细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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昆明山海棠对CIA大鼠模型中HIF-1α表达的影响
目的:研究昆明山海棠(THH)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型中低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其作用机制.方法:建立CIA大鼠模型,随机分组,治疗组分别采用高、中、低剂量THH每天灌胃1次,连续用药30d.动态观察关节炎指数(AI)及关节的病理改变,用RT-PCR及免疫组化染色法分别检测HIF-1 αmRNA及其蛋白的表达.结果:THH可明显抑制CIA大鼠的足爪肿胀,明显减轻滑膜增殖及炎症反应,HIF-1α表达明显降低.结论:THH通过降低HIF-1α的表达,减轻CIA模型大鼠关节的炎症反应.
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IL-10在反复自然流产人绒毛组织的表达及意义
目的:通过研究白细胞介素-10 (IL-10)在反复自然流产和正常流产人绒毛组织和血清中的表达比较来探讨IL-10与不明原因反复自然流产的相关性及其临床意义.方法:采用免疫组织化学技术和逆转录-聚合酶链反应技术检测35例反复自然流产者(实验组)和35例正常流产者(对照组)人绒毛组织中IL-10的细胞学定位以及在mRNA水平的表达；ELISA法定量分析IL-10在两组血清中的表达.结果:免疫组织化学检测结果显示两组组织中均有IL-10阳性表达,实验组IL-10在人绒毛组织中的阳性表达率低于对照组(P＜0.05).RT-PCR结果显示实验组和对照组均有IL-10表达,对比显示实验组IL-10表达低于对照组.ELISA测定结果显示IL-10在实验组的表达低于对照组.结论:IL-10的表达在实验组早孕绒毛组织细胞学定位及mRNA水平检测均较对照组降低,在血清中的表达量也是实验组低于对照组,提示自然流产妊娠妇女存在IL-10细胞因子表达异常,IL-10可能在维持正常妊娠过程中起到重要作用.
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顶体素结合蛋白真核表达载体的构建及其在肝癌细胞株的表达
目的:构建ACRBP真棱表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础.方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒.通过Fugene HD将该重组质粒转染至ACRBP表达阴性的肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性克隆获得稳定转染株.RT-PCR和免疫组织化学方法检测HepC-2细胞中ACRBP的表达情况.结果:pEGFP-N1/ACRBP真核表达载体经测序证实插入序列完全正确；ACRBP基因已经稳定转染至HepG2细胞中并获得表达.结论:成功构建了pEGFP-N1/ACRBP真核表达载体并将其转染HepG2后,能稳定地表达ACRBP.
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肝细胞肝癌组织浸润性淋巴细胞及其因子的表达
目的:分析原发性肝细胞癌(HCC)组织中浸润淋巴细胞的分类及细胞因子表达,探讨肝癌组织免疫微环境改变的意义.方法:收集76例原发性HCC的癌组织及非癌组织标本,应用流式细胞术及免疫组化的方法分别检测组织中免疫细胞的比例；运用流式微球阵列法(CBA)检测HCC组织和非癌组织中Th1/Th2类细胞因子,ELISA法检测TGF-1、VEGF的表达.结果:HCC患者中CD3+T细胞、CD4+ Th细胞、Treg细胞及CD455RO+记忆性T细胞在癌组织中的比例均高于相应的非癌组织,而CD8+ CTL细胞在癌组织中的比例较低；Treg细胞与Th细胞或CTL细胞水平呈负相关；癌组织中早期活化因子CD69在CD3+T淋巴细胞及NK细胞上的表达均低于非癌组织,而癌组织中晚期活化因子HLA-DR在CD3+T细胞表达的水平高于非癌组织.细胞因子IL-10、TGF-1及VEGF在癌组织中表达高于非癌组织.结论:肝癌组织微环境中,抗肿瘤效应性细胞比例下降,而抑制性细胞及其相关因子增加,引发肿瘤浸润淋巴细胞的免疫无能,导致肿瘤发生.
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CDK1靶向shRNA质粒载体的构建及鉴定
目的:设计并构建CDKI -shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能.方法:设计针对CDK1 mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体片段进行连接、转化.经测序等方法鉴定重组克隆.将重组载体质粒经脂质体包裹转染肝癌HePG2细胞,realtime PCR及Western blot检测RNA干扰效果.结果:重组克隆经测序证实插入的序列正确,realtime PCR及Western blot检测证实设计的3条RNA干扰序列有效沉默了肝癌HepG2细胞中的内源性CDKI.结论:所制备的CDK1-shRNA在肝癌HepG2细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CDK1为靶向的shRNA能够有效下调CDK1基因的表达,对周期依赖激酶CDK1功能的研究奠定基础.
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Notch1在TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化中的表达和意义
目的:探讨Notch1蛋白及其mRNA在TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化(KTECT)中的动态表达及意义.方法:以体外培养的人近端肾小管上皮细胞株( HK-2)为研究对象,实验分为空白对照组及TGF-β1( 10 ng/mL)诱导组.加入TGF-β1作用后分别于12 h、24h、48 h及72 h在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化；用细胞免疫组化染色法检测α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)、E-钙黏连素(E-cadherin)和Notch1蛋白表达的变化；用RT-PCR法检测α-SMA mRNA、Ecadherin mRNA和Notch1 mRNA表达的变化.结果:与空白对照组相比较,在加入TGF-β1作用后12 h、24h、48 h及72h,TGF-β1诱导组α-SMA蛋白及其mRNA表达明显增加(P＜0 05)；Notch1蛋白及其mRNA在TGF-β1作用后的24h、48h、72 h表达逐渐增加(P＜0.05)；E-cadherin蛋白及其mRNA表达在24h、48 h、72 h明显减少(P＜0.05)；Notch1蛋白及其mRNA的表达与E-cadherin蛋白及其mRNA的表达呈负相关(r蛋白=-0.937;rmRNA=-0.921;假设检验结果(P＜0.05),与α-SMA蛋白及其mRNA的表达呈正相关(r蛋白=0.958；rmRNA=0.944；假设检验结果(P＜0.05).结论:Notch1极有可能参与了TGF-β1诱导的KTECT.
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HCV刺激小胶质细胞后TLR9蛋白的表达及其与MCP-1、TNF-α的关系
目的:了解在体外培养条件下雨型肝炎病毒(HCV)刺激小鼠小胶质细胞(BV2)后Toll样受体9(TLR9)蛋白的表达变化及其对MCP-1(人单核细胞趋化蛋白-1)和TNF-α分泌的影响,探讨HCV感染中枢神经系统(CNS)后小胶质细胞TLR9蛋白的表达及其相应细胞因子的变化.方法:体外培养BV2细胞,分为HCV阳性血清组、正常人血清组、空白对照组.每组各20例细胞样本.在12 h收集细胞和上清液,用流式细胞术检测TLR9蛋白的表达,ELISA法检测培养上清中MCP-1和TNF-α的含量,并应用SPSS11.0统计软件包进行统计学分析.结果:(1)各组BV2细胞均有TLR9蛋白的表达,HCV阳性血清组中TLR9蛋白的表达高于正常人血清组、空白对照组(P＜0.01)；正常人血清组和空白对照组无统计学差异(P＞0.05)；(2) HCV阳性血清组MCP-1和TNF-α含量高于正常人血清组、空白对照组(P＜0.01)；且HCV阳性血清组TLR9蛋白的表达量与MCP-1和TNF-α的分泌可能呈正相关.结论:HCV阳性血清刺激可使体外培养的BV2细胞表达TLR9蛋白增高,且可能诱导了MCP-1和TNF-α的分泌.TLR9蛋白可能参与了HCV在中枢神经系统感染中的早期固有免疫应答.
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免疫途径和佐剂对CVB3VP1蛋白免疫效果的影响
目的:观察不同免疫途径和佐剂类型对柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus group B type 3,CVB3)衣壳蛋白VP1免疫效果的影响.方法:将原核表达质粒pET-his/VP1转入E.coli BL21 (DE3) pLysS中,用异丙基-1-硫代-β呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导CVB3VP1蛋白的表达并进行纯化.首先采用不同的免疫途径(皮下,腹腔,肌肉)用VP1蛋白免疫小鼠,每组12只.然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(氢氧化铝、弗氏佐剂、Montanide ISA720),每组18只,采用肌肉注射途径免疫.每次每只小鼠注射50μg,共免疫3次,间隔3周.用ELISA和微量中和试验检测血清特异性IgG抗体和中和抗体.用CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性.用致死量的CVB3攻击后,检测血中病毒的滴度并观察小鼠的存活状况.结果:在大肠杆菌中成功表达CVB3VP1蛋白.三种免疫途径比较,肌肉注射组血清中和抗体和特异性IgG抗体的水平明显高于其他组(P＜0.01).采用肌肉注射免疫时,弗氏佐剂组Montanide ISA 720佐剂组的体液免疫和细胞免疫应答的水平明显高于氢氧化铝组(P＜0.05)；但血中病毒的滴度低于氢氧化铝组(P＜0.05).弗氏佐剂组小鼠的生存率好于氢氧化铝组(P＜0.05).结论:采用肌肉注射途径,并联合弗氏佐剂或Montanide ISA 720佐剂可以使CVB3VP1免疫获得较好的免疫效果.
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迟缓爱德华菌HB01外膜蛋白OmpS2基因的克隆表达及其免疫原性研究
目的:构建重组菌株BL21( DE3)(pET-28a-OmpS2),制备防治鱼类爱德华氏菌病的基因工程疫苗.方法:根据GenBank报道的致病性迟缓爱德华菌外膜蛋白OmpS2基因(AY078509)序列设计引物,通过PCR扩增得到大小为1 284 bp的迟缓爱德华菌(E.t.)HB01的外膜蛋白基因OmpS2.将该基因定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,并转化大肠杆菌BL21(DE3),得到重组菌株BL21(DE3)(pET-28a-OmpS2).经IPTG诱导后,由SDS-PAGE分析可见Mr在47000的特异蛋白条带.结果:Western blot检测说明表达的外膜蛋白具有较好的反应原性.将重组菌株BL21 (DE3)(pET-28a-OmpS2)制成基因工程疫苗,与嗜水气单胞菌(A.h.)溶血素(Hly)基因工程疫苗联合使用分别免疫小鼠与牙鲆(Paralichthys olivaceus)后,获得了较高的保护率,ELISA实验结果表明两种基因工程疫苗均能产生较高抗体水平.结论:本实验制备的基因工程疫苗能有效的预防鱼类爱德华氏菌病,且保护率高,能够起到免疫预防效果.
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人GRP78蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定
目的:构建原核表达质粒pGEX-4T-1 -GRP78,诱导表达、纯化后检测GRP78蛋白的抗原活性.方法:利用PCR方法从本实验室已构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)上扩增GRP78基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组载体pGEX-4T-1 -GRP78.转化至大肠杆菌BL21( DE3)中诱导表达,再将所表达的融合蛋白进行纯化.经SDS-PAGE分析后,将所得产物用Thrombin切割；进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价.结果:酶切和测序结果均证实GRP78原核表达载体构建正确,可诱导表达；ELISA检测显示纯化后的人GRP78抗原具有免疫原性.结论:成功构建了人GRP78基因的原核表达载体,获得了纯化的GRP78蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究以GRP78为基础的肝细胞癌的血清学检测提供了抗原.
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G-CSF动员前后外周血T细胞CD3基因表达水平变化特点
目的:分析G-CSF动员前后外周血T细胞中CD3分子的γ,δ,ε和ξ链基因表达水平变化特点,以深入了解G-CSF对T细胞信号转导的影响.方法:利用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测17例健康供者G-CSF动员前后外周血单个核细胞中CD3γ、δ、ε和ζ链的表达水平,以β2微球蛋白基因(β2MG)作为内参照,采用相对定量公式:2-△C1×100％,计算CD3分子各亚单位的相对mRNA表达量.结果:G-CSF动员前后4种CD3基因表达水平模式均为CD3ζ＞ CD3ε＞ CD3δ＞ CD3γ.供者G-CSF动员后CD3ζ和ε链基因表达水平( 2.194％,0.867％)明显低于G-CSF动员前(7.615％,1.839％),动员前后比较存在显著差异(P=0.031,P=0.009)；动员前CD3δ和γ基因平均表达水平分别为1.097％和0.271％,与动员后比较(0.333％和0.077％)并没有显著性差异(P=0.093,P =0.070).G-CSF动员前与动员后CD3ξ基因表达水平存在正相关性(rs=0.576,P=0.016)；G-CSF动员前与动员后CD3γ、δ和ε基因表达水平均不存在显著相关性(P=0.726,P=0.236,P =0.198).G-CSF动员前与动员后CD3ζ基因以及G-CSF动员后CD3δ基因表达水平与供者年龄均有负相关性(rs= -0.549,P =0.023；rs=-0.679,P=0.003；rs=-0.570,P =0.017).结论:本研究结果提示G-CSF动员可能主要影响TCR信号通路中的CD3ζ和ε链基因的表达,而整体的CD3基因表达模式未发生改变.
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视网膜中央静脉阻塞黄斑水肿时VEGF和IL-6在前房和玻璃体腔的表达
目的:探讨视网膜中央静脉阻塞(CRVO)黄斑水肿的严重程度与前房中的血管内皮生长因子(VEGF)和白介素-6(IL-6)相关性.方法:15例CRVO合并黄斑水肿的患者在接受玻璃体切除联合白内障摘除手术时收集其房水和玻璃体标本,采用酶联免疫吸附试验检测房水、玻璃体、血浆中的VEGF和IL-6.结果:VEGF和IL-6在前房和玻璃体腔的分布显著相关.相比非缺血型CRVO,缺血型CRVO玻璃体腔和前房的VEGF和IL-6水平更高,且和黄斑水肿严重程度相关.结论:我们的研究提示前房的VEGF和IL-6可以间接反映其在玻璃体腔的水平.房水VEGF和IL-6的检测对临床评估CRVO患者黄斑水肿严重程度可能是行之有效的方法之一.
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不同症状分腹泻型肠易激综合征患者外周血sIgG及sIgE表达分析
目的:分析不同症状分腹泻型肠易激综合征患者食物特异性抗体IgG(sIgG)及IgE(sIgE)表达.方法:连续选择近期就诊的腹泻型IBS患者43例,并按IBS总体症状分组(高症状分腹泻型IBS组,23例和低症状分腹泻型IBS组,20例),对照组为35例同龄、同性别的同期健康体检者.人选对象均接受了外周血skG及sIgE检测.结果:腹泻型IBS组外周血sIgG及sIgE表达阳性例数和阳性率均明显多于对照组,同时高症状分腹泻型IBS组外周血sIgG表达阳性例数和阳性率均明显多于低症状分腹泻型IBS组(P＜0.05 ～0.01).结论:腹泻型IBS患者外周血存在明确sIgG及sIgE优势表达,这种表达与腹泻型IBS症状轻重有密切关系.
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Micro-RNA-223参与肾移植后急性排斥反应中的作用
目的:探讨小RNA-223(miR-223)在肾移植后急性排斥反应(AR)中的作用.方法:对近一年我院33例接受肾移植手术的患者进行常规检查,每周1次,以判断移植肾的排斥情况,同时定期分离外周血细胞用PCR检查miR-223.另外,抽取10名健康志愿者的外周血,并分离外周血单个核细胞( PBMCs),经植物血凝素(PHA)激活处理后,检查miR-223表达的变化.结果:发生AR患者的外周血中,miR-223的表达水平出现2倍以上的升高.经PHA刺激激活的PB-MCs中miR-223的表达水平与未经PHA激活PBMCs相比较,升高3.76倍.此外,以miR-223来预测AR,可以得到92％的灵敏度和90％的特异性.结论:肾移植AR可能伴随着外周血miR-223表达的升高,提示miR-223可能在肾移植AR中发挥一定的作用.
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TPO和TGF-β1在特发性血小板减少性紫癜患者血清中的表达和意义
目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(TTP)患者血清中血小板生成调控因子血小板生成素(TPO)和转化生长因子β1( TGF-β1)的变化并探讨其临床意义.方法:采用双抗体夹心ELISA检测30例ITP和24例病例对照血清中的TPO和TGF-β1的水平.25例健康体检者为正常对照组.结果:ITP患者血清TPO水平与正常对照组相比无统计学意义(P＞0.05),病例对照组TPO水平显著高于正常对照组(P＜0.05).ITP患者血清TGF-β1的含量显著高于正常对照组(P＜0.05),病例对照组血清TGF-β1的含量与正常对照组相比无统计学意义(P＞0.05),但显著低于ITP患者(P＜0.05).结论:检测ITP患者血清中的TPO及TGF-β1水平对其发病机制研究有重要意义.
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新生儿溶血病红细胞血型免疫性抗体的特异性分析
目的:观察母婴血型不合新生儿溶血病(HDN)红细胞血型免疫性抗体的检出率及其特异性.方法:采用试管法和微柱凝胶法对母婴血标本进行ABO、Rh血型鉴定及不规则抗体筛查,对有黄疸症状的新生儿血标本进行直接抗人球蛋白试验、抗体游离试验、抗体放散试验、抗体特异性鉴定及其效价测定.结果:在298例由红细胞血型免疫性抗体引起的HDN患儿中,检出抗A 62例(20.8％),抗B 65例(21.8％),抗A+抗AB 87例(29.2％),抗B+抗AB 6例(2.0％)；抗M4例(1.3％),抗N1例(0.3％)；抗D4例(1.3％),抗E7例(2.3％),抗cE 3例(1.0％).由ABO及MN血型免疫性抗体引起HDN者,直接抗人球蛋白试验多为弱阳性,由Rh血型免疫性抗体引起HDN者,直接抗人球蛋白试验多为强阳性；微柱凝胶法的凝集强度高于试管法；HDN患儿出生后24 h内阳性检出率为91.5％.结论:HDN血型免疫性抗体的特异性主要为ABO系统的抗A、抗B、抗AB,其次为Rh系统的抗E、抗D、抗cE及MN系统的抗M、抗N.
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体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定
目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础.方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆人原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1 -VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得重组人VEGF165蛋白,将重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,制备人VEGF165高效价的mAb.通过鸡胚血管形成抑制实验、HUVEC迁移抑制实验以及HUVEC血管形成抑制实验,对获得的人VEGF165特异性mAb进行进一步鉴定.结果:成功地从脐静脉血管内皮细胞中克隆出人VEGF165基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,以纯化重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,筛选获得5株分泌人VEGF165特异性mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为5A6、3F5、6H3、7D10、7A10,其中5A6、3F5、6H3、7D10分泌的mAb亚类为IgG2a,7A10分泌的mAb亚类为IgG2b,抗体轻链均为κ链.5株mAb均能抑制鸡胚血管形成、抑制HUVEC迁移和及血管形成.结论:所获得的mAb具有效价高,活性强的优点,为抗肿瘤血管研究中进一步研究VEGF165的生物学作用提供了重要的基础.
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筛选Fab抗体库的细菌展示技术的建立
目的:利用NlpA蛋白的前六个氨基酸(CDQSSS)将抗体锚定在细菌内膜建立筛选Fabs抗体库的展示技术,为今后抗体的研发工作奠定基础.方法:从pNAD质粒中克隆出NlpA leader(含有CDQSSS序列)基因序列,利用相应的酶切位点将该序列插入pComb3表达载体中构建成用于展示Fab的重组质粒pBFD.将从pEAI质粒克隆得到的anti-human IL-1β抗体的重链Fab和全长轻链分别插入到NlpA leader和pelB leader( pComb3载体自带的果胶酶基因前导肽)的下游.将pBFD-Fab转入到E.coli DH5α中诱导表达,原生质球制备后,采用梯度浓度的抗原进行孵育,后经流式细胞术(FCM)检测抗体展示情况并且分选阳性群体,利用质粒提取的方法来替代PCR方法拯救阳性基因,转化E.coli DH5α,利用FCM再次检测该群体展示的抗体与抗原结合情况.结果:所展示的anti-hlL-1β Fab抗体依次与抗原和FITC标记的抗原特异性抗体孵育后,用FCM实时检测,结果显示出很强的荧光信号并且表现出抗原浓度依赖性.拯救出的pBFD-Fab-原生质球的FCM检测结果与首次展示的FCM结果一致,该系统能够稳定的展示抗体.结论:经过该细菌展示系统展示的Fab抗体能够有效的折叠,与相应的抗原具有很好的特异性结合能力.成功改进该展示技术的基因拯救方法,避免了基因突变和链置换的发生.此外还证明了该展示技术具有很好的稳定性.本实验成功构建了筛选Fab抗体库的细菌展技术.
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兔抗多疣壁虎Hoxc10抗血清的制备及鉴定
目的:制备兔抗多疣壁虎Hoxc10抗血清并进行特性鉴定.方法:构建pGEX-4T1 -g-Hoxc10质粒,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶( GyST) -g-Hoxc 10蛋白.用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备Hoxc10抗血清.用Western blot和免疫组化染色法检测Hoxc10抗血清的特性.结果:构建的多疣壁虎Hoxc10基因的原核表达质粒pGEX-4T1 -g-Hoxc10,在大肠杆菌中获得高效表达.表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的Hoxc10融合蛋白,以其免疫大白兔获得较高效价的Hoxc10抗血清.Western blot及免疫组化染色法检测显示,所得抗血清具有较高的效价及特异性.结论:利用原核表达的多疣壁虎GST-g-Hoxc10融合蛋白制备的Hoxc10抗血清效价高,特异性良好,为进一步深入研究Hoxc10的功能提供了重要的制剂.
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重组hIL-31抗体制备及其拮抗皮肤炎症的研究
目的:高效表达重组hIL-31制备IL-31抗体,探讨IL-31抗体拮抗皮肤炎症的作用,为研发IL-31抗体治疗性新药奠定基础.方法:①培养工程苗、IPTG诱导、菌体、超声破碎,用镍NTA柱纯化重组蛋白.②重组hIL-31蛋白溶液加佐剂免疫家兔,制备兔抗IL-31多克隆抗体.③将IL-31抗体分为3个剂量,经皮下注射和皮肤直接涂抹的途径,对已经致皮肤炎症的BALB/c小鼠治疗7d,治疗后3d取治疗部位皮肤作石蜡切片进行HE染色观察组织学变化,并检测血清中IL-6、IL-8、L选择素和MIP-3β等细胞因子的变化.结果:①SDS-PAGE电泳证实获得了高纯度的纯化人IL-31蛋白.②用重组hIL-31蛋白疫苗免疫家兔,在免疫后4周抗体滴度达到高峰,经ELISA法测血清抗体滴度为1:15 000～1:20 000,双扩滴度为1:16.Western blot结果重组IL-31蛋白能与抗IL-31抗体特异性结合.③小鼠皮肤组织切片HE染色显示,治疗组皮下和皮内均有炎症细胞浸润,呈现剂量依赖性趋势.④血清中炎性因子ELISA检测,涂抹组和注射组小鼠血清中IL-6、IL-8、MIP-3β均明显低于阴性对照组(P＜0.05).结论:①获得稳定表达的重组人IL-31蛋白,以此作为免疫原免疫家兔,诱导分泌高滴度的IL-31抗体.②IL-31抗体使皮肤炎症中炎性细胞减少,血清中炎症相关细胞因子明显降低.
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人GALNT3-sol蛋白的原核表达和抗体制备
目的:构建人乙酰半乳糖胺转移酶3可溶性区域( GALfVI3-sol)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化GALN13 -sol蛋白,制备小鼠抗人GALIVI3-sol多克隆抗体,并对抗体的基本特性进行了检测.方法:RT-PCR扩增编码人GALIVI3 -sol的cDNA片段(1 755 bp),将其克隆至原核表达载体pET15b中,转化大肠杆菌B121( DE3)后,诱导表达人GALNr 13-aol重组蛋白.将变性、复性和电泳纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清.分别采用EL ISA和Westem blot检测抗体的效价和特异性.结果:成功构建了pET15b/CALArl3-so/原核表达载体,转BI21( DE3)后可高效表达重组蛋白GALIVI3-sol.获得的小鼠抗人GALN,l3_sol多克隆抗血清效价达1:25 600,并有良好的特异性.结论:成功获得人GALN'13-sol蛋白,得到了效价和特异性良好的小鼠抗人GALIVI3-sol抗体,为进一步研究人GALNT3在肿瘤组织中的表达提供了可靠的材料.
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肝癌候选标志物HCCR单克隆抗体的制备和鉴定
目的:制备肝癌候选标志物HCCR蛋白的单克隆抗体(mAb).方法:重组表达HCCR-1167-360蛋白用于动物免疫,用含有HCCR蛋白抗原表位YLGTRR的重组蛋白(Ep-HCCR)检测血清抗体效价及筛选阳性克隆.通过ELISA、Western blot、免疫荧光和免疫组化方法鉴定制备的HCCR抗体的性质.结果:获得1株分泌HCCR抗体杂交瘤细胞株,通过ELISA方法测定抗体的亲和力常数为5.4×106L/mol;Western blot结果显示,该抗体能特异识别肝癌HepG2细胞中HCCR-1和HCCR-2蛋白；免疫荧光检测显示,HCCR蛋白主要分布在细胞质和细胞膜中；免疫组化检测到肝癌组织中有HCCR蛋白表达但在正常组织中没有.结论:成功制备了1株抗HCCR特异性mAb,为建立基于HCCR的肝癌检测方法奠定了基础.
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去氢甲睾酮单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备去氢甲睾酮(DMT)的单克隆抗体(mAb),为采用免疫法分析食品中该激素的残留提供基础.方法:通过采用碳二亚胺法合成的完全抗原DMT-KLH免疫BALB/c小鼠,经过效价测定,ELISA方法建立,细胞融合、筛选和亚克隆,建立了去氢甲睾酮mAb杂交瘤细胞株,并采用ELISA方法测定mAb纯化后的效价、IC50、交叉反应率和抗体亲和力等参数,以及对猪肉样品中的DMT加标含量进行测定.结果:经过3次亚克隆成功建立1株分泌去氢甲睾酮mAb的杂交瘤细胞株,纯化后抗体的蛋白浓度为0.87 mg/mL,效价为1∶32 000,IC50值为7.57 μg/L,亲和常数为3.09×109L/mol与丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1％,猪肉样品中平均加标回收率为97.73％.结论:成功筛选到分泌DMT mAb的杂交瘤细胞株,并对其产生的mAb的效价、IC50值、特异性、稳定性、IgG亚类和亲和力等特性进行了鉴定,为下一步开展DMT免疫学检测方法研究奠定了基础.
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刚地弓形虫醛缩酶蛋白的表达及其多克隆抗体的纯化
目的:体外制备弓形虫醛缩酶(aldolase)蛋白及其多克隆抗体.方法:以弓形虫cDNA链为模板,PCR扩增醛缩酶基因,构建aldolase/pET30a原核表达系统；IPTG诱导表达aldolase-His6蛋白；用纯化的蛋白加免疫佐剂免疫SD大鼠,收集抗血清,制备多克隆抗体,亲和层析纯化并分析抗体的效价.结果:构建了aldolase原核表达系统,表达并纯化了aldolase-His6蛋白；获得了抗该蛋白的大鼠源性抗血清,纯化后的多克隆抗体效价为1∶4 000.结论:在体外制备并纯化了aldolase-His6蛋白及其多克隆抗体,为后续研究aldolase的功能奠定了基础.
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间充质干细胞免疫调节特性与临床应用的研究进展
间克质于细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是可以从骨髓、脂肪、脐带、骨膜等组织分离而来的一种干细胞,具有黏附培养基生长的特性和复杂的免疫表型,可以向3个胚层细胞分化.MSC在组织修复和再生方面有良好的治疗效果.MSC回输体内可以定位到受损的组织,并且通过上调抗炎症细胞因子和下调促炎症细胞因子,调节受损部位的炎症反应.此外,MSC有显著的免疫调节特性,可以抑制T细胞、NK细胞等细胞的功能,调节树突状细胞的活性而诱导免疫耐受,在临床上具有广泛的应用前景.
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CD137/CD137L在抗病毒免疫中作用的研究进展
病毒持续感染常导致抗原特异性T细胞功能损害,病毒则可逃避免疫监视以致不能被清除.CD137/CD137L是除CD28/B7以外另一对具有多种活性的T细胞共刺激分子,在抗病毒免疫中有重要调节功能,尤其对增强和维持CD8+T细胞应答起关键作用.近年研究表明,CD137/CD137L在抗病毒免疫治疗中具有潜在的临床应用价值.
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单链抗体制备技术及应用的研究进展
抗体是机体在抗原物质刺激下所形成的能与抗原特异性结合的一类血清活性成分,它可以识别和排除抗原性异物,对于维护体内的生理平衡和稳定起着至关重要的作用.随着免疫学技术研究的不断深入,杂交瘤单克隆抗体(mAb)技术于20世纪70年代问世,它的出现使人们大量生产特异性强、纯度高的抗体成为可能,但是由于杂交瘤细胞制备技术较为复杂,可能会在长期培养的过程中丢失抗体基因,而且应用于人体后容易产生人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody,HAMA)等不足之处[1],其应用受到一定的限制.这促使人们继续努力,探索更为理想的抗体生产技术.近年来,基因工程技术迅速发展,人们将免疫学与现代分子生物学技术结合,生产出重组抗体,为生物学和医学研究开辟了新的领域.其中单链抗体(single-chain antibody,scFv)以其在研究和应用过程中表现出的各方面优势,正在越来越多的被人们研究和关注.
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HLA多态性与疾病机制关联的研究进展
人类白细胞抗原(HLA)是人类复杂、具多态性的遗传系统,其功能涉及到机体免疫应答和调节的各个方面.大量研究表明,HLA基因多态性与炎症、病毒感染、肿瘤等相关.本文就HLA的多态性与各个系统的的多种疾病机制关联的研究进展进行简要综述.
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携带钙整合素结合蛋白基因逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞系的建立
目的:构建钙整合素结合蛋白(CIB)的逆转录病毒表达载体,并建立包装细胞系.方法:质粒pet32-CIB经EcoR I和Xho I双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建重组逆转录病毒表达载体pLXSN-CIB,PCR及双酶切鉴定后,通过脂质体转染导入包装细胞pA317,G418稳定筛选后获得抗性克隆,NIH3T3细胞进行逆转录病毒颗粒谪度测定.结果:重组逆转录病毒表达载体pLXSN-CIB质粒测序结果与GenBank中序列一致,经PCR及酶切鉴定证实,获得了大约574 bp的基因片段,且正确插入pLXSN-CIB载体中；建立了pA317-CIB包装细胞系,采用NIH3T3细胞测定病毒滴度为6.81 ×105 CFU/mL.结论:pLXSN-CIB结构正确,成功构建了CIB基因的逆转录病毒表达载体并建立了pLXSN-CIB包装细胞系.
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HER2高表达的人乳腺癌原代细胞模型的建立
目的:探讨人乳腺癌恶性胸水肿瘤细胞的分离、纯化、培养与肿瘤细胞的鉴定,为HER2阳性的人乳腺癌的研究提供肿瘤原代细胞模型.方法:利用淋巴细胞分离液及密度梯度离心法分离、纯化恶性胸水肿瘤细胞,分离得到的细胞培养并传至第5代,通过流式细胞仪分选肿瘤细胞、Q-PCR技术、Western blot技术验证细胞HER2分子的表达水平、通过裸鼠荷瘤实验检测细胞的成瘤能力.结果:淋巴细胞分离液及密度梯度离心法分离得到乳腺癌原代细胞；流式细胞分选结果显示未分选出HER2高表达的肿瘤细胞；Q-PCR及Western blot检测发现分离得到的细胞在mRNA及蛋白水平HER2的表达水平高于乳腺癌MCF-7细胞；裸鼠荷瘤实验结果显示分离得到的细胞可以成功荷瘤.结论:胸水中分离得到的细胞为HER2阳性的乳腺癌原代细胞；对于原代细胞的鉴定需要采用不同的方法加以论证.
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免疫磁珠法分选P75NTR阳性的人脑胶质瘤细胞
目的:建立免疫磁珠法分选P75NTR阳性的人脑胶质瘤细胞.方法:采用P75NIR单克隆抗体(mAb)以及兔抗鼠IgG1标记的微珠,通过MACS分选器MiniMACS以及MS分选柱分离P75NTR阳性和阴性的人脑胶质瘤细胞,并采用酶免疫染色法鉴定分离的细胞.结果:通过免疫磁珠分选法,成功将p75NTR阳性和阴性的人脑胶质瘤细胞分离(纯度达95％以上),且不影响细胞活性(细胞培养成活).结论:P75NTR阳性细胞的分选和纯化,为下一步进行体内外研究P75NTR对脑胶质瘤的发生、发展及侵袭等的作用提供条件.
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慢病毒介导survivin体外转染MSCs及功能测定
目的:探讨存活素(Survivin,Svv)基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)在离体微环境中延长生存能力的机制,为新的干细胞抗凋亡移植策略提供理论依据.方法:制备Svv重组慢病毒和空白对照病毒,测定病毒滴度及转染率大于90％时的MOI值；分别进行转染后成骨诱导分化测定；RT-PCR比较转染前后survivin表达变化情况.结果:成功包装出Svv慢病毒和空白病毒,实验组病毒滴度为7.1×10 7TU/mL,空白病毒组为8.3×107 TU/mL;转染率大于90％时的MOI值Svv慢病毒和空白病毒分别为28.4和8.3；转染后的Svv慢病毒和空白病毒均能向成骨分化；同时RT-PCR结果显示转染后明显过表达survivin.结论:慢病毒成功转染MSCs且具有其分化功能,同时过表达survivin,为体内研究靶细胞的存活时间提供了实验基础.
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TLR2介导的BV-2细胞TNF-α及IFN-α的表达
目的:观察HCV阳性血清处理后TLR2 mRNA的表达及TLR2蛋白阻断前后TNF-α、IFN-α的表达.方法:细胞分为空白对照组、正常对照组及实验组,每组分为4h、8h、16 h及24h,同时设TLR2阻断组及其对照组,采用RT-qPCR方法检测各组各时间点TLR2mRNA的表达变化,并采用ELISA方法检测各时间点及TLR2阻断后组培养上清液中TNF-α、IFN-α水平.结果:HCV阳性血清处理后各时间点TLR2 mRNA表达均显著增加,空白对照组、正常对照组与实验组之间TLR2mRNA表达有统计学差异(P ＜0.05); TLR2蛋白阻断前后TNF-α、IFN-α的表达有统计学差异(P＜0.05).结论:HCV阳性血清处理可能激活TLR2,TLR2可能通过下游大量炎性因子如TNF-α、IFN-α等参与BV-2抗HCV免疫.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
