细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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小鼠STAT4和STAT6基因酵母双杂交表达载体的构建与鉴定
目的:分别克降小鼠信号传导和转录活化因子-4(STAT4)、信号传导和转录活化因子-6(STAT6)基因编码序列(CDS序列),构建并鉴定其酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6.方法:PCR扩增STAT4和STAT6基因CDS序列,T-A亚克隆到pMD19-T simple载体中,酶切获取目的基因STAT4和STAT6,克隆入已经过双酶切和CIAP脱磷酸处理的酵母表达载体pGADT7,酶切鉴定并测序;转化pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6到酵母AH109细胞中,Western blot分析STAT4和STAT6的蛋白表达情况,同时检测其毒性和自激活作用.结果:成功扩增了STAT4和STAT6基因CDS序列,并分别成功克隆到pMD19-T simple载体和pGADT7中,测序结果符合要求.酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot结果证实酵母细胞高表达融合蛋白STAT4和STAT6.结论:成功构建了酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6,为进一步研究STAT4和STAT6蛋白与其他蛋白质的相瓦作用奠定了基础.
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SA/mIL15双功能融合蛋白的制备及其生物学鉴定
目的:制备链亲和素(SA)标记的鼠白细胞介素-15融合蛋白SA-miL15和mIL15-SA,并研究其生物学功能.方法:构建pET24a-SA-L-mIL15和pET21 a-mIL15-L-SA重组表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,对所表达的蛋白分别采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和阴离子交换(DEAE)层析进行纯化,透析复性.MTT法检测融合蛋白对ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)分析融合蛋白对生物素化的小鼠前列腺癌(RM-1)细胞表面锚定修饰效率.结果:SA-mIL15和mIL15-SA在大肠杆菌中实现了高效表达,约占细菌总蛋白的20%.制备的SA-mIL15和mIL15-SA融合蛋白纯度达到95%,并具有双重活性,即:mIL15促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞的增殖活性和SA介导的高效结合至表面已生物素化的RM-1细胞的功能(表面锚定修饰效率均大于95%).其中,SA-mIL15双功能融合蛋白促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞增殖活性为1×10~6IU/mg,mIL15-SA活性为2×10~5IU/mg.结论:SA/mIL15双功能融合蛋白具有双重活性,为mIL15表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研制奠定了基础.
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细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠免疫应答的动态观察
目的:观察细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后其免疫应答的动态变化.方法:将疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,分别于免疫后2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周用ELISA法测定免疫小鼠血清中IgG及其亚类和lgE水平.用MTT法测定脾淋巴细胞的增殖,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液中IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平,用流式细胞术(FCM)检测脾CD4~+ 和CD8~+T细胞百分率.结果:口服免疫小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后8、2、6、6、8和10周达到峰值.脾淋巴细胞悬液中IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后4、2、4和6周达到峰值.脾淋巴细胞增殖在免疫后6周达到峰值;脾CD4~+T细胞在免疫后6 周达到峰值,脾CD8~+T细胞无明显变化.鼻腔内接种免疫小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后10、6、10、8、8和10周达到峰值.脾淋巴细胞悬液中IL-12、TFN-γ、TNF-P和IL-10水平分别在免疫后2、2、4和8周达到峰值.脾淋巴细胞增殖在免疫后6周达到峰值;脾CD4~+T细胞在免疫后6周达到峰值,脾CD8~+T细胞无明显变化.口服免疫和鼻腔内接种是两种较好的免疫途径,且前者优于后者.结论:细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答.
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ConA对CD4~+ CD25~+调节性T细胞早期活化和功能的影响
目的:观察常用丝裂原ConA对CD4~+ CD25~+调节性T细胞抑制功能的影响与早期活化标志CD69之间的关系.方法:用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4~+ CD25~+ 调节性T细胞、CD4~+ CD25~-效应性T细胞,加入不同浓度的ConA,12 h后收集细胞,流式细胞术分析其CD69的表达.CFSE标记CD4~+ CD25~-效应性T细胞,按2:1比例与CD4~+ CD25~+ 调节性T细胞共同培养,培养同时加ConA,3 d后流式细胞仪分析ConA对CD4~+ CD25~+调节性T细胞抑制CD4~+ CD25~-效应性T细胞增殖的影响.结果:ConA能剂量依赖性地升高CD4~+ CD25~+调节性T细胞和CD4~+ CD25~-效应性T细胞CD69的表达,对两群细胞CD69的升高表现出了相似的作用;另外,ConA在上述浓度能剂量依赖激活CD4~+ CD25~+调节性T细胞的抑制功能.结论:CortA在体外对CD4~+ CD25~+调节性T细胞活化和功能具有促进作用.ConA能一定程度模拟抗原,因而可用于评价药物对调节性T细胞的活化和功能影响.
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NF-κB抑制剂和IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性的影响
目的:探讨IFN-γ和NF-κB抑制剂对人BAFF-R基因启动子活性的影响.方法:以人全血基因组DNA为模板,PCR方法扩增得到BAFF-R基因转录起始点上游5'端-1562～+261 bp的片段,与荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic连接构建8个序列缺失质粒.将重组质粒瞬时转染人多发性骨髓瘤细胞株KM3,通过检测荧光索酶的相对活性,确定启动子活性强的区域;分别用NF-κB抑制剂(BAY11-7082)和IFN-γ对活性强的启动子进行干预,测定并比较荧光素酶的相对活性;同时RT-PCR检测十预前后BAFF-R基因mRNA的表达水平.结果:IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性有促进作用并且可以上调BAFF-R mRNA的表达,NF-κB抑制剂(BAY11-7082)对BAFF-R基因启动子活性有抑制作用并且可以下调BAFF-R mRNA的表达.结论:IFN-γ和NF-κB信号通路参与了BAFF-R基因的转录调控,为进一步研究BAFF-R的调节机制提供了基本的依据.
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结缔组织生长因子在幼年兔关节软骨全层缺损修复中的表达及意义
目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)在幼年兔膝关节软骨全层缺损修复过程中的表达及意义.方法:采用兔膝关节股骨关节面全层软骨缺损自我修复模型,25只幼年新西兰白兔,随机分为5组(每组5只):对照组、损伤24 h组、1周组、4周组、8周组.应用RT-PCR技术和免疫组化技术分别检测CTGF mRNA和蛋白在修复过程中的表达.结果:幼年兔关节软骨全层损伤后自我修复良好.各组检测均见CTGF mRNA表达,损伤后各组表达水平显著高于对照组(P＜0.05).免疫组化显示各组软骨细胞均有CTGF蛋白表达,阳性表达主要集中在软骨的中间带及深层带.结论:幼年兔关节软骨全层缺损自我修复过程伴有显著的CTGF表达上调,CTGF可能在关节软骨修复中发挥重要作用.
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ASPH在肿瘤细胞和肿瘤组织中的分布及检测
目的:检测肿瘤细胞系和我国肿瘤患者癌组织中天冬氨酰-(天冬酰胺酰)β-羟化酶(ASPH)的分布及表达谱.方法:采用RT-PCR法检测肿瘤细胞系中ASPH基因的转录水平;细胞免疫荧光和Western blot方法检测肿瘤细胞系中ASPH蛋白的表达水平;免疫组织化学方法检测人癌组织和正常组织中ASPH的分布与表达.结果:在肿瘤细胞系中ASPH在转录和翻译水平均有不同程度表达,ASPH蛋白分布于细胞膜和胞质区域;在肿瘤患者组织中有ASPH的高表达,而人正常组织中不表达或表达量极低.结论:ASPH是一种有潜力的广谱性肿瘤标记分子,有可能用于肿瘤的早期检测.
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MPP~+对原代培养SAMP8小鼠中脑神经元的毒性作用
目的:建立MPP~+(1-甲基-4-苯基吡啶离子)干预SAMP8(快速老化小鼠P8)小鼠中脑神经元的体外细胞模型.方法:SAMP8新生1 d小鼠的中脑神经元原代混合培养6 d,加入100μmol/L浓度的MPP~+,再培养6、9、12 h和24 h后分别对各时间点的中脑原代培养神经元免疫荧光染色或提取蛋白测定TH水平.结果:MPP~+导致原代培养的SAMP8小鼠中脑神经元形态学改变.正常对照组神经元形态完整,免疫反应性强,胞体大呈椭圆形,突起多而长且粗壮;MPP~+组神经元随时间逐渐出现形态变化,MPP~+后6 h即可见突起不完整断续,9 h突起数目减少,缩短;12 h神经元胞体明显变小,24 h突起多消失,神经元胞体小且免疫反应性弱.MPP~+导致原代培养的SAMP8小鼠中脑神经元数量在MPP~+后9 h开始有显著减少,同时TH蛋白的表达也开始有显著减少,24 h低.结论:MPP~+对原代培养的SAMP8小鼠中脑神经元具有毒性作用.MPP~+导致SAMP8小鼠中脑神经元原代混合培养体系的神经元数量下降,同时TH蛋白表达降低,提示MPP~+导致其中脑DA能神经元损伤死亡.
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完全与不完全睡眠剥夺对小鼠免疫功能的影响
目的:研究经完全与不完全睡眠剥夺以后小鼠免疫功能的变化.方法:通过光照模拟全白天生活、黑箱模拟全黑夜生活,连续2周干扰小鼠睡眠;通过转轮24 h和72 h短期全剥夺小鼠睡眠;实验小鼠实施睡眠干扰前以BSA免疫一次.采用称重脾脏;流式细胞术(FCM)检测小鼠外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞数量及其比例;以ELISA方法检测血清中IL-2、IL-10以及抗BSA特异性抗体含量.结果:与正常睡眠小鼠相比:全日组脾重没有显著变化,其余各组脾重明显减轻(P＜0.05);24 h转轮组CD4~+T细胞数明显降低(P＜0.05),其他各组没有明显变化(P＞0.05);所有实验组CD8~+T细胞数均明显降低,CD4/CD8比例显著增大(P＜0.01);所有实验组IL-2下降(P＜0.01);除全日组IL-10含量升高以外(P＞0.05),其他实验组IL-10含量均呈下降趋势(P＜0.05);转轮组小鼠抗BSA抗体效价含量显著降低(P＜0.01),全日光组与全夜组无统计学意义.结论:完全与不完全睡眠剥夺可不同程度地引起实验小鼠CD8~+ T细胞数减少、脾重减轻、特异性抗体分泌减少以及细胞因子分泌格局的变化,进而影响机体免疫功能.
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UO-126对HeLa细胞增殖及对FBW7表达的影响
目的:观察UO-126对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖及对F-盒和含蛋白7的WD重复结构域FBW7表达的影响.方法:采用MTY法观察不同浓度的UO-126对HeLa细胞增殖的影响;免疫荧光法检测FBW7在HeLa细胞中的定位和表达;RT-PCR、Western blot检测FBW7 mRNA及蛋白在UO-126阻断丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号通路前后的表达情况.结果:MTY结果显示各浓度UO-126具有抑制HeLa细胞增殖的作用,且具有剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.05).免疫荧光检测显示UO-126处理HeLa细胞后FBW7阳性表达增强.RT-PCR及Western blot结果显示,UO-126作用后HeLa细胞FBW7 mRNA及蛋白表达水平较未处理HeLa细胞明显增高(P＜0.05).结论:MAPK信号通路阻断剂UO-126抑制HeLa细胞增殖,FBW7位于MAPK信号通路的下游.
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骨髓源性干细胞向慢性马兜铃酸肾病大鼠肾小管上皮细胞分化的研究
目的:观察骨髓源性干细胞能否向慢性马兜铃酸肾病(CAAN)大鼠肾小管上皮细胞分化.方法:雌性Wistar大鼠30只,随机分移植组、非移植组和正常对照组,每组10只,移植组和非移植组经关木通水煎剂灌胃12周,制作CAAN大鼠模型,第12周末,移植组经尾静脉输入骨髓干细胞1×10~8爪/只(约0.35 mL/只),非移植组经尾静脉输入0.35 mL生理盐水;正常对照组,先用饮用水灌胃12周,然后经尾静脉注射等量(0.35 mL)生理盐水.第16周分别处死大鼠.大鼠在处死时留取血、尿、肾组织标本.肾组织连续切片,做免疫荧光(IF)染色结合Y染色体荧光原位杂交(YFISH)检测观察移植组大鼠肾组织中骨髓源性干细胞的分化情况.结果:第16周,移植组大鼠肾组织中可见Y~+ CK18~+及Y~+RCAI~+双阳性细胞,非移植组未见到Y~+细胞.结论:骨髓源性干细胞具有向CAAN大鼠肾脏小管上皮细胞分化的潜能.
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四种靶向因子与柯萨奇病毒B3 VP1融合基因疫苗免疫效果的比较
目的:比较巨噬细胞源趋化因子(MDC)、补体片段C3d3、志贺毒素B亚单位(STxB)和小鼠β-防御素2(mBD2)分别与柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1构建的融合基因疫苗及VP1基因疫苗对小鼠的免疫效果.方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为6组,每组22只,分别于股四头肌注射pcDNA3、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3、pcD-NA3/STxB-VP1和pcDNA3/mBD2-VP1,接种剂量为每次100μg/只,3周免疫1次,共3次.每次免疫后第14天内眦静脉取血,用微量中和试验滴定血清中和抗体滴度.第3次免疫后第21天,每组随机取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,用CCK-8细胞计数法检测特异性CTL的杀伤活性;每组取3只小鼠以3LDLD_(50)CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血清病毒滴度;其余小鼠以5LDLD_(50)的CVB3攻击,观察各组的生存情况.结果:除了pcDNA3对照组,其他各组的中和抗体滴度均随免疫次数的增加而提高(P＜0.01),第3次免疫后,pcDNA3/MDC-VP1、peDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组的抗体滴度明显高于peDNA3/VP1组(P＜0.01);pcDNA3/STxB-VP1和peDNA3/mBD2-VP1组CTL杀伤活性显著高于其他各组(P＜0.01).致死量病毒攻击后,pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组小鼠血中病毒滴度显著低于其他组(P＜0.01);pcDNA3/MDC-VP1和pcDNA3/VP1-C3d3组小鼠生存率显著高于其他各组(P＜0.05).结论:pcDNA3/MDC-VP1和pcDNA3/VP1-C3d3能诱导出较强的体液免疫和细胞免疫,能有效降低血中病毒滴度,获得较高的小鼠生存率;整体效果优于其他组.
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人泡沫病毒介导IL-24对肿瘤细胞的抑制作用
目的:利用重新构建的人逆转录病毒四载体系统共转染人胚肾细胞获得携带IL-24的复制缺陷型重组人泡沫病毒(HFV-IL24)颗粒,探讨复制缺陷型人泡沫病毒介导IL-24对肿瘤细胞生长分化的抑制作用.方法:重组构建含IL-24的人泡沫病毒载体质粒(p△Φ-IL24);与辅助质粒共转染人胚肾HEK 293T细胞后获取蕈组病毒颗粒(HFV-IL24);RT-PCR检测目的基因的表达;MTT法检测人宫颈癌HeLa细胞的体外增殖水平,台盼蓝染色计数检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞活性和周期变化.结果:成功构建含IL-24的人泡沫病毒载体(p△Φ-IL24);收获得到复制缺陷型重组人泡沫病毒颗粒(HFV-IL24);感染后的HeLa细胞显示出明显的生长抑制现象(P＜0.01)并呈现周期变化和较高的凋亡(死亡)率.结论:所构建的重组病毒载体p△Φ-IL24及由此而产生的重组人泡沫病毒颗粒(HFV-IL24)的功能性检测加深对HFV和抗癌基因IL-24的了解,为泡沫病毒载体的应用和IL24抗肿瘤的基因治疗提供了研究方向和理论依据.
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伊马替尼对慢性粒细胞白血病患者T细胞免疫功能的影响
目的:探讨伊马替尼(STI571)对慢性粒细胞白血病(CML)患者T细胞免疫功能的影响.方法:以30例CML患者为观察组,32例缺铁性贫血患者为对照组,用流式细胞术(FCM)检测患者骨髓体外加用STI571后CD3~+、CD3~+ CD8~-、CD3~+ CD8~+内T淋巴细胞内INF-γ表达水平.结果:STI571干预后,观察组CD3~+、CD3~+ CD8~-、CD3~+ CD8~+T淋巴细胞内IFN-γ水平明显降低,与干预前和对照组比较有统计学差异(P＜0.05),而对照组干预前后CD3~+、CD3~+ CD8~-、CD3~+CD8~+T淋巴细胞内IFN-γ水平变化无统计学意义.结论:STI571能够降低初发CML患者T淋巴细胞内.IFN-γ的表达,影响初发CML.患者的细胞免疫功能,使免疫功能受到抑制.
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多发性骨髓瘤患者外周血CD3ε基因的表达特点
目的:建立荧光定量PCR法检测CD3ε链表达水平的方法,了解多发性骨髓瘤(MM)T细胞信号传导分子CD3ε基因的表达特点.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测22例MM患者及22例正常人外周血单个核细胞CD3ε基因的表达情况,以B2微球蛋白基因(β2M)作为内参,22例健康人作为对照,采用相对定量公式:2-△Cι×100%,计算MM患者CD3ε基因相对mRNA表达量.结果:MM患者和正常人外周血单个核细胞均表达CD3ε基因,具体表达量呈现很大的个体差异性.MM患者CD3ε基因mRNA相对表达量高为39.78%,低为0.48%,正常人CD3ε基因mRNA相对表达量高为5.15%,低为0.01%.MM患者CD3ε基因表达量明显高于正常人(P＜0.05).结论:成功建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法检测CD3ε链表达水平的方法,率先报道了多发性骨髓瘤中CD3ε基因高表达的特点,为了解多发性骨髓瘤T细胞免疫学特点提供新的资料.
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PCNA和Caspase-3在肺癌组织中的表达及意义
目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)在肺癌中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化SP法对80例肺癌病例和相对应的80例正常肺组织进行PCNA蛋白和Caspase-3蛋白半定量分析.结果:PCNA蛋白在肺癌组织中阳性表达率为65.0%,Caspase-3在肺癌组织中阳性表达率为32.5%,与相应正常肺组织中的阳性表达率有显著差异(P＜0.05).PCNA蛋白的表达与淋巴结转移、分期和分化程度明显相关(P＜0.05).Caspase-3蛋白表达与肺癌的组织病理学类型、淋巴结转移以及分化程度明显相关(P＜0.05),与病理分期却未表现出相关性(P＞0.05),PCNA蛋白与Caspase-3蛋白的表达呈负相关,这其中PCNA(+)Caspase-3(-)的肺癌群体低/未分化危险性是非PCNA(+)Caspase-3(-)的27倍(OR=27.0,P＜0.05).结论:肺癌组织PCNA蛋白表达增强和Caspaae-3蛋白表达减弱,两者的表达与肺癌的病理类型,淋巴结转移,分期和分化程度具有一定关系,关于这两种蛋白的研究对临床工作有一定指导意义.
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放疗分割剂量对食管癌细胞耐药基因表达的影响
目的:观察不同放疗剂对食管癌细胞EC9706耐药基因MDR1表达水平的影响,同时分析其对细胞化疗耐药性的作用.方法:对食管癌细胞分别按常规剂量组(2 Gy/d·f)和小剂量组(1 Gy/d·f)进行分次外照射,共20次.采用实时定量PCR(QRT-PCR)和Western blot对外照射前后处于缺氧培养下的食管癌细胞MDR1表达水平进行检测.MTT实验评估化疗细胞抑制率.结果:照射前缺氧培养下的食管癌细胞MDR1表达水平即较对照组明显升高(P＜0.05).接受20次2 Gy/d·f照射后食管癌细胞的MDR1表达水平明显高于单纯缺氧培养组(P＜0.05),但小剂茸照射组的MDR1表达则明显减低(P＜0.05),同时其耐药指数亦明显下降(P＜0.05).结论:同缺氧条件下进行常规剂分次外照射相比.小剂量分次外照射可以缓解食管癌细胞的耐药程度,推测其辅助化疗疗效应较好.
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强化阿托伐他汀对老年冠状动脉介入后血清MCP-1、hs-CRP和sFas因子的影响
目的:探讨阿托伐他汀对老年冠状动脉介入治疗术(PCI)后血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)和血浆可溶性Fas(sFas)的影响.方法:52例接受PCI的稳定型心绞痛患者随机分为观察组和对照组,对照组予常规治疗;观察组在对照组基础上予口服阿托伐他汀40 mg,qd,治疗4～7 d后行PCI术.于术前及术后24 h、1周测定患者血清MCP-1、hs-CRP和血浆sFas水平.MCP-1、sFas检测采用酶联免疫吸附法,hs-CRP采用免疫比浊法.结果:两组hs-CRP、MCP-1及sFas水平术后24 h升高,术后1周低于术后24 h,观察组较对照组下降更明显,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:老年冠状动脉介入治疗术后应用大剂量阿托伐他汀能促进MCP-1、hs-CRP和sFas水平下降,有利于动脉粥样硬化斑块的稳定,预防再狭窄的发生.
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葡萄糖转运蛋白4活性与钙超载后心肌细胞胰岛素抵抗
目的:初步研究钙超载后心肌细胞胰岛素抵抗与葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)活性之间的关系,探讨钙超载后心肌细胞胰岛素抵抗的分子机制.方法:采用伊屋诺霉素构建不同程度成年大鼠心肌细胞钙超载模型;应用同位素示踪技术观察胰岛素刺激大鼠心肌细胞的葡萄糖摄取效应,用Western blot分析检测胰岛素刺激的心肌细胞膜GLUT4的活性变化.结果:钙超载后心肌细胞表现出严重的胰岛素抵抗,实验组(1.0μmol/L伊屋诺霉素)心肌细胞膜基础GLUT4磷酸化形式和对照组无统计学差异,但胰岛素刺激的GLUT4磷酸化形式显著增加,为对照组的226.3%(P＜0.05).结论:胰岛素刺激的GLUT4活性障碍是心肌细胞钙超载后胰岛素抵抗的另一重要分子机制;缺血再灌注心肌细胞内钙超载是急性胰岛素抵抗的始动因素.
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细胞角蛋白7和19在结肠癌中的表达及意义
目的:检测细胞角蛋白(CK)在结肠癌中的表达,探讨其在病理分级及临床分期中的表达差异性.方法:采用免疫组化法、免疫细胞化学法和Western blot检测结肠癌中CK7和CK19的表达,分析这些表达与肿瘤分期及分型的关系.结果:CK7和CK19在正常结肠组织中均不表达.CK7在结肠癌组织中不表达,而CK19在结肠癌组织中阳性表达.两组间检验差异性明显(P＜0.05).结论:CK7和CK19与结肠癌的发生有关,CK7~-/CK19~+可作为结肠癌的表达特征之一.
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PCB77人工抗原的合成及多克隆抗体的制备
目的:制备PCB77人工抗原和多克隆抗体,为建立其免疫学检测方法提供技术准备.方法:以3,4-二氯苯基乙酸为半抗原,在低温和弱碱性条件下,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将其与载体BSA偶联,制备PCB77的人工抗原,计算结合比为23:1,免疫家兔获得了PCB77的多克隆抗体.采用混合酸酐法将半抗原与OVA偶联,结合比为8:1,用作ELISA检测包被原.间接ELISA检测结果表明,2只兔子的抗血清效价均达1:20 000以上.抗血清经辛酸一硫酸铵沉淀法纯化后通过ELISA检测验证了PCB77人工抗原的有效性,通过方阵滴定法确定ELISA的佳工作浓度,建立标准曲线.在0.75～300 ng/L范围内,抑制率与PCB77的质量浓度对数呈显著的线性关系,检测限达到4.44μg/L.结论:合成的PCB77人工抗原具有较好的免疫效果,纯化后的抗体符合后续实验的条件要求,为研制和开发PCB77免疫检测试剂盒奠定了基础.
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人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达
目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性.方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5El)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区fCDR)不变,选择与框架区同源性高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基.通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达.表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白.对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测.结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和炭疽毒素活性.结论:获得了具有功能的人源化的抗体基因序列,为表达具有中和炭疽毒素活性的全分子人源化抗体奠定了基础.
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肿瘤疫苗的研究进展
肿瘤疫苗是用肿瘤细胞、肿瘤细胞裂解物或肿瘤抗原激活机体免疫系统产生特异性抗肿瘤细胞免疫效应.它是一种治疗性的、新型的肿瘤治疗方法,也是一种主动性免疫疗法.随着肿瘤免疫学和分子生物学的发展,肿瘤与机体之间的相互作用、肿瘤免疫耐受以及肿瘤抗原鉴定都取得了很大的进展,这也促进了肿瘤疫苗的发展.
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B淋巴细胞与免疫老化
免疫老化(immunosenescence)是机体免疫系统随年龄增长而出现的退行性变化,免疫细胞是免疫系统的重要组成部分.其中B淋巴细胞既是机体产生抗体的惟一细胞,同时又是专职性的抗原提呈细胞.因此,B淋巴细胞在机体的细胞免疫及体液免疫中均发挥重要作用.研究发现,随着年龄的增长,B淋巴细胞的生成环境、数量及功能等均发生渐进性改变,从而导致机体正常免疫应答功能紊乱.致使年长者易罹患肿瘤、感染及自身免疫性等疾病.
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HIV-1 Tat疫苗基础研究进展
目前,艾滋病感染已经成为全球所面临的重大公共卫生问题.研制有效的HIV疫苗是艾滋病防治的重要手段之一.两个已完成三期临床试验的以病毒囊膜蛋白和核心蛋白作为主要靶点的HIV疫苗没有达到理想的预防效果~([1]).因此,探索HIV疫苗研究的新策略和寻找新的疫苗靶点对疫苗的成功研发显得尤为重要.
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间充质干细胞作为免疫调节剂用于临床肝移植治疗研究进展
间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)因其多潜能性和可扩增性对再生医学产生了不可估量的影响.除可塑性外,MSC作为新型免疫调节治疗产物正在被应用于临床前及临床研究中.无论是体外试验还是疾病模型中MSC均显示了良好的免疫抑制功能,为正在遭受自身免疫病和移植排斥反应困扰的人们带来了福音.
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海洛因依赖者外周血T细胞亚群及NK细胞检测分析
目的:检测海洛因依赖者戒毒前、后不同时间段外周血中的T淋巴细胞亚群及NK细胞数目的改变状况并探讨其原因,为制定有效防治策略提供依据.方法:采集30例海洛因依赖者在戒毒前、戒毒7 d和14 d各不同时间段的静脉血抗凝,以本地区13例正常人外周血做参照,用流式细胞术(FCM)对其T淋巴细胞亚群和NK细胞进行测定.结果:海洛因依赖者淋巴细胞(Lymphocyte)百分比较正常对照组降低(P＜0.01);未戒断组CD4百分比较对照组下降(P＜0.05);戒断7 d组CD25与正常组相比明显升高(P＜0.05).按年龄及吸毒时间进行分组得出:不同年龄段或为同吸毒时间之间的CD4、CD25及NK有统计学意义(P＜0.05).结论:海洛因依赖者细胞免疫功能受损,短期戒断产生的应激可能是导致依赖者自身免疫疾病发生的诱因之一.
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体外不同动态力学应变对人牙周膜成纤维细胞整合素α5、α6及β1的表达影响
目的:探讨体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)在动态力学微应变范围内细胞膜表面整合素α5、α6、β1表达变化.方法:采用四点弯曲细胞力学加载装置对体外培养的HPDLF进行加载,通过流式细胞术(FCM)分析不同动态力学应变对HPDLF膜表而整合素α5、α6、β1表达的影响.结果:未加力条件下体外培养的HPDLF膜表面同时有整合素α5、α6、β1弧单位的表达;且β1的表达量高,α5次之,α6较低;不同大小应变组和不同作用时间组的细胞膜表面整合素α5、α6、β1表达量之间均存在统计学差异(P＜0.01),动态力学应变引起了HPDLF膜表面整合素α5、α6、β1表达的上调,此影响与应变的大小和作用时间密切相关;在不同亚单位间存在一定的相关性和差异性.结论:动态力学应变作用下整合素α5、α6、β1亚单位表达的上调,提示整合素β1亚族(特别是αβ亚单位结合体-α5 β1和α6β1)可能在HPDLF的力学信号转导中具有重要的调控作用.
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脑组织切片免疫组化技术中防止脱片制作方法
在做人脑组织病检及小鼠、大鼠等小动物要取材脑组织的实验中,因为脑组织本身的组织结构,化学组成等因素,按常规取材、固定、脱水方式,做成组织切片再做免疫组织化学染色时,切片经抗原修复和缓冲液的长时间浸泡后,往往会部分或全部从载玻片上脱落,严重影响实验操作的进行与染色结果的判断~([1-3]).经过查阅资料多次摸索,本技术组总结出一套脑组织切片制片方法,可以有效防止脑组织切片免疫组化技术中组织切片脱片的发生.
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Toll样受体4和巨噬细胞移动抑制因子对血管内皮细胞生物活性的影响
目的:探讨Toll样受体4(TLR4)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对ECV304内皮细胞增殖、黏附及炎症因子水平的影响.方法:ECV304细胞经TLR4 MIF单克隆抗体(mAb)和脂多糖(LPS)处理后,通过~3H-TdR掺入实验、黏附实验和放射免疫分析研究细胞增殖、黏附和细胞因子水平.结果:LPS(10 mg/L)明显促进ECV304细胞TLR4的表达,而抗MIF mAb(10、50 mg/L)明显抑制其表达.抗MIF(50 mg/L)和抗TLR4mAb(1 mg/L)明显抑制了ECV304细胞的增殖,而LPS(10 mg/L)明显促进增殖.抗MIF mAb明显抑制了人外周血淋巴细胞对ECV304细胞的黏附,而LPS和抗TLR4 mAb对黏附无显著影响.抗MIF、抗TLR4 mAb明显抑制ECV304细胞TNFα的分泌,并呈剂量依赖,而LPS作用相反.与对照组相比,LPS(1 mg/L,48 h)可以促进ECV304细胞IL-8的分泌,抗MIF mAb(50 mg/L,48 h)可以明显抑制IL-8的分泌(P＜0.05).但是抗TLR4 mAb(1 mg/L)对ECV304细胞IL-8的分泌无明显影响.结论:LPS、抗TLR4及抗MIF mAb对血管内皮细胞TLR4表达及活性有显著影响.
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电刺激对脑梗死大鼠运动功能及骨形成蛋白表达的影响
目的:探讨电刺激对脑梗死大鼠运动功能及骨形成蛋白2、6、7(BMP2,6,7)表达的影响.方法:健康雄性SD大鼠,制作大脑中动脉闭塞模型,将造模成功的大鼠随机分为对照组、电刺激组各48只,假手术组32只,正常组8只.对照组、电刺激组、于脑梗死后每天接受自然恢复、电刺激治疗6 h、12 h、24 h、3 d、7 d和21 d.并在上述时间点,各组取8只大鼠,进行走平衡木试验观察大鼠偏瘫肢体功能恢复情况,然后断头处死动物取脑,石蜡包埋切片行免疫组织化学染色,检测梗死灶周围皮质及正常大脑皮质BMP2,6,7的表达.结果:第7天、21天时,电刺激组肢体功能恢复较对照组明显(P＜0.05).正常组和假手术组BMP-2,6,7表达无统计学差异.对照组、电刺激组BMP-2表达均先下调,电刺激组大鼠BMP-2下调时间早于对照组,21 d恢复至正常水平,对照组、电刺激组BMP-6,7均上调,BMP-7于7 d灰度值上升,至21 d恢复至正常水平,BMP6则一直保持高水平,电刺激组BMP-6,7表达高于对照组.结论:电刺激组偏瘫肢体功能的恢复优于对照组,电刺激下调BMP-2表达,上调BMP-6,7表达.
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人FcγRⅠ受体胞外区基因的克隆、原核表达及纯化
目的:探讨人FcγR Ⅰ(huFcγR Ⅰ)胞外区蛋白的原核表达纯化及其在体外与IgG的结合活性.方法:PCR方法从人的外周血自细胞中扩增出huFcγR Ⅰ ORF区全长基因并与T载体链接,从克隆载体huFcγR Ⅰ-T中扩增huFcγR Ⅰ胞外区基因,并将其装入原核表达载体pGEX-6p-1.构建好的载体转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白表达,并利用SDS-PAGE和Western blot对表达的蛋白进行鉴定.结果:扩增到了huFcγR Ⅰ的胞外区基因,所构建的pGEXhuFcγR Ⅰ重组质粒经PCR和酶切鉴定与预期一致.IPTG诱导下目的蛋白的表达率约为30%.SDS-PAGE结果显示表达的目的相对分子质量(M_r)56 700与理论预期值一致.Western blot结果显示原核表达的huFcγR Ⅰ胞外区蛋白与人IgG特异亲和.结论:FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白在原核表达系统中得到有效的表达,复性蛋白在体外与人的IgG特异结合.
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人CD4~+T淋巴细胞活化相关miRNA的筛选及其靶分子鉴定
目的:筛选与CD4~+ T淋巴细胞活化相关的miRNA,确定其靶分子.方法:用抗CD3的单免隆抗体(mAb)和抗CD28的mAb诱导Jurkat细胞活化,利用miRNA芯片检测并筛选出活化前后表达丰度有显著变化的microRNA,用定量RT-PCR证实筛选出的miRNA在Jurkat细胞活化的差异表达.设计引物构建miRNA的表达载体.利用牛物信息学软件预测miRNA的靶分子,将靶分子mRNA的3'UTR克隆入pGL3Luciferase报告基因载体中.观察转染的miRNA对报告基因表达的影响.结果:流式细胞术(FCM)证实了抗CD3的mAb和抗CD28的mAb可以诱导Jurkat细胞的活化.经miRNA芯片检测表明,Jurkat细胞活化前后有5种miRNA表达水平明显下降,定量RT-PCR证实了miRNA芯片的结果.成功构建了部分预测靶分子的荧光素酶报告基因载体.双荧光素酶报告系统检测了miR-181c对靶分子的干扰作用.结论:miR181c与人CD4~+ T淋巴细胞的活化有着密切的关系,CD69可能足miR-181c的一个靶分子.
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ABO血型鉴定不相符的影响因素及其预防方法
ABO血型是临床输血和器官移植重要的血型系统,正确鉴定受血者与供血者的ABO血型,是确保临床输血安全的重要措施.如果误定受血者或供血者的ABO血型,误输异型血,可使受血者发生严重的溶血性输血反应,危及患者的生命安全.我们对ABO血型鉴定不相符的影响因素及预防方法进行探讨,并对35例2次血型鉴定不相符的原凶进行了分析.
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唾液支原体分别经NF-κB依赖性和非依赖性方式诱导HGEC产生IL-1β、IL-8和表达hBD-2
目的:研究唾液支原体感染牙龈上皮细胞(HEGC)后,人β防御素-2(hBD-2)的表达和IL-1β、IL-8的产生情况,以及这两者是否与NF-κB的激活有关.方法:HGEC经口腔支原体刺激后,RT-PCR检测hBD-2 mRNA表达,ELISA检测细胞因子的产生,Western blot分析NF-κB的激活情况.结果:HGEC经唾液支原体刺激3 h后能经NF-κB产生IL-8.同时唾液支原体也能以非NF-κB依赖性方式诱导hBD-2表达.IL-8的产生与hBD-2 mRNA的表达存在一定相关性.结论:hBD-2的非NF-κB依赖性表达可能与初始的炎症反应有关,IL-8的产生可能通过自分泌机制影响到上皮细胞表达hBD-2 mRNA的表达.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
