+CD25+Treg均能抑制NK细胞杀伤B16-F10-luc-G5黑色素瘤细胞,Nrp-1+T细胞组的肿瘤细胞数目在6、 24、 48、 72 h分别为984±15、 1015±14、 1261±21、 1323±38,高于CD4+CD25+Treg组的931±4、 983±8、 1201±18、 1256±18,两组肿瘤细胞数目在各时间点均有统计学意义(P＜0.01).结论:经典CD4+CD25+Treg中表达Nrp-1的细胞比例较高,Nrp-1+T细胞有负性免疫调节作用,抑制功能比CD4+CD25+Treg更强,可以作为一类新的Treg亚群.
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siRNA介导的RNAi降低了CD59对补体溶破的抵抗作用
目的:构建针对人CD59基因的siRNA表达载体并筛选稳定细胞系,观察CD59基因改变后对补体溶破的抵抗作用的变化,探讨CD59在肿瘤细胞免疫逃逸及相关信号转导通路中的作用.方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性CD59基因的重组载体,脂质体法转染A2780细胞,G418筛选建立稳定抑制的细胞克隆,RT-PCR和Western blot检测转染细胞中CD59基因的表达抑制效果,染料释放试验判断CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用的影响.结果:重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确;重组载体转染A2780细胞,可表达绿色荧光蛋白,经G418筛选,得到抗性细胞克隆,RT-PCR和Western blot表明,稳定转染后CD59基因的mRNA和蛋白水平降低,染料释放试验表明CD59基因受抑制后对补体溶破的抵抗作用降低.结论:特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体以及稳定抑制的细胞系构建和筛选成功,CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用降低,为后续进行肿瘤细胞的研究奠定了基础.
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LKB1基因转染对人肺腺癌细胞生物学行为的影响
目的:探讨外源性LKB1基因表达对人肺腺癌细胞生物学行为的影响.方法:应用巢式PCR方法扩增LKB1基因编码区,利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA-LKB1质粒和空载体pcDNA3.1质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Western blot检测LKB1和STAT3在A549细胞中的表达变化.通过绘制生长曲线和克隆形成试验检测获得性表达LKB1基因后肺癌细胞的增殖变化,流式细胞术(FCM)分析其细胞周期及其凋亡的变化.结果:成功获得了稳定表达外源性LKB1基因的A549细胞系,与转染空白载体组比较,转染LKB1基因的细胞生长速度明显减慢,细胞周期中G1/G0期比例明显增加,S期比例减少,细胞凋亡率升高;同时STAT3蛋白的磷酸化水平明显降低. 结论:LKB1可能通过下调STAT3蛋白磷酸化水平的表达从而抑制A549细胞的恶性生物学行为.
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比索洛尔治疗慢性充血性心力衰竭对血清IL- 6和TNF-α水平的影响
目的:探讨β受体阻滞剂比索洛尔治疗充血性心力衰竭(CHF)时对血清白介素- 6(IL- 6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平的影响.方法:110例充血性心力衰竭患者随机分为常规治疗组(血管紧张素转换酶抑制+利尿剂+地高辛)和比索洛尔组(常规治疗药物+比索洛尔),随访12 周,采用放射免疫分析方法测定两组治疗前后和50例健康体检者(正常对照组)血清中IL- 6和TNF-α水平.同时使用核素心室显像测定心衰患者左心室射血分数(LVEF).结果:CHF患者的血清IL- 6和TNF-α水平较正常对照组显著升高,IL- 6和TNF-α水平在比索洛尔治疗前与LVEF显著负相关,随着病情的好转其水平逐渐降低,且不同的心功能分级之间有统计学意义.在比索洛尔治疗后,比索洛尔组血清IL- 6和TNF-α水平较常规治疗组下降更明显.结论:血清IL- 6和TNF-α水平的改变水平在CHF病理生理中起着一定的作用,β受体阻滞剂能抑制CHF患者神经内分泌的过度激活.
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IL-23、 IL-17在桥本氏甲状腺炎患者甲状腺组织中的表达
目的:检测桥本甲状腺炎(HT)甲状腺组织中白细胞介素(IL)-23、IL-17的表达,并探讨IL-23/IL-17在HT免疫病理中的作用.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法,检测20例HT患者和15例正常甲状腺组织中IL-23p19、 IL-17mRNA和蛋白的表达水平.结果:RT-PCR显示IL-23p19、 IL-17mRNA在HT甲状腺组织中的平均表达水平分别为1.0154±0.5749、 0.5952±0.2513,正常对照组的表达水平分别为0.0929±0.0242、 0.1537±0.0855;两组比较,HT患者甲状腺组织IL-23p19、IL-17mRNA的表达水平显著高于正常对照(P<0.05);且在HT中,IL-23p19和IL-17mRNA的表达存在正相关(P<0.01,r=0.861).Western blot检测显示IL-23p19、 IL-17蛋白在HT甲状腺组织中的平均表达水平明显高于正常对照(P<0.05).结论:IL-23、 IL-17在HT患者甲状腺组织中的协同过表达,提示IL-23/IL-17可能参与了HT的免疫病理过程.
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Graves病131I治疗后甲状腺过氧化物酶和甲状腺球蛋白抗体的变化及与早发甲减的关系
目的:探讨131I治疗Graves病后1年半内甲功、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)改变的规律以及与早发甲状腺功能减低的关系.方法:应用标记免疫分析法测定 130 例 Grave病患者的TPOAb、 TGAb的水平,根据其阴性、阳性分为阳性组(TPOAb和TGAb均为阳性)和阴性组(TPOAb和TGAb均为阴性),并于131I治疗后 3、 6、 12、 18个月时测血清 FT3、 FT4、 sTSH、 TPOAb、 TGAb,观察其变化规律及与早发甲减的关系.结果:与治疗前比较,TPOAb阳性率治疗后3个月下降,治疗6个月后阳性率较治疗前升高,12个月后阳性率略有下降,至治疗18月时,阳性率明显下降(P<0.01).TGAb治疗后3个月时无明显变化(P>0.05),治疗后6个月时其阳性率高,与治疗前相比P<0.05,治疗18个月时下降更明显. 131I治疗后18月时随访,甲低的发生率阳性组患者为19.23%(10/52例),甲亢未愈为7.69%(4/52例).阴性组甲低发生率为8.97%(7/78),阳性组甲低发生率明显高于阴性组(P<0.01). I治疗3月,6月,12月时暂时性甲低发生率阳性组均明显高于阴性组(P<0.05).结论:TGAb、 TPOAb阳性组甲减的发生率明显高于阴性组,提示早发甲减与TGAb和TPOAb呈显著相关,尤其是TPOAb.131I 治疗后动态检测TPOAB和TGAB的变化规律对指导临床观察、判断治疗的预后有重要的指导意义.
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体外灌流处理的慢性重型肝炎患者血浆对C3A细胞CYP450 mRNA表达的影响
目的:通过比较未经灌流处理和体外灌流处理的慢性重型肝炎患者血浆对C3A细胞CYP4503A表达的影响,为改善C3A细胞的功能活性以提高其治疗效果提供依据.方法:分别用正常人血浆、慢性重型肝炎患者血浆、体外灌流处理的慢性重型肝炎患者血浆培养C3A细胞,RT-PCR法测定上述血浆培养的C3A细胞CYP4503A4 mRNA表达,凝胶成像系统获取CYP4503A4/β-action相对值,进行统计学分析.结果:未经灌流处理和体外灌流处理的慢性重型肝炎患者血浆培养的C3A细胞CYP3A4 mRNA表达均低于正常人血浆培养组(P<0.05),而体外灌流处理的血浆培养的C3A细胞CYP3A4 mRNA表达高于未经灌流处理的血浆培养组(P<0.05).结论:在进行生物人工肝治疗之前,配合血液灌流技术对患者血浆进行适当的处理,从而改善生物反应器中细胞的功能活性,将可能提高生物人工肝的治疗效果.
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低浓度HBsAg人群临床特征及免疫功能测定分析
目的:分析慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者高、低浓度乙型肝炎表面抗原(HBsAg)人群血清双特异性免疫复合物(TCIC)及外周血淋巴细胞亚群之间的差异,以了解其临床特征及与宿主免疫功能.方法:采用捕捉法酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞术(FCM)分别测定44例低浓度HBsAg人群(A组)、 82例高浓度HBsAg人群(B组)、 22例健康体检者(C组)血清TCIC和淋巴细胞亚群,并进行分析比较.结果:A组90.9%(40/44)分布于非活动期,以HBsAg/IgG-CIC阳性率高15.9%(7/44),B组以HBsAg/C3-CIC阳性率高46.3%(38/82);A组血清TCIC阳性率、 (A)值及非活动期的CD3+CD8+均低于B组或相应分期(P<0.01,P<0.05),CD4+/CD8+高于B组相应分期(P<0.01).结论:低浓度HBsAg人群机体TCIC形成和清除能力均较低下,且存在低剂量诱导的免疫耐受现象.
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CFSE标记抗原特异性CD4+CD25+T细胞在胰岛移植体内归巢的研究
目的:观察抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞在小鼠同种异体胰岛移植后体内的分布特点,探讨抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞免疫调节可能机制.方法:构建小鼠同种异体胰岛移植模型.CFSE对抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞标记,经尾静脉输注.用组织冰冻切片和流式细胞术动态了解CFSE标记的抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞在受体内的分布和增殖变化.结果:抗原特异性CD4+CD25+ Treg细胞联合胰岛移植组胰岛移植物平均生存期为(34.57±17.15) d,较胰岛移植组生存时间(10.6±1.82) d,差异有统计学意义(P<0.01).抗原特异性CD4+CD25+ Treg 细胞在各级淋巴结均有能定居,但是胰腺淋巴结定居的细胞数量明显多于其他淋巴结.结论:抗原特异性Treg细胞抑制STZ诱导的糖尿病小鼠的急性移植排斥反应,细胞抑制功能与细胞在体内淋巴结的归巢有关.
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血清IL-15水平与心血管疾病的关系
目的:探讨与动脉粥样硬化相关的炎性因子IL-15血清水平变化与心血管并发症的关系.方法:原发性高血压患者(262例)入选本研究.研究对象根据世界卫生组织1999年诊断标准分为无器官损伤组(n=116)、轻度器官损伤组(n=88)及重度器官损伤组(n=58).观测指标为IL-15和高敏C反应蛋白,测量方法为酶联免疫法(ELISA).结果:血清IL-15水平在重度器官损伤组明显高于无器官损伤组(P<0.01)及轻度器官损伤组(P<0.01).在周围血管疾病及冠脉疾病组,IL-15水平比无此两类疾病组明显升高.血清IL-15浓度在腔隙性脑梗塞患者组也明显升高(P<0.01).结论:炎性因子IL-15或许与原发性高血压患者并发的心血管疾病发生相关.
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醛脱氢酶8A1融合蛋白的表达及其多克隆抗体的制备与鉴定
目的:重组表达醛脱氢酶8A1(aldehyde dehydrogenase 8 family member A1,ALDH8A1)蛋白,制备其多克隆抗体,并进行抗体的特异性鉴定,以及蛋白在组织和细胞内的定位.方法:以成人肝cDNA文库为模板,PCR扩增ALDH8A1目的片段,并构建重组表达载体pGEX- 4T-1-ALDH8A1和pET-32a-ALDH8A1,经测序鉴定插入载体的DNA片段序列正确后,转化大肠杆菌BL21,诱导表达GST-ALDH8A1和 His-ALDH8A1融合蛋白.经Western blot确定其为目的蛋白后,纯化重组融合蛋白,并以GST-ALDH8A1免疫家兔制备抗人ALDH8A1多克隆抗体.用His-ALDH8A1包板,ELISA法测定兔抗人ALDH8A1血清效价;Western blot鉴定兔抗人ALDH8A1血清在重组蛋白和天然蛋白中的反应特异性;免疫组化法确定ALDH8A1蛋白在组织和细胞中的定位.结果:成功构建重组表达载体pGEX- 4T-1-ALDH8A1和pET-32a-ALDH8A1;获得包涵体形式表达的GST-ALDH8A1和可溶性形式表达的 His-ALDH8A1融合蛋白;应用纯化的重组蛋白GST-ALDH8A1免疫家兔,获得兔抗人ALDH8A1血清,ELISA测定抗血清的效价为1∶ 256 000.Western blot结果显示,制备的ALDH8A1兔多抗可特异地识别成人肝总蛋白以及293T、 A549、 HeLa、 U937、 HepG2细胞总蛋白中一个相对分子质量(Mr)约53 000的ALDH8A1天然蛋白,与文献报道的ALDH8A1的Mr一致,表明ALDH8A1在正常肝组织与癌细胞中都有表达.免疫组化结果表明ALDH8A1蛋白定位于人肝癌细胞胞质中.结论:成功制备出兔抗人ALDH8A1多克隆抗体,此抗体可应用于ELISA,Western blot和免疫组化检测,为进一步研究ALDH8A1的功能奠定了基础.
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抗呕吐毒素多克隆抗体的制备、纯化及鉴定
目的:制备呕吐毒素(DON)的多克隆抗体,并对抗体效价、特异性和抑制率进行鉴定.方法:采用EDC法合成了呕吐毒素的完全抗原DON-BSA,并通过免疫新西兰大白兔,得到呕吐毒素的多克隆抗体.结果:ELISA检测出多抗中含有呕吐毒素的特异性抗体,其效价高为12 800,其抑制率为50%时,DON的浓度为10 mg/L,DON的低检测浓度为0.1 mg/L.与结构类似物T-2毒素和NIV的交叉率分别为9.1%和4.9%.结论:呕吐毒素经过衍生化后制备出完全抗原,经免疫新西兰大白兔后得到的多克隆抗体可以完全满足ELISA检测的需要.
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IGF-1R的真核表达和单克隆抗体的制备
目的:IGF-1R稳定表达株的建立和抗IGF-1R单克隆抗体(mAb)的制备.方法:从cDNA扩增得到人全长IGF-1R基因,构建成含有E-Tag的质粒.用此质粒建立稳定表达IGF-1R的细胞株,并免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb.结果:成功构建IGF-1R病毒质粒,并筛选得到稳定表达IGF-1R的3T3细胞,该细胞免疫BALB/c小鼠后筛选得到6株稳定分泌抗IGF-1R抗体的杂交瘤细胞株,Western blot结果显示抗体8G3能特异性识别抗原.结论:成功制备了IGF-1R的mAb,为进一步研究IGF-1R在肿瘤治疗中的作用提供了有力的工具.
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Autotaxin多克隆抗体的制备
目的:表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的Autotaxin(58-157位氨基酸)融合蛋白,制备抗Autotaxin的多克隆抗体.方法:构建pET-21c-Autotaxin(58-157)重组表达质粒,转入BL21大肠杆菌,IPTG诱导蛋白表达,经镍离子金属螯合树脂纯化后,用纯化的蛋白免疫家兔,制备抗Autotaxin的多克隆抗体.ELISA检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性,并用于免疫组化实验.结果:在大肠杆菌中高表达Autotaxin(58-157)-His6融合蛋白,经亲和纯化后免疫家兔,获得了特异性的抗Autotaxin抗血清.结论:成功构建pET-21c-Autotaxin(58-157)表达质粒,原核表达获得高纯度的目的蛋白,制备出高效价的特异性抗Autotaxin多克隆抗体.
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Notch信号通路与血管发育
血管发育是复杂的血管网络形成的过程,在个体发育、 组织再生、 肿瘤发生发展中发挥重要作用,因此具有重要的研究价值.以往研究已经证明,血管发育与细胞因子、 组织缺氧、 基因调控等多种因素有关.现就Notch信号通路在血管发育中的作用的研究进展作一综述.
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细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应的检测方法
细胞介导的免疫效应在机体抗感染免疫、抗肿瘤免疫、移植排斥效应和自身免疫性疾病发生机制中发挥重要作用, 主要效应细胞之一为细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphoclyte, CTL).近年来,基于CTL特异性表位的多肽疫苗已经成为研究热点之一,CTL的活化及对靶细胞的杀伤效应成为衡量疫苗质量的重要因素之一.目前已经报道许多新的评价CTL活性及其杀伤效应的方法,现就此做一综述.
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p53与抗肿瘤免疫
p53是迄今发现的与肿瘤发生、 发展关系为密切的抑癌基因, 正常的p53蛋白通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡等途径对细胞增殖发挥负调控作用, 而在肿瘤细胞中异常表达的p53, 尤其是突变型p53蛋白可以诱导机体产生细胞和体液免疫反应, 导致对肿瘤细胞的免疫耐受或排斥。本文中对p53的功能、 p53在抗肿瘤等免疫反应中的作用, 及其在肿瘤治疗中的应用做一综述。
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EIAV减毒疫苗减毒机制及免疫研究进展
马传染性贫血病(EIA)是由逆转录病毒科慢病毒属的马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)引起的马属动物传染病.以重复发生的病毒血症以及发热,贫血,水肿,血小板减少症和消瘦等临床症状为特点.
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CpG ODN序列结构特征对免疫活性影响的研究进展
CpG ODN(CpG oligonucleotide,CpG 寡脱氧核苷酸)是人工合成的含有非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)的寡脱氧核苷酸(ODN),可模拟细菌DNA刺激多种哺乳动物包括人的免疫细胞.
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BrdU标记检测大鼠垂体前叶细胞的增殖功能
目的:为了观察大鼠垂体前叶细胞中各类激素细胞的增殖水平,建立一种快速、准确、灵敏、无同位素污染的检测垂体前叶细胞增殖的方法.方法:应用原代培养大鼠垂体前叶细胞,加入5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)标记细胞增殖,用抗BrdU抗体进行免疫细胞化学染色,观察大鼠垂体前叶细胞中各类激素细胞增殖能力.结果:大鼠垂体前叶细胞可见BrdU阳性标记内分泌细胞,其细胞核内可见棕褐色阳性颗粒,核浆比例增大,呈颗粒状,提示处于细胞增殖期.免疫细胞双重染色表明,体外培养垂体前叶的生长激素细胞、催乳素细胞、促肾上腺皮质激素细胞均具有一定的增殖能力.结论:BrdU标记是一种有效的标记垂体前叶细胞增殖的方法,为探究大鼠垂体前叶细胞中各类激素细胞增殖能力提供了理论基础.
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IL-27基因转染对小鼠结肠腺癌细胞生物学特性的影响
目的:获得稳定表达小鼠IL-27(mIL-27)基因的小鼠结肠腺癌细胞株(Colon26),研究IL-27基因对小鼠结肠腺癌细胞体内外生物学特性的影响.方法:通过脂质体法将pcDNA3.1(+)-His(B)/mIL-27质粒转染结肠腺癌细胞,筛选建立高表达细胞株.采用Western blot、 ELISA、 RT-PCR法证实IL-27基因成功转染Colon26.用MTT比色法检测IL-27质粒转染后对Colon26细胞生长的影响;流式细胞术检测IL-27质粒转染后对Colon26细胞凋亡的影响;将Colon26-IL-27细胞接种于BALB/c小鼠的右侧背部皮下,观察其致瘤性.结果:Colon26-IL-27细胞可表达IL-27mRNA并分泌IL-27,IL-27的表达在体外对Colon26细胞的增殖、凋亡均无影响,而在体内则具有明显的抗瘤活性.结论:成功制备Colon26-IL-27细胞株,证明IL-27能在体内明显抑制肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期,具有一定的抗肿瘤作用.
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T-ALL患者外周血TCRγ/δ T细胞的分布和增殖特点
目的:了解T细胞急性淋巴白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)患者外周血TCR Vγ和Vδ亚家族T细胞的分布和克隆情况.方法:利用RT-PCR扩增9例T-ALL患者和10例正常人外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCR亚家族Vγ和Vδ亚家族细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性.结果:9例T-ALL患者3个Vγ亚家族的表达率都明显低于正常人Vγ亚家族的表达率(P<0.05);V δ亚家族中只有Vδ1和Vδ3的表达率低于正常人(P<0.05).3例T-ALL患者出现克隆性增殖的γ/δ T淋巴细胞.结论:T-ALL患者外周血TCR Vγ和部分Vδ亚家族谱系出现限制性表达和克隆性增殖.同时存在克隆性增殖γδ+ T细胞提示可能为γδ+白血病性T细胞克隆.
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人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及免疫效果的初步研究
目的:构建人精子特异性乳酸脱氢酶 DNA疫苗,并免疫雌雄两性BALB/c小鼠,以观察特异性抗体的产生.方法:采用分子克隆的方法构建pVAX1-hLDHC DNA疫苗.双酶切及正反向测序对该DNA疫苗进行鉴定.肌肉注射方法免疫雌雄两性BALB/c小鼠,ELISA和Western blot方法检测小鼠血清中的特异性抗体,常规病理学方法检测雄性实验小鼠的睾丸组织.结果:双酶切及正反向测序结果表明:插入片段的序列以及插入的位置和方向均正确.肌肉注射免疫BALB/c小鼠后可诱导明显的体液免疫反应,且在雄性实验小鼠中未观察到睾丸炎的发生.结论:成功构建了具有一定免疫效果的hLDHC DNA疫苗,为今后进行更深入的研究奠定了基础.
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荷瘤小鼠T细胞表面CD59分子的表达与T细胞信号转导的相关性研究
CD59是一种以糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidy inositol,GPI)锚着于细胞膜表面的糖蛋白,广泛分布于造血细胞、非造血细胞及多种组织细胞表面,其主要功能是调节补体活化,通过与补体攻膜复合物(membrane attack complex,MAC)装配过程中的C8和/或C9结合从而抑制补体的活化[1].
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
