细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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小鼠巨细胞病毒播散性感染急性期脾脏损伤的免疫病理机制
目的:观察小鼠巨细胞病毒(MCMV)播散性感染急性期脾组织病理损伤程度与病毒量、caspase-1和下游促炎因子IL-1β、IL-18表达的关系,探讨MCMV感染后脾脏的免疫病理损伤机制.方法:建立MCMV全身播散性感染模型,MCMVSminth株接种后第3、7、14和第28天各处死3只小鼠；同时设模拟感染小鼠作为对照.标准空斑试验检测脾组织病毒滴度；Western blot法检测脾脏中caspase-1表达强度；免疫组化法检测脾组织中IL-1β和IL-18表达状况,HE染色后用半定量法评估脾脏组织病理损伤程度；分析病毒滴度及caspase-1、IL-1 β和IL-18表达与组织病理损伤的关系.结果:MCMV感染后,脾组织病毒滴度在感染后3d升高,7d明显下降,14 d时用标准空斑试验已检测不到病毒；与模拟感染对照组比较,MCMV感染组感染后第3天脾组织中caspase-1表达明显升高后逐渐下降(P＜0.01)；脾组织中IL-1β和IL-18表达呈进行性升高,于感染后7d达峰值,14d减少,28d基本接近正常；脾组织病理损伤呈进行性加重,至感染后14 d达高峰,28d明显减轻；IL-1β和IL-18在脾组织中的高表达早于其组织病理损伤,随着IL-1β和IL-18表达水平的下降,病理损害也逐渐恢复.结论:巨细胞病毒感染引起caspase-1表达增加,促进炎性因子(IL-1β、IL-18)合成和释放增加.IL-1 β、IL-18不仅有抗病毒作用,同时也可能参与MC-MV播散性感染后脾组织的免疫病理损伤.
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猪溶血素突变体的构建及活性评价
目的:构建无溶血活性的猪溶血素突变体,并对制备蛋白进行功能评价.方法:根据猪溶素的晶体结构,采用定点突变分别将其353位脯氨酸突变为丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸.重组表达的突变体蛋白采用镍柱亲和层析进行柱上复性后,评价纯化蛋白的溶血活性和免疫原性.结果:获得三种猪溶素突变体,SLY( P353A),SLY( P353L)和SLY(P353V).溶血试证明SLY (P353V)无溶血活性,蛋白质免疫印迹和动物实验显示SLY( P353V)具有免疫原性.结论:猪溶素突变体SLY(P353V)无溶血活性,有免疫原性.
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重组Trail蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化条件的优化
目的:构建肿瘤坏死因子相关凋亡配体胞外功能区的原核表达质粒,优化诱导蛋白表达的相关条件,检测切胶纯化所得蛋白的抗原结合活性,以及亲和层析纯化蛋白的促凋亡功能.方法:扩增Trail胞外功能区第114 - 281个氨基酸基因序列,插入融合表达载体pET-28α(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28α(+)-Trial114 -281.以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组子,调整诱导前菌群的密度(A600)值,诱导时IPTG的浓度、温度及诱导时间,确定佳诱导条件,同时比较超声、渗透冲击和IP裂解三种破碎细菌方法以及切胶回收和Ni-NTA亲和层析方法对纯化目的蛋白的影响.Western blot鉴定切胶纯化蛋白的抗原结合活性,用Ni-NTA亲和层析方法得到的蛋白作用于A549细胞,采用流式细胞术检测检测该细胞的凋亡率.结果:成功扩增了Trail胞外区基因序列,经测序证实其正确插入到表达载体pET-28α(+)中,经IPTG诱导,在37℃时呈包涵体表达,25℃时为可溶性表达,经软件分析确定A600 =0.6,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导4h为包涵体表达的佳条件；A600 =1.0,IPTG1.0 mmol/L,诱导4h为可溶性目的蛋白表达的佳诱导条件.三种破菌方法的比较,超声法获得的蛋白多.切胶和Ni-NTA亲和柱纯化的方法都得到了目的蛋白,Western blot分析显示,切胶纯化的蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析得到的可溶性蛋白可以促使A549细胞发生凋亡.结论:成功构建了重组表达载体pET28α-Trial114 -281,在A600值、IPTG 以及诱导时间都相同的情况下,37℃出现包涵体表达,而25℃则出现了可溶性表达.切胶纯化获得蛋白有较好的抗原结合活性,亲和层析纯化的可溶性蛋白能保持其原有的功能不被破坏,促使肿瘤细胞A549的凋亡.
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厄贝沙坦通过MAPK-ERK1/2信号通路影响乳腺癌MCF-7细胞的增殖
目的:初步研究血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)阻断剂对人乳腺癌细胞系MCF-7的细胞增殖的抑制作用及其机制.方法:MTT法观察血管紧张素Ⅱ1型受体阻滞剂(ARBs)厄贝沙坦对MCF-7细胞增殖的抑制作用；采用流式细胞术分析厄贝沙坦对MCF-7细胞周期及凋亡的影响；应用Westernblot技术分别检测ERK1/2及p-ERK1/2蛋白.结果:厄贝沙坦对MCF-7细胞具有明显的抑制作用,并具有剂量依赖性；厄贝沙坦影响MCF-7细胞的周期,使得细胞的G0/G1期细胞比例增多(P＜0.05),而S期细胞比例下降(P＜0.05),抑制细胞的生长；但与对照组相比,只有高浓度的厄贝沙坦(1 × 10-4 mol/L)具有促进细胞凋亡的作用(P＜0.05)；厄贝沙坦可抑制MCF-7细胞p-ERK蛋白的表达(P＜0.05),但不影响总ERK1/2蛋白的表达(P＞0.05).结论:厄贝沙坦可以通过影响ERK1/2 MAPK信号转导通路抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长.
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Caspase-8在非小细胞肺癌中的表达及其在肺癌A549细胞侵袭转移中作用
目的:研究caspase-8蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达、临床意义及其在癌细胞侵袭转移方面的作用.方法:运用免疫组织化学方法对临床非小细胞肺癌标本中caspase-8蛋白的表达情况进行检测；运用RNAi技术对肺癌A549细胞内的caspsae-8基因进行沉默,通过Western blot、划痕实验及Transwell小室等实验对caspase-8蛋白的生物学功能进行探究.结果:癌组织中caspase-8的阳性率为73.1％,癌旁组织73.3％,正常组织中为65.4％,之间的差别无统计学意义,不同部位组织中caspase-8蛋白表达的阳性强度之间有统计学差别(P＜0.05).caspase-8蛋白在癌组织、癌旁组织及正常组织细胞内定位上也有着显著的统计学差异(P＜0.05).caspase-8蛋白的表达与癌组织的病理类型、组织学分化以及患者吸烟与否没有统计学上的差异,但caspase-8在癌组织中的表达与淋巴结转移及临床分期阳性之间有统计学相关性(P＜0.05).shRNA-Cas-8质粒转染肺癌A549细胞后,实验组转染,caspase-8被完全沉默,经过24h的培养,划痕出的空白几乎未见缩小,对照组划痕后24h,划痕两侧的细胞已基本迁移铺盖了划痕处的空白.Transwell小室结果显示实验组细胞的侵袭能力远较对照组弱,这种差异有统计学意义(P＜0.05).结论:非小细胞肺癌组织中caspase-8蛋白的表达强度低于正常组织,且定位于胞核,它在癌组织里的表达预示着更高的淋巴结转移几率和更晚的分期；完全沉默肺癌A549中caspase-8蛋白的表达,可降低肿瘤的侵袭及迁移.
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人RUVBL2真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达
目的:构建带有绿色荧光蛋白的RUVBL2真核表达载体pEGFP-N1-RUVBL2,并鉴定其在HeLa细胞中的表达.方法:以pGADT7 -RUVBL2质粒为模板,PCR扩增RUVBL2基因,首先克隆至T载体中,进一步亚克隆至p-EGFP-N1,并对重组表达载体进行酶切及测序鉴定.采用脂质体转染法将重组质粒瞬时转染HeLa细胞系,应用荧光显微镜观察绿色荧光融合蛋白的表达,并用Western blot法检测RUVBL2-GFP融合蛋白的表达.结果:经限制性酶切鉴定及测序分析证实pEGFP-N1-RUVBL2载体序列正确；荧光显微镜下可见转染的HeLa细胞中有绿色荧光蛋白的表达,Western blot法证实转染细胞中能表达RUVBL2-GFP融合蛋白.结论:pEGFP-N1-RUVBL2表达载体构建成功,并在HeLa细胞内成功表达.
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天花粉蛋白突变体TCSFYY163-165CSA的构建表达与纯化
目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并在原核系统进行表达及纯化.方法:应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(FYY163 - 165),并进行定点突变.以栝楼基因组DNA为模扳,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序.将阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot法鉴定和Ni-NTA层析纯化.结果:构建了带有TCS突变体基因(TCSFYY163- 165CSA)的重组表达质粒,使目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白.结论:成功地构建了TCS突变体基因TCSFYY163 - 165CSA,并获得高效表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径.
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D-半乳糖所致衰老小鼠抗原提呈细胞的改变及其意义
目的:研究D-半乳糖所致衰老小鼠专职性抗原提呈细胞的改变及其意义.方法:取健康昆明雌性小鼠,2月龄,运用D-半乳糖建立衰老小鼠模型并进行生物学鉴定后,采用免疫荧光和流式细胞术测定脾脏中巨噬细胞CD11b、树突状细胞CD11c、B淋巴细胞CD40的表达；采用免疫组化法测定脾脏组织Fas表达的改变.结果:模型组小鼠巨噬细胞CD11b+/MHC-Ⅱ+CD11b+的百分率为9.78±1.42,与对照组10.76+1.93相比下降(P＜0.05)；模型组小鼠树突状细胞CD11c +/MHC-Ⅱ+CD11c+、B淋巴细胞CD40+的百分率分别为5.34±0.74、43.60士8.06,与对照组7.88±1.73、56.70±10.97相比明显下降(P＜0.01).模型组小鼠脾脏组织Fas表达增加.结论:D-半乳糖所致衰老小鼠脾脏各种专职性抗原提呈细胞减少,脾脏组织Fas的表达出现渐进性增加.
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甲型副伤寒沙门氏菌蛋白指纹图谱的建立
目的:利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱建立甲型副伤寒沙门氏菌蛋白指纹图谱.方法:收集临床中分离获得的甲型副伤寒沙门氏菌36株,同时采集对照菌96株,对所收集的细菌利用16S rDNA测序技术进行分子生物学验证鉴定.利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱检测细菌蛋白,ProteinChip和Biomarker Wizard软件自动采集数据,将结果用BioMarker Patterns软件建立分类树鉴定模型,并进行盲法验证.结果:在相对分子质量(Mr)3000～20 000范围内,捕获104个蛋白峰,其中90个蛋白峰差异有统计学意义(P＜0.01),择优选出质荷比(M/Z)为10 061.7的蛋白峰建立甲型副伤寒沙门氏菌的分类树模型,甲型副伤寒沙门氏菌诊断的灵敏度和特异度通过盲法验证为100％.结论:采用SELDI-TOF MS技术建立的甲型副伤寒沙门氏菌的分类树诊断模型,可用于该菌的快速鉴定.
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不同来源血清或血浆培养条件下的树突状细胞表型和功能的比较
目的:比较在添加100 mL/L胎牛血清(FBS)、20mL/L人AB血清和10 mL/L供者自体血浆3种不同培养条件下树突状细胞(DC)的表型和功能,为临床应用DC找到安全且有效的培养方法.方法:将外周血单个核细胞( PBMCs)分别在添加100 mL/L FBS,20 mL/L人AB血清,10 mL/L供者自体血浆培养条件下诱导成DC,在培养的第8天,利用流式细胞术(FCM)检测3种培养条件下DC的得率、纯度、表型和抗原捕获能力；用MTT的方法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力.结果:在DC集落数量、DC得率、DC纯度、抗原捕获能力和刺激淋巴细胞增殖的能力上,100 mL/L FBS培养组优于20 mL/L AB血清和10 mL/L自体血浆组,3组之间DC得率差异比较具有统计学的意义(P＜0.05),而其他比较都无统计学的意义(P＞0.05).结论:利用供者自体血浆培养DC是一种安全有效的培养方法,符合细胞治疗规范,可替代异种血清或同种异体血清,成为临床级别DC培养的选择.
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FLT3与STAT3分子表达水平的变化与白血病关系的探讨
目的:通过分析HL-60细胞内FLT3受体与STAT3的表达,探讨细胞信号转导异常与白血病的关系.方法:培养人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60,利用特异性抗体,用免疫沉淀法、聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot方法检测细胞内FLT3受体与STAT3的表达.结果:在HL-60细胞内检测到FLT3受体与STAT3的表达.结论:人早幼粒细胞白血病的发生、发展可能与酪氨酸激酶介导的细胞信号转导异常有关.
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肝激酶B1通过下调细胞周期素D1抑制大肠癌细胞的体外增殖
目的:研究肝激酶B1(LKB1)基因对大肠癌细胞增殖的影响.方法:用脂质体转染法将LKB1基因表达质粒( pReceiver-LKB1)瞬时转染SW1116及SW480细胞,半定量RT-PCR及Western blot方法检测LKB1 mRNA和蛋白水平的表达；CCK8法检测SW1116及转染重组质粒的细胞体外增殖变化；半定量RT-PCR和Western blot方法检测胞内LKB1对细胞周期蛋白cyclin D1的影响.结果:转染LKB1基因后,质粒转染组LKB1表达较空质粒组及空白对照组明显升高；质粒转染组在转染后48、72、96h时,细胞活性较空质粒组及空白对照组明显降低(P＜0.01)；与对照组相比,质粒转染组的细胞内cyclin D1 mRNA和蛋白的表达明显降低.结论:LKB1可抑制大肠癌细胞的体外增殖能力,并且这一抑制效应可能通过下调cyclin D1产生.
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牙龈卟啉菌外膜蛋白ragB-GITRL真核共表达载体的构建及免疫原性研究
目的:构建牙龈卟啉菌外膜蛋白ragB和小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体( mGITRL)真核共表达载体,在体内研究其免疫原性.方法:应用PCR扩增技术,从pMD18-T-ragB中获得ragB基因编码序列片段,克隆至真核共表达载体pIRES及pIRES-mGITRL.对重组质粒进行双酶切与测序鉴定后,以脂质体介导法转染至COS7细胞,通过Western blot检测其在COS7细胞中的表达.将成功构建的重组质粒免疫小鼠,应用ELISA法检测免疫后小鼠血清中抗RagB的水平.结果:PCR扩增目的基因,酶切和测序证实重组质粒pIRES-ragB及pIRES-ragB-mGITRL成功构建,Western blot结果显示目的基因在COS7细胞及骨骼肌细胞中均过表达.小鼠血清中检测出高滴度的抗RagB的抗体.结论:pIRES-ragB-mGITRL表达载体的构建,为牙龈卟啉菌疫苗研究、预防和牙周炎治疗提供了实验依据.
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蛋白激酶PKR的克隆表达及与其相互作用的蛋白质的亲和纯化
目的:克隆并表达双链RNA调节的蛋白激酶(PKR)基因,以纯化分离与PKR相互作用的蛋白质.方法:设计特异性引物,PCR扩增分别得到FLAG-PKR-HA和HAPKR-FLAG基因片段,克隆至表达载体pSG5中.将重组质粒通过脂质体法转染PKR稳定沉默(PKRkd)的HeLa细胞,Western blot检测PKR及标签表达情况；后,利用HA、FLAG串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与PKR相互作用的蛋白,Western blot技术及银染SDS-PAGE验证PKR蛋白复合物的纯化和分离情况.结果:成功构建了PKR融合蛋白表达载体及FLAG、HA亲和纯化系统,SDS-PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了PKR蛋白带和两条可能与PKR相互作用的蛋白质片段.结论:成功纯化和分离了与PKR相互作用的蛋白质,为进一步研究奠定了基础.
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复合营养素对急性束缚冷水浸泡应激诱发的Th1/Th2细胞因子变化的影响
目的:探讨复合营养素对大鼠急性束缚冷水浸泡应激时血清Th细胞亚群相关细胞因子变化引起的Th1/Th2失衡的影响.方法:SD雄性大鼠随机分为:正常对照组、急性应激对照组、急性应激喂复合营养素组.采用束缚冷水浸泡应激模型,急性应激30 min,应激后0 min、30 min、60 min和120 min处死动物取血,分离血清保存于- 70℃C备用,ELISA试剂盒检测大鼠血清中的IL-2、IL-6和TNF-α的变化.结果:急性束缚冷水浸泡应激后可引起细胞因子IL-2水平的降低,IL-6和TNF-α升高,不同时间点(0、30、60、120 min)中30min的变化明显,应用复合营养素可削弱急性束缚冷水浸泡应激引起的IL-2水平的降低和IL-6、TNF-α的升高,同样以应激后30 min复合营养素的改善作用显著.结论:复合营养素可以显著改善急性束缚冷水浸泡应激应激大鼠Th1/Th2细胞因子IL-2、IL-6和TNF-α的变化,提示复合营养素可改善应激大鼠的免疫调节功能,恢复Th1/Th2平衡,对于提高机体抗应激能力、减轻应激所造成的损伤可能具有一定的作用.
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间充质干细胞诱导小鼠CD8α+CD11b+jagged2high调节性树突状细胞的方法
目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外诱导CD8α+ CD11b+jagged2high调节性树突状细胞(DCregs)的方法.方法:应用4种细胞因子体外刺激BALB/c( H-2d)小鼠骨髓有核细胞( BMCs)3 d,流式细胞术(FCM)分选树突状细胞(DCs),与BMSCs共培养10 d,诱导DCregs产生.FCM分析共培养前后DCs的表型、细胞周期及Notch信号通路中Jagged1、Jagged2配体的表达变化.结果:小鼠BMSCs在体外成功诱导新型DCs转变为DCregs,其CD86、CD80、CD40、MHC-Ⅱ表达均明显下降(P＜0.05),而CD205、Jagged1、Jagged2表达均明显上升(P＜0.05)；细胞周期中(G2+S)期细胞增加.结论:MSC可诱导DC细胞向DCregs转化,该MSC-DCregs具有致免疫耐受性表型,增殖能力提高；MSC诱导免疫耐受的机制可能与上调DC的Jagged1和Jagged2基因表达,激活T细胞Notch信号通路相关.
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血管内皮细胞生长因子在人胎儿胃黏膜的表达
目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)在不同胎龄的正常人胎儿胃黏膜的表达及其意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测VEGF在20例12～34周人胎胃黏膜的表达.结果:VEGF在20例人胎胃黏膜上皮细胞和腺上皮细胞中均有表达,免疫反应产物分布于细胞质,胞核为阴性,在胃黏膜上皮细胞中的表达较腺上皮细胞弱.经与HE染色的邻片比较,腺上皮细胞中的免疫反应阳性细胞为壁细胞.随着胎儿的发育,胃腺内VEGF呈免疫反应阳性的壁细胞数目增多,免疫反应强度无明显变化.结论:VEGF在不同胎龄的人胎儿胃黏膜组织中均有表达,提示VEGF与人胎儿胃黏膜的生长发育有重要的调节作用.
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支气管哮喘患儿血清中IL-17、IL-21和IL-22水平变化及其临床意义
目的:探讨Th17细胞分泌的细胞因子IL-17、IL-21和IL-22在血清中的表达与儿童支气管哮喘的相关性以及与儿童哮喘发作程度的关系.方法:采用ELISA法,对68例哮喘患儿和30例健康对照患儿血清中IL-17、IL-21和IL-22的水平进行检测.患儿血清中IL-17、IL-21和IL-22与患儿性别、年龄的关系进行Pearson相关分析.结果:三种细胞因子的水平在不同性别间无显著性差异,与年龄亦无相关性.哮喘患儿血清中IL-17(37.35±10.52) pg/mL和IL-22 (407.42±137.41) pg/mL的表达水平明显高于健康对照组,而IL-21表达水平在两组之间无差异；IL-21和IL-22的表达与哮喘发作程度无关,而IL-17表达水平与哮喘发作程度呈正相关.结论:Th17细胞分泌的细胞因子IL-17和IL-22在哮喘的炎症中发挥重要作用,是监测病情和诊断哮喘的重要指标之一.
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Treg/Th17平衡在巨细胞病毒感染发病机制中的作用
目的:研究调节性T细胞(Treg/Th17)细胞失衡在巨细胞病毒感染(CMV)免疫调节机制中的作用.方法:将CMV感染患儿按诊断标准分为激活感染组与潜伏感染组,同时设立正常对照组,采用流式细胞术(FCM)分析各组外周血Treg、Th17的百分比,并计算Treg/Th17比值；同时采用ELISA和RT-PCR法检测Treg主要相关因子(IL-10、Foxp3)和Th17主要相关因子(TGF-β、IL-17、IL-6、IL-23及ROR-γt)表达水平.结果:与对照组比较,CMV感染后Treg细胞百分率降低,Th17细胞升高,致Treg/Th17比值下降(P＜0.05)；CMV感染后两组间比较,激活感染组Trg、Th17比值和Treg主要相关因子表达水平下降更明显,而Th17主要相关因子表达水平显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:Treg/Th17平衡参与了CMV感染发病免疫机制,并可能与病毒潜伏-激活状态相关.
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钙离子结合蛋白S100A9在乳腺癌中表达及临床意义
目的:探讨钙离子结合蛋白S100A9在乳腺癌患者中的表达及临床意义.方法:选取39例乳腺癌患者术前、15例术后血清及10例健康女性血清,12例手术切除肿瘤组织标本,应用ELISA检测乳腺癌患者血清S100A9水平,采用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中S100A9的表达,分析S100A9表达与临床病理特征的关系.结果:S100A9在乳腺癌组患者血清中表达水平高于健康组(P＜0.01),有淋巴结转移乳腺癌组血清S100A9表达水平高于无淋巴结组(P＜0.01),乳腺癌患者术后S100A9血清表达水平降低(P＜0.01).乳腺癌患者血清中S100A9水平与患者年龄、肿瘤大径、组织学分级和病理类型有关(P＜0.01).S100A9在乳腺癌组织中表达明显高于癌旁正常组织.结论:S100A9表达水平在乳腺癌血清和组织中明显升高,表明S100A9可作为乳腺癌患者诊断和疗效观察指标.
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B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)在类风湿关节炎滑膜组织的表达
目的:探讨CD28家族共抑制分子B和T淋巴细胞衰减因子在类风湿关节炎(RA)患者滑膜组织内的表达.方法:免疫组化法检测RA患者滑膜组织BTLA的表达；并使用免疫荧光法检测BTLA的细胞定位及分布.结果:免疫组化结果证实,RA患者滑膜组织中有大量的BTLA阳性细胞,形态观察提示这些阳性的细胞主要是淋巴结处的淋巴细胞及巨噬细胞；免疫荧光分析进一步表明这些BTLA+细胞主要为CD3+T细胞及CD68+巨噬细胞,少数CD31+内皮细胞也表达BTLA.此外,对比其他B7家族共刺激分子在滑膜组织中的分布,免疫荧光发现BTLA共表达于B7-H1+,B7-H4+及HVEM+细胞,但不表达于B7-DC+及B7-H3+细胞.结论:关节炎滑膜组织内有大量BTLA阳性细胞,提示BTLA有可能参与并调节了关节炎的病理进程.
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人蛋白酶体α7亚基在原发性肝细胞肝癌中的表达及临床意义
目的:探讨人蛋白酶体α7亚基(PSMA7)与原发性肝细胞肝癌(HCC)发生发展的关系.方法:采用免疫组织化学法检测254例HCC中PSMA7蛋白的表达.结果:在癌组织细胞质中,发现不同临床分期和病理分级之间,PSMA7的表达均无明显差异(P＞0.05),但不同肝硬化程度间具有显著性差异(P＜0.01),以早期肝硬化患者肝细胞表达量高.在癌组织细胞核中,不同临床分期之间PSMA7的表达无明显差异(P＞0.05),但不同病理分级之间具有显著性差异(P＜0.05),同时与肝硬化的程度有一定关系(P＜0.05),亦以早期肝硬化患者肝细胞表达量高.另外,PSMA7的表达在癌组织和癌旁组织的细胞质中无明显差异(P＞0.05),而在细胞核中具有显著性差异,癌组织高于癌旁组织(P＜0.01).淋巴结转移组细胞核中的PSMA7表达高于无淋巴结转移组(P＜0.05).结论:PSMA7在HCC细胞核中表达增高,与病理分期有关.此外,PSMA7的表达与肝硬化程度和淋巴结转移有关.
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气道上皮IL-25促进哮喘气道重塑
目的:通过检测白细胞介素-25 (IL-25)在嗜酸细胞性哮喘(EA)及非嗜酸细胞性哮喘(NEA)患者的血清、诱导痰及气道上皮中的表达,探讨其在支气管哮喘气道重塑中的作用.方法:选取初诊的哮喘患者55例,健康对照组27例,所有受试者均进行肺通气功能检查,然后采集空腹静脉血及诱导痰.据诱导痰中嗜酸性粒细胞(EOS)的比例将哮喘患者分为EA组和NEA组.采用ELISA检测血清及诱导痰中IL-25的水平,同时对其中的10例EA组患者、10例NEA组患者及10例健康对照者行电子支气管镜气道黏膜活检,免疫组织化学技术分析IL-25在气道上皮的表达,HE染色测量气道重塑的重要指标-基底膜厚度,并行血清及诱导痰中IL-25的水平与基底膜平均厚度的相关性分析.结果:与正常对照组相比,EA和NEA组哮喘患者的肺功能轻度受损.ELISA结果显示哮喘患者血清及诱导痰中IL-25的水平明显高于对照组(P＜0.05),而EA和NEA组哮喘患者间差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学结果显示哮喘患者气道上皮IL-25的表达明显高于对照组,HE染色显示气道黏膜下的基底膜厚度明显增加(P＜0.05).相关性分析显示哮喘患者血清及诱导痰中IL-25水平与气道黏膜下基底膜平均厚度成正相关.结论:IL-25可能有促进哮喘气道重塑的作用,嗜酸性粒细胞与基底膜厚度无明显相关性,其在哮喘气道重塑中的作用可能是有限的.
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人类新基因CTRP4的原核表达及多克隆抗体的制备
目的:构建新基因CTRP4的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化rhCTRP4-his蛋白,制备和鉴定小鼠抗人CTRP4多克隆抗体,为进一步研究人类新基因CTRP4的生物学功能奠定基础.方法:从pcDNA3.1-myc/his(-)B-hCTRP4重组载体中通过PCR的方法扩增CTRP4基因ORF中不含信号肽的目的基因片段,将得到的片段双酶切定向插入pET-32a中,构建原核表达载体pET-32a-hCTRP4.构建好的质粒在E.coli BL21( DF3)中进行诱导、表达,通过镍亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度.将pcDNA3.1-myc/his(-) B-hCTRP4重组质粒和纯化好的融合蛋白依次免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体.并对抗体进行纯化、效价测定以及特异性鉴定.结果:DNA测序证实构建的pET-32a-hCTRP4重组表达载体含有hCTRP4编码序列,其序列比对分析与GenBank中公布序列一致,质粒在E.coli中表达相对分子质量(Mr)为35 000的目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析纯度为95％以上.ELISA法检测抗体效价为1∶20 000,Western blot、免疫荧光细胞化学和免疫组化分析显示抗体能特异性识别重组hCTRP4以及天然状态hCTRP4蛋白.结论:成功构建了hCTRP4蛋白的原核表达载体,并获得较高纯度的融合蛋白,制备了高效价、高特异性的多克隆抗体.
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人源性抗NS5B单链抗体的制备及鉴定
目的:运用核糖体展示技术制备抗HCV NS5B人源性单链抗体,并进行初步分析.方法:以HCV阳性患者的外周血单个核细胞为材料,扩增全套重链可变区和轻链可变区的基因,构建人单链抗体(scFv)核糖体展示文库；以NS5B蛋白为靶标筛选到scFv基因,并将其连接到pET16b载体并转化至大肠杆菌BL21,诱导表达scFv；对scFv基因测序和特异性分析.结果:成功构建抗HCV scFv库；获得2个具有较强结合活性的scFv；基因分析证实获得预期抗体.结论:成功制备了人源性抗NS5B scFv,为HCV的免疫治疗奠定了基础.
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人源性噬菌体抗体库的构建及抗amylin抗体的初步筛选
目的:构建人源性噬菌体抗体库,从中筛选胰淀素(amylin)单克隆抗体(mAb),测定其特异性及抗原结合活性.方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PcR方法扩增人免疫球蛋白Fd段和轻链基因,构建噬菌体抗体库.酶切和PcR鉴定后,阳性克隆进行DNA测序分析.用人amylin抗原对抗体库进行筛选富集,将得到的阳性克隆进行Phage-ELISA鉴定,结果进行统计学分析.结果:终构建的抗体库库容约为0.8×108,酶切鉴定显示有插入片段,抗体库重组率为70％.阳性克隆进行DNA测序证实所获基因为人免疫球蛋白可变区基因.以amylin抗原进行3轮筛选,抗体库得到特异性富集.阳性克隆进行Phage-ELISA检测证实有良好的抗胰淀素抗原的特异性.结论:成功构建了一个人源性噬菌体抗体库,为从中获得人源抗amylin的mAb奠定了实验基础.
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人NYD-SP28基因原核表达及其多克隆抗体的制备
目的:构建人NYD-SP28基因原核表达载体,表达其原核蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生中的作用.方法:以原始质粒为模板,用PCR法扩增人的NYD-SP28基因开放阅读框全长,将其克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,构建重组质粒pET28 a-NYD-SP28.将该重组质粒转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导原核蛋白的表达,纯化蛋白以免疫小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体的滴度.结果:成功构建了用于原核蛋白表达的重组质粒,并在BL21菌中表达NYD-SP28原核蛋白,用亲和层析Ni柱进行纯化得到NYD-SP28原核蛋白.用纯化的NYD-SP28蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度达到1/10万.结论:成功构建人NYD-SP28原核表达载体,并获得了高纯度的NYD-SP28蛋白及鼠抗NYD-SP28多克隆抗体,为进一步研究NYD-SP28的功能奠定了基础.
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重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体在毕赤酵母中的表达及活性检测
目的:采用酵母多拷贝分泌表达载体pPIC9K表达重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体cRFB4FC和cRFB4CH3,并进行活性检测.方法:采用基因克隆技术获得两抗体的基因,然后将其克隆入表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9K/cRFB4CH3,经测序鉴定正确,电转化人毕赤酵母SMD1163中,将经G418抗性筛选出的重组酵母菌株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,经ELISA检测生物学活性.采用正交试验优化重组酵母菌株的表达条件以提高抗体的表达量.结果:获得重组表达质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9 K/cRFB4CH3,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株,经甲醇诱导表达出cRFB4FC和cRFB4CH3蛋白.它们在SDS-PAGE上分别表现为相对分子质量(Mr)约326 000和295 000的蛋白区带,在Western blot分析中均可被山羊抗人IgGFc单克隆抗体(mAb)识别,经ELISA分析它们都具有较高的生物学活性.优化表达条件后,抗体的表达量分别提高了196.4％和151.7％.结论:抗体cRFB4FC和cRFB4CH3在酵母菌SMD1163中成功获得高效分泌表达,并有免疫学活性.
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免疫豁免与移植物耐受
组织、器官来源短缺和移植排斥严重制约了器官移植的临床运用.随着分子免疫学的研究进展,发现有些天然免疫分子与免疫活性细胞接触后能够诱导免疫细胞的凋亡,在形成局部免疫耐受的同时又不会造成全身性免疫抑制,这对克服移植排斥有重要意义.
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程序性死亡分子1及其配体在急性感染性疾病中的作用
程序性死亡分子1 (PD-1)及其配体在慢性感染性疾病中抑制免疫力的作用已得到证实,但它在急性感染性疾病中的具体作用却不是十分明确.近研究结果提示:PD-1途径在一些急性感染性疾病中能够抑制CD8+T细胞应答,并能通过失助的记忆CD8+T细胞抑制应答.PD-1除了能限制T细胞和B细胞非依赖性适应性免疫反应之外,还能限制树突状细胞(DC)和巨噬细胞的功能,这是近研究发现的PD-1在固有免疫中的一种新的作用.因此,PD-1在急性感染性疾病中能够影响免疫反应,但对这种影响作用发生机制的研究则刚刚起步,现就PD-1及其配体在急性感染性疾病中对效应记忆性T细胞应答的调节作用的研究进展进行综述.
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双链RNA依赖性蛋白激酶及与其相互作用的蛋白质
双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR)是一个经典的干扰素可诱导蛋白,具有抗病毒活性,并参与了细胞信号转导、细胞生长、分化和凋亡等生理过程.此外,PKR在抗病毒的天然免疫应答中亦发挥着十分重要的调控作用.近来,越来越多的研究发现报道了与PKR相互作用的蛋白质,为阐明PKR功能的分子机制提供了重要依据.本文主要介绍了已被证实与PKR相互作用的蛋白质,并对PKR发挥作用的机制进行探讨.
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诊断用过敏原膜芯片的制备及其应用研究
目的:制备过敏原诊断用膜芯片并优化其实验条件,探讨其在过敏性疾病诊断中的应用价值.方法:以虾、蟹、鳖、大豆等过敏原按一定点阵排列吸附在不同膜载体(NC膜、PVDF膜)上,制作含有阳性对照和阴性对照的膜芯片,用斑点酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)从包被液、过敏原包被浓度、二抗浓度等方面优化工作条件,并与德国Allergopharma的过敏原检测试剂盒比较结果符合度.将包被好的PVDF膜保存在4℃冰箱中在3个月内检测其稳定性.结果:PVDF膜的效果优于NC膜,肉眼观察膜上斑点的显色即可确定相应过敏原,以试剂盒检出的阳性血清28份作比较,结果总符合率达82.1％ (23/28),差异无统计学意义(P＞0.05).不同时间同批试剂重复检测结果完全一致,制备的过敏原膜芯片在4℃密封避光可稳定保存3个月.结论:建立的Dot-ELISA法膜芯片能同时检测多种过敏原,具有用血量少,成本低,操作简便,安全特异等优点,值得临床推广应用.
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环氧合酶2mRNA3'UTR荧光素酶报告基因载体的构建
目的:通过构建环氧合酶2( COX2)mRNA 3'UTR的全长及其截短体荧光素酶报告基因载体,为研究COX2基因在炎症条件下的的转录后调控提供有效的工具.方法:通过从胃癌细胞SGC-7901提取RNA,反转录成cDNA后,以此为模板,PCR扩增COX23’非翻译区(3’-UTR)全长及截短的序列,并将该序列连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-control,构建pGL3-COX2 3'UTR全长及pGL3 -COX23' UTR不同截短体.测序后将上述载体分别与pRL-TK载体共转染293-T细胞,48 h后裂解细胞检测荧光素酶的活性.后通过ELISA检测在IL-1β的刺激下COX2的下游产物PGE2的表达,并再次测定pGL3-COX2 3' UTR全长的荧光素酶活性.结果:成功构建了pGL3-COX2 3'UTR全长及pGL3 -COX23’UTR不同截短体,荧光素酶报告系统表明COX2 3 'UTR对基因表达具有较强的调控作用.而在炎症因子IL-1β的刺激下,pGL3-COX2 3'UTR全长荧光素酶的活性明显升高.结论:成功构建了COX2 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因载体并证明在IL-13的刺激下COX2表达上调,参与转录后调控.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
