细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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耐受调节性CD8+NKT细胞体外稳定性的研究
目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的CD8+NKT细胞耐受调节功能的稳定性.方法:超抗原SEB活化并体外扩增的10 d、20d、30 d和冻存效应细胞被用于本研究.以正常C57BL/J鼠脾细胞为对照,将各个效应细胞与刺激剂刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)共同培养72 h,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力.在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加各效应细胞,72 h后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力.体外扩增和冻存的效应细胞与异源鼠脾细胞做混合淋巴细胞培养,MTT法测定细胞的增殖情况.效应细胞用荧光抗体染色,用流式细胞术(FCM)解析NKT细胞亚群.结果:与正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力相比,体外扩增10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞对ConA或LPS的应答反应能力明显降低,细胞增殖的A值分别由正常值0.67和0.61分别下降至0.30和0.31,0.28和0.20,0.26和0.24,以及0.22和0.23(P＜0.05,n=3).效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述刺激剂ConA或LPS的应答反应,分别由正常值0.67和0.61下降至0.33和0.39,0.30和0.43,0.36和0.43,以及0.26和0.29(P＜0.05,n=3).效应细胞与异源鼠脾细胞反应与对照组相比明显的降低,分别由正常值0.70下降至20d的0.42,30 d的0.42以及冻存效应细胞的0.54(P＜0.05,n=3).在这群效应细胞中,主要是CD8+NKT细胞,由原始的0.36%增加到41.59%(P＜0.05,n=3).结论:耐受调节性CD8+NKT细胞可以在体外进行传代培养,并且这些传代培养细胞的耐受调节功能依然存在.
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T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究
目的:探讨T-bet质粒局部应用对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤的干预作用.方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右肩部皮下,制备荷瘤小鼠模型;瘤内分别注射PIRES-eGFP/mT-bet(m指小鼠)、PIRES-eGFP质粒和PBS,观察各组小鼠存活时间,肿瘤体积的变化;HE染色观察肿瘤组织的病理变化;Western blot检测肿瘤组织T-bet的表达,QRT-PCR检测肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平.结果:瘤内注射T-bet质粒载体后Western blot检测发现,肿瘤组织T-bet蛋白表达显著高于对照组;QRT-PCR结果显示,肿瘤组织T-bet和IFN-,γ的mRNA水平呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).T-bet质粒干预组小鼠肿瘤生长明显缓慢,存活期延长.HE染色组织病理观察可见mT-bet干预组小鼠局部组织淋巴细胞大量浸润.结论:T-bet基因局部注射可延缓小鼠肺癌Lewis皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答能力,增强对已发肿瘤的生长限制作用,为T-bet应用于肿瘤治疗积累试验数据.
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妊娠相关蛋白A的纯化及鉴定研究
目的:对比G200凝胶过滤、反向亲和层析、DEAE离子交换等不同的方法纯化孕妇血清中的妊娠相关蛋白A(PAPP-A),为下一步的临床应用研究奠定基础.方法:把正常男性血清过G200凝胶过滤纯化后免疫家兔得到兔抗人抗体,连接溴化氰活化G25凝胶制备反向免疫层析柱.收集足月孕妇血清,离心后依次应用G200凝胶过滤、反向亲和层析及离子交换层析柱纯化.用ELISA检测试剂盒检测各个洗脱峰的PAPP-A活性,SDS-PAGE检测纯化蛋白的纯度.结果:稀释兔抗人血清抗体至浓度为1∶16,双向扩散有明显沉淀线,可以用于制备抗体,蛋白A亲和层析洗脱pH3.0洗脱峰,G200凝胶过滤第一个洗脱峰,反向亲和层析的0.1 mol/LPBS洗脱峰,离子交换层析的0.45mol/L NaC1洗脱峰中PAPP-A活性均较高.SDS-PAGE结果显示,孕妇血清用G200凝胶过滤处理后杂蛋白条带较多,反向亲和层析或者DEAE分别处理后同样存在杂蛋白条带,三种纯化方法结合应用杂蛋白条带明显减少,Western blot鉴定显示三种方法结合应用后纯化蛋白样品条带单一.结论:本研究用三种层析方式相结合的方法得到纯度较高的PAPP-A抗原,鉴定显示可以到达制备单克隆抗体(mAb)的要求,为mAb的制备以及酶联免疫试剂盒的建立奠定了基础,使PAPP-A在临床应用方面前景广阔.
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p21对MAVS通路的调节
目的:研究MAV S与p21的相互作用,对MAVS通路的调节.方法:我们首先通过PCR的方法克隆了全长的p21基因,然后通过co-IP方法进一步验证p21与MAVS是否可以发生相互作用,接下来通过荧光素酶报道基因的方法研究p21对MAVS通路的影响.结果:通过co-IP发现p21与MAVS可以发生相互作用,另外p21降低MAVS活性.结论:成功地克隆了p21基因,p21与MAVS在293T细胞内可以发生相互作用,p21可以抑制MAVS激活NF-kB途径和IFN-β途径的活性,为进一步研究p21在MAVS通路中所起的作用奠定基础.
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脂肪来源的干细胞移植对大鼠脑缺血后TGF-β1表达的影响
目的:探讨脂肪来源的干细胞(ADSC)移植促进大鼠脑缺血后微血管生成作用的可能机制.方法:108只成年雄性Sprague-Darley大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、局灶性脑缺血组(MCAO组)、溶剂对照组(vehicle组)和ADSC治疗组(ADSC组),采用改良的Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,ADSC移植前用CFSE标记,ADSC组于造模成功1 d后经侧脑室注射入30 μL的ADSC细胞悬液,内含1×106细胞,vehicle组则注射同等剂量的PBS.术后4d、7 d和14 d分批断头取脑,检测缺血区脑组织TGF-β1表达的变化.结果:ADSC组术后4 d、7 d和14 d脑组织中TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平均较MCAO组和vehicle组明显增高,同时显示脑缺血后经侧脑室移植的ADSC能够存活并分泌生长因子TGF-β1.结论:ADSC移植促进脑缺血大鼠缺血区微血管生成的机制可能与促进TGF-β1的表达有关.
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氧化应激诱导内皮细胞凋亡与PI3k/Akt-Bcl-2通路的关系
目的:探讨氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞凋亡与细胞存活信号通路PI3k/Akt-Bcl-2的关系.方法:不同浓度(0、50、100、200、400、800 μmol/L)第三丁基过氧化氢(tBHP)处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)1～4 h,MTT法检测内皮细胞生存率,Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察细胞凋亡率.再选用佳t-BHP浓度(100 μmol/L)干预HUVEC不同时间(0、0.5、l、2、4、6 h),Western blot测Akt、p-Akt、Bcl-2以及caspase-3在各时间点的表达情况.结果:MTY显示随着t-BHP作用浓度的增加和时间的延长,HUVEC生存率逐渐下降,并呈现一定的量效和时效关系;Hoechst/PI染色荧光显微镜观察证实t-BHP能够诱导HUVEC发生凋亡.t-BHP浓度在50～200 μmol/L时,随着其作用浓度的增加细胞凋亡率明显增加(8.2%±0.3%、37.2%±0.3%、55.6%±0.2%,P＜0.05),大于200 μmol/L凋亡率反而下降(44.9%±0.2%、36.8%±0.4%,P＜0.05);Western blot结果显示caspase-3的活化片段在4 h表达量高.p-Akt在30 min时表达达高峰,随后降低.Bcl-2表达呈现递减的趋势.结论:t-BHP诱导caspase依赖的HUVEC凋亡,这一病理过程与p-Akt的迅速减少和Bcl-2的减少有关.
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瘦素对大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响
目的:探讨瘦素对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响及其可能的作用机制.方法:体外培养大鼠的ASMCs,分别用RT-PCR和Western blot测定ASMCs中瘦素受体mRNA和该细胞上瘦素受体蛋白的表达.不同浓度的瘦素(0～100 μgL)干预培养的ASMCs不同时间(1～72 h)后,以CCK-8法测定ASMCs的增殖情况.不同浓度的瘦素作用于ASMCs 48 h后,Western blot测定磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)的表达.结果:不同浓度的瘦素作用不同时间后,均可促进大鼠ASMCs增殖,并呈浓度依赖性(r=0.837,P＜0.01)和时间依赖性(r=0.874,P＜0.01).Western blot的结果显示,不同浓度的瘦素干预后,大鼠ASMCs中p-ERK、PI-3K蛋白的表达较对照组显著增加(P＜0.05),并与瘦素的浓度呈正相关(前者r=0.793,P＜0.01,后者r=0.746,P＜0.01).结论:大鼠ASMCs表面有瘦素受体表达.瘦素可促进体外培养的大鼠ASMCs增殖,其机制可能与激活p-ERK和PI-3K有关.
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LRG介导内毒素预处理诱导的脑保护作用
目的:通过测定不同组大鼠脑缺血/再灌注损伤模型中脂多糖应答分子(LRG)表达水平的变化与炎症因子含量及大鼠脑梗死容积之间的关系,探讨内毒素重复预处理诱导脑保护效应的机制.方法:将66只SD大鼠随机分为假手术组、缺血对照组和内毒素预处理组,每组22只.采用戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,采用大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO)制备大鼠大脑缺血/再灌注模型.采用免疫印迹法结合图像分析软件半定量计算LRG分子表达水平的变化,酶联免疫法测定脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的含量,用氯化三苯四唑(TTC)染色法和计算机图像分析系统计算大鼠大脑梗死容积.结果:相比于缺血对照组,内毒素重复预处理组大鼠大脑LRG分子表达水平明显上调,TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低,IL-10的含量明显增高,同时,内毒素预处理组较缺血对照组神经功能评分明显升高,脑梗死容积明显缩小.结论:内毒素重复预处理通过上调LRG分子表达,促进致炎-抑炎因子之间的动态平衡介导脑保护作用.
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TNF刺激肥大细胞IL-6分泌的信号转导通路
目的:检测TNF对肥大细胞IL-6、IL-10分泌和组胺释放的影响并探讨其可能的信号转导途径.方法:用不同浓度TNF激发肥大细胞系P815后收集细胞和上清,细胞用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测信号转导通路蛋白ERK、p38、和STAT3磷酸化水平,上清用ELISA检测组胺、IL-6和IL-10的水平.结果:ELISA结果显示TNF促进P815肥大细胞IL-6分泌(P＜0.05),但对IL-10分泌和组胺释放无明显影响.ERK信号转导通路抑制剂PD98059和U0126抑制TNF引起的P815肥大细胞IL-6分泌(p＜0.05),而p38信号转导通路抑制剂SB203580和STAT3信号转导通路抑制剂AG490不能抑制TNF引起的P815肥大细胞IL-6分泌.CASE结果显示ERK信号转导通路抑制剂PD98059,U0126抑制TNF引起的P815肥大细胞内ERK蛋白磷酸化(P＜0.05)而p38信号转导通路抑制剂SB203580和STAT3信号转导通路抑制剂AG490不能抑制TNF引起的P815肥大细胞内p38和STAT3蛋白磷酸化.结论:TNF刺激小鼠肥大细胞P815分泌IL-6可能与ERK信号转导通路的激活有关的.
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人组蛋白H1基因的原核表达、纯化及其活性检测
目的:克隆人组蛋白H1全长编码区基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化以及活性检测.方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人组蛋白H1全长编码区基因,将其克隆到pGEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达与纯化产物.结果:从人乳腺文库中扩增获得约650 bp的DNA片段,并成功克隆至pGEX-KG载体上,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出相对分子质量(Mr)约为52 000的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-H1,激酶实验证明该蛋白活性良好.结论:成功获得了活性良好的重组蛋白GST-H1,为后续研究细胞周期蛋白调控奠定了实验基础.
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rSj26-Sj32融合蛋白用于慢性日本血吸虫病的诊断研究
目的:探讨rSj26-Sj32融合蛋白用于慢性日本血吸虫病的诊断价值.方法:用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原(SjAWA)作为包被抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和dipstick三种方法检测慢性日本血吸虫病患者血清特异性IgG抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病和囊型棘球蚴病患者以及健康人血清作为对照.结果:rSj26-Sj32融合蛋白通过三种方法检测慢性日本血吸虫病的敏感性分别为95.00%、92.50%和92.50%;特异性分别为97.67%、95.35%和97.67%.结论:rSj26-Sj32融合蛋白可用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断.
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维药祖发奇尼对哮喘大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3mRNA表达水平的影响
目的:研究维吾尔药祖发奇尼对哮喘大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平的影响,探讨祖发奇尼治疗哮喘的免疫机制.方法:将大鼠随机分为正常对照组,哮喘模型组,地塞米松治疗组及祖发奇尼高、低剂量治疗组.采用卵清白蛋白(OVA)、氢氧化铝[Al(OH)3]及百白破疫苗联合致敏和OVA生理盐水雾化激发的方法制备哮喘模型.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平.结果:正常对照组与哮喘模型组、哮喘模型组与各治疗组大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平差异均有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,祖发奇尼治疗后哮喘大鼠肺组织GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平显著降低(P＜0.05),而T-bet的表达水平显著增高(P＜0.05);祖发奇尼高剂量治疗组大鼠肺组织GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平明显低于低剂量治疗组(P＜0.05),而T-bet的水平明显高于低剂量治疗组(P＜0.05).各组大鼠肺组织T-betmRNA和GATA-3 mRNA表达水平呈负相关关系(r=-0.696),STAT-3mRNA表达水平与T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达水平分别呈负、正相关(r=-0.767,r=0.772),P值均＜0.05.结论:祖发奇尼可能在转录水平对Th1、Th2和Th17的分化进行调节,发挥抗炎作用.
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血清IFN-γ及RANTES水平与兔动脉粥样硬化易损斑块的相关性
目的:研究血清IFN-γ及调节激活正常T细胞表达和分泌趋化因子(RANTES)水平与家兔动脉粥样硬化易损斑块之间的相关性.方法:30只雄性家兔随机分为3组:①空白对照组(control组,10只),普通饲料喂养12周;②稳定斑块组(AS组,10只),高脂饮食(含胆固醇1%和猪油5%)喂养12周;③易损斑块组(VAP组,10只)高脂饮食喂养12周,于处死前24 h和48 h分别给予两次药物触发.测定各组第0周、12周血脂,12周处死时检测兔血清INF-y和RAN-TES水平,Masson染色法计算校正的斑块面积、易损指数及其与血清炎症因子的相关系数.结果:AS组和VAP组血清IFN-γ水平(2.95±0.92;3.77±0.51)均显著高于control组(1.52±0.23,P＜0.01),VAP组血清IFN-γ明显高于AS组(P＜0.01).AS组血清RANTES水平较Control组无统计学差异(26.01±4.45vs25.88±4.22;P＞0.05),VAP组血清RANTES水平(96.48±11.22)明显高于AS组和Control组(P＜0.01).VAP组校正的斑块面积显著高于AS组(51.26±12.58vs31.26±8.76,P＜0.01),VAP组易损指数显著高于AS组(7.25±1.87vs3.14±1.22,P＜0.01).AS组和VAP组血清IFN-y、RANTES水平分别与校正的斑块面积和易损指数呈正相关(P＜0.05).结论:可能是两个监测动脉粥样硬化斑块易损性的炎症标记物.IFN-γ和RANTES血清表达水平与斑块的稳定性有一定关系.
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可溶性DC-SIGN对T淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的调节作用
目的:研究可溶性DC-SIGN(sDC-SIGN)对T细胞增殖及分泌细胞因子的影响.方法:无菌分离人外周血单个核细胞,免疫磁珠负选法分离纯化T细胞.以Con A、anti-CD3/anti-CD28单抗与sDC-SIGN共培养T细胞,流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞的增殖,ELISA检测培养上清中细胞因子的含量.结果:培养72 h时,对于Con A诱导的T细胞增殖,sDC-SIGN使CD4+、CD8+T细胞的增殖率分别由(11.42±0.20)%和(12.15:±0.39)%下降到(2.61±0.05)%和(1.62±0.04)%(P＜0.05);sDC-SIGN使Con A诱导T细胞配体上清中IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-17A的含量(ng/L)分别由680.27±5.86、29.37±0.44、101.82±0.03、60.46±0.34下降到348.54±0.91、22.45±0.05、63.77±0.01、23.74±0.03(P＜0.05),却使IL-6的含量(ng/L)由85.17±0.62增高到460.57±12.67(P＜0.05).对于anti-CD3/anti-CD28单抗诱导的T细胞增殖和细胞因子产生,sDC-SIGN也具有类似效应.此外,sDC-SIGN还下调Con A所刺激T细胞表达早期活化标志CD69.结论:sDC-SIGN可抑制T细胞增殖和影响细胞因子分泌,提示sDC-SIGN可能在T细胞介导免疫的调节中具有重要意义.
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脂肪来源的干细胞移植对脑缺血大鼠神经轴突再生的影响
目的:探讨脂肪来源的干细胞(ADSC)移植对脑缺血大鼠神经轴突生长以及神经胶质酸性蛋白(GFAP)、神经突蛋白(Neuritin)、神经微丝蛋白200(NF-200)表达的影响.方法:54只清洁级成年雄性SD大鼠,随机分为3组:假手术组(Sham组)、模型组(MCAO组)及MCAO+ADSC治疗组(ADSC组),每组18只.采用改良Zea-Longa线栓制法大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,ADSC移植前用DAPI标记,ADSC组于造模成功1 d后经侧脑室注射入ADSC(1×106),分别于术后7 d、14 d、28 d观察其恢复情况,并断头取脑,通过免疫荧光、Western blot法检测脑缺血组织中GFAP、Neuritin、NF-200表达情况.结果:ADSC组缺血周边区脑组织中能观察到DAPI染色的阳性细胞;ADSC组与MCAO组相比在各个时间点脑组织中GFAP阳性细胞表达明显降低(P＜0.05),神经突蛋白和神经微丝蛋白200表达明显增高(P＜0.05).结论:ADSC移植后可引起脑缺血后期组织中Neuritin、NF-200有效表达,并抑制GFAP阳性细胞增生,促进了神经轴突再生和修复.
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肺性脑病患者血清神经元特异性烯醇化酶和S-100β蛋白检测的意义
目的:观察肺性脑病患者血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和脑特异性蛋白(S-100β)的变化,探讨其临床意义.方法:60例健康体检者为正常对照组,60例慢性阻塞性肺疾病(COPD)并发呼吸衰竭无肺性脑病患者为病例对照组,60例COPD并发肺性脑病患者为病例组.病例组又分为轻型、中型、重型3组.分析比较各组患者血清NSE、S-100β的变化.结果:病例对照组的NSE、S-100β高于正常对照组,病例组NSE、S-100β明显高于病例对照组;病例组的中重型患者血清NSE、S-100β含量高于轻型组(P＜0.05).结论:血清NSE和S-100β的含量与肺性脑病病情呈正相关,可作为判断病情、估计预后的重要指标.
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新生儿溶血病Rh血型免疫性抗体检测的分析
目的:探讨母婴Rh血型不合免疫性抗体的特异性及其效价对新生儿溶血病(HDN)的影响.方法:采用血型血清学检测技术对母婴进行ABO及Rh血型鉴定,对15例母婴Rh血型不合HDN患儿的血标本进行直接抗球蛋白试验、抗体游离试验和抗体放散试验,采用间接抗球蛋白试验对患儿及其母亲的血清进行ABO以外血型不规则抗体筛选、特异性鉴定及效价测定.结果:在15例RhHDN患儿中检出抗-D4例(26.7%),抗-E 6例(40.0%),抗-cE 3例(20.0%),抗-Ce 2例(13.3%);Rh血型免疫性IgG抗体效价为1∶8～1∶128.结论:产前对孕妇夫妇进行ABO、Rh血型鉴定及Rh血型免疫性抗体筛查及特异性鉴定,产后对患儿及时进行检测诊断和治疗,对减少HDN患儿的受害程度和保证优生优育均有重要的临床意义.
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IgA肾病患者血清瘦素水平变化及其临床意义
目的:探讨IgA肾病患者血清中瘦素(leptin)水平变化的特点及其临床意义.方法:选取40例IgA肾病患者,按照是否需要透析治疗标准划分为A组(无需透析治疗)、B组(需长期透析治疗)及C组(健康体检者),每组各20例(n=20).收集晨起空腹血清(B组外加透析前后的血清),采用竞争性放射免疫分析法(RIA)检测leptin的水平并分析其临床意义.结果:A、B、C组血清leptin的平均水平分别为(4.98±0.78)μg/L、(6.45±0.76)μg/L及(3.96±0.56)μg/L.A、B组血清leptin的平均水平显著高于正常对照C组(P＜0.05);B组血清Leptin的平均水平明显高于A组(P＜0.05);B组患者透析前后血清leptin的平均水平分别为(6.50±0.86)μg/L及(5.21±0.66)μg/L,透析后血清leptin 的平均水平显著低于透析前(P＜0.05).结论:IgA肾病患者存在血清leptin的水平明显升高,血液透析能降低其血清水平,提示leptin可能在IgA肾病发生发展中起着重要的作用.
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急性冠脉综合征患者外周血中F0xp3+调节性T细胞的变化
目的:探讨急性冠脉综合征(ACS)患者外周血Foxp3+(包括CD4+Foxp3+和CD4+CD25+Foxp3+)调节性T细胞(Treg)的变化与意义.方法:分别采用流式细胞术(FCM)、实时定量PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)检测44例ACS患者,20例稳定性心绞痛(SA)患者和24例对照组患者外周血Treg细胞百分率,转录因子Foxp3的mRNA表达和血浆TGF-β1的浓度.结果:与对照组患者和SA组患者相比,ACS组患者外周血中CD4+Foxp3+、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分率,Foxp3mRNA的表达和血浆TGF-β1浓度明显降低(P＜0.05),而CD4+CD25+Treg细胞的百分率在三组之间并无显著性差异.结论:ACS患者外周血Foxp3+Treg 数量和/或功能的下调,Foxp3+Treg的变化可能与斑块的不稳定密切相关.
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维生素D受体Fok I基因多态性对SLE患者维生素D受体表达的影响
目的:检测维生素D受体(VDR)Fok I基因多态性与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性,以及对SLE患者VDRmRNA表达的影响.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测VDR Fok I基因位点及基因型在271例SLE患者和130例健康人中的分布情况;并应用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测VDR mRNA在48例SLE患者和38例健康对照组的表达.结果:VDRFokI多态性等位基因F和f频率在SLE组和健康对照组有统计学差异(P=0.001),携带F等位基因个体发生SLE的相对危险度(OR)为1.630(95%CI=1.210-2.196,P=0.001);FF纯合子基因型频率在SLE组也明显高于健康对照组(42.8%vs25.4%,x2=11.417,P=0.001).同时,携带F等位基因的SLE患者(FF基因型和Ff基因型患者),浆膜炎发生率(P=0.001)及抗ds-DNA抗体(P=0.001)、抗Sm抗体(P=0.047)和抗组蛋白抗体(P=0.001)阳性率较F等位基因阴性SLE患者(ff基因型患者)明显升高.VDR mRNA在48例SLE患者表达下调,其⊿Ct值(⊿Ct值越大,表达量越小)为9.26±2.37,高于健康对照组的7.82±3.05(P=0.026).而在SLE患者,携带F等位基因患者的VDR mRNA的⊿Ct值明显高于F等位基因阴性患者(10.54±1.88vs7.15±3.78,P=0.019).结论:VDR Fok I多态性与SLE发病易感性有关,而且携带F等位基因的患者更容易发生浆膜炎和产生抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体等自身抗体,此可能与F等位基因下调SLE患者的VDR mRNA表达有关.
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胃黏膜树突状细胞与幽门螺杆菌相关性胃炎的关系
目的:研究胃黏膜树突状细胞在幽门螺杆菌(Hp)相关性胃炎发生中的作用.方法:内镜下收集正常/慢性胃炎胃黏膜标本,快速尿素酶试验、C14呼气试验和Warthin-Starry银染色检测Hp,Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离胃黏膜标本中的单个核细胞,进一步采用磁珠选技术分离HLA-DR+DCs,分析DCs数量与Hp分布密度和胃黏膜炎症程度的关系.结果:Hp阴性正常胃黏膜中巨噬细胞平均含HLA-DR+DCs4.93%,Hp阳性正常胃黏膜中HLA-DR+DCs含量为17.93%,明显高于Hp阴性组(P＜0.01);胃黏膜DCs数量与Hp分布密度成正相关(P＜0.05);胃黏膜炎症程度为中度和重度的标本中HLA-DR+DCs含量明显高于轻度(P＜0.05),中度和重度相比差异无统计学意义.结论:成功分离了胃黏膜DCs,并证实DCs与Hp相关性胃炎发生的早期阶段密切相关.
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TNF-α单核苷酸多态性与中国北方汉族人类风湿关节炎的相关性研究
目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因单核苷酸多态性(SNP)与中国北方汉族人类风湿性关节炎(RA)易感性的相关性.方法:选取98例RA和100例正常对照者作为研究对象,应用Sequenom飞行时间质谱技术,对TNF-α基因的SNP点rs1800629(-308 A/G)、rs361525(-238 A/G)、rs1799724(-850 C/T)和rs1800610(+489 C/T)进行基因分型,用SPSS 11.5软件对数据资料进行统计分析.结果:RA患者TNF-α多态性位点rs1799724、rs1800610和rs361525的基因型频率及等位基因频率与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而TNF-α rs1800629的基因型频率及等位基因频率与正常对照组比较有明显的统计学差异(P＜0.05).TNF-α rs1800629 G等位基因及GG基因型可以提高RA的发病风险性.结论:NF-α基因SNP位点rs1800629可能与北方汉族人RA发病易感性相关.
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血清p185蛋白及VEGF-C水平在乳腺癌诊断中的应用及生存质量影响分析
目的:探讨免疫PCR检测的预测应用,检测血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达水平及意义,以及乳腺癌患者生存质量的主要影响因素并总结研究方法.方法:本院2007-05/2010-04收治的136例乳腺癌患者(实验组)的临床资料进行了回溯式分析并总结研究,并与同期收治的132例乳腺良性肿瘤患者(对照组)的生存质量进行比较.结果:两组患者血清p185蛋白的免疫检测发现,p185蛋白阳性表达对乳腺癌的临床诊断及预后存在统计学意义.血清p185阳性患者80.5%可发生复发或转移,显著高于阴性组的12.5%(P＜0.05).实验组患者术前血清VEGF-C的水平显著高于对照组患者(P＜0.05),但治疗1个月后对照组VEGF-C的水平较治疗前有显著降低(P＜0.05).结论:检测血清P185蛋白以及VEGF-C的水平对于乳腺癌患者的诊断、治疗及预后判断均有显著的重要意义.p185蛋白阳性患者易复发,且VEGF-C的水平术后降低越多者治疗效果越显著,生存质量越好.
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鼠抗人B7-H4单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定
目的:研制鼠抗人B7-H4分子的单克隆抗体(mAb)并鉴定其生物学特性.方法:以高表达人B7-H4分子的转基因细胞L929/B7-H4为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴瘤杂交技术,经免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选、多次克隆化培养,获得两株可特异分泌鼠抗人B7-H4分子mAb的杂交瘤细胞株.采用快速定性试纸分析法鉴定mAb所属的Ig亚类.用Dot-blot、Western blot鉴定mAb的特异性,竞争结合抑制实验鉴定mAb所识别的抗原结合位点,T细胞增殖抑制阻断实验对mAb的生物学功能进行初步的鉴定.结果:获得两株持续、稳定地分泌抗B7-H4 mAb的杂交瘤细胞,分别命名为1F10和2B2.Dot-blot的结果显示,两株mAb均能特异性识别B7-H4分子.Western blot检测显示,mAb 2B2可以特异性识别B7-H4分子,而mAb 1F10则不能识别.位点竞争实验表明,两株mAb之间,mAb 1F10与商品化的mAb H74之间识别位点不同,mAb 2B2与商品化mAb识别位点相近.T细胞增殖抑制阻断试验显示,这两株mAb均能一定程度地阻断B7-H4对T细胞的抑制作用.结论:成功地获得两株抗人B7-H4分子的mAb,为进一步研究B7-H4分子的生物学功能提供了有效的工具.
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结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的:制备抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb.方法:采用杂交瘤技术,获得了11株针对结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb杂交瘤细胞株,对其中的5株进行了小鼠腹水的制备及相关鉴定.结果:5株mAb的腹水效价达到1∶32 000～1∶512 000,将这5株mAb进行了纯化,纯化后纯度大于90%,抗体亚类(型)均为IgG1/k型,ELISA结果显示制备的mAb与结核分枝杆菌Rv3881c抗原可发生特异反应.结论:制备了抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb,为结核分枝杆菌Rv3881c生物学功能的研究奠定基础.
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抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体的表达及初步活性检测
目的:构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/抗CD3双特异单链抗体(bscVEGFR2×CD3),及亲和活性测定.方法:设计抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体基因序列,由公司合成并亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),筛选高效分泌表达bscVEGFR2×CD3的克隆株.表达产物经Ni-NTA柱纯化,120g/L SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定.应用流式细胞术(FCM)检测生物学活性.结果:bscVEGFR2×CD3重组表达载体测序证实序列正确.bscVEGFR2×CD3能够在CHO细胞中进行分泌表达,筛选出6株高表达克隆株.120g/L SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)约56 000有1条带,与预期相符,Western blot证明anti-His抗体能与这条蛋白条带发生特异性结合.FCM检测bscVEGFR2×CD3能与CD3+jurkat细胞和VEGFR2+A375细胞特异性结合.结论:成功构建和表达抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体,该抗体具有与VEGFR2、CD3特异性结合的免疫学活性.
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人源N0dal成熟肽的原核表达及多克隆抗体的制备
目的:表达人Nodal成熟肽,免疫小鼠制备其多克隆抗体.方法:构建原核表达质粒pReceiver-hNodal,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达His6-hNodal融合蛋白,融合蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后,回收融合蛋白,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.通过间接ELISA、Western blot和免疫细胞化学染色和间接免疫荧光等方法检测抗体的效价和特异性.结果:在大肠杆菌中高效表达了与预期理论值大小相符的Mr约13 000的人Nodal成熟肽的融合蛋白,通过免疫小鼠制备的多克隆抗体效价高、特异性强.结论:成功制备了抗人Nodal成熟肽多克隆抗体,为进一步深入研究Nodal在肿瘤发生发展过程中的生物学功能奠定了基础.
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α1-抗胰蛋白酶在胰岛移植和Ⅰ型糖尿病中的作用
世界范围内,糖尿病患病率呈急剧上升趋势,而Ⅰ型糖尿病的患病率每年就增加约2%～5%.Ⅰ型糖尿病是由于T细胞介导的自身免疫破坏β细胞而引起,胰岛β细胞功能持续恶化是一种不可逆的过程.因此,科学家们将目光投向了替代和恢复胰岛β细胞功能治疗上.虽然胰岛细胞移植可以纠正Ⅰ型糖尿病患者的代谢紊乱,在短时间内达到停用胰岛素的目的,但在胰岛移植治疗的各个环节上仍面临供体缺乏、免疫排斥等问题.
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NF-kB信号通路在病毒感染中的作用
因子kB(NF-kB)是一种广泛存在于体内多种细胞的核转录因子.目前已发现NF-kB调节着100多种靶基因的表达,如细胞因子、趋化因子、生长因子、黏附分子、某些急性期反应蛋白以及参与免疫识别的受体和抗原递呈的蛋白质等.这些分子大多数均参与宿主的免疫和炎症反应.
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MicroRNA在免疫系统中的作用
MicroRNAs(miRNAs)是一类新型保守的非编码单链小分子RNA,广泛存在各种生物体中.miRNAs转录后水平调节基因的表达,主要通过结合到特定靶日标mRNA的3′UTRS端,导致蛋白翻译抑制或促进靶mRNA降解.miR-NAs在固有免疫和适应性免疫细胞中通过特定的表达谱调节细胞的分化和功能,其表达和功能失调将导致各种免疫性疾病发生,如癌症和自身免疫性疾病.本文中主要阐述目前miRNAs在免疫系统中的研究及其对各种自身免疫性疾病的影响.
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艾滋病西药治疗及其相关问题研究进展
艾滋病(AIDS)流行形势严峻,据联合国AIDS规划署发布的<2009年全球艾滋病流行情况摘要>,截止2009年l 2月31日,全球共有约3330万HIV感染者,2009年新增感染者约260万、死亡约180万[1].国内外治疗AIDS目前常采用的是高效抗逆转录病毒治疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART),即同时联合应用3种或3种以上抗HIV药物的方法.
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芒果苷对2215细胞MAPK信号通路的影响
目的:通过研究芒果苷对MAPK信号通路的影响,探讨芒果苷抑制HBV在细胞内复制的可能机制.方法:体外培养2215细胞,采用Western blot检测芒果苷对2215细胞MAPK信号转导通路中ERK、JNK、p38蛋白含量及磷酸化水平的影响;采用报告基因实验检测芒果苷对2215细胞内转录因子AP-1活性的影响.结果:芒果苷对2215细胞MAPK信号转导通路中ERK、JNK及p38三种蛋白含量及磷酸化水平均无影响.但可以不同程度的抑制TGF-β诱导的2215细胞MAPK信号转导通路中JNK蛋白的活性,对p38和ERK的活性无明显抑制作用.同时芒果苷可抑制AP-1的转录活性.结论:芒果苷可抑制2215细胞MAPK信号转导通路中JNK蛋白及其下游转录因子AP-1的活性.提示此通路可能是芒果苷抑制HBV在肝细胞内复制的机制之一.
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缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组蛋白的免疫原性
目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价.方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamH I和Xho I双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11.将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以1 mmol/L IPTG 进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定.以表达的GST-EPF11融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,抗体效价用ELISA检测.结果:在大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约35 000的融合蛋白GST-EPF11.ELISA法检测免疫小鼠的抗体血清可达1:12 800.结论:在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,并免疫了小鼠,测定了抗体效价,为下步制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子的单克隆抗体(mAb)奠定了基础.
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人滤泡辅助性T细胞(Tfh)上CD226分子的表达格局
目的:用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析鉴定人滤泡辅助性T(Tfh)细胞,对外周血和扁桃体来源的Tfh上CD226分子的表达格局进行研究,采用免疫组化染色的方法,检测异位淋巴组织来源的生发中心中CD226分子的表达情况.方法:采用密度梯度离心法分离人外周血PBMC;扁桃腺经研磨、200目滤网过滤获取扁桃腺细胞,对两种细胞采用不同荧光素标记的抗CXCR5、CD4及CD226抗体进行染色和FCM分析.常规制备类风湿性关节炎(RA)关节滑膜活检组织石蜡切片,采用免疫组化的方法分析CD226分子的表达格局.结果:外周血及扁桃腺Tfh细胞上可以检测到CD226分子,外周血Tfh上CD226阳性率为(91.88±0.52%),MFI值为201.49±6.2;扁桃腺Tfh上CD226表达阳性率为(90.81±0.69%),MFI值为230.81±8.4,表达密度稍高于其他CD4+T细胞.RA患者关节滑膜组织可以观察到异位生发中心(G,C),并检测到CD226分子的表达.结论:健康人外周血、扁桃腺及RA患者关节滑膜组织中存在不同比例的Tfh细胞,其膜上CD226分子的表达具有独特的格局,该结果为进一步研究其功能提供了思路.
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免疫组化技术标准化的探讨
免疫组织化学技术由Coons首创于1950年,刘彦仿等[1]于1965年在国内首先建立了免疫组织化学技术.该技术经历了4个发展阶段:免疫组织化学各种方法不断建立和发展阶段;推广普及阶段;用于临床病理诊断及广泛应用阶段;该技术标准化、规范化及质量控制阶段.该技术具有很高的特异性、灵敏性、简便性,能将形态和功能代谢相结合,定性、定位和定量相结合,基因水平和蛋白质水平检测相结合,细胞水平和超微结构水平相结合.
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抗AFP单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制及应用
甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)是一种癌胚抗原,在胚胎期由肝细胞和卵黄囊合成并出现在胎儿血清中,出生后血清中AFP的含量很低,正常人血清中的AFP浓度在20μg/L以下.当机体发生原发性肝癌时,肝癌细胞可合成和分泌大量AFP,在癌组织提取液、血清及腹水中均可检出高水平的AFP,现已作为肝癌的标志物,广泛应用于肝癌的普查、诊断、疗效判断和复发的预测[1].
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辛酸-低温乙醇沉淀法纯化小鼠腹水IgM类单克隆抗体
目的:为建立一种简便的,仪器要求不高的,从小鼠腹水中获得高纯度IgM类抗体的纯化方法.方法:先用辛酸在酸性条件下沉淀腹水中的杂蛋白,再在冰浴条件下用-20C预冷乙醇沉淀IgM.结果:用辛酸-低温乙醇沉淀法纯化的IgM抗体纯度＞85%,收率＞80%,而且对抗体活性几乎无影响.结论:辛酸-低温乙醇沉淀法是一种方便获得高纯度IgM抗体的方法.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
