细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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氯沙坦通过ERK1/2 MAPK途径抑制高糖诱导小鼠系膜细胞CTGF表达
目的: 研究高糖环境下, 氯沙坦对CTGF的影响以及其作用机制.方法: 体外培养小鼠系膜细胞株(MMCs), 用高糖(25 mmol/L葡萄糖)刺激细胞分别作用24 h、 48 h、 72 h, 用Western blot方法检测磷酸化ERK1/2的表达.再将细胞分为低糖组(5.6 mmol/L葡萄糖), 山梨醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+19.4 mmol/L山梨醇), 高糖组(25 mmol/L葡萄糖), 氯沙坦组(25 mmol/L葡萄糖+10-5 mol/L氯沙坦)以及 ERK抑制剂组(25 mmol/L葡萄糖+ 25 μmol/L PD98059), 48 h后采用Western blot方法检测磷酸化ERK1/2的表达, 72 h后采用Real-time PCR方法及Western blot分别检测 CTGF mRNA表达量以及蛋白的表达.结果: 高糖刺激小鼠系膜细胞后, ERK1/2磷酸化的蛋白表达逐渐增高, 呈现一定时间依赖性.与低糖组相比, 高糖组磷酸化ERK1/2、 CTGF的蛋白表达明显增加(P<0.01), 而与高糖组相比, 氯沙坦组以及ERK抑制剂组磷酸化ERK1/2的蛋白表达以及CTGF的蛋白均明显下降有统计学意义(P<0.05).与低糖组相比, 高糖组CTGF mRNA表达量明显增加(P<0.01), 而与高糖组相比, 氯沙坦组以及ERK抑制剂组CTGF mRNA表达量明显下降, 且有统计学意义(P<0.01).结论: 氯沙坦可抑制高糖对CTGF的诱导作用, 其机制可能与抑制ERK1/2 MAPK途径有关.
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IL-12对BALB/c小鼠Th17细胞的分化的影响
目的: 观察细胞因子IL-12对Th17细胞分化的影响.方法: 小鼠脾淋巴细胞经抗CD3单克隆抗体(mAb)和不同浓度的重组小鼠IL-12刺激, 3 d后使用ELISA方法观察培养物上清液中IL-17的产生情况.并使用细胞内细胞因子染色的方法, 通过流式细胞术观察CD3 mAb和重组小鼠IL-12刺激对Th1和Th17细胞分化的影响.结果: Th17细胞不分泌IFN-γ、 IL-5、 IL-10等细胞因子, 不表达Foxp3, 是一个独立的细胞亚群.不同浓度的重组小鼠IL-12可以诱导抗CD3 mAb 的T细胞分泌IFN-γ, 并向Th1细胞方向分化.同时, IL-12可以抑制活化的T细胞分泌IL-17, 抑制T细胞向Th17细胞分化.结论: IL-12可以抑制Th17细胞的分化.
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大熊猫秦岭亚种IL-2基因的克隆表达及其生物活性研究
目的: 明确大熊猫四川种群和秦岭种群IL-2在基因水平是否存在差异; 得到具有具有生物活性的秦岭大熊猫IL-2原核表达产物.方法: 采用RT-PCR方法从ConA诱导培养的秦岭大熊猫外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到IL-2的cDNA片段, 利用DNA重组技术构建原核表达载体pET32a-IL-2, 转入BL21(DE3)中, 以IPTG BL21(DE3)表达IL-2融合蛋白.融合蛋白进行SDS-PAGE和Western blot进行鉴定及可溶性分析; 用纯化的融合蛋白免疫家兔, 制备多克隆抗体; 采用淋巴细胞增殖试验测定融合蛋白生物活性.结果: 通过重组表达获得IL-2抗原蛋白, 相对分子质量(Mr)为34 000; 免疫家兔得到特异性的抗IL-2抗体, 该抗体能够检测细胞内源性IL-2蛋白的表达; 融合蛋白具有促进淋巴细胞转化增殖的生物学活性, 并且它的这种作用可被本研究制备的多抗所抑制.结论: 成功克隆了秦岭大熊猫IL-2基因, 与四川大熊猫核苷酸同源性为99.4%表达了具有生物活性的融合蛋白.
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人CCR7真核表达载体构建及对HeLa细胞HLA-I表达的影响
目的: 构建人CCR7真核表达载体, 建立稳定转染CCR7的HeLa细胞株, 初步探讨肿瘤细胞表达HLA-I类分子表达改变及相关机制.方法: 从人脾脏cDNA扩增出CCR7, 装入pDsRed2-N1, 脂质体转染HeLa细胞.CCR7配体CCL21作用后, 流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞表达HLA-I的表达, 萤虫素酶报告基因系统检测NF-κB活化.结果: 经PCR、酶切和测序证实, 含CCR7真核表达载体成功构建.G418筛选后获得稳定表达CCR7蛋白的HeLa细胞.FCM证实HeLa细胞表达HLA-I类分子水平增高, 萤虫素酶报告基因系统证实NF-κB活化明显.结论: 成功构建人CCR7真核表达载体, CCR7促进肿瘤细胞表达HLA-I类分子, 诱导肿瘤细胞NF-κB活化.
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布鲁氏菌引起的巨噬细胞依赖性树突状细胞迁移与免疫应答
目的: 研究阴道巨噬细胞清除后小鼠对布鲁氏菌疫苗的免疫应答机制.方法: BALB/c小鼠60只随机分为3组, 每组20只, 实验组小鼠阴道内滴注脂质体包裹的clodronate以清除阴道巨噬细胞, 3 d后阴道滴注10 μL布鲁氏菌疫苗(含6×108个布鲁氏菌).同时设空脂质体对照组(不含clodronate)和PBS对照组.依次在12、 24、 36、 72 h收集小鼠阴道、髂内淋巴结和血液.采用免疫组织化学染色法观察阴道巨噬细胞清除效果和树突状细胞(DC)的迁移, 并用ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4的含量.收集小鼠腹腔液制备巨噬细胞进行细胞培养, 1.2×106个巨噬细胞中加入布鲁氏菌疫苗10 μL, 于不同时间点对巨噬细胞进行姬姆萨染色, 观察巨噬细胞的变化.结果: 清除巨噬细胞组小鼠接种布鲁氏菌疫苗后, 髂内淋巴结中S-100阳性DC数量没有明显的变化, IFN-γ和IL-4的含量也没有明显的升高.非清除组中, 不同的时间点, 髂内淋巴结中S-100阳性DC明显增多, 与PBS对照组相比, IFN-γ含量显著增高, 而IL-4则没有明显变化.体外巨噬细胞负载布鲁氏菌疫苗发现, 随着时间的延长, 巨噬细胞吞噬布鲁氏菌逐渐增多, 在12 h, 巨噬细胞开始出现坏死性凋亡.结论: 小鼠在对布鲁氏菌疫苗的免疫应答中, DC的迁移是巨噬细胞依赖性的, 并且这种依赖性有可能是由布鲁氏菌抗原成分在细胞间间接传递引起的.
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ULBP1启动子报告质粒的构建及NS3/4A蛋白对ULBP1基因转录的作用
目的: 构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒, 并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响.方法: 将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Flag-NS3/4A), Western blot 检测其表达.用荧光分度计检测NS3/4A对ULBP1转录水平的影响.结果: 成功构建了含有ULBP1启动子的报告质粒pGL3-ULBP1和FLAG-NS3/4A真核表达质粒, 并检测到NS3/4A可以抑制ULBP1的转录.结论: HCV的蛋白酶NS3/4A可以抑制ULBP1的转录.
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小剂量美法仑治愈荷瘤小鼠过程中外周血细胞计数的变化及其意义
目的: 观察在小剂量美法仑治愈荷瘤C57BL/6小鼠过程中外周血细胞计数的变化与肿瘤结节缩小之间的关系, 为进一步研究化疗治愈肿瘤的作用机制奠定基础.方法: 野生型C57BL/6小鼠皮下接种小鼠淋巴瘤EL4 细胞, 建立荷EL4 肿瘤的小鼠模型.肿瘤接种后12 d, 12只荷瘤小鼠随机分成2组, 7.5 mg/kg美法仑单次腹腔内注射, 等量生理盐水对照.观察荷瘤小鼠肿瘤结节直径的变化.用药组小鼠分别在7.5 mg/kg美法仑治疗前3 d、治疗后6 h、治疗后第4、 7、 11、 15、 28天内眦静脉取血, 进行血常规检测, 分析荷瘤小鼠外周血象与荷瘤小鼠肿瘤结节缩小之间的相关性.结果: 7.5 mg/kg美法仑治疗后, 荷瘤小鼠肿瘤消退;而对照组荷瘤小鼠肿瘤继续生长.美法仑治疗后6 h外周血白细胞为(10.6±2.3)×109/L, 与治疗前(9.8±0.32)×109/L比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后第4天外周血白细胞降为(2.9±0.97)×109/L, 与治疗前比较差异具统计学意义(P<0.01), 随后尽管白细胞数有所回升, 但在治疗后第28天仍明显低于化疗前水平(P<0.01).Hb含量在美法仑治疗后6 h由化疗前的(132±7) g/L降为(110±14) g/L(P<0.05), 随后Hb含量持续降低, 治疗后第7天达低点(96±5) g/L, 以后逐渐升高, 治疗后15 d恢复至化疗前水平.用药后6 h荷瘤小鼠血小板计数升至(1502±142)×109/L, 与用药前(914±322)×109/L比较差异具有统计学意义(P<0.01), 随后1周内一直维持在高水平, 治疗后第11天血小板恢复至化疗前水平.结论: 美法仑在使荷瘤小鼠的肿瘤结节缩小的同时可引起外周血白细胞数和血红蛋白浓度的降低, 但对血小板无抑制作用.美法仑化疗后1周内血小板计数的增加可能与美法仑的抗肿瘤作用有关.
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老年糖尿病酮症酸中毒患者IL-6和氧化应激的变化
目的: 探讨老年糖尿病酮症酸中毒(DKA)患者白细胞介素6(IL-6)和氧化应激的变化.方法:检测老年糖尿病酮症酸中毒患者治疗前后血IL6、 8异前列腺素F-2α(8-isoprostaglandinF2α,8isoPGF2α)水平、超氧化物歧化酶(SOD）活性、总抗氧化能力(TAC)和丙二醛(MDA）含量.结果:在DKA患者SOD、 TAC显著低于对照组(P<0.05), 而IL6、 MDA和8isoPGF2α显著高于对照组(P<0.05); DKA患者治疗后的SOD和TAC显著高于治疗前患者(P<0.05), 而IL-6、 MDA和8isoPGF2α显著低于治疗前患者(P<0.05).DKA患者治疗前IL6与8isoPGF2α呈显著性正相关(r=0.33, P<0.05）, 治疗后IL-6与SOD呈显著性负相关(r=-0.36, P<0.05）.DKA患者治疗前后IL-6与MDA均呈显著性正相关(r=0.38, 0.41, P<0.05）.结论: DKA患者血清IL-6水平明显升高, 且与氧化应激有关.
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URG-4在骨肉瘤中的表达及与预后的关系
目的: 探讨上调基因在骨肉瘤(osteosarcoma)组织中的表达及与预后的关系.〖HTH〗方法: 随机选取骨肉瘤(患者86例, 应用SP免疫组化方法检测URG-4蛋白的表达.并对其中的59例骨肉瘤患者中作术后为期1～60个月的随访, 分析URG-4蛋白与骨肉瘤患者预后的相关性.结果: URG-4蛋白在骨肉瘤组织中的阳性表达率为75.58% (65/86).URG-4蛋白的表达与Enneking分期有关, 而与骨肉瘤患者年龄、 性别、 肿瘤部位、 大小、 病理分型无关; URG-4蛋白表达阳性者的5年生存率显著低于表达阴性者(P<0.01).结论: URG-4蛋白的表达可能与骨肉瘤的发生、 浸润、 转移有关; 检测URG-4蛋白在骨肉瘤组织中的阳性表达率, 并结合其临床病理学分级, 可提高对患者预后的判断准确性.
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食管鳞癌ABCG4的表达及临床意义
目的: 检测ABC膜转运蛋白ABCG4在食管鳞癌中的表达, 探讨其在病理分级、 TNM分期及转移与否中的差异性, 为研究ABCG4在肿瘤中表达及其与耐药相关性提供依据.方法: 采用免疫组化EnVinsion法、 免疫荧光法检测ABCG4在66例食管鳞癌中的表达, 激光共聚焦显微镜观察其表达定位, 统计学分析差异性.结果: ABCG4阳性表达主要定位于胞膜上和胞质中, 鳞癌总阳性率65.15%, Ⅰ-Ⅱ、 Ⅱ、 Ⅱ-Ⅲ阳性率分别为15.38%、 75.0%、 85.16%, 3组间检验差异性非常明显(P<0.01), 各2组间的Mann-Whitney检验差异性有统计学意义(P<0.05);TNM分期Ⅱa、 Ⅱb、 Ⅲ阳性率分别为34.5%、 90.5%、 87.5%, 3组间检验差异性显著(P<0.01), Ⅱa与各组的Mann-Whitney检验差异性非常显著(P<0.01), Ⅱb与Ⅲ组间检验差异性无统计学意义(P>0.05).淋巴结转移组与非转移组差异性非常显著(P<0.01).结论: ABCG4在食管鳞癌中高表达, 表达的高低与病理分级、 TNM分期高低及其淋巴结转移与否有关, 很可能与食管鳞癌化疗药物耐药、 转移有关联.
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胰岛素样生长因子-1受体和血管内皮生长因子在胃癌中的表达
目的: 探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)和血管内皮生长因子受体(VEGF)的表达与胃癌浸润、转移的关系.方法: 选取胃癌患者56例, 以20例癌旁不典型增生组织及28例正常胃黏膜组织作为对照, 应用SABC免疫组化方法检测IGF-1R和VEGF的表达.结果: IGF-1R蛋白在胃癌组织、癌旁不典型增生组织及正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为87.5%、 55.00%和17.86%, 两两比较, 均有统计学差异(P<0.01);IGF-1R蛋白在胃癌转移组和无转移组中的阳性表达率分别为97.06%和72.73%(P<0.05);浸润至黏膜下层、肌层、外膜的胃癌组织中IGF-1R蛋白阳性表达率分别为66.67%、 92.59%、 100%(P<0.05).VEGF蛋白在胃癌组织、癌旁不典型增生组织及正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为69.64%、 45.00%和25.00%, 两两比较, 均有统计学差异(P<0.05);VEGF蛋白在胃癌转移组和无转移组中的阳性表达率分别为85.29%和45.45%(P<0.01);浸润至黏膜下层、肌层、外膜的胃癌组织中VEGF蛋白阳性表达率分别为40.00%、 74.07%、 85.71%(P<0.05).结论: IGF-1R和VEGF与胃癌的发生、浸润、转移有关, 可联合运用, 作为新的胃癌标记物, 对判断预后有一定价值.
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阿托伐他汀对ST段抬高心肌梗死患者血清C反应蛋白、 IL-6水平的影响
目的: 阿托伐他汀对ST段抬高心肌梗死患者血清CRP、 IL-6的作用及意义.方法: 选择诊断为ST段抬高心肌梗死患者134例, 随机分为对照组和实验组, 各67例, 均给予阿司匹林、减轻心脏耗氧等常规治疗, 实验组除标准治疗外, 入院给予每晚睡前口服阿托伐他汀40 mg, 检测2组治疗前及8周后血清C反应蛋白(CRP)、 IL-6、血脂的变化.结果: 治疗后对照组血脂、血清CRP、 IL-6无明显变化, 而实验组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清CRP及IL-6明显降低(P<0.05).结论: 阿托伐他汀除具有降脂作用外, 还具有降低炎症反应, 有利于ST段抬高的急性心肌梗死(STEAMI)患者的恢复;降低CRP的作用可能是通过降低IL-6实现的.
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CRRT治疗MODS患者血清对体外培养血管内皮细胞分泌TF及PAI-1的影响
目的: 研究连续性肾脏替代治疗(CRRT)过程中多器官功能障碍综合征(MODS)患者血清对体外培养血管内皮细胞分泌组织因子(TF)及纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响.方法: 16例MODS患者随机分为两组, 一组给予无肝素CRRT治疗, 另一组给予普通肝素抗凝的CRRT治疗.观察患者行CRRT治疗8h过程中的变化, 在治疗0 min、 15 min、 1 h、 2 h、 8 h时分别留取血样5 mL.ELISA法检测患者血清TNF-α、 IL-1β水平.观察CRRT治疗不同时间点血清对内皮细胞分泌TF及PAI-1蛋白水平的影响, RT-PCR法检测TF及PAI-1mRNA水平的表达.结果: MODS患者血清可明显增加体外培养血管内皮细胞TF及PAI-1的分泌, 经CRRT治疗后, 患者血清对内皮细胞分泌TF及PAI-1的影响逐步减小.无肝素组内皮细胞分泌TF及PAI-1蛋白水平与相应干预血清TNFα水平均呈正相关, 相关系数分别为0.902, 0.939(P＜0.05);肝素组内皮细胞分泌TF及PAI-1水平与相应干预血清TNFα水平均无相关性(P＞0.05).结论: MODS患者血清促进内皮细胞分泌TF及PAI-1, 内皮细胞功能明显异常, 可能与炎症介质有关.CRRT治疗可清除血液中激活/损伤内皮细胞的成分, 改善患者内皮细胞功能.
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甲状腺滤泡状癌微淋巴管密度与淋巴结转移的关系
目的: 应用新型淋巴管内皮标记物D2-40分析甲状腺滤泡状癌及周围组织微淋巴管密度(MLVD)与淋巴结转移之间的关系.方法: 应用免疫组织化学Envision法检测35例甲状腺滤泡状癌和20例结节性甲状腺肿中D2-40和CD34的表达, 分别计数MLVD和微血管密度(MVD), 分析MLVD与甲状腺滤泡状癌淋巴结转移之间的关系, 同时与病变中MVD行对比观察.结果: 甲状腺滤泡状癌周围结缔组织及被膜中的MLVD和MVD与淋巴结转移有密切关系;MLVD和MVD越高淋巴结转移率越高.同时甲状腺淋巴管内的癌栓与淋巴结转移也显著相关(P<0.01).结论: 甲状腺滤泡状癌的淋巴结转移与微淋巴管及微血管的形成有密切关系, 抑制淋巴管生成, 这可能是未来甲状腺肿瘤治疗的一重要方向.
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Smac蛋白干扰胰腺癌Bx-PC3细胞系survivin蛋白增敏顺铂化疗
目的: 观察Smac蛋白对细胞凋亡抑制蛋白survivin的下调作用, 进一步分析Smac蛋白转染增敏survivin过表达胰腺癌Bx-PC3细胞系顺铂化疗敏感性的效应.方法: 建立稳定传代、均一表达survivin的Bx-PC3细胞系.制备Smac-GFP重组质粒, 将其转染入Bx-PC3细胞, 以Western blot法半定量测定survivin表达水平.联合10 mg/L顺铂孵育48 h和72 h, 按照MTT法测定细胞抑制率(%).结果: Bx-PC3细胞转染24 h开始出现微弱阳性转染表现(GFP绿色荧光阳性), 于48 h出现大量细胞转染, 于72 h转染水平达到峰值.Western blot检测表明, 与对照组相比, 转染组的survivin蛋白表达水平仅为对照组的28.6%(P<0.01).MTT检测发现, 随着顺铂作用时间的延长, 对照组和转染组的顺铂抑制率均升高(48 h vs 72 h, P<0.05).而且, 转染组的抑制率在两时点上均高于对照组(P<0.01).结论: Survivin蛋白在胰腺癌中具有重要的增殖调控作用, 并且与胰腺癌化疗抵抗密切相关.Smac蛋白拮抗可以在蛋白水平上下调survivin的表达, 提高胰腺癌细胞对化疗的敏感性, 这一治疗策略有望成为一种治疗胰腺癌的新型有效治疗方法.
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中国西部自身免疫性肝病患者自身抗体的分布特征
目的: 探讨中国西部自身免疫性肝病患者中相关自身抗体的存在状况及特征.方法: 57例自身免疫性肝病患者分为3组: 自身免疫性肝炎(AIH)12例、原发性胆汁性肝硬化(PBC)32例、原发性硬化性胆管炎(PSC)13例.用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、平滑肌抗体(SMA)、抗肝肾微粒抗体1型抗体(anti-LKM1)、抗线粒体抗体(AMA)和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA),Western blot检测抗肝细胞胞溶质抗原1型抗体(anti-LC1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(anti-SLA/LP)、抗肝肾微粒抗体1型(anti-LKM1)、 AMA-M2亚型等多种肝抗原自身抗体.结果: 57例中ANA、AMA、M-2、pANCA阳性率在组间有统计学差异(P<0.01).PBC中AMA、M-2阳性检出率均为100%, PSC中pANCA阳性检出率为53.8%, Fisher精确检验在α'=0.002水准与其他各组比较有统计学差异.AIH与PBC的ANA阳性率分别为100%和50%,Fisher精确检验在α'=0.002水准二者无统计学意义,与其他各组比较有明显差异.在AIH组SMA阳性率为25%,LKM-1、LC-1、SLA/LP阳性率均为8.3%, 与其他组无统计学意义,可能与病例少有关.PBC中分别有1例患者ANA、SMA以及ANA、LKM-1同时阳性, PSC中有1例ANA、SLA/LP同时阳性,此3例患者结合性别、生化、自身抗体等资料符合AIH诊断条件;AIH中有1例M-2阳性综合各项资料符合PBC(重叠综合征).结论: 肝抗原自身抗体、ANA、AMA及M-2亚型的检测有助于自身免疫性肝病的诊断.对肝炎病毒血清标志物阴性的肝功能异常者应该行肝抗原自身抗体检测协助诊断.
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持续胰岛素输注对脓毒症早期大鼠肝脏线粒体的保护作用
目的: 探讨持续胰岛素输注对脓毒症早期大鼠肝脏线粒体是否具有保护作用及其作用机制.方法: SD大鼠24只随机分为正常对照组(n=8)、 LPS组(n=8)和胰岛素干预组(n=8).监测各组大鼠的血糖水平及腹腔注射后2 h和6 h的血清TNF-α和IL-6水平;运用流式细胞术检测24 h时点分离肝脏线粒体的膜电位;检测测分离肝脏线粒体SOD和MDA水平;电镜观察24 h肝脏线粒体形态学变化.结果: LPS组在腹腔注射LPS后各监测时点, 血糖水平较正常对照组均显著升高, 并且注射后2 h和6 h的血清TNF-α和IL-6水平较正常对照组显著升高.与正常对照组相比, LPS组24 h肝脏线粒体膜电位显著下降, 线粒体SOD水平显著升高, 而MDA水平则变化不显著.胰岛素干预组与LPS组比较, 血糖水平、 TNF-α及IL-6和肝脏线粒体SOD水平均显著降低, 而肝脏线粒体膜电位则显著升高, 线粒体MDA水平则改变不显著.肝脏线粒体超微结构改变尚不明显, LPS组与正常对照组相比, 仅个别线粒体出现空泡样改变, 部分基质凝固;而胰岛素干预组则未见空泡样改变.结论: 脓毒症早期大鼠肝脏线粒体存在可逆性损伤;持续胰岛素输注对脓毒症早期大鼠肝脏线粒体有明显的保护作用, 此保护作用可能与其减轻过度的炎症反应和降低过高的血糖水平有关.
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两株鼠抗人PD-1单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定
目的: 制备鼠抗人PD-1单克隆抗体(mAb)及鉴定其生物学特性.方法: 以基因转染细胞PD-1/L929为免疫原, 免疫BALB/c小鼠;采用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合, 经选择性克隆化培养及流式细胞术(FCM)分析, 筛选分泌鼠抗人PD-1分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、 Western blot、竞争结合抑制试验及肿瘤细胞株测定等方法对mAb进行生物学特性鉴定.结果: 获得了2株持续稳定分泌鼠抗人PD-1mAb的杂交瘤细胞株, 命名为1F2和5F10.对其生物学特性的鉴定结果表明, 均为条带相对分子质量在(Mr)55 000左右的免疫球蛋白, 具有不同的PD-1结合位点;1F2 mAb可识别SKHep-1和7721细胞株表面的PD-1分子, 而5F10可识别Raji细胞株的PD-1分子.结论: 成功获得了2株鼠抗人PD-1杂交瘤及其分泌的mAb.
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大鼠透明质酸合成酶-2抗血清的制备及鉴定
目的: 制备大鼠透明质酸合成酶-2(HAS-2)抗血清并鉴定抗血清灵敏度及其特异性.方法: 通过生物信息学分析选取HAS-2非保守的亲水区域作为抗原, 通过原核表达纯化后免疫家兔, 制备出抗血清.Western blot检测所制备抗血清的灵敏度.真核瞬时表达大鼠HAS-2和HAS-3, 分别用抗His抗体和抗血清检测, 鉴定制备抗血清的特异性.结果: 通过原核表达并纯化得到抗原多肽, 免疫家兔后获得ELISA效价大于1∶ 10 000的抗血清.所制备的抗血清至少可以检测出10 ng以上的抗原多肽, 并且能够特异地检测HAS-2而与HAS-3无反应.结论: 成功通过大鼠HAS-2非保守区域多肽的原核表达产物制备出高灵敏度和特异性的大鼠HAS-2抗血清, 为研究透明质酸(HA)的病理生理意义提供了有利支持.
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重组荞麦 rBTI 的多克隆抗体制备及鉴定
目的: 制备重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)的多克隆抗体.方法: 通过大肠杆菌原核表达系统制备高纯度的rBTI蛋白, 免疫大白鼠, 制备多克隆抗体.用Western blot、间接ELISA及免疫细胞组织化学法检测该抗体的效价和特异性.结果: 间接ELISA法检测所制备抗体的效价达1∶ 128 000以上;Western blot显示该抗体能与BTI蛋白特异结合;免疫组织化学法检测结果显示rBTI主要存在于EC9706细胞的胞质和细胞核内.结论: 所制备的大鼠抗rBTI的抗血清具有较高的免疫反应性和特异性, 为rBTI诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究及进一步揭示荞麦胰蛋白酶抑制剂的结构与功能的关系提供重要的基础.
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小鼠visfatin抗体的制备及应用
目的: 制备高效价抗visfatin抗体, 探测visfatin在前脂肪细胞成脂分化过程中在空间上表达情况.方法: 克隆鼠内脂素visfatin基因的蛋白编码区全长序列, 构建其原核表达载体pET28a-visfatin, 然后在E.coli(BL21)中诱导大量以包涵体形式表达, 提取包涵体并用Ni-NTA 亲和层析柱纯化蛋白, 并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.以纯化后的抗血清为一抗, Western blot检测小鼠肝、肌肉等组织中visfatin的分布.结果: SDS-PAGE及Western blot显示原核表达载体pET28a-visfatin在大肠杆菌中诱导表达, 融合蛋白能够被抗his mAb识别.免疫新西兰大白兔获得抗体效价在1∶ 25 600以上.结论: 用制备得到的抗体对小鼠心、肝、肺、脾、脂肪、肌肉组织样品做Western blot鉴定, 结果表明visfatin在各组织中均有表达, 其中脾和脂肪组织中表达量高于其他组织.
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兔抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定
目的: 制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb), 并对抗体进行特性鉴定.方法: 以人正常肝cDNA文库为模板, 构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His).CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb, 辛酸-硫酸铵法纯化抗体, 采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性.结果: CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达.兔抗人CES1 pAb效价为1∶ 64 000.Western blot鉴定表明, 该抗体可识别重组人CES1蛋白, 也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基.免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白.结论: 成功地制备了兔抗人CES1 pAb, 该抗体可应用于ELISA、 Western blot、免疫组化等实验, 为进一步研究CES1的功能提供了特异性检测工具.
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CARP抗体制备及表达模式分析
目的: 制备心肌锚定重复序列蛋白(CARP)的抗体并分析其表达模式.方法: 通过生物信息学对其抗原性进行分析, 通过RT-PCR从小鼠的心肌cDNA中扩增了N-端279 bp的片段, 并克隆到表达载体pET 28b中, 使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达, 用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化CARP蛋白, 用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.利用制备的抗体, 通过Western blot和免疫荧光的方法, 分别检测了CARP在各组织和细胞中的表达模式.结果: 制备了CARP抗体, 进一步验证了CARP表达在蛋白水上呈心肌特异性, 在大鼠心肌原代细胞中主要在细胞核中表达.结论: 成功制备了CARP抗体, 分析了CARP的表达模式, 为进一步CARP的功能奠定了基础.
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足细胞抗原与肾小球疾病
肾小球足细胞的损伤及其相关蛋白的表达异常是蛋白尿形成的主要原因, 足细胞表面抗原在肾小球疾病发病机制中发挥了重要作用.人类膜性肾病第一个足细胞抗原-中性内肽酶以及第一个裂孔隔膜组成分子Nephrin的发现开辟了足细胞研究的新纪元.随着足细胞抗原在肾小球疾病及蛋白尿产生机制中的深入研究, 将为临床进一步揭示肾小球疾病的发病机制和寻找特异有效的防治蛋白尿的新的分子靶点提供理论依据.
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癌-睾丸抗原GAGE与肿瘤
肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一, 其诊断和治疗一直是人们关注的焦点.近年来, 肿瘤的发病率和死亡率呈明显上升趋势, 传统的治疗方法仍存在各种问题, 故寻找新的诊疗手段已势在必行.目前, 肿瘤免疫治疗已经成为该研究领域的热点之一.
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HCV入胞相关分子及其作用机制的研究进展
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)是一种有包膜的单股正链RNA病毒, 属于黄病毒科丙型肝炎病毒属.包膜病毒感染细胞的初始步骤即是病毒外膜与靶细胞膜相互结合作用的过程, 多种病毒蛋白及宿主细胞分子参与其中.HCV主要的靶细胞是肝细胞, 病毒颗粒首先要通过肝细胞膜进入胞浆才能开始其生命周期.
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NKT细胞的发育分化及细胞因子分泌状态的调控机制
自然杀伤(NK)T细胞是从传统T淋巴细胞在早期发育中分支出的一种特殊类型的T淋巴细胞亚群, 它们直接在胸腺内阶段分化发育成熟, 或在外周分化发育为功能稳定的成熟细胞.
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以肿瘤抗原BAP31为靶点的基因疫苗构建及其诱导小鼠免疫反应的研究
目的: 构建重组表达载体P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗并接种小鼠, 评价其诱导的体液和细胞免疫应答.方法: 利用分子克隆技术, 构建重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31, 同时构建P-BAP31/EGFP和P-L-BAP31/EGFP重组质粒, 并将其以脂质体瞬时转染HeLa细胞, 通过荧光显微镜观察目的蛋白的表达;将重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31免疫C57BL/6小鼠, 采用间接ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价;通过酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测免疫脾细胞在受到BAP31抗原刺激后产生IFN-γ和IL-4细胞因子的频率;通过乳酸脱氢酶(LDH释放)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的应答.结果: 酶切及测序结果表明, 成功构建了针对BAP31肿瘤抗原的P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗.通过荧光显微镜观察重组质粒转染的HeLa细胞, 可见EGFP报告基因表达的绿色荧光.ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价发现, 带LAMP组明显高于不带LAMP组(P<0.05), 且两者均高于空质粒(P-LAMP)及正常对照(N)组(P<0.01).ELISPOT检测脾细胞分泌细胞因子IFN-γ和IL-4的频率, 带LAMP组与其他组相比显著提高(P<0.01).LDH释放试验显示, 带LAMP组的特异性CTL活性高于不带LAMP组, 且均高于对照组(P<0.01).结论: 构建了针对肿瘤抗原BAP31的全长基因疫苗, 以其免疫C57BL/6小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫反应, 其中, P-L-BAP31基因疫苗各项免疫反应均优于P-BAP31.
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CTGF反义寡核苷酸对高糖培养人肾小球系膜细胞细胞外基质表达的影响
目的: 观察体外转染结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对高糖培养的人肾小球系膜细胞(HMC)细胞外基质表达的影响.方法: 体外培养HMC, 予以高糖(30 mmol/L)和正常糖(5 mmol/L)培养液培养, 高糖培养后应用脂质体Lipofectamine2000转染CTGF ASODN, 在不同时间收集培养液上清.用ELISA检测培养液上清中的纤连蛋白(FN)和层黏连蛋白(LN)含量.结果: 高糖呈时间依赖促进体外培养的HMC表达 FN和LN, 而转染CTGF ASODN可抑制高糖所致的FN和LN分泌增加.结论: 高糖培养可促进HMC细胞外基质的表达, 转染CTGF ASODN可抑制上述高糖的作用.故调控HMC的CTGF表达水平可能成为防治糖尿病肾病(DN)、特别是早期病变的有效途径之一.
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Fas/FasL、Bcl-2/Bax蛋白在母胎界面的表达
目的: 探讨在牦牛妊娠早期的功能及与其它动物的异同.方法: 取妊娠早期牦牛不同阶段的胎盘组织, 采用SP免疫组化方法检测牦牛妊娠早期胎盘中Fas/FasL、 Bcl-2/Bax蛋白表达特征.结果: 在牦牛妊娠早期, 子宫内膜上皮和滋养层中Fas/FasL呈阳性表达, 而在子宫内膜中的淋巴细胞和浆细胞也呈Fas/FasL阳性.Fas蛋白在子宫内膜上皮中的表达量随妊娠进行有下降趋势, 而在滋养层中几乎均为强阳性表达.FasL的表达量在滋养层中没有发生变化, 一直呈强阳性表达;而在子宫内膜中, 几乎均为中等表达. Bcl-2蛋白在子宫内膜中的表达量16～20 d较高, 之后表达量呈下降趋势;在滋养层中没有发生变化.Bax蛋白在妊娠16 d的子宫内膜中的表达量较高, 其余均为低表达;在滋养层中的表达量变化不大, 一直较高.在凋亡的细胞中, Bax着色较深.结论: 在牦牛妊娠过程中, 子宫内膜上皮和滋养层中Fas/FasL呈阳性表达, 可能与牦牛妊娠过程中的免疫赦免有关.
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小鼠IL-33的原核表达、纯化及鉴定
目的: 在大肠杆菌中表达具有生物学活性的白细胞介素-33(mIL-33).方法: 用PCR技术扩增小鼠IL-33成熟蛋白的编码区, 与原核表达载体pET-44连接, 构建pET-44-mIL-33表达载体, 转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达, 镍柱亲和层析法纯化目的蛋白, SDS-PAGE分析表达产物, MTT法测定纯化IL-33的生物学活性.结果: 成功构建了pET-44-mIL-33原核表达载体, 并在大肠杆菌中表达出可溶性mIL-33, SDS-PAGE分析纯化产物纯度为95%, 表达产量为95 mg/L.细胞增殖实验表明IL-33有抑制P815细胞增殖的活性.结论: 获得了有活性的重组IL-33蛋白纯品, 为后续功能研究奠定了基础.
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两种不同胞内pH敏感染料在激光扫描共聚焦显微镜中的应用
目的: 使用两种胞内pH敏感的荧光染料SNARF-4F/AM和BCECF/AM, 利用激光扫描共聚焦显微镜进行胞内pH值(pHi)的测量.方法: SNARF-4F/AM和BCECF/AM均能被诱导胞内瞬时酸化和碱化, 用单激发双发射比值测量法, 比较SNARF-4F/AM和BCECF/AM的酸化和碱化与浓度线性关系.结果: SNARF-4F/AM孵育的细胞能够被诱导胞内酸化和碱化, 并能较好地反应出浓度与pH值的线性关系, 同时其诱导酸化后能够产生钠氢交换体(Na+/H+ exchanger, NHE)介导的回复相;BCECF/AM孵育的细胞虽然能够产生一定程度的胞内酸化和碱化, 但是其诱导酸化后不能产生NHE介导的回复相, 说明利用SNARF-4F/AM能正确反应细胞内pH值的变化以及细胞膜上pH相关转运器的工作效率.结论: SNARF-4F/AM染料比BCECF/AM类染料更适合激光扫描共聚焦显微镜的使用.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
