细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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多棘海星乙醇提取物对小鼠血清IL-4和IFN-γ水平的影响
目的:研究多棘海星乙醇提取物对小鼠血清IL-4和IFN-γ水平的影响.方法:将多棘海星粉碎后,用无水乙醇提取,通过硅胶柱层析进行组分分离.将各组分分别腹腔注射小鼠后,用ELISA法检测小鼠血清中IL-4与IFN-γ的水平.结果:多棘海星乙醇提取物通过硅胶柱层析分离后,获取8个组分.多棘海星乙醇提取物的组分Ⅲ和Ⅷ能刺激小鼠产生较高水平的IL-4和IFN-γ.结论:所分离的多棘海星乙醇提取物组分Ⅲ和Ⅷ刺激小鼠产生高水平的IL-4和IFN-γ,具有自然杀伤T(NKT)细胞激活剂的作用特征.提示多棘海星中可能含有能活化NKT细胞的活性物质.
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人抗HER2单链抗体/精氨酸九聚体融合蛋白的基因构建、表达及鉴定
目的:构建人源性抗HER2单链抗体(scFv)/精氨酸九聚体(9R)融合蛋白基因,在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性.方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv-9R,将获得的基因克隆入原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,通过Ni-NTA螯合层析纯化,透析复性,超滤浓缩.ELISA分析scFv-9R融合蛋白抗原亲和活性,凝胶迁移实验检测scFv-9R融合蛋白与siRNA结合活性.结果:成功构建了人源性抗HER2 scFv-9R融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达.表达的目的蛋白scFv-9R能与HER2抗原结合,同时具有siRNA结合能力.结论:scFv-9R具有结合抗原与siRNA双重活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础.
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25-羟基维生素D3人工完全抗原的合成与鉴定
目的:合成25-羟基维生素D3人工完全抗原,并制备抗25-羟基维生素D3的特异性抗体.方法:将25-羟基维生素D3进行化学修饰加入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯.采用碳二亚胺法,将25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,合成人工完全抗原25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯-BSA和25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯-OVA.通过紫外吸收光谱,SDS-PAGE和MALDI-TOF进行偶联鉴定.用25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯-BSA免疫小鼠,获得抗25-羟基维生素D3抗体免疫血清.结果:25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯与BSA的偶联比为(12 +0.16):1,免疫小鼠后获得高效价(效价为6.25×10-4)的抗体,且标准品浓度在37.5～600 ng/mL范围具有显著的竞争性线性关系,检测的灵敏度为37.5 ng/mL.结论:成功合成了25-羟基维生素D3人工完全抗原,制备出25-羟基维生素D3的抗体且其线性关系显著,灵敏度较高,为进一步研制检测25-羟基维生素D3的试剂盒奠定了基础.
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IL-12增强结核病患者中性粒细胞吞噬和杀伤结核杆菌的活性
目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(M.tb)吞噬和杀伤功能的影响.方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素( FTTC)标记的M.tb共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对M.tb的吞噬率；结核病患者和正常人外周血均加入2'7’二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用,同时加或者不加M.tb共同孵育不同时间后,用FCM检测PMN的活化率并计算活性氧(ROS)产生量；不同浓度IL-12预先作用外周血后,再用上述方法检测PMN对M.tb吞噬率,活化率及产生ROS的变化.结果:结核病患者和正常人PMN对M.tb吞噬率,PMN活化率和ROS产生均随时间延长而增加,但结核病患者5 min吞噬率(51.82±6.93)％高于正常人(47.20±4.26)％(P＜0.05)；IL-12预先作用后,结核病患者和正常人PMN吞噬率、PMN活化率和ROS的产生均随浓度增大而显著增加,两者之间无显著性差异.结论:结核病患者外周血PMN对M.tb的吞噬功能以及ROS产生与正常人无显著性差异,仅早期吞噬率较高.IL-12略增强PMN吞噬和产生ROS的反应能力.
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腺病毒介导的ING4基因抑制人脑胶质瘤细胞增殖迁移的机制研究
目的:观察ING4对人脑胶质瘤细胞株U251增殖及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:以Ad-INC4及腺病毒空载体转染U251细胞,RT-PCR法检测ING4基因的表达水平,Western blot法检测目的蛋白的表达.用MTT试验检测ING4对于U251细胞增殖的影响,通过Boyden Chamber试验检测其对U251细胞侵袭能力的影响.并用免疫印迹方法检测NGF、TrkA的表达变化,通过pull-down试验检测活性RhoA表达.结果:U251细胞感染Ad-ING4 48 h后,RT-PCR结果显示ING4在U251中过表达,且U251细胞的增殖及迁移能力受到明显抑制.免疫印迹方法显示感染AdING4的U251细胞中TrkA和NGF的表达降低,pull-down试验结果显示活性RhoA表达降低.结论:Ad-ING4可以抑制胶质瘤细胞株U251的增殖和迁移,这一作用可能是通过抑制NGF、TrkA和活性RhoA的表达实现的.
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结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞的研究
目的:研究结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后氮氧化物的产生及细胞因子的分泌和表达情况.方法:结核杆菌H37Ra感染RAW264.7巨噬细胞株24h后收集上清液,用Griess法检测一氧化氮(NO),化学法检测过氧化氢(H2O2)的产生,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测感染后巨噬细胞IL-12和TNF-α mRNA的表达,ELISA法检测细胞因子IL-12和TNF-α的含量.结果:结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后产生的NO和H2 O2水平均显著升高,同时IL-12和TNF-α的分泌和表达也明显增加(P＜0.05).结论:结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后能产生大量的氮氧化物和抗结核细胞因子,从而产生有利于宿主的抗结核免疫应答.
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人TRAF2新剪切体的鉴定与表达分析
目的:对TRAF2的新剪切体进行鉴定与表达分析.方法:以人脑库为模板,利用PCR扩增,电泳确定新剪切体的存在.再提取不同细胞与组织的总RNA,逆转录得到cD-NA后作为模板对两种不同剪切体的表达进行比较分析.结果:利用P1与P2引物对从人脑库扩增出1条约1 500 bp的条带,而利用P3与P4引物对则得到2条明显电泳带,通过测序表明其中1条包含TRAF2的第6外显子,另1条缺失了TRAF2的第6外显子.通过对新剪切体TRAF2Δ6与全长剪切体TRAF2的表达量比较表明在T47D中全长剪切体表达占优势；而在Hep3B、GC-1与MCF7中TRAT△6剪切体表达占优势；在HepG2、HBL100、A549与HeLa细胞中未发现两种剪切体的明显表达；在PANCI与SW480中两种剪切体表达量相近.在胎大脑与一级神经胶质瘤中TRAF2Δ6表达占优,而二级与三级神经胶质瘤中则全长剪切体TRAF2表达占优势.结论:人体TRAF2基因除可表达全长TRAF2 mRNA外,还可通过可变剪切表达缺失第6外显子的TRAF2Δ6 mRNA.而且这两种剪切体的表达存在细胞与组织特异性.
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重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响
目的:研究重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫途径对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响.方法:通过PCR方法克隆出结核分枝杆菌的热休克蛋白65的基因序列,构建了pET28a-HSP65高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达,利用阴离子交换柱层析分离纯化.在不添加佐剂的情况下以纯化的HSP65通过3次鼻黏膜免疫非肥胖型1型糖尿病模型动物(NOD)小鼠,每月采集小鼠的血清,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测血清中抗体的产生,利用自动生化分析仪检测血糖浓度.结果:通过鼻黏膜免疫途径可成功诱导小鼠产生特异的抗HSP65抗体,组织病理学分析也显示HSP65通过鼻黏膜免疫能降低NOD小鼠胰腺病变的产生.结论:HSP65通过鼻黏膜免疫能预防NOD小鼠糖尿病的发生,证实了HSP65经鼻黏膜免疫能降低和自身免疫性糖尿病有关的炎症过程的严重性,对1型糖尿病的治疗提供了一个新的途径.
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含APPβ裂解位点肽及Aβ1-15的嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备及其免疫原性分析
目的:构建含APPβ位点裂解肽ABCSP、β-淀粉样肽氨基段15肽(Aβ1-15)及删除了c/e1表位的截短型HBcAg基因的原核表达质粒pET/c-ABCSP-Aβ15-c,并在大肠杆菌中表达,观察融合蛋白C-ABCSP-Aβ15-c形成的病毒样颗粒,检测其免疫原性,为多表位AD基因工程疫苗的研究奠定基础.方法:PCR扩增含APPβ位点裂解肽ABCSP、β-淀粉样肽氨基段15肽(Aβ1-15)的基因,连接于HBcAg的1～71的3’端,再将HBcAg的88～144位氨基酸的基因片断连接于Aβ1-15的基因的3’端,构建重组质粒pUC/c-ABCSP-Aβ15-c,将重组基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pET/c-ABCSP-Aβ15-c,IPTG诱导表达.用SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色,观察重组基因的表达.透射电镜观察融合蛋白形成的病毒样颗粒.融合蛋白经腹腔注射免疫昆明小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗-ABCSP、抗-Aβ抗体的滴度.结果:经酶切鉴定、DNA序列测定证实,重组基因位于表达质粒之中,其大小、序列与理论设计相符.诱导表达后,SDS-PAGE显示,在细菌裂解液的上清和沉淀中均可见到表达蛋白条带,且以沉淀中为多,约占沉淀总蛋白的40％.纯化后的融合蛋白形成电镜下可观察到的病毒样颗粒.昆明小鼠经融合蛋白免疫5次后,其血清中抗-ABCSP抗体的滴度可达1∶5 000,抗-Aβ抗体的滴度可达1∶10 000,检测不到抗-HBc抗体.结论:c-ABCSP-Aβ15-c融合基因在大肠杆菌中可高效表达,表达的融合蛋白具有较强的免疫原性.
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重组穿梭质粒pIMP1-eHER2/neu的构建及其生孢梭菌稳定转化株的筛选与鉴定
目的:制备人原癌基因HER2/neu的细胞外区域(ECD)基因修饰的重组生孢梭菌,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础.方法:利用SOE-PCR将HER2/neu ECD基因连接到厌氧菌的内β1,4-葡聚糖酶的启动子和信号肽基因(eglAp)下游,构建融合基因eglAp-HER2/neu；将其插入大肠杆菌-厌氧菌穿梭质粒pIMP1,构建重组质粒；首先将重组质粒导人大肠杆菌DH5α内并进行鉴定；然后用电穿孔法将重组质粒导人生孢梭菌.利用红霉素抗性筛选重组生孢梭菌；采用菌液PCR鉴定阳性克隆.结果:酶切和测序结果显示,插入质粒pIMP1内的eglAp-HER2/neu融合基因序列及读框正确.菌液PCR结果表明,重组质粒pIMP1-eHER2/neu成功转化生孢梭菌；经过20多代抗生素压力筛选,重组生孢梭菌仍能稳定携带pIMP1-eHER2/neu.结论:成功制备了重组质粒pIMP1-eHER2/neu生孢梭菌的稳定转化株,为其进一步的抗肿瘤作用研究奠定基础.
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荷载人生存素的多表位树突状细胞疫苗的抗肿瘤活性研究
目的:观察荷载人生存素(survivin)的多表位树突状细胞(DC)疫苗的抗肿瘤活性.方法:分别将含4个sur-vivin的HLA-A2类限制性CD8+ CTL表位和1个CD4+ Th细胞表位的重组真核表达质粒pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th,以及含4个CD8+ CTL表位的重组质粒pPIRESneo3.0-survivin (4),转染人DC并制备DC疫苗.实验分为survivin(4)/Th组、survivin (4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组.DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率明显高于survivin(4)组(P＜0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P＜0.05).运用流式细胞术(FCM)分别检测DC表面CD83、CD86、T淋巴细胞表面CD4、CD8a的表达以及DC疫苗作用后MCF-7乳腺癌细胞的凋亡.用ELISA法检测上清中IFN-γ的含量.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测DC疫苗诱导的CTL对MCF-7细胞的抑制率.结果:流式细胞术检测显示,人DC高表达CD83、CD86；人外周血T淋巴细胞高表达CD4、CD8a；survivin (4)/Th组IFN-γ的含量[(66.50±3.34) ng/L]明显高于survivin(4)组[(46.10±1.35)ng/L]、空质粒组[(25.17±0.32) ng/L]、未转染DC与T细胞共培养组[(25.47±0.95)ng/L]和单独T淋巴细胞组[(23.73 +0.50)ng/L],P＜0.05.survivin (4)/Th组中MCF-7细胞的抑制率明显高于survivin (4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P＜0.05).DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率[ (10.63±0.29)％]明显高于survivin(4)组(P＜0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P＜0.05).结论:荷载多个survivin的CD8+ CTL表位的树突状细胞肿瘤疫苗具有很强的抗肿瘤活性,CD4+ Th细胞对CD8+ CTL的抗肿瘤方面有明显的促进作用.
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Nrf2在食管鳞癌组织中的表达及意义
目的:探讨Nrf2(Nuclear factor E2 p45-related factor 2)在食管鳞癌组织中的表达及其与临床病理学特征的关系.方法:采用免疫组化SP法检测Nrf2在32例食管鳞癌,30例癌旁组织,21个阳性淋巴结和24个阴性淋巴结组织中的表达.结果:Nrf2阳性表达主要定位于细胞核中,在食管鳞癌中的阳性表达率为78.13％,显著高于癌旁组织(13.33％),淋巴结癌转移阳性组织中的表达率(66.67％)也显著高于淋巴结癌转移阴性组织中的表达水平(20.83％),均具有统计学意义(P＜0.05).Nrf2的阳性表达随淋巴结的转移度的增加而表达增加(P＜0.05),但在不同年龄、性别、TNM分期、肿瘤分化程度及不同部位之间差异无统计学意义.结论:Nrf2在食管鳞癌中高表达,表达的高低与淋巴结转移与否及转移度有关.
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脑源性神经营养因子对雪旺细胞增殖和分泌的影响
目的:评价脑源性神经营养因子(BDNF)对雪旺细胞(SCs)增殖、分泌功能的影响.方法:取新生SD大鼠双侧臂丛神经,用双酶消化法体外培养SCs,并检测特异性标志蛋白S-100的表达.按培养基中BDNF终浓度的不同将所培养的SCs设立0、10、20、50、100 ng/mL组,共5组培养2周,每2d用MTT法测细胞活力.并对不同浓度BDNF处理的SCs培养24h后,取上清液,ELISA法测细胞分泌神经生长因子( NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)水平.结果:培养出的细胞呈S-100阳性,为SCs.与0ng/mLBDNF组比较,终浓度为50、100ng/mLBDNF组的SCs细胞活力明显高于0 ng/mL组(均P＜0.05),而浓度为10、20 ng/mL时虽有差异但无统计学意义(均P＞0.05).SCs能分泌NGF和FGF；其中终浓度为50 ng/mLBDNF组的SCs分泌NGF和FGF水平高(P＜0.05).结论:BDNF对SCs的增殖和分泌功能有促进作用,终浓度为50 ng/mL时,SCs的活力与分泌能力佳.
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针对CD44的siRNA对脑胶质瘤细胞U87增殖与侵袭的抑制作用
目的:通过RNA干涉下调CD44在脑胶质瘤细胞U87中的表达,观察CD44的表达抑制对胶质瘤增殖、迁移和侵袭的影响.方法:根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段(CD44-siRNA)转染U87细胞,利用荧光实时定量qRT-PCR检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化；Western blot 检测CD44蛋白水平的变化；MTT法检测U87细胞增殖；单细胞划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验检测U87细胞的迁移与侵袭能力变化.结果:CD44-siRNA下调了U87细胞中CD44mRNA水平与蛋白水平的表达,转染细胞的增殖和迁移侵袭能力下降.结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制U87脑胶质瘤细胞的增殖及其迁移侵袭力,为以CD44为靶点的脑胶质瘤基因治疗奠定基础.
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成年阻塞性睡眠呼吸暂停患者多导睡眠图及临床特征分析性差异
目的:分析成年男性阻塞性睡眠呼吸暂停( OSA)患者多导睡眠图及临床特征,明确年龄对OSA严重程度的影响.方法:回顾性研究包括836名成年男性OSA患者,按年龄分为三组:青年组312人(平均年龄37.07岁),中年组359人(平均年龄52.14岁),老年组165人(平均年龄69.43岁).分析其多导睡眠图和临床特征,并进行相关性分析.结果:中年组和老年组呼吸暂停低通气指数(AHI)、阻塞性呼吸暂停指数(OAI)、AHI-NREM和AHI-REM均无显著统计学意义(P＞0.05),但均低于青年组(P＜0.01)；中年组和老年组的低血氧饱和度(SaO2)均高于青年组；中枢性呼吸暂停指数(CAI)随年龄增长而升高(P＜0.05).在睡眠结构方面,老年组总睡眠时间、非快速眼动( NREM)睡眠时间和快速眼动期(REM)睡眠时间均缩短,睡眠效率亦低于青年组(P＜0.01),但睡眠潜伏期和入睡后觉醒时间( WASO)明显延长(P＜0.01).年龄与以下各项均呈现显著的相关性:AHI (P＜0.01),OAI(P ＜0.01),CAI(P ＜0.01),低Sa02(P＜0.01).多重回归分析表明年龄作为独立变量分别与AHI,OAI,CAI具有相关性.结论:在成年OSA患者中,年龄与OSA严重程度具有显著的相关性,表现为OSA随年龄增长而降低.本研究为研究年龄与OSA严重程度的关系提供了新的证据.
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系统性红斑狼疮肾炎血清差异蛋白质的筛选
目的:对比分析系统性红斑狼疮肾炎(LN)患者和健康人双重滤过血浆置换(DFPP)产物中的差异蛋白质,筛选与LN发生相关的血清蛋白质.方法:利用DFPP的方法分别对4例LN患者和4例健康人血浆进行过滤,将滤下的大分子蛋白混合物行双向电泳分离并银染显影,经图像分析筛选差异表达的蛋白点.应用QSTAR PulsarⅠ型串连飞行质谱鉴定差异表达的蛋白点,通过生物信息学比对,对其中有意义分子行血清浓度检测验证.结果:2组间筛选出差异蛋白点共317个,其中表达量差异达3倍以上的蛋白点69个,经串连质谱分析鉴定出包括人冷凝集素IgM抗体、免疫球蛋白λ轻链、谷胱甘肽-S-转移酶、结合珠蛋白前原蛋白、甲状腺素转运蛋白、载脂蛋白E、皮质类固醇结合球蛋白、玻连蛋白、角蛋白和转铁蛋白等十多个在SLE活动性肾炎血清中表达改变的蛋白分子.ELISA及RIA检测结果与双向电泳相符.结论:LN患者血清与健康人血清的蛋白表达谱有一定差异,这些差异分子可能成为LN诊断及预后判断的重要标志物.
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姜黄素诱导胃癌BGC细胞凋亡的作用及机制研究
目的:探讨姜黄素促人胃癌BGC-823细胞凋亡的生物学作用及其调控机制.方法:常规体外培养对数生长期胃癌BGC- 823细胞,细胞分为对照组,低、中、高姜黄素处理组四组,姜黄素浓度分别为0 mg/L,5 mg/L,10mg/L,20mg/L.姜黄素处理24h后,采用甲基噻唑(MTT)比色法及流式细胞仪测定细胞增殖水平及细胞凋亡率；采用免疫组化法测定细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达；采用PCR检测Caspase-3的mRNA表达水平.结果:MTT检测显示姜黄素能抑制人胃癌BGC-823细胞增殖,呈现浓度依赖性；流式细胞仪显示姜黄素能有效诱导细胞的凋亡,呈现浓度依赖性,其中20 mg/L姜黄素处理24h后细胞凋亡率为48.3％；免疫组化试验表明姜黄素处理使人胃癌BGC- 823细胞中Bax表达水平上调,同时Bcl-2蛋白表达水平下调；且细胞中Caspase-3的mRNA表达水平受姜黄素诱导而增高.结论:姜黄素对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达而活化Caspase-3的信号通路有关.该研究为深入探讨姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制提供了重要依据.
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抗人球蛋白试验阳性及其临床意义的探讨
目的:观察抗人球蛋白试验(AGT)的临床应用及对自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的诊断价值.方法:采用微柱凝胶法和传统试管法,对368例临床表现疑似为AIHA、风湿免疫性疾病及新生儿溶血病患者的血标本进行AGT.结果:在368例患者血标本中AGT阳性209例(56.8％),其中直接抗人球蛋白试验(DAT)阳性187例(89.5％),间接抗人球蛋白试验(IAT)阳性12例(6.4％,DAT和IAT均阳性10例(5.3％).AGT阳性的类型分布为IgG +C3型118例(63.1％),IgG型45例(24.1％),C3型24例(12.8％).12例IAT阳性经抗体特异性鉴定为抗D2例(16.7％),抗E5例(41.7％),抗C1例(8.3％),抗Ec 2例(16.7％),抗e3例(25.0％).10例DAT和IAT均阳性者为新生儿溶血病引起的免疫性抗体.结论:AGT能较敏感地检出吸附在红细胞膜上的IgG和补体C3等免疫性抗体,对AIHA的诊断有重要临床意义.但AGT存在一定的假阳性和假阴性,应同时做阴阳性对照才能确保试验结果的准确性.
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IL-6基因启动子多态性与乳腺癌风险的关联性
目的:探讨白介素-6(IL-6)基因启动子区- 597G/A(rs1800797)、- 572C/G( rs1800796)和- 174G/C(rs1800795)三个单核苷酸多态性位点(SNP)和乳腺痘易感性的关联性.方法:按照诊断标准,入组女性乳腺癌患者176例及年龄、体重指数等相匹配的健康女性200例.提取外周静脉血DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测IL-6基因启动子区- 597G/A、- 572C/G和- 174 G/C三个SNPs位点的基因型.利用SPSS11.5软件进行x2检验,比较乳腺癌患者各位点基因型、等位基因频率与健康女性之间的差异,分析各位点多态性与乳腺癌发病风险的关联性.结果:IL-6基因- 572C/G位点的基因型及等位基因频率分布在乳腺癌组与健康组之间存在显著性差异(P＜0.05),乳腺癌组- 572C/G位点的等位基因G频率显著高于健康组(x2=15.438,P＜0.0001,OR =2.017,95％CI=1.417 ～2.870).结论:IL-66基因- 572C/G位点多态性与乳腺癌易感性相关联,携带有- 572G/C多态性位点G等位基因的女性罹患乳腺癌的风险要高于非携带女性.
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Ⅱ型糖尿病肾病患者血清IL-18、TNF-α、NO与ET的水平变化及临床意义
目的:观察2型糖尿病肾病患者(DN)血清中白细胞介素18( IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)与内皮素(ET)的水平及其临床意义.方法:将93例2型糖尿病(DM)患者分为单纯糖尿病组( SDM)患者组(31例)、隐性糖尿病肾病( IDN)患者组(30例)及显性糖尿病肾病(ODN)患者组(32例).同时将30例健康体检者作为正常对照组.取上述各组的血清标本,用ELISA法检测IL-18和TNF-α的水平；用硝酸还原酶法检测NO的水平；用放射免疫分析法检测ET的水平.结果:与正常对照组相比较,IL-18、TNF-α与ET水平SDM患者组、IDN组患者组、ODN患者组明显升高(P＜0.01),升高的水平依次为ODM患者组＞IDN组患者组＞ SDN患者组；血清NO的水平明显降低(P＜0.01),降低的水平依次为ODM患者组＜IDN组患者组＜SDN患者组.IL-18与TNF-α和ET均呈正相关(r值分别为0.613和0.738)；ET与TNF-α也呈正相关(r值为0.649)；NO与IL-18、TNF-α及ET呈负相关(r值分别为0.631和0.627及0.714).结论:血清IL-18、TNF-α、NO与ET水平的变化,提示它们可能参与了2型DN的发病及病理变化过程,检测血清IL-18、TNF-α、NO与ET的水平可作为判断患者的预后、指导治疗的参考指标.
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一过性高耸T波
患者男性,35岁,于2010年4月18日因健康体检描记心电图时发现肢体导联T波电压高耸,此前一月来无服药及饮酒史.查:血压16/9.2 kPa,心脏听诊无异常发现,四肢无功能性障碍,血钾、血脂、超声心动图及脑部检查均正常.心电图示:窦性心律,心率100次/min;T波振幅为19 mm和17mm,两肢对称,呈箭头样改变.几分钟后,做平静仰卧心电图,T波恢复正常,QRS电压,时限不变.因怀疑脑血管疾病行脑电图及脑部CT检查未见异常.次日及1周、1月、6月后复查心电图均正常,随访1年,无器质性病变.
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副溶血弧菌单克隆抗体的制备和鉴定
目的:制备副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)单克隆抗体(mAb)并进行鉴定.方法:用灭活的副溶血弧菌免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备副溶血弧菌mAb.用间接ELISA法对mAb的效价进行测定.结果:获得4株能稳定分泌副溶血弧菌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1E3、5F12、5D8、6H9.经测定杂交瘤细胞腹水mAb效价分别为1×10-4～1 ×10-7.4株杂交瘤细胞系所分泌的mAb亚类分别是:IgG2b,IgG2a,IgG2b,IgG3.交叉反应试验显示,mAb 5D8与弧菌属其他几种细菌均不起反应,特异性强.副溶血弧菌生长抑制及动物保护实验结果表明4株mAb均能不同程度地抑制副溶血弧菌的生长并对动物具有保护作用,其中5F12保护效果强.结论:成功地制备能稳定分泌副溶血弧菌mAb的杂交瘤细胞株,为建立该病的免疫学诊断及防治的奠定了基础.
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鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定
目的:研制特异性鼠抗人PD-L1单克隆抗体(mAb)并鉴定其生物学特性.方法:以高表达人PD-L1分子的基因转染细胞L929/PD-L1为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以L929/PD-L1细胞为抗体筛选细胞,L929/mock细胞为对照细胞,经选择性克隆化培养及流式细胞术(FCM)分析,筛选稳定和持久分泌鼠抗人PD-L1 mAb的杂交瘤细胞株；采用Ig亚型快速定性试纸法、Western blot、间接免疫荧光法和竞争结合抑制实验等方法对mAb进行生物学特性鉴定；继而体外实验分析mAb对T细胞增殖的影响.结果:成功获得3株鼠抗人PD-L1mAb,分别命名为11G8,2G5和5C3；对其生物学功能的研究结果显示,3株mAb均能识别活化T细胞表面PD-L1分子,和在体外显著促进T细胞的增殖.结论:获得的3株鼠抗人PD-L1功能性mAb,通过阻断PD-1/PD-L1抑制途径能够有效增强T细胞体外增殖,这为进一步研究PD-1/PD-L1信号通路提供了物质基础.
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抗ICAM-1单克隆抗体的制备与特性鉴定
目的:制备有生物学活性的抗人细胞间黏附分子-1( ICAM-1)单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法:以纯品ICAM-1为抗原免疫BALB/c小鼠4次.采用杂交瘤技术,经3次亚克隆筛选稳定分泌抗人ICAM-1 mAb的杂交瘤细胞株.采用动物体内诱生的方法大量制备mAb.以protein G对其进行纯化后,用间接ELISA法测定mAb的效价并鉴定其Ig亚类.用Western blot鉴定mAb的特异性.结果:筛选出4株可稳定分泌抗人ICAM-1 mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为B9株、F1株、C11株和D6株.4株mAb的Ig亚类均为IgG1.4株mAb培养上清的效价均为1∶1 000；腹水的效价B9株与D6株为1∶2×105,F1株与C11株为1∶4×105.纯化后mAb的蛋白浓度为1.2 g/L,均可与ICAM-1特异性结合.结论:成功制备出效价高、特异性良好的4株抗ICAM-1 mAb,为进一步研究ICAM-1的生物学功能和临床应用奠定了基础.
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空肠弯曲菌cjaA基因表达蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定
目的:原核表达空肠弯曲菌CjaA蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb).方法:克隆目的基因并将其构建到pGEX-6p-1和pET30a(+)表达载体,分别以变复性纯化后的rGST-caA、rHis-cjaA蛋白为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选.采用间接ELISA法测定细胞上清和mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性.结果:成功构建pET30a(+ )-cjaA和pGEX-6p-1-cjaA重组原核表达质粒,并融合表达rHis-cjaA和rGST-cjaA蛋白,Western blot试验显示全菌多抗血清能与体外表达的蛋白呈现特异性反应,表明表达蛋白具有免疫原性.筛选获得3株稳定分泌抗CjaA的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2B6、3C2、4F11,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1∶1×105、1∶2×105和1∶4×105；Western blot试验显示,3株mAb均能与表达rHis-CjaA重组蛋白的细菌发生特异性反应；Dot-ELISA试验表明,3株mAb均能与不同来源的空肠弯曲菌分离株发生特异性反应.结论:本研究制备的mAb有较高特异性,具有良好的应用价值.为进一步研究空肠弯曲菌CjaA蛋白的生物学特性、致病机制,以及建立快速检测技术奠定基础.
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抗hGITRaa27-165多克隆抗体生物学活性的初步鉴定
目的:明确兔源性抗人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体胞外段的多克隆抗体(anti-hGITRaa27-165PcAb)与人类天然GITR分子的结合能力及其对CD4+T细胞的生物学作用.方法:分离、刺激培养人外周血单个核细胞后,利用流式细胞术( FCM)检测anti-hGITRaa27-165 PcAb与细胞膜表面GITR分子的结合能力；免疫磁珠分离人外周血收集CD4+T细胞,以3 H-TdR掺入试验分别检测在细胞刺激生长剂存在或不存在的情况下,anti-hGITRaa27-165PcAb对CD4+T细胞增殖的影响.结果:兔源性anti-hGITRaa27-165 PcAb可以与天然构象的GITR分子结合,且此种结合具有浓度依赖性；在细胞生长刺激因子存在或不存在情况下,该多抗均能促进CD4+T细胞增殖.结论:本室制备的兔源性anti-hGITRaa27-165 PcAb具有与天然分子结合的能力以及一定的生物学活性,进一步的研究可考虑将其应用于临床相关疾病的检测和治疗.
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炎症细胞及细胞因子在间质性肺病炎症和纤维化中的作用
间质性肺病(ILD)是以肺泡壁为主要病变所引起的众多异质性疾病组成的疾病谱,其病理主要表现为早期弥漫性肺泡炎及后期大量间质细胞增生、基质胶原进行性聚集以致取代正常的肺组织结构.研究发现,免疫细胞和某些非免疫细胞通过产生细胞因子,作为细胞介质,调节ILD的免疫与炎症应答.本文综述了近年来关于细胞及其分泌的细胞因子参与ILD炎症和纤维化的研究进展.
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Th9细胞的生物学作用及其与自身免疫病的关系
T辅助细胞9(Th9)是近发现的Th细胞新亚群,其主要分泌白细胞介素-9(IL-9),具有重要的免疫调节作用.IL-9介导JAK/STAT信号通路,在自身免疫病(AID)中的作用受到关注.因此对Th9细胞特点的掌握有助于更加深入的认识自身免疫病的发病机制,有助于寻找新的治疗药物.Th9细胞可能作为一个新的治疗靶点,用于改善机体的高反应性、阻止AID的进展.
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MDA5与抗病毒感染信号转导
MDA5是胞内模式识别受体,能够识别入侵病毒RNA链,主要在非髓系细胞系中发挥抗病毒作用.MDA5包括3个功能区域:CARD、DExD/H以及无功能RD.CARD与DExD/H分别发挥信号传递与ATP水解功能,无功能RD主要使MDA5基于病毒5’-ppp末端不同识别单股正链RNA病毒中的EMCV；MDA5能通过CARD结构域与线粒体结合的接头蛋白IPS-1相互作用,激活转录因子IRF-3/IRF-7,诱导其核转位促进β干扰素的表达,从而启动固有免疫应答.此外,还可以通过FADD依赖途径产生NF-κB,调控炎症反应因子表达.本文综述MDA5在结构、识别病毒及其信号转导等方面的研究新进展.
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肿瘤特异性转移因子在消化系统肿瘤治疗中的应用
转移因子(transfer factor,TF)早由Lawrence[1]于1949年发现,作者从对某一特定抗原有明显皮肤反应的供体采集白细胞并制备白细胞抽提液,然后将抽提液注入无皮肤反应或免疫抑制的受试者,而受试者随即出现强烈的皮肤反应,这一实验结果很有力的证明了个体间的全身性和特异性免疫可以发生转移,因此实现这种转移功能的白细胞抽提物被称为转移因子.目前,TF被用于治疗病毒、寄生虫、真菌、自身免疫及恶性失调等引起的疾病.按性质TF可以分为特异性转移因子( specific TF,STF)与非特异性转移因子(non-specific TF,NSTF).肿瘤特异性转移因子(tumor specific transfer factor,TSTF)是指用肿瘤组织作抗原免疫健康动物(如羊、猪、兔等)后,取动物的血液、脾脏和淋巴结组织,采用非特异性TF的常规方法而获得的提取物的小分子生物活性物质[2].相对分子质量(Mr)为3000～5000,对热不稳定,但耐低温,在4℃保存1年仍有稳定的免疫活性[3].
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调节性B细胞与免疫耐受
B细胞通过产生抗体和递呈抗原发挥免疫应答和调节作用.调节性B细胞( Bregs)是新近发现的一种新的B细胞亚群,通过产生白细胞介素10 (IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性细胞因子介导免疫耐受.在自身免疫性疾病、感染、肿瘤等发生、发展、转归过程中起重要调节作用.本文中综述了Bregs的发现、分类及活化、作用机制及在自身免疫病与移植耐受中的相关研究进展.
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趋化因子配体18(CCL-18)在白血病患者中的表达及其意义
趋化因子能够招募单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等各种免疫细胞聚集至病原体入侵的部位,在免疫反应中发挥关键作用.趋化因子配体18 (CCL-18)是主要由单核/巨噬细胞和树突状细胞(DC)分泌的一种趋化因子,主要选择性趋化初始T细胞,与多种疾病有关,在变态反应及自身免疫性疾病中的作用报道较多[1],随着肿瘤学的发展,关于CCL-18在恶性肿瘤中的研究报道也越来越多,如在乳腺癌、胃癌及卵巢癌等许多实体瘤中CCL-18的水平升高[2],参与肿瘤的发病过程,现已成为上述肿瘤的一种检测指标.正是由于CCL-18与多种恶性肿瘤有关,而且其在血循环中持续存在,促使人们研究其在血液肿瘤中的作用.近几年研究发现其在白血病患者中有着较高的表达,并作为白血病的一种新的生物学指标,在鉴别诊断、判断预后中起重要作用.本文中主要就CCL-18的生物学性能、CCL-18在各种白血病中的表达及其意义作一综述.
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重组人骨形态发生蛋白-7对NIH3T3细胞生物学行为的影响
目的:探讨重组人骨形态发生蛋白-7( rhBMP-7)对NIH3T3增殖和骨向分化的影响.方法:向培养的成纤维细胞NIH3T3中加入不同浓度的rhBMP-7,观察NIH3T3增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量的变化.结果:rhBMP-7在一定浓度范围内可以明显促进NIHh3T3细胞增殖、提高ALP活性与OCN水平.结论:rhBMP-7可以刺激NIH3T3细胞增殖,诱导NIH3 T3细胞向成骨细胞表型分化.
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癌胚抗原光激化学发光免疫分析法的建立
目的:利用光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清癌胚抗原(CEA)的快速检测试剂.方法:1株CEA单克隆抗体(mAb)包被受体微球,另1株(mAb)用生物素标记,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价.结果:自制CEA试剂分析灵敏度为0.11 ng/mL,线性测量范围为0.11 ～500 ng/mL,分析内和分析间的精密度分别为3.3％ ～6.8％、5.5％ ～8.1％,与AFP、CA12-5、CA19-9和人血清白蛋白均无交叉反应,100份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.976.结论:自制CEAAl-phaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,有望替代国外同类试剂应用于临床血清样本CEA浓度的测定.
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大豆异黄酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖和表型转化的影响
目的:观察大豆异黄酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖和表型转化的影响.方法:采用酶消化法原代培养大鼠血管平滑肌细胞,传至第3-6代,加入含不同浓度(0、0.1、0.2、0.4、0.8μmol/L)大豆异黄酮的DMEM培养基作用24h,采用MTT法检测大鼠血管平滑肌细胞增殖率,采用RT-PCR法检测平滑肌22α (SM22α) mRNA、骨桥蛋白mRNA的表达,采用Western blot法检测SM22α、骨桥蛋白的表达.结果:0.1～0.8 mol/L的大豆异黄酮随浓度增加其抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用增强(P＜0.05)；SM22αmRNA及SM22α蛋白表达增加,骨桥蛋白mRNA及骨桥蛋白表达降低,各组间有明显差异(P＜0.05).结论:大豆异黄酮抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖,同时使大鼠血管平滑肌细胞从合成表型向收缩表型转化.
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鼻咽癌中SOX2基因的表达研究
目的:研究干细胞表面标志物SOX2基因在鼻咽癌中的表达,探讨对鼻咽癌诊断及治疗的潜在意义.方法:应用PCR及荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测33例鼻咽癌和21例鼻咽炎组织中SOX2基因的表达.以鼻咽炎组作为参照,对两组荧光定量PCR数值△Ct差异进行t检验,应用Li-vak( 2-△ΔCt)法进行相对定量分析,计算鼻咽癌中SOX2基因的表达水平.结果:78.8％( 26/33)鼻咽癌和38.1％ (8/21)鼻咽炎组织中存在SOX2基因的表达,差异具有统计学意义(P＜0.05).鼻咽癌中57.6％( 19/33)的SOX2基因表达水平比炎症组高,差异具有统计学意义(P＜0.05),21.2％ (7/33)鼻咽癌组织中SOX2基因表达水平比对照组低,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:鼻咽癌组中SOX2基因处于一个较高的表达水平,提示SOX2基因在鼻咽癌中出现了异常表达,是鼻咽癌肿瘤干细胞存在的一个间接证据,为从肿瘤干细胞水平上的诊断及治疗提供一个潜在的靶点.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
