细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗的计算机辅助设计及真核表达
目的:设计并表达预防16型人乳头瘤病毒感染的重组蛋白疫苗.方法:选取HPVl6型病毒L1蛋白上的B表位和T表位,将其连接组合成多种方式,利用计算机预测蛋白质的三维结构,选取其中优的结构进行基因克隆构建,并利用杆状昆虫系统进行表达.结果:利用计算机设计出了一种重组蛋白,成功构建了该重组蛋白的结构基因,并在杆状昆虫表达系统中得到表达.结论:成功构建并表达了人乳头瘤病毒的重组蛋白疫苗.
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转录因子JunB在肝癌细胞中的表达、定位及其转录作用研究
目的:构建表达转录因子JunB的真核表达质粒,观察外源JunB分子在细胞中的表达、亚细胞定位及其对下游分子的转录调控作用.方法:采用PCR方法从人源肝cDNA文库中扩增JunB基因片段,克隆入T载体进行测序鉴定.而后将测序正确的基因片段分别亚克隆入pcDNA3.1(-)和pEGFP-C3真核表达载体中,获得重组载体pcDNA-JunB和pEGFP-JunB.采用脂质体瞬时转染法分别将pEGFP-JunB和pcDNA-JunB导入肝癌细胞HepG_2中,用Western blot法观察外源JunB在肝癌细胞中的表达;用荧光显微镜观察其在细胞内的定位;用双荧光素酶报告基因检测法观察JunB对下游靶分子VEGF的转录调控作用.结果:分别构建表达转录因子JunB和增强型绿色荧光蛋白融合JunB分子的重组表达质粒,并经Kpn Ⅰ/BamH Ⅰ双酶切鉴定正确.将重组表达质粒转染HepG_2细胞后,经免疫印迹法和荧光显微镜检测,可见外源导人的JunB分子在细胞中成功表达并特异性定位定位于细胞核内.荧光素酶报告系统检测显示:JunB对VEGF分子在转录水平具有明显的激活作用.结论:成功构建了增强型绿色荧光蛋白基因和转录因子JunB基因融合表达的重组质粒.在肝癌细胞中观察到外源瞬时表达的JunB定位于细胞核中,提示其可能发挥转录因子的活性.报告基因结果显示其对肿瘤血管生成密切相关的分子VEGF发挥转录激活的作用,提示JunB分子有可能成为抑制肝癌血管生成的新靶点.
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人CD133基因转染细胞株的建立及其生物学功能的初步研究
目的:构建人干细胞标记分子CD133-2转基因细胞并探讨CD133-2分子的生物学功能.方法:利用分段克隆和重叠PCR方法从人胎肝cDNA文库中克隆出人CD133-2全长基因,经双酶切后装入真核表达载体p IRES2-EGFP中,用脂质体法转染L929细胞,加入G418选择性培养基进行筛选.经RT-PCR、Western blot、流式细胞术(FCM)等方法鉴定转基因细胞;MTT法分析转基因细胞对T细胞的体外增殖作用;流式细胞仪分析T细胞表面活化分子标记CD4CD25、CD8CD25的表达.结果:成功克隆和构建了能稳定表达人CD133-2分子的转基因细胞CD133-2/L929,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,下调T细胞表面分子CD4cD25和CD8CD25的表达.结论:稳定表达CD133-2蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究奠定了物质基础.
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负向调节树突状细胞对心脏移植大鼠调节性T细胞的影响
目的:探讨受者树突状细胞(DC)与体外光化学法(PUVA)处理的供者脾淋巴细胞共培养,对心脏移植受者CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)及移植心存活时间的影响.方法:以DA大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,SD大鼠为无关供者,建立大鼠腹部异位心脏移植模型.分离正常的供者脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的供者脾淋巴细胞(PUVA-SP).在体外将DA大鼠PUVA-SP或SP与受者骨髓来源的DC共同培养,收集经上述处理后受者DC,流式细胞术(FCM)检测其表面分子CD80、CD86以及OX6的表达状况.根据受者术前静脉输注的成分将实验动物随机分为3组:①Control组:单纯输注PBS,n=7;②SP DC组:输注加载供者sP的受者大鼠DC,n=8;③PUVA-SPDC组:输注加载PUVA处理的供者SP的受者大鼠DC,n=8.移植术前7 d,经外周静脉给受者输注与PUVA-SP共培养后的DC(PUVA-SPDC组)、正常受者DC(DC组)或只输注PBS(Control组),移植术后观察受者移植物的存活时间,检测受者外周血中CD4~+CD25~+T细胞、CD4~+CD25~(high) T细胞的比例及其Foxp3表达状况.过继转移PUVA-SP DC组受者大鼠的T细胞后,检测正常LEW大鼠对供者抗原或无关抗原的DTH反应.结果:受者DC与供者未经处理的脾淋巴细胞(SP)混合培养后,其表面分子CD80、CD86以及ox6的表达分别为16.6%±0.72%、36.5%±0.87%及65.6%±1.45%,明显高于未处理DC组(3.53%±0.27%、13.0%±0.57%及27.7%±1.23%)(P＜0.01);而受者DC与PUVA处理过的供者脾淋巴细胞(PUVA-SP)混合培养后,其表面分子的表达仍保持较低的水平,CD80、CD86以及OX6的表达分别为3.9%±0.12%、13.4%±0.59%及28.0%±1.73%,与未经任何处理的受者DC无统计学差异(P＞0.05).移植术后,PUVA-SPDC组受者,外周血CD4~+CD25~+T、CD4~+CD25~(high) T细胞占CD4~+T的比例分别是18.97%和3.81%,明显高于输注DC组(4.40%和0.81%)和Control组(3.11%和0.09%)的大鼠(P＜0.01).PUVA-SP DC组大鼠外周血CD4~+CD25~+T细胞中Foxp3表达率为29%±1.73%,CIM'CD25~(high) T细胞中Foxp3阳性率高达95%±1.67%,均明显高于对照组(12%±0.58%和19.3%±2.03%)及DC(16.3%±0.88%和52.0%±1.73%)组(P＜0.01).PUVA-SP DC组大鼠移植心存活时间为(27.3±0.98)d,与Control组(6.7±0.29)d及DC组(11.0±0.32)d相比,明显延长(P＜0.01).过继转移实验显示,接受PUVA-SP DC组受者T细胞的正常LEW大鼠对DA大鼠抗原的刺激呈特异性免疫低应答状态.结论:PUVA-SP DC能够在移植受者体内诱生CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg,同时诱导抗原特异性免疫低反应,进而延长异基因移植物的存活时间.
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诱导型一氧化氦合酶对大鼠胰岛细胞凋亡的影响
目的:探讨细胞因子和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)对体外培养的大鼠胰岛细胞凋亡和功能的影响及其机制.方法:大鼠胰岛细胞体外培养,随机分组,培养液中分别加入细胞因子IL-1β、TNF-α和/或iNOS抑制剂氨基胍,分为空白对照组、细胞因子组、氨基胍组、氨基胍+细胞因子组.检测指标包括:培养液NO水平和组织iNOS、结构型NOS活性,RT-PCR检测胰岛组织中iNOS基因和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达情况,AO/EB染色检测胰岛存活,胰岛素释放实验检测胰岛功能.结果:与细胞因子IL-1β和TNF-α共同培养后,大鼠胰岛组织中iNOS的表达增强,活性显著提高(38.93±4.72)U/mL,NO水平上升(313.0±35.4)mol/L,而结构型NOS没有变化;同时胰岛促凋亡基因表达上调,抗凋亡基因表达下降,细胞的存活率下降,胰岛素分泌大大减少.加入氨基胍后,随着胰岛组织中iNOS的活性明显受到抑制,胰岛的凋亡程度减轻,存活和胰岛素分泌情况都明显改善.结论:iNOS在细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡中起到十分关键的作用,而氨基胍通过抑制iNOS活性,减轻了细胞因子的损害,降低了胰岛凋亡水平,改善胰岛的存活与功能.
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N-乙酰半胱氨酸抑制IL-18在血管平滑肌细胞中诱导TNF-α和IL-6表达
目的:研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对白细胞介素18(IL-18)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)表达的影响.方法:培养的VSMC细胞,加入或不加入NAC(5 mmol/L)处理1 h后,再以不同浓度的IL-18刺激不同时间,通过ELISA测定培养上清IL-6及TNF-α蛋白质水平,加入IL-18(100 μg/L)6 h后RTPCR分析细胞中相应的mRNA水平.同时Western blot分析NAC对IL-18激活的NF-κKB的影响.结果:通过IL-18刺激的VSMC培养上清中的IL-6及TNF-α水平及细胞中的mRNA水平显著升高(P＜0.01),且具有时间和剂量依赖关系(P＜0.01).NAC(5 mmol/L)显著抑制IL-18诱导的IL-6及TNF-α的mRNA和蛋白质水平表达(P＜0.01).Western blot分析显示NAC能够抑制IL-18对NF-κB的激活作用.结论:NAC体外可以抑制IL-18在SMC中诱导的IL-6及TNF-α表达.
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介导可溶性MHCⅠ产生的去整合素金属蛋白酶初步筛选研究
目的:以HEK293细胞为研究模型,筛选介导可溶性MHC Ⅰ产生的去整合素金属蛋白酶.方法:将ADAM8、ADAM10、ADAM15和ADAM17 cDNA分别克隆入pcDNA3.1/V5载体,并用TransIT(R)-LT1转染试剂将构建好的载体转染入HEK293细胞,用潮霉素B筛选ADAMs蛋白稳定表达克隆;用SDS-PAGE、免疫印迹结合化学发光法检测ADAMs在HEK293细胞中的表达;用细胞表面生物素标记、免疫沉淀、SDS-PAGE、免疫印迹结合化学发光检测ADAMs过表达对可溶性MHC Ⅰ产生的影响.结果:成功获得稳定表达ADAMs的HEK293细胞;过表达ADAM10和ADAM17可增强HEK293细胞产生可溶性MHC Ⅰ.结论:ADAM10和ADAM17具介导可溶性MHC Ⅰ产生的潜能.
关键词： 主要组织相容性复合体 去整合素金属蛋白酶 -
卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌与他莫西芬敏感性及MAPK、Akt活性和ER特异性位点磷酸化水平的关系
目的:分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系(A2780、CAOV-3、SKOV-3和ES-2)IL-6、IL-8分泌与他莫西芬(TAM)敏感性及MAPK、Akt活性和雌激素受体(ER)特异性位点磷酸化水平的关系,探讨TL-6、IL-8诱导卵巢癌细胞对内分泌治疗产生耐药的机制.方法:RT-PCR及ELISA法检测IL-6、IL-8的表达,MTT法分析卵巢癌细胞对TAM的敏感性,免疫印迹法测定MAPK、Akt活性及ER特异性位点的磷酸化水平.结果:(1)4种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6和IL-8,二者转录水平与其蛋白水平基本一致;(2)4种卵巢癌细胞对TAM的敏感性不同,其中A2780细胞敏感,CAOV-3、SKOV-3和ES-2细胞则有不同程度的耐药性,其耐药倍数分别为4.99、3.76和2.66;(3)4种卵巢癌细胞的MAPK、Akt活性存在差异,CAOV-3细胞的二者活性强,SKOV-3细胞的MAPK活性弱于ES-2细胞,而其Akt活性则强于ES-2细胞,A2780细胞未检测到二者有活性;(4)ER的第167位丝氨酸(Serl67)在四种卵巢癌细胞中均存在不同程度的磷酸化,ER的第118位丝氨酸(Ser118)除A2780细胞外亦存在不同程度的磷酸化.结论:卵巢癌细胞IL-6、IL-8的自分泌水平与其对TAM的敏感性呈负相关,与其MAPK、Akt活性和ER特异性位点(Scr167、Ser118)的磷酸化水平相一致.
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HIV-1 Nef通过Erk/Mapk途径调节内皮细胞黏附分子ICAM-1的表达
目的:研究HIV-1 Nef基因对内皮细胞ECV304细胞ICAM-1表达的影响及其信号途径.方法:选用Nef基因稳定表达细胞株ECV304-Nef和对照细胞株ECV304 pcDNA 3.1(+),应用Western blot分析ECV304-Nef细胞ERK的磷酸化水平,利用ERK磷酸化抑制剂通过Western blot、流式细胞术分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平与信号分子ERK磷酸化的相关性.结果:Western blot显示ECV304-Nef细胞ICAM-1和p-ERK蛋白的表达水平均高于对照组;流式细胞术检测结果表明ECV304-Nef细胞和对照组ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P＜0.01).加入p-ERK抑制剂PD98059后,ECV304-Nef细胞p-ERK水平被显著抑制,ICAM-1降至对照组水平,ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(11.4±1.1)%和(10.4±1.5)%(P＞0.05).结论:HIV-1 Nef基因上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达与ERK信号分子磷酸化有关,为HIV-1感染的致病机制及临床治疗提供实验基础.
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p57与细胞膜上胆固醇的相关性分析
目的:检测生理状况下p57蛋白与细胞膜上的胆固醇之间的相关性.方法:使用不同工作浓度的mβCD抽提U937细胞膜上的胆固醇,再利用超速离心分离细胞膜组分,并利用Western blot技术检测细胞膜上p57蛋白含鼍的变化.利用非连续蔗糖密度梯度离心制备脂筏,并利用Western blot技术检测脂筏上的p57蛋白含量.结果:在mβCD降低细胞膜上胆固醇含量之后,p57在膜组分中的含量的变化不大.此外,在脂筏中未检测到p57的存在.结论:与病原性分枝杆菌等所导致病理状态不同,在生理状态下p57蛋白与细胞膜上的胆固醇之间尚未观察到相关性.
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人细胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物.方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple vector中,获得重组质粒pMD18-CK8,转化感受态大肠杆菌DH5α.继而采用PCR技术从重组质粒pMD18-CK8中扩增出约1 500 bp目的片段,再次级克隆到原核表达质粒pET028a(+)载体中,获得pET-28a-CK8重组原核表达质粒;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21(DE3)菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达.采用SDS-PAGE电泳及Western blot检测CK8蛋白表达水平.结果:①成功建立了人CK8基因cDNA重组体的无性繁殖系.②在原核细胞中成功地表达出人CK8蛋白,该蛋白具有很好的免疫原性.结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了人细胞角蛋白8(CK8)基因,为进一步研究CK8的基因型及探讨该基因编码的CK8蛋白的性质和生物学活性创造条件.
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转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用
目的:探讨转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用.方法:化学合成针对人T-bet和Eomes基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的CD3单克隆抗体(mAb)活化的αβT细胞和Mtb-Ag活化的γδT细胞,利用流式细胞仪分选纯化CD4~+、CD8~+T细胞和γδT细胞,半定量RT-PCR检测CD4~+、CD8~+T淋巴细胞中T-bet和Eomes mRNA的表达变化,流式细胞术(FCM)检测转染前后IFN-γ产生的变化情况.结果:经过连续2次转染,siRNA-FAM~+细胞可达50%.转染T-bet-siRNA后,CD4~+T细胞IFN-γ~+细胞率(18.46±6.86)%,比阴性对照组(50.20±5.91)%,明显降低(P＜0.01),而CD8~+T细胞转染T-bet-siRNA,IFN-γ~+细胞率(74.18±9.33)%,与阴性对照组(76.51±6.49)%无统计学意义;转染Eomes-siRNA,CD4~+T细胞IFN-γ~+细胞率(50.92±6.78)%,与对照组无统计学意义;而CD8~+T细胞IFN-γ~+细胞率(25.37±7.11)%,比阴性对照组(76.51±6.49)%,明显降低(P＜0.01).MtbAT转染T-bet-siRNA和Eomes-siRNA后,γδT细胞IFN-γ~+细胞率分别为(56.57±6.67)%和(42.53±5.13)%,比阴性对照组(76.52±2.58)%均明显降低(P＜0.01).结论:在转录因子水平,T-bet和Eomes分别是调控CD4~+、CD8~+T淋巴细胞IFN-γ产生的重要转录因子,而两者可能同时参与了γδT细胞IFN-γ产生的调节.
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HBV截短core基因融合preS1基因在BCG中的表达及其免疫应答
目的:探讨HBV相关抗原在卡介苗(BCG)中的有效表达及其刺激产生的体液和细胞免疫应答效果.方法:将带有HBV截短C基因和preS1基因片段的穿梭载体转化BCG菌株,筛选重组菌,SDS-PAGE和Western blot实验分析其抗原表达特性;分别以生理盐水、BCG、BCG-pDE22、BCG-pDE22-CS1皮下注射BALB/c小鼠,进行连续抗体测定和细胞毒性T细胞杀伤实验.结果:与对照组相比,重组BCG可表达M_r为24 000的新生蛋白,与CS1融合蛋白大小相符,Western blot实验分析显示出良好的抗原结合特性;带有HBVCS1抗原基因的重组BCG免疫组抗体滴度显著升高,特异性杀伤能力更强.结论:BCG可以作为HBV相关抗原的活载体,为研制HBV新型疫苗提供了实验依据.
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9型重组腺相关病毒转染体外培养大鼠心肌细胞的影响
目的:研究含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的9型重组腺相关病毒(rAAV9)对大鼠心肌H9C2细胞的转染及对细胞生长的影响.方法:rAAV9-EGFP按转染复数(MOI)1×10~5、1×10~6、1×10~7转染H9C2细胞,转染后在倒置荧光显微镜下观察H9C2细胞中EGFP阳性表达情况,采用流式细胞仪检测rAAV9-EGFP对H9C2细胞的转染效率.观察转染后细胞生长形态,并用Alamar Blue法检测rAAV9-EGFP对H9C2细胞增殖影响.结果:转染后第1天,MOI=1×10~6、1×10~7组中EGFP开始表达;第2天,MOI=1×10~5组开始表达,各组EGFP表达强度随MOI值的增高而增强,同时EGFP的表达强度随着时间延长而逐渐增强;转染后第4天达到高峰,此时流式细胞术检测rAAV9-EGFP对H9C2细胞的转染率分别为MOI=1×10~5组:(14.1±0.2)%、MOI=1×10~6组:(35.1±4.8)%、MOI=1×10~7组:(56.8±0.1)%.rAAV9-EGFP转染H9C2细胞后,细胞生长及形态正常,Alamar Blue法进一步检测表明转染组对H9C2细胞增殖无影响.结论:rAAV9-EGFP能够有效地转染H9C2细胞,且rAAV9-EGFP对H9C2细胞增殖无明显抑制.
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巨噬细胞衍生趋化因子在MRL/lpr小鼠肾组织中的异常表达
目的:研究巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)在红斑狼疮小鼠狼疮肾炎中的作用.方法:比较MRL/lpr狼疮小鼠和BALB/c小鼠24 h尿蛋白,并用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测两组小鼠肾组织MDCmRNA及蛋白表达情况.结果:MRL/lpr小鼠24 h尿蛋白高于BALB/c小鼠(P＜0.05);MRL/lpr小鼠肾组织MDC mRNA表达较BALB/c小鼠明显升高(P＜0.05);MRL/lpr小鼠肾小球、肾小管及间质均有明显MDC蛋白表达,而BALB/c小鼠肾脏未见MDC表达.结论:MDC在红斑狼疮小鼠肾脏组织中的表达增高,说明MDC可能参与介导了小鼠狼疮性肾炎的病变过程.
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类风湿关节炎患者血清单核细胞趋化蛋白-1水平及与间质性肺疾病的关系
目的:研究单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在类风湿关节炎(RA)发病中的作用,探讨其与RA继发间质性肺疾病(ILD)的关系及其可能的临床价值.方法:选择RA患者60例,按是否存在ILD,分为单纯RA组30例和RA继发ILD组30例,正常对照组20例,应用ELISA测定各组血清MCP-1水平,比较各组MCP-1水平的差异,同时比较各组中实验室指标IgG、IgA、IgM、α2-球蛋白、γ-球蛋白、RF、ESR、CRP及关节肿痛数的差异,并分析以上指标与血清MCP-1表达的相关性.结果:RA患者MCP-1的表达明显高于健康对照组,RA继发ILD组显著高于单纯RA组.RA患者血清MCP-1与IgG、IgM、γ-球蛋白均呈正相关.结论:MCP-1是RA发病中重要的细胞因子,在RA继发ILD过程中可能起着一定的促进作用.
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化疗加手术对非小细胞肺癌患者的疗效及血清内皮抑素水平的影响
目的:探讨化疗与手术对非小细胞肺癌患者的疗效及血清内皮抑素水平的影响.方法:选择2008-03/09我院收治的非小细胞肺癌患者92例,随机将患者分为治疗组和对照组,每组46例.治疗组采用长春地辛-异环磷酰胺-顺铂(VIP)方案化疗配合手术进行治疗,对照组则只单纯进行手术治疗.结果:与对照组相比,治疗组的完全缓解和有效比率显著升高,肿瘤进展的比率显著下降(P＜0.05);而两组毒性反应的差异不显著.与对照组相比,治疗组患者血清内皮抑制素的含量明显升高(P＜0.05).结论:应用化疗与手术相结合的方法对非小细胞肺癌的治疗具有较好的效果,并能显著提高患者血清内皮抑制素的水平,增加机体免疫力,提高患者的生活质量.
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稳定表达水通道蛋白-4 HEK293细胞株的建立及应用
目的:建立稳定表达水通道蛋白-4(AQP4)的HEK293细胞株,并以其检测12例视神经脊髓炎患者血清中是否存在AQP4抗体.方法:从颢叶癫痫患者脑组织提取总RNA,RT-PCR扩增AQP4的cDNA,构建AQP4-绿色荧光蛋白(GFP)融合表达重组体pEGFP-N1-AQP4,转染HEK293细胞,抗生素筛选联合流式细胞仪分选筛选稳定表达细胞株,RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定AQP4的表达,激光共聚焦显微镜观察AQP4在细胞中的定位,并以已建立的细胞为底物间接免疫荧光法检测12例视神经脊髓炎患者血清中是否存在AQP4抗体.结果:经PCR、双酶切、测序鉴定证实成功获取AQP4的cDNA,AQP4-GFP融合表达重组质粒pEGFP-N1-AQP4构建成功,抗生素筛选联合流式细胞仪分选筛选稳定表达细胞株,稳定表达率达90%以上,RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定存在AQP4的表达,激光共聚焦显微镜进一步确认AQP4-GFP融合蛋白主要表达于细胞膜上,11例典型视神经脊髓炎患者血清中检出AQP4抗体,对视神经脊髓炎诊断敏感性为91.7%,特异性为94.7%.结论:成功建立稳定表达AQP4的HEK293细胞株,以其作为检测底物检出视神经脊髓炎患者血清中存在AQP4自身抗体.
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MMP-9、VEGF、P16与垂体瘤侵袭性的相关性研究
目的:检测MMP-9、VEGF和P16在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中的表达变化,探讨它们与垂体瘤侵袭性相关性.方法:选用垂体瘤54例,分为侵袭组(n=30)和非侵袭组(n=24),应用免疫组化法检测标本中MMP-9、P16基因与VEGF的表达,分析它们与侵袭性和非侵袭性垂体瘤的相关性.结果:MMP-9、VEGF标记指数在侵袭性垂体瘤组的分别为(39.44±5.61),(24.28±3.94)较非侵袭性腺瘤组的(22.17±4.32),(17.62±1.89)显著增高(P＜0.01),.P16基因在非侵袭性垂体瘤组阳性率(27.49±4.07)较侵袭性腺瘤组(20.18±3.26)显著增高(P＜0.01).结论:垂体瘤侵袭性与MMP-9和VEGF表达成正相关(P＜0.01),而与P16表达成负相关.
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sCD38在类风湿关节炎和系统性红斑狼疮患者外周血中的变化及意义
目的:探讨类风湿关节炎(RA)和系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血血清中sCD38水平的变化及其在该类疾病发病中的作用.方法:采用ELISA法检测48例RA患者,19例SLE患者和20例正常对照者外周血血清中sCD38水平.结果:RA患者外周血sCD38水平为(163.05±13.97)mg/L,明显高于正常对照组水平(80.59±5.58)mg/L,统计学分析有差异(P＜0.05).特别是RA有X线改变组(至少骨质疏松)血清中sCD38水平平均高于单纯关节肿痛组(P＜0.05).而且RA患者外周血sCD38水平与其活动指标RF、CRP呈明显的正相关(r=0.582,P＜0.05;r=0.485,P＜0.05).SLE患者外周血sCD38水平平均为(295.22±16.01)mg/L,明显高于RA患者组及正常对照组(P均＜0.05),且与SLE活动指标ds-DNA成明显正相关(r=0.692,P＜0.05).结论:sCD38在RA和SLE患者外周血中明显增高,在风湿性疾病的发病过程中具有重要作用.
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脑钠肽单克隆抗体的制备及临床应用研究
目的:制备抗脑钠肽(BNP32)单克隆抗体(mAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立BNP抗原检测技术,应用于临床心脏患者脑钠肽水平的检测.方法:以基因工程原核重组表达BNP抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术制备mAb,mAb经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA法筛选检测BNP32蛋白的佳配对mAb,以其建立BNP32抗原检测技术,并与临床BNP检测的标准实验做平行比较.结果:成功筛选到16株稳定分泌抗BNP32 mAb的杂交瘤细胞株,16株mAb的亚型分别为IgG1、IgG_2a和IgM,并从中筛选出佳mAb配对组合,该组合对BNP32蛋白的检测灵敏度为20 ng/L.建立的双抗体夹心BNP检测ELISA法与临床BNP检测的标准实验平行比较具有很好的一致性(kappa值=0.828),两者没有统计学意义(P＞0.05).结论:成功地建立了BNP32抗原的双抗体夹心ELISA法检测技术,并能够很好地运用于临床心衰患者BNP指标的检测.
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抗AGR2单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用
目的:制备鼠抗AGR2单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定及其初步应用研究.方法:以AGR2-MBP融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗AGR2的mAb,并用Protein-C亲和层析法纯化mAb.用间接ELISA法测定mAb的效价,以Western blot鉴定mAb的特异性.用免疫荧光、免疫沉淀和MTT法对mAb进行初步应用研究.结果:获得1株可持续、稳定分泌抗AGR2的mAb的杂交瘤细胞.杂交瘤细胞分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10~(-6).Western blot检测显示,在Mr为20 000处有1条清晰的带.免疫荧光显示,该mAb可与乳腺癌细胞中的AGR2蛋白结合.免疫沉淀证实该mAb可与天然状态的AGR2有效结合.MTT实验显示该mAb对乳腺癌细胞MCF7的生长有抑制作用.结论:制备出的鼠抗AGR2的mAb效价高、特异性良好,可抑制细胞的生长,有一定的应用价值,为进一步研究AGR2的功能及其在乳腺癌、前列腺癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具.
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人细胞核诱导凋亡因子1在大肠杆菌中的表达、纯化及多克隆抗体制备
目的:构建人核凋亡诱导因子1(NAIF1)原核表达质粒,在大肠杆菌中表达及纯化NAIF1融合蛋白,制备兔抗NAIF1多克隆抗体,并对其特性进行初步鉴定.方法:PCR法获得人NAIF1序列并将其克隆到原核表达载体pET-32a中,重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达蛋白,经变性、Ni~+柱亲和纯化、复性后得到纯化的重组人NAIF1蛋白,免疫大耳白兔,制备兔抗人NAIF1多抗血清,以ELISA和Western blot方法检测其效价和特异性.结果:成功获得了高纯度的人NAIF1重组蛋白和高效价的兔抗人NAIF1多抗血清,ELISA检测多抗效价达到1:500 000,Western blot检测证明多抗特异性良好.结论:获得了高纯度的人NAIF1重组蛋白和兔抗人NAIF1多抗血清,为后续针对NAIF1基因功能的研究提供了重要实验材料.
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病原菌与宿主细胞中的微丝装配
细胞骨架是分布于真核细胞中的由蛋白质纤维组成的网络系统,在细胞内细胞器和生物大分子的运输、细胞的运动和细胞分裂分化都发挥重要的作用.病原菌通常将细胞骨架作为主要的攻击目标,尤其利用微丝做为跳板入侵宿主细胞并进行扩散和繁殖.探索病原菌对微丝的作用有利于深入了解病原菌的致病机制,同时也为研究微丝的组装提供一个理想的模型.
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Th22型细胞与炎症性疾病的关系
Th22型细胞是一种新发现的辅助性T细胞亚群,表型为CCR6~+CCR4~+CCR10~+,关键转录因子是芳香烃受体(AHR),主要分泌IL-22,通过活化信号传导及转录激活因子3(STAT3)而发挥作用.在类风湿性关节炎、银屑病、异位性皮炎以及Crohn's病等患者中IL-22均表达升高,而在IL-22~(-/-)小鼠,胶原诱导的关节炎(CIA)的发病率及发病严重程度均显著下降;在急性呼吸窘迫综合症和系统性红斑狼疮患者的血清中,IL-22的表达水平下降;IL-22对肝炎时的肝细胞存活起保护作用.总之,Th22在炎症性疾病的发病过程的作用是非常复杂的.
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miRNA在免疫系统中的研究进展
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的长度约22个核苷酸的非编码小分子RNA,能够在转录后水平调节mRNA表达.miRNA在线虫、果蝇、植物、哺乳动物,甚至病毒中广泛存在.miRNA基因以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因组中,而且绝大部分定位于基因间隔区,其转录独立于其他基因.
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巨核系造血发育和调控
血小板是血液系统重要的组成部分,机体通过巨核系造血维持血小板数量.血小板在止血、血栓形成、创伤修复、固有免疫应答以及肿瘤转移等过程中发挥重要作用.巨核系造血受造血微环境中的细胞因子、黏附分子和细胞外基质(ECM)等多种因素的复杂调控,这些调控机制的异常可导致多种巨核/血小板谱系相关疾病的发生.近年来巨核系造血研究进展迅速,对血小板发育成熟过程及其调控机制的深入研究具有重要的理论意义和临床价值.现就近年来巨核系造血调控机制研究的进展作一综述.
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改变PTEN基因表达影响支气管平滑肌细胞增殖
目的:通过基因过表达和RNA干扰(RNAi)技术改变PTEN基因的表达并观察其对人支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖和相关信号通路的影响.方法:利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-GFP-PTEN)和针对PTEN基因的腺病毒短发夹状RNA(shRNA)载体(Ad-GFP-shRNA-PTEN),转染BSMC细胞,建立PTEN基因过表达细胞模型Ad-GFP-PTEN-BSMC和PTEN基因沉默细胞模型Ad-GFP-shPTEN-BSMC,并以感染Ad-GFP和空白组作为对照.通过荧光倒置显微镜检测转染效率;Western blot法检测PTEN蛋白的表达和AKT、ERK1/2通路的活化情况;MTS/PMS法检测细胞生长的变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期的变化.结果:腺病毒介导的过表达载体和shRNA载体都能有效改变PTEN基因的表达.PTEN基因表达上调后,BSMC细胞生长受到抑制,G_0-G_1期细胞增多,S期细胞和G_2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路受到抑制,而MAPK/ERK通路未见变化;PTEN基因表达下调后,BSMC细胞生长受到促进,S期细胞增多,G_0-G_1期细胞和G_2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路激活,但MAPK/ERK通路却受到抑制.结论:PTEN基因可能主要通过调节PBK/AKT通路影响人支气管平滑肌细胞的生长.
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大鼠面神经完全切断后面神经核内OMgp的表达
目的:通过建立大鼠面神经完全切断损伤模型,观察面神经损伤后脑干内OMgp表达的变化.方法:对36只大鼠分别行左侧面神经茎乳孔切断术,于术后1、3、5、7、14、21 d取大鼠脑干含面神经核团部分,应用免疫组织化学方法检测面神经核中OMgp的变化及其对面神经元凋亡的影响.结果:OMgp分布于正常SD大鼠面神经各亚核,面神经损伤后OMgp与假手术对照侧相比较均下降,免疫组织化学方法显示5～14 d下降明显并显示神经元细胞凋亡增加,图像分析OMgp灰度值与假手术对照侧比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:OMgp对神经网络的重建有重要意义,同时在面神经损伤中发挥重要作用.
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CD59配体肽真核表达系统的构建及对PC-3细胞活性的作用研究
目的:构建CD59分子配体肽sp22基因重组真核表达系统,探讨sp22基因对CD59分子的影响.方法:构建含特异性sp22基因的真核重组表达载体sp-pIRES,脂质体法转染人前列腺癌PC-3细胞,G418筛选建立稳定转染细胞系,RT-PCR检测转染细胞中sp22基因mRNA的表达筛选阳性细胞克隆,Western blot、ELISA竞争抑制试验检测转染细胞CD59蛋白的表达;台盼蓝染色实验和LDH实验测sp22基因对CD59分子功能的影响.结果:PCR、酶切及DNA测序鉴定表明成功构建了sp-PIRES重组表达载体;RT-PCR试验证实sp22在spPC-3细胞中成功表达;Western blot、ELESA竞争抑制试验表明:spPC-3细胞比正常PC-3细胞CD59蛋白表达减少(P＜0.05);与正常PC-3细胞相比,补体对spPC-3细胞的溶解杀伤明显增强(P＜0.05).结论:sp22基因可在mRNA及蛋白水平影响人前列腺癌PC-3细胞表面CD59抗原的表达及功能,降低CD59分子抗补体活性,有望用于肿瘤治疗.
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Jagged-1对淋巴细胞生成细胞因子的影响
目的:探讨可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞产生细胞因子的影响.方法:不同时间和不同浓度Jagged-1/Fc处理小鼠淋巴细胞,ELISA检测其培养上清中细胞因子的水平,并用Western blot分析相关蛋白NICD和Deltex的表达.结果:低浓度Jagged-1/Fc对淋巴细胞生成IL-17无明显影响,但高浓度Jagged-1/Fc(500 μg/L)组IL-17的表达量是对照组的64.75倍,并且随着时间的增加而减少;IFN-γ随着Jagged-1/Fc浓度的增加而减少.Western blot分析显示Jagged-1/Fc处理组的NICD和Deltex的表达明显高于对照组和Anti-Jagged-1组.结论:高浓度Jagged-1/Fc能够诱导淋巴细胞表达IL-17,可能在指导初始T细胞向Th17细胞偏离中发挥作用.
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Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定
目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exosomes.方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes.样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70 mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定.结果:电镜下可以观察到提取的exosomes平均大小为50～100 nm.免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45 000、43000和70000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示exosomes膜表面和内部有明显的金颗粒.结论:Ana-1巨噬细胞分泌exosomes.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
