细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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pDsRed1-C3/XAPC7真核表达载体的构建及细胞定位
目的:构建pDsRedl-C3/XAPC7真核表达载体并观察其在786-0.293T和Chang liver细胞株中的定位情况.方法:采用RT-PCR法从HBE135-E6E7细胞株中克隆得到XAPC7cDNA全长序列,将之与pMD18T载体连接、测序后将该片段亚克隆到真核表达载体pDsRedl-C3中.构建好的pD-sRedl-C3/XAPC7真核表达质粒经酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组质粒转染786-0.293T和Chang liver细胞株中,观察其在真核细胞中的表达.结果:pDsRedl-C3/XAPC7重组子经酶切鉴定及DNA测序证实,目的基因XAPC7的序列完全正确,真核表达载体构建成功,转染该重组子的细胞株均可见红色荧光蛋白的表达,呈颗粒状分布.XAPC7主要定位于786-O细胞的胞质,胞核罕见,在293T细胞中,胞质和胞核均有分布,且两者间无明显差别,在Changliver细胞中,胞质和胞核亦均有分布,但以胞质为主.结论:成功构建pDsRedl-C3/XAPC7融合基因并进行真核表达,发现XAPC7在不同细胞中的细胞定位具有差异,为下一步研究XAPC7的肿瘤相关功能奠定基础.
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融合蛋白mTSLPR-Ig的表达、纯化及其鉴定
目的:构建含小鼠TSLPR胞外段与小鼠Ig Fe段融合基因的腺病毒表达载体(Ad-mTSLPR-Ig),体外表达、纯化并鉴定可溶性融合蛋白mTSLPR-Ig.方法:运用PCR方法从小鼠胸腺cDNA文库中扩增mTSLPR胞外段基因,构建并鉴定mTSLPR胞外段与小鼠Ig Fc段融合基因的腺病毒表达载体(Ad-mTSLPR-Ig);将Ad-TSLPR-mIg转染COS-7细胞,收集细胞上清液;采用双抗体ELISA夹心法检测上清中融合蛋白表达;经蛋白A亲和层析,制备纯化可溶性融合蛋白mTSL-PR-Ig.结果:经测序证实,所构建表达载体的目的基因片段mTSLPR-Ig序列正确,成功包装出腺病毒表达载体Ad-mTSL-PR-Ig; ELISA法检测到上清中融合蛋白mTSLPR-Ig的表达;通过亲和层析法获得纯化的融合蛋白,经Western blot鉴定融合蛋白表达无误.结论:成功获得可溶性融合蛋白mTSLPR-Ig,为进一步研究其生物学特性奠定基础.
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TRAF6在抗β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达组织因子时的活化
目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在抗β2 GPI/β2 GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用.方法:采用一定剂量抗β2 GPI/β2 GPI复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,实时定量PCR检测细胞TF mRNA水平,发色底物法检测细胞TF活性;RT-qPCR及Western blot分别检测细胞TRAF6mRNA和蛋白表达情况;进一步采用蛋白酶体抑制剂MG-132,观察是否能够干预抗β2 GPI/β2 GPI复合物对细胞的刺激效应.结果:抗β2 GPI/β2 GPI复合物(100 mg/L)能够刺激THP-1细胞表达TF mRNA及活性,与对照相比差异显著(P<0.05);使细胞TRAF6 mRNA和蛋白表达均增加,并显示时间相关性,分别在刺激15 min和30 min时表达至高峰;MG-132(5μmol/L)明显抑制抗β2 GPI/β2 GPI复合物(100 mg/L)对THP-1细胞TRAF6 mRNA和蛋白的刺激效应及TF的诱导表达.结论:抗β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,TRAF6被激活并发挥重要作用.
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THH对HIF-1α在CIA动物模型中表达的影响及意义
目的:探讨昆明山海棠(THH)对低氧诱导因子(HIF-1α)在胶原关节炎(CIA)大鼠模型中表达的影响及其作用机制的研究.方法:建立CIA大鼠模型,然后用药治疗30d,30d后HE染色观察关节的病理改变,RT-PCR以及免疫组化法检测HIF-1α的表达.结果:给药30 d后,HE染色显示治疗组明显减轻滑膜增殖以及炎症反应,免疫组化以及PT-PCR显示治疗组HIF-1α明显表达降低.结论:THH治疗CIA大鼠模型具有显著疗效的作用机制与调节外周血清以及滑膜组织内的HIF-1α的表达有关.
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川穹嗪对AngⅡ诱导的大鼠心肌肥大细胞JAK-STAT通路作用
目的:研究川弯嗪对心肌肥大JAK-STAT通路的影响.方法:建立心肌肥大动物模型,分离培养新生大鼠心肌细胞,利用RT-PCR检测试验组和对照组基因ANP相对水平、Western blot检测试验组和对照组心肌肥大信号转导途径分子pJAK2,pJAK1,pSTAT3,并进行统计学分析.结果:川芍嗪可显著抑制ANP mRNA的表达(P<0.01),可明显抑制JAK2 JAKI STAT3的表达(P<0.01).结论:川弯嗪能干扰大鼠心肌肥大JAK-STAT信号转导通路,为中药干扰JAK-STAT信号转导通路治疗心肌肥大奠定基础.
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NDRG2在小鼠胚胎脑组织的表达特点
目的:观察NDRG2 mRNA在小鼠胚胎脑组织的表达与分布.方法:采用胚胎期小鼠E10.5 d、E12.5 d、E16.5d和E18.5 d进行脑切片的原位杂交.结果:NDRG2 m RNA在小鼠胚胎发育各期均有持续性表达,主要定位于端脑、中脑、菱脑、间脑、眼原基、脊髓、小脑原基、海马原基、丘脑、下丘脑和许多神经核团,神经细胞定位主要集中在细胞质中.结论:脑内NDRG2作用贯穿了整个脑的发育阶段,提示该基因在小鼠胚胎组织发育过程中有重要作用.
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Survivin多表位真核表达载体的构建及其在树突状细胞中的表达
目的:构建人生存素(survivin)的多表位真核表达载体,并在人树突状细胞(DC)中进行表达.方法:人工合成含4个survivin的HLA-A2类限制性CD8+CTL表位和一个CD4+Th表位的重组cDNA片段,克隆到pBluescript ⅡSK(+)载体上,测序正确后将目的基因连接到真核表达载体pIBESneo3.0中,构建的重组真核表达质粒pPIBESneo3.0-survivin(4)/Th.将其转染人DC并筛选,进行稳定表达.结果:构建了含有survivin的多表位真核表达载体,并成功地转染了人DC.结论:成功地构建了含有survivin的多表位真核表达载体,并在人DC中稳定表达,为进一步研究多表位肿瘤疫苗奠定基础.
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藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库的构建及初步鉴定
目的:构建藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库,并进行初步鉴定.方法:用TRIzol试剂抽提藜草花粉总RNA并分离mRNA.以纯化的mRNA为模板,以含有Xho I内切酶位点和18 by的Poly(dT)序列的引物,用ZAP Express cDNA合成试剂盒反转录合成cDNA.将cDNA修饰、分级纯化后,获得大于400 by的cDNA片段.将带有黏性末端的双链ds cD-NA与Uni-ZAP XR载体连接,采用ZAP Express cDNA文库合成试剂盒利用λ噬菌体构建藜草花粉λ噬菌体cDNA表达文库,用包装蛋白对合成的ds cDNA进行体外包装,以包装产物感染宿主菌XL1-Blue MRF即获得cDNA表达文库.用PCR方法检测cDNA表达文库的滴度和插人片段的大小.结果:构建的藜草花粉变应原λ噬菌体表达文库的滴度为9.7×10(8)pfu/L,重组率为100%,库容量为4.85pfu.插人片段的长度平均约为1.0 kb.结论:构建的cDNA表达文库的容量及插人片段的大小合适,适用于藜草花粉变应原cDNA克隆的筛选,为制备基因重组藜草花粉变应原疫苗奠定了基础.
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细胞亲环素A对单核来源泡沫细胞功能的影响
目的:研究细胞亲环素A对单核来源泡沫细胞功能的影响,探讨细胞亲环素A(CypA)在动脉粥样硬化发病过程中的作用.方法:以氧化型低密度脂蛋白诱导,建立人单核细胞系(THP-1细胞)分化的泡沫细胞模型,采用油红O染色进行形态学鉴定.以不同浓度的重组人CyPA(50、100、200μg/L)刺激人单核来源的泡沫细胞,通过细胞黏附实验、基质侵袭实验和明胶酶谱实验检测在分化的过程中CypA作用前后,MMP的表达,细胞黏附和侵袭力的变化.进而用环抱素A(CsA)、HAb18 mAb、c7b8f10以及HAb18 mAb联合c7b8f10分别进行阻断实验,观察对泡沫细胞功能的抑制作用.结果:在单核向泡沫细胞分化的各阶段中,泡沫细胞MMP-2、9的表达,黏附基质和侵袭能力均较THP-1单核株和巨噬细胞显著增强(P<0.05);CyPA对泡沫细胞上述功能有促进作用,浓度100～200 μg/L的作用效果明显(P<0.05);以上拮抗剂均可不同程度阻断CypA作用于泡沫细胞前后的上调作用,其中以HAb18 mAb联合c7b8f10的抑制作用明显(P<0.05).结论:CypA上调了动脉粥样硬化泡沫细胞MMP-2、9的表达及其活性,增强了泡沫细胞黏附、侵袭能力,其促进作用可被CypA和CD147的拮抗剂所抑制.这一作用机制可能与动脉粥样硬化斑块不稳定性的发病机制相关联,并为其治疗提供了新的理论基础.
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结核杆菌抗原诱导成纤维细胞水通道蛋白1(AQP1)表达的调节
目的:观察结核杆菌抗原(MTh-Ag)对BALB/c 3T3成纤维细胞水通道蛋白1(AQP1)表达的影响及其调节机制.方法:采用免疫印迹技术和免疫荧光检测细胞的AQPI和微管相关蛋白轻链3(LC3),实时定量PCR测定AQPI mRNA含量,倒置显微镜观察细胞形态学变化.结果:低浓度MTh-Ag(10mg/L)与细胞作用24～72h后诱导细胞AQPI表达分别增加了74.46%、70.84%及93.89%(P<0.01),且细胞增长速度加快;而高浓度MTh-Ag(30mg/L)并未诱导细胞AQPI表达增加.免疫荧光也证实低浓度的MTb-Ag诱导了细胞AQPI的显著增加.低浓度MTb-Ag(10mg/L)作用于细胞24～72h,均未检测出AQPI mRNA的差异变化,但细胞的自噬反应显著增加.结论:MTh-Ag可诱导BALB/c3T3成纤维细胞AQPI表达的显著增加,这种增加在于基因转录后的调节,而细胞的自噬途径可能参与其中.
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miR-146a对小鼠巨噬细胞IL-18表达的影响
目的:探讨miR-146a对小鼠单核-巨噬细胞株RAW264.7以及小鼠原代腹腔巨噬细胞Th1/Th2类细胞因子表达的影响.方法:体外培养的小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞和腹腔新鲜分离的巨噬细胞分别瞬时转染miR-146a mimics、阴性对照mimics(NC mimics)、抑制性miR-146a(miR-146a inhibitor)和抑制性miR-146a阴性对照(NC in-hibitor).转染后,利用real time PCR定量检测IL-18、IL-5和IL-10的表达情况.结果:RAW264.7细胞和原代腹腔巨噬细胞在转染miR-146a mimics后IL-18的表达水平明显降低(P<0.05),转染miR-146a inhibitor后IL-18的表达水平明显升高(P<0.05),但对IL-5和IL-10的表达,两种转染形式均没有影响.结论:巨噬细胞RAW264.7及原代巨噬细胞表达的miR-146a能够负向调控Th1类细胞因子IL-18的表达,但是不能调控Th2类细胞因子IL-5及IL-10的表达.
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八色流式细胞术检测人外周血BCG特异性效应型记忆CD4+T细胞的表型特征
目的:检测BCG刺激后,PPD+正常人外周血中细胞因子产生及其亚群.方法:分离PPD+正常人外周血单个核细胞(PBMC),BCG刺激后检测CD4+和CD8+T细胞细胞因子分泌,并用八色流式细胞术分析BCG特异性T细胞亚群.结果:BCG刺激PBMC后,主要是CD4+T细胞分泌Th1细胞因子(IFN-γ、IL-2和TNF-α),而CD8+T细胞几乎不产生细胞因子.进一步分析分泌细胞因子的细胞亚群,主要是CD4+CD45RO+ CD62L(-)CD27(-)和CD4+ CD45RO+ CD62L(-)CD27+分泌细胞因子.结论:BCG刺激PPD+正常人外周血PBMC后,主要诱导CD4+T细胞分泌细胞因子,且该细胞表现出CD4+CD45RO+ CD62L(-)效应型记忆细胞特征,可能在预防结核感染中发挥重要作用.
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利用减毒沙门菌递送的柯萨奇病毒A16型VP1基因重组质粒的构建和鉴定
目的:构建能够稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌并鉴定目的抗原的表达,研发利用减毒沙门菌递送的口服疫苗.方法:利用DNA重组技术,构建表达CoxA16 VP1蛋白的真核表达质粒,体外转染Vero细胞后检测VP1蛋白表达情况及抗原活性,并将该质粒通过电转化构建重组减毒伤寒沙门菌.结果:构建了表达CoxA16 VP1蛋白的重组质粒,转染vero细胞后检测到CoxA16 VP1蛋白的表达并具有抗原活性;获得能稳定携带该质粒的重组减毒伤寒沙门菌.结论:成功构建稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌,为口服CoxA16疫苗的研究打下了基础.
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利用Fine-tiling aCGH分析TCR基因重排鉴定T细胞白血病克隆
目的:建立基于分析T细胞受体(TCR)基因重排而确定T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)克隆的新方法,为研究T-ALL中涉及TCR基因位点的染色体易位提供基础.方法:提取1例T-ALL患者外周血单个核细胞(PBMC)的总DNA,利用精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(fine-tiling aCGH)分析样本与对照组基因组DNA的差异,了解不同染色体上可能的断裂点和具体的位点,根据所提供的初步结果,从断裂点涉及的基因序列设计特异引物,采用连接介导PCR(LM-PCR)和序列分析等方法去找出与之发生重排的基因序列.并进一步通过RT-PCR检测TCR基因表达.结果:该例T-ALL患者fine-tiling aCGH结果显示14染色体TCRα/δ基因座出现4个断裂点,分别对应TCR Vδ1、Vδ2、Jδ1和Jδ2基因位点.通过LM-PCR、测序及序列分析,该例T-ALL患者的PBMC中TCR基因涉及Vδ1Dδ2Dδ3Jδ1、Vδ2Dδ3Jδ2重排.RT-PCR的结果也验证T-ALL表达该TCR基因重排.结论:结果表明,利用fine-tiling aCGH及LM-PCR技术可以找出TCR基因重排,并且该方法是可靠的,也是发现一些涉及TCR位点的融合基因的一条途径.
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HSV-1gC糖蛋白真核表达载体的构建及表达
目的:构建单纯疱疹病毒1型(HSV-1)囊膜糖蛋白C(gC)哺乳动物表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R,实现其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中的稳定表达.方法:利用基因重组技术构建同时克隆有gC-1基因和中国仓鼠二氢叶酸还原(DHFR-L22R)基因的真核表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R,按Lipofectamine(TM)2000说明书转染野生型CHO-K1细胞,在G418和氨甲喋呤(MTX)双筛选压力下筛选稳定表达细胞株,Slot blot方法测定重组蛋白的表达,并用His-Ni琼脂糖填料进行目的蛋白纯化,纯化后West-ern blot检测.结果:成功构建了真核表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R.经过两轮筛选获得稳定表达HSV-1型邪基因的细胞系,Western blot成功检测到目的蛋白.结论:HSV-1 gC在CHO-K1细胞中成功表达,并具有良好的特异性结合活性,为进一步的实验研究和临床应用提供了基础.
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固相MHCI类相关抗原A刺激的NK细胞对树突状细胞活性的影响
目的:观察固相MHCI类相关抗原A(iMICA)刺激的NK细胞对树突状细胞(DCs)活性的影响.方法:首先取新鲜分离及受固相MICA刺激的异体NK细胞,或IL-2、及IL-2联合iMICA刺激的自体NK细胞与未成熟DCs(iDCs)按5:1比例孵育24 h后,用流式细胞术(FCM)分析HLA-DR+或CD86+频率的DCs.然后取自体NK细胞以iMICA刺激后,按1:5的比例与iDCs孵育24 h后,FCM检测DCs上HLA-DR、CD86的表达.后在NK细胞与DCs的共培养体系中加人抗IFN-γ抗体,观察DCs上HLA-DR、CD86表达的变化.结果:当NK细胞与iDCs孵育比例为5:1时,异体新鲜分离的与自体活化的NK细胞均能杀伤iDCs;而MICA无协同作用.当NK细胞与iDCs孵育的比例为1:5时,iMICA刺激的NK细胞可促进DCs表达HLA-DR和CD86;而加人抗IFN-γ抗体可抑制 NK细胞诱导DCs表面HLA-DR和CD86表达的上调.结论:异体新鲜分离的或自体活化的NK细胞杀伤iDCs时,无需iMICA的刺激;但当NK细胞的数目明显低于iDCs时,iMICA可刺激NK细胞分泌IFN-γ促进DCs成熟.
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病毒性心肌炎的外周血T淋巴细胞免疫学研究
近年来,病毒性心肌炎(viral myoearditis,VMC)与免疫细胞学的相关性倍受关注.有文献认为,VMC的心肌发生病变的原因,除了与病毒存在直接相互作用外,还和自身的T淋巴细胞免疫反应密切相关[1].为此,我们探讨了VMC的发病机制及其与外周T淋巴细胞的病理关系.
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中药联合吉西他滨化疗治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及其对血清MMP-9的影响
目的:观察中药联合吉西他滨化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效,探讨其对基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响.方法:60例Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者随机分为观察组和对照组.观察组采用参芪扶正注射液联合吉西他滨化疗治疗,对照组单用吉西他滨化疗治疗.两组均以21 d为1周期,治疗2周期后进行评价.结果:治疗后,观察组血清MMP-9水平显著降低,与治疗前和对照组比较均有显著性差异(P<0.05);治疗前IV期患者血清MMP-9水平显著高于Ⅲ b期(P<0.05),治疗后W期患者血清MMP-9水平显著低于Ⅲb期(P<0.05);观察组近期临床疗效有效率为56.7%,显著高于对照组(P<0.05);观察组1年生存率、平均随访时间和中位疾病进展时间显著高于对照组(P<0.05),Ⅲ～Ⅳ级毒副反应显著低于对照组(P<0.05).结论:中药联合吉西他滨化疗治疗晚期NSCLC近期疗效明显,毒副反应低,并通过抑制MMP-9的活性来达到抑制肿瘤生长和转移.
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胃癌及癌前病变组织中VEGF和iNOS蛋白的表达
目的:观察胃癌及癌前病变(肠上皮化生、不典型增生)组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,探讨其临床意义.方法:选择我院2008-01/2010-01手术切除和内镜活检的胃黏膜标本150例,其中胃黏膜肠上皮化生组50例,不典型增生组50例,胃癌组50例;另40例来自胃镜胃黏膜活检的正常胃黏膜标本作为对照组.免疫组化染色法比较各组VEGF和iNOS的表达.结果:胃癌组 VEGF和iNOS的表达高于其余3组(P＜0.01);肠上皮化生组与不典型增生组的表达无显著差异;但均明显高于对照组(P<0.05).结论:胃镜黏膜组织活检VEGF和iNOS的表达与组织恶变程度相关,有利于胃癌的早期诊断.
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次级淋巴组织趋化因子及其受体对干燥综合征患者外周血淋巴细胞趋化性的影响
目的:研究次级淋巴组织趋化因子(CCL21)及其受体(CCR7)对干燥综合征(SS)患者外周血淋巴细胞趋化性的影响,并探讨其在SS发病机制中的作用.方法:选择31例SS患者(其中原发性SS18例、继发性SS13例)及正常对照20例(均为健康体检者).分离SS患者及正常对照的外周血淋巴细胞,采用transwell细胞跨膜试验检测CCL21/CCR7对外周血淋巴细胞迁移的影响.结果:在CCL21的作用下,原发性SS和继发性SS患者外周血淋巴细胞的趋化指数(CI)分别为2.92土0.12和2.80土0.28,均明显高于正常对照(CI =1.32±0.11,P<0.01);原发性SS和继发性SS患者之间淋巴细胞的CI无统计学差异(P>0.05).经过抗CCR7单抗(mAb)处理后,原发性SS和继发性SS患者的CI分别为1.04±0.05和1.03±0.08,与未经抗CCR7mAb处理的SS患者相比较明显降低(P<0.01).结论:CCR7是导致淋巴细胞迁移的重要因素之一.CCL21/CCR7的相互作用可介导SS患者外周血淋巴细胞的迁移,可能与SS患者的外分泌腺中大量淋巴细胞浸润导致腺体损害有重要关系.
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阿德夫韦酯联合扶正化淤治疗慢性乙肝及其对炎症细胞因子的影响
目的:观察阿德夫韦酯(ADV)联合扶正祛淤治疗慢性乙肝(CHB)的临床疗效及对炎症细胞因子IL-2和IFN-γ的影响.方法:100例CHB患者随机分为治疗组和对照组.对照组给予ADV治疗,治疗组给予ADV联合扶正化瘀治疗,疗程为1年,疗程结束后评价临床疗效.治疗前和疗程结束后测定血清IL-2和IFN-γ水平、HBV DNA定量和肝功能常规指标.结果:治疗后,两组患者血清HBV DNA水平和肝功能指标(TBIL,AST,ALT)均显著下降,与治疗前比较有显著性差异(P<0.05),且治疗组与对照组比较有显著性差异(P<0.05);两组患者血清IL-2,IFN-γ水平均显著上升,与治疗前比较有显著性差异(P <0.05),且治疗组与对照组比较有显著性差异(P <0.05).结论:ADV联合扶正化瘀治疗CHB能够促进血清中IL-2及IFN-γ的释放,可提高患者的免疫功能,增强机体清除病毒的能力,临床疗效好,无不良反应,值得临床推广应用.
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缺氧诱导因子-1α在原发性肝癌血清中的表达及其与肿瘤浸润转移的关系
目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在原发性肝癌(PHC)血清中的表达及其与肝癌浸润转移的关系.方法:采用双抗体夹心ELISA法检测60例PHC患者和60例健康查体者血清中HIF-1α水平.结果:PHC组的血清HIF-1α水平为(161.14土80.79)ng/L,对照组为(22.67±8.47 ) ng/L,相比较有显著性差异(P<0.05);肿瘤远处转移组血清HIF-1α水平为(225.15土108.16) ng/L,无肿瘤远处转移组血清HIF-1α水平为(101.26土55.18) ng/L,两组相比较有显著性差异(p<0.05);有门脉癌栓组血清HIF-1α水平为(255.45土122.23)ng/L,无门脉癌栓组血清HIF-1α水平为(139.9771.49)ng/L,两组相比较有显著性差异(P<0.05);肿瘤包膜组血清HIF-1α水平为(99.97土55.75) ng/L,无肿瘤包膜组血清HIF-1α水平为(187.36土91.52)ng/L,两组相比较有显著性差异(P<0.05);HIF-1α在不同年龄、性别、TNM分期、肿瘤直径大小患者血清中的表达差异无统计学意义.结论:HIF-1α在PHC患者血清中呈高表达,HIF-1α的高表达与有无肿瘤转移、有无癌栓和包膜有关.血清HIF-1α水平可以为预测PHC的浸润和转移的指标.
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CsA通过抑制免疫突触的形成促进类风湿关节炎巨噬细胞的凋亡
目的:探讨免疫抑制剂环抱素A (CsA)对类风湿关节炎(RA)患者体内参与免疫突触形成的巨噬细胞凋亡的影响.方法:将人单核细胞株THP-1(human acute monocytic leukemia cell line)诱导分化的巨噬细胞经葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxin B,SEB) ( 100μg/L)包被后与活化的Jurkat T细胞(human acute T-cell leukemia cell line)共培养促免疫突触形成,加或不加CsA(1 mg/L),置于无血清RP-M11640培养液诱导凋亡16 h后,以Annexin V-PI染色,用流式细胞术检测巨噬细胞的凋亡情况.临床收集10例健康对照及10例确诊活动期RA患者外周血,采用免疫磁珠法阴性分选CD4+T细胞并将其与诱导分化的巨噬细胞共培养,亦设加或不加人CsA(1 mg/L)组,研究CsA对免疫突触调控巨噬细胞凋亡作用的影响.结果:在细胞株、健康人及RA患者外周血由单核细胞诱导分化的巨噬细胞和CD4+T细胞相互作用形成免疫突触后巨噬细胞的凋亡率分别为(32.9±2.8)%,(24.7±1.6)%,(14.5%±1.2)%,较相应单独培养的巨噬细胞的凋亡率(61.4±2.4)%、(45.5土2.6)%、(22.9±1.5)%显著降低(P<0.05).而在加CsA组,细胞株来源的巨噬细胞及RA患者来源的巨噬细胞的凋亡率分别为(48.8 +2.0)%、(16.9土1.1)%,较相应参与免疫突触形成的巨噬细胞的凋亡率有所升高(P<0.05),而加人CsA对健康对照巨噬细胞凋亡率的影响差异无统计学意义.结论:RA患者外周血诱导分化的巨噬细胞参与免疫突触的形成后可显著抑制其凋亡率,而CsA能减弱突触对巨噬细胞的这一保护功能,起到促进巨噬细胞凋亡的作用,该结论为减少RA炎性因子的分泌、减弱关节破坏提供了有利的理论依据.
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胃癌中REIC蛋白分泌水平及其增殖抑制作用研究
目的:研究胃癌患者血清和胃癌细胞培养液上清中分泌型REIC含量及重组REIC对胃癌细胞增殖的影响.方法:ELISA检测血清和细胞上清中的REIC表达;WST-8法检测胃癌细胞的增殖.结果:REIC在胃癌患者中的分泌水平比正常健康人明显降低(P<0.05),并且与肿块大小呈负相关(P<0.05);胃癌细胞系培养液上清中的REIC表达低于正常的胃勃膜细胞(P<0.05);胃癌AGS细胞系转染REIC后,细胞培养液上清中的REIC浓度升高(P<0.05);加人外源性融合的REIC可以抑制胃癌细胞AGS和BGC-823的增殖(P<0.05).结论:分泌型的REIC在胃癌细胞中表达降低,重组REIC蛋白可抑制胃癌细胞的增殖,REIC蛋白可以作为胃癌早诊、生物学和基因治疗的靶点.
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微生态制剂对重型肝炎患者血清细胞因子的影响
目的:探究微生态制剂对重型肝炎患者的临床病状、血清细胞因子的变化以及血清生化指标的影响.方法:将2008-05/2010-05人住某三甲医院的%例重症肝炎患者的临床资料进行回顾性分析,对本组重症肝炎患者随机性地分为两组,即治疗组和对照组,每组48例.对照组为内科综合治疗组,治疗组为在此基础上外加使用肠球菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌三联活胶囊以及乳果糖口服3-4周.经过治疗之后,对两组治疗前后的临床病状、肝功能改善情况,采用酶联免疫吸附法对治疗前后TNF-α,IL-2,IL-6,IL-10的水平进行比较.结果:在临床症状改善方面,治疗组均明显地优于对照组,血清TNF-α以及白细胞介素水平治疗组分别为(110.3±15.6)ng/L和(88.5±21.8)ng/L,对照组上述两个指标值分别为(130.2土19.9) ng/L和(42.1上11.2) ng/L.由上述数据的比较可见,血清TNF-α治疗组比对照组有较为明显地降低,对于白细胞介素水平而言,则出现相反结果,具有统计学差异(P<0.01).结论:对重症肝炎患者使用综合治疗外加口服生态制剂(本组使用了肠球菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌三联活菌胶囊),能够降低TNF-α以及IL-6的数量和升高IL-2,IL-10水平,减轻免疫反应对肝脏造成的损害,从改善了重症肝炎患者的临床症状及肝功能.
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慢性乙型肝炎患者CD4+和CD8+T细胞亚群的研究
目的:比较不同感染状态慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4+和CD8+T细胞亚群的差异.方法:收集CHB患者78例,根据感染状态分为乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性且肝功能正常、HBeAg阳性且肝功能异常和HBeAg阴性3组.13例健康志愿者(正常对照组)来自曙光医院体检中心.应用流式细胞术(FCM)检测不同感染状态CHB患者外周血中CD4+CD25+.CD8+CD28-.CD4+CD95+.CD8+CD95+细胞亚群的分布情况,并对各亚群分布情况与HBeAg和HBVD-NA水平的相关性进行分析.结果:与正常对照组相比,HBeAg(+)肝功能正常组的CD4+CD25+/CD4+和CD4+CD95+/CD4+明显升高(P<0.01,P<0.05),3个感染组CD8+CD28-/CD8+值均明显升高(P<0.01);与HBeAg(+)肝功能正常组相比,HBeAg(+)肝功能异常组和HBeAg(-)组的CD4+CD25+/CD4+明显降低(P<0.01),HBeAg(-)组CD8+CD95+/CD8+明显降低(P<0.05),HBeAg(+)肝功能异常组的CD8+CD95+/CD8+明显降低(P<0.01).CD4+CD25+/CD4+,CD4+CD95+/CD4+与HBVDNA呈正相关(P<0.01,P＜0.05),CD8+CD28-/CD8+与HBVDNA和HBeAg均呈正相关(P<0.01).结论:CHB患者外周血中CD4+CD25+.CD8+CD28-T,CD4+CD95+细胞表达频率增加,可能对慢性乙肝病毒感染过程中的免疫耐受起一定作用.
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连续性血液净化对多发伤后并发脓毒症患者血清Ang-2、TNF-α、IL-18水平及预后的影响
目的:探讨连续性血液净化(CBP)治疗对多发伤后并发脓毒症患者血清血管生成素(Ang-2),TNF-α与IL-18水平及预后的影响.方法:选择73例多发伤后并发脓毒症患者,按照是否接受连续性血液净化治疗分为常规治疗组35例和连续性血液净化治疗组38例,监测治疗前后临床疗效及预后,并分别在治疗前和治疗后6h,12h,24h,48h各时间点采用ELISA检测两组患者血清Ang-2,TNF-α,IL-18水平的变化.结果:经72 h治疗后,CBP治疗组患者在APACHE II评分和ICU住院时间明显优于常规治疗组,且MODS发生率和住院期间死亡率均明显低于常规治疗组,两组间比较有统计学差异(P<0.05)o CBP治疗组患者血清Ang-2,TNF-α,IL-18水平均较治疗前明显降低(P<0.05),组间比较,CBP治疗组患者的各时间点血清Ang-2,TNF-a,IL-18水平均明显低于常规治疗组.结论:CBP是改善多发伤后并发脓毒症患者预后的有效治疗方法,清除患者血清中过多Ang-2,TNF-α和IL-18水平,可能是改善预后的重要机制之一.
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Ⅱ型糖尿病患者血清ET、抵抗素水平与周围神经病变的关系
目的:探讨2型糖尿病患者血清内皮素(ET)、抵抗素水平与周围神经病变(DPN)的关系.方法:选择郑州大学第二附属医院内分泌科住院的2型糖尿病患者印例,经神经电生理检查分为单纯糖尿病组20例和DPN组40例,并选择健康体检者30例为对照组.采用放射免疫法和酶联免疫法测定各组血清ET、抵抗素水平.结果:单纯糖尿病组和DPN组血清ET、抵抗素水平均显著高于对照组(P<0.05),而DPN组ET、抵抗素水平显著高于单纯糖尿病组(P<0.05)0直线相关分析发现,2型糖尿病患者血清抵抗素水平与ET呈正相关(r=0.436,P<0.01).Logistic回归分析发现病程、HbAlc、血清ET和抵抗素水平是与DPN发生相关的独立危险因素.结论:2型糖尿病患者血清ET、抵抗素水平与DPN密切相关;患者血清ET、抵抗素水平异常增高是可能导致DPN发生的危险因素.
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COX-2代谢产物与重症肝炎的表达关系
目的:检测重症肝炎患者血清中PGs代谢产物的水平,探讨COX-2与重症肝炎的关系,进一步指导临床对重症肝炎的预测及治疗.方法:采用双抗体夹心ELISA法检测50例重症肝炎患者和25例正常对照血清中PGs代谢产物TXB2,6ketoPGFla的水平.结果:急性,亚急性和慢性重症肝炎患者血清TXB2和6-keto-PGFIα及T/K的表达水平均明显高于对照组(P<0.01),急性、亚急性和慢性重症肝炎患者各组,TXB2和6ketoPGF1α的表达水平无统计学差异.结论:COX-2在重症肝炎的发生发展中起着一定的作用,检测重症肝炎患者血清TXB2,6-keto-PGF1α的水平和T/6-K比值对监测重症肝炎患者病情转归和预后有重要临床意义.
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肿瘤转移相关蛋白1表达的降低在银屑病发病中的可能作用
目的:探讨肿瘤转移相关蛋白1在银屑病发生发展过程中的作用及其临床价值.方法:免疫组化方法检测36例银屑病组织和12例正常皮肤组织中肿瘤转移相关蛋白1(MTAI)的表达水平;并分析MTAI与银屑病临床病理特征的关系以及两者之间的相关性.结果:银屑病中MTAI蛋白表达阳性率为22.2% (8/36),明显低于正常皮肤组织(100%,P＜0.05).结论:结果提示MTAI的表达与银屑病密切相关,提示MTA1表达的降低可能是银屑病发展中的一个关键步骤.
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抗HCV HVR1模拟合成肽单克隆抗体的制备及特性鉴定
目的:制备抗-HCV高变区I(HVR1)合成肽单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定.方法:以固相合成的HCV HVR1合成肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联后,免疫8周龄的BALB/c小鼠.采用杂交瘤技术,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制备抗-HCV HVR1 mAb.经HAT,HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后,用相关的试剂盒鉴定小鼠mAb的Ig亚类;经中和抑制后用ELISA法检测mAb的特异性:用间接ELISA法检测mAb腹水的效价及相对亲和常数.结果:获得1株可分泌抗-HCV HVR1合成肽特异性mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11.该株mAb的Ig亚类为IgG3;腹水效价为3.125x10-5;相对亲和常数为1.0x106 L/mol.该株mAb与HBsAg,HBeAg,HBcAg,HAAg、牛血清白蛋白、酪蛋白和胸腺5肽均无交叉反应,与HCV HVR1合成肽-牛血清白蛋白出现特异性反应.结论:成功地建立了1株可分泌抗-HCV HVR1 mAb的杂交瘤细胞1 A9G9F11,为进一步的实验研究提供了重要的制剂.
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抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定
目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性.方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf75,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白.以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,终获得稳定分泌抗GDF15 mAb杂交瘤细胞株.以间接ELISA法检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测在肝癌患者血清中GDF15表达水平.结果:获得1株稳定分泌抗人GDF15 mAb杂交瘤细胞株,命名为9G3;抗体免疫球蛋白亚类为IgGI,轻链为K型;免疫共沉淀及质谱分析证实抗GDF15 mAb9G3能与肝癌患者血清中GDF15蛋白特异性结合并且GDF15水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高.结论:成功制备了抗人GDF15mAb,为后期肝癌早期诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础.
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人肠道病毒71型VPO蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
目的:原核表达并纯化人肠道病毒71型(EV71)VPO蛋白,免疫豚鼠制备多克隆抗体,并鉴定其用于EV71检测的反应性和特异性.方法:PCR方法扩增VPO基因,构建原核表达质粒pET-VPO并转化大肠杆菌,诱导表达并纯化VPO重组蛋白,免疫豚鼠制备抗VPO多克隆抗体,ELISA方法检测抗VPO抗体效价,细胞免疫荧光和Western blot方法鉴定抗体特异性.结果:VPO重组蛋白在大肠杆菌BL21中高效表达,制备的抗VPO抗体效价为1:106.细胞免疫荧光及Western blot检测结果显示,抗VPO多克隆抗体可以识别原核表达及EV71感染细胞中的VPO蛋白.结论:原核表达了EV71的VPO蛋白并制备出抗VPO多克隆抗体,为EV71的临床诊断、疫苗开发和分子病毒学研究提供了新的研究工具和手段.
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蓝藻抗病毒蛋白-N的制备、生物活性鉴定及其多克隆抗体的制备和修饰
目的:纯化CVN重组蛋白,检测其抗病毒活性,制备CVN多克隆抗体,并对其进行纯化和修饰.方法:利用两步Ni-NTA亲和层析和一步SUMO酶切制备CVN抗原,CPE法观察其抗病毒活性,活性抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot鉴定其效价和特异性,抗血清经硫酸铵初步沉淀和DEAE离子交换层析获得纯化抗体,纯化抗体通过辣根过氧化物酶(HRP)标记获得修饰抗体.结果:纯化获得纯度达95%以上且具有明显抗流感病毒作用的非融合CVN,利用所得CVN抗原成功制备CVN多克隆抗体,酶联免疫分析显示其效价达到1:16000以上,Western blot分析表明其具明显特异性.抗血清经盐析和DEAE离子柱层析后获得效价为1:6400高纯度纯化抗体,经HRP修饰后获得具有较高生物活性的标记抗体.结论:获得高纯度,高效价兔抗CVN多克隆抗体,以及HRP标记的兔抗CVN多克隆抗体,为后续研究奠定了基础.
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免疫耐受机制的研究进展
免疫系统是机体抵御病原体侵袭,维持内环境相对稳定的必要条件.而淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体,它包括T细胞、B细胞和NK细胞等多种表型和功能各异的细胞.其中,T、B细胞是参与适应性免疫应答的主体,借助二者特异性的抗原识别受体TCR和BCR,机体几乎可以识别一切可能的生化结构,从而应对任何来犯的病原体.然而,如此丰富的TCR和BCR库中亦存在能与自身组织抗原相结合的TCR和BCR.要监控拥有这些自身反应性TCR和BCR的T细胞和B细胞,则依赖于机体免疫耐受机制的建立和维持.现就这方面的研究进展做一综述.
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Cupin家族食物性过敏原表位研究进展
Cupin蛋白家族是一个具有多种功能蛋白的家族,它的进化可以追溯到从古细菌、细菌到真核生物.cupin来源于拉丁语" cupa",是指由至少6个β-折叠片形成的桶状结构[1].根据蛋白中含有cupin结构域的数目而把它们分类成不同的cupin亚群[2].具有两个cupin结构域的蛋白初是在高等植物种子储藏蛋白中发现的.它们分为7S球蛋白三聚体(豌豆球蛋白)和11S球蛋白六聚体(豆球蛋白).7S和11S球蛋白大约有35％~45％的序列相似性,但是在结构上却具有高度的相似性[3].
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运用流式细胞术快速检测汉滩病毒滴度
目的:建立用流式细胞仪快速测定汉滩病毒滴度的方法.方法:汉滩病毒76-118株感染Vero-E6细胞,以汉滩病毒核蛋白单克隆抗体(mAb) 3G1为一抗,FIX标记的羊抗小鼠抗体为二抗,用流式细胞术(FCM)检测阳性细胞率,评价感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率,并与间接免疫荧光法对比.结果:感染后36 h阳性细胞百分率为(10.06±0.42)%,低检测的病毒滴度为100 TCID50/ML.结论:相对于传统的空斑实验及间接免疫荧光滴定法,FCM是一种简单、快速、有效检测汉滩病毒滴度的方法.
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流式微载体技术检测梅毒螺旋体抗体方法的研究
目的:建立流式微载体法(FCMA)测定血清梅毒螺旋体(TP)特异性抗体.方法:对RPR(血浆反应素环状卡片试验)和TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)检测确诊的20例TP患者、14例TP诊断判愈者,19例健康者血清标本分别用FCMA法检测特异性Anti-TP-IgG,Anti-TP-IgM.结果:Anti-TP-IgG和Anti-TP-IgM灵敏度在TP组分别为100%和75.0%,在TP诊断判愈组分别为100%和57.1%;特异度分别为100%和94.7%.Anti-TP-IgG和Anti-TP-IgM的荧光强度均值在TP组分别为598.5和94;在梅毒诊断判愈组的分别为275.3和49.6.结论:Anti-TP-IgG对TP诊断的灵敏度和特异度均为100%,高于anti-TP-IgM.两种抗体滴度在治疗过程中均呈下降趋势,到诊断判愈时约下降50%.该方法为梅毒血清学检测提供了新途径.
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兔不同部位单核/巨噬细胞的分离、培养和鉴定
目的:建立兔不同部位单核/巨噬细胞(Mφ)的分离、培养和鉴定的方法,并在体外培养情况下研究其形态、生长特性及生理功能的差异.方法:6只健康新西兰兔以Fi-coil-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单核细胞(MO),以灌洗法分离肺泡巨噬细胞(AM)和腹腔巨噬细胞(PM),以酶消化法十Percoll密度梯度法分离肝脏枯否氏细胞(KC).在光镜和透射电镜下观察形态学及微观结构的差异,采用墨汁吞噬试验及免疫细胞化学方法分别测定吞噬功能和表型的表达情况.结果:同一个体来源的4个部位贴壁细胞具有单核/巨噬细胞的形态学特征及免疫表型,有较强的吞噬能力,且表现出一定的差异性.墨汁吞噬功能:AM > PM,KC > Mo,MAC387表达:KC > AM > PM > Mo.结论:同一个体不同部位兔单核/巨噬细胞的功能及表型存在异质性.
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百合多糖对人肝癌HePG2细胞CyclinD1和COX-2的影响
目的:研究百合多糖(LP)对脂多糖(LPS)诱导的HePG2细胞增殖抑制作用的机制.方法:培养HePG2细胞,用LPS刺激8h后加入不同浓度的百合多糖,应用MTT法检测百合多糖对HePG2细胞增殖的影响;用Western blot和细胞免疫组化检测HePG2细胞中CyclinD1和Cox-2蛋白的表达;用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡情况.结果:10mg/L LPS可诱导HePG2细胞明显增殖(P<0.01),细胞中CyclinD1和Cox-2表达均明显升高(P<0.01,P<0.05).大剂量(1g/L)、中剂量(0.5g/L)百合多糖干预后,明显抑制LPS诱导的HePG2细胞增殖(P<0.01),促使HePG2细胞G0/G1比例明显增加,细胞中CyclinD1明显降低(P<0.01,P<0.05),而对Cox-2无影响.结论:百合多糖可能通过降低CyclinD1的表达抑制HePG2细胞增殖.
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氯霉素磁分离酶联免疫(MEIA)检测方法的建立
目的:采用磁分离酶联免疫分析法(MEIA)建立定量检测氯霉素(CAP)的一种高灵敏度方法.方法:采用免疫竞争法,用异硫氰酸荧光素(FITC )标记抗CAP抗体,碱性磷酸酶(AP)标记CAP,以羊抗FITC抗体包被的免疫磁珠作为固相分离载体,单磷酸酚酞做显色底物,建立检测CAP的MEIA法.结果:成功建立了检测CAP的MEIA法,检测时间为40 min,检测灵敏度为0.03μg/L,线性范围为0.1～8.1μg/L,批内变异系数(CV) 3.9%-5.3%,批间CV 4.8%-8.1%,回收率为97%～101.5%,与国标方法液相色谱一串联质谱法的检测结果对比,相关系数r=0.9817.结论:检测CAP的MEIA法的灵敏度及准确率高、检测时间短,为食品中氯霉素残留的监测提供了一种新的免疫分析方法.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
