细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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实验性自身免疫性脑脊髓炎中B7-H1分子在脾脏和中枢神经系统淋巴细胞上的表达变化
[目的]观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病高峰期淋巴细胞表面B7-H1分子的表达变化,探讨B7-H1在EAE发病和病情进展中的作用.[方法]以MOG35-55诱导雌性C58BL/6小鼠制备EAE动物模型,并对其行为学变化进行记录与评分.分别于发病前和发病高峰期处死小鼠,分离脾脏与中枢神经系统中的淋巴细胞,用流式细胞术分析淋巴细胞表面B7-H1分子的表达差异.[结果]与发病前相比,EAE发病高峰期脾脏分离的淋巴细胞中B7-H1阳性细胞率由(35.1±2.46)％下降至(18.9±2.06)％(P＜0.01),其中CD4+T细胞中B7-H1阳性细胞由发病前的(6.4±1.25)％下降至发病后的(2.3±1.04)％(P＜0.05).中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有8.7％为B7-H1阳性细胞.[结论]在EAE发病过程中,B7-H1分子在外周淋巴细胞的阳性细胞数下降,而中枢神经系统浸润的淋巴细胞中有一定比例的B7-H1阳性细胞,提示B7-H1可能在EAE发病过程中发挥重要作用.
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剪切因子SC35体外调节B7-H3分子的表达
[目的]利用生物信息学及分子生物学体外探讨剪切因子SC35对协同刺激分子B7-H3的表达调控机制.[方法]通过生物信息方法筛选可能参与协同刺激分子B7-H3表达的调控蛋白,再通过定量PCR及RNA干扰实验验证剪切因子是否参与该分子的调控.[结果]剪切因子SC35、SRP40、SF55可能参与B7-H3的表达调控,体外发现T细胞活化后B7-H3表达上调,SC35同时也表达上调；继而通过RNA干扰抑制SC35的表达,发现B7-H3的表达也同时降低.[结论]剪切因子SC35可能参与了B7-H3的表达调控,对研究该分子的生物学功能奠定了基础.
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活化血小板对类风湿关节炎滑膜炎症和增生影响的实验研究
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜慢性炎症病变为主的自身免疫性疾病[1].RA软骨和关节破坏的主要原因是成纤维样滑膜细胞的类肿瘤样增生、新生血管翳侵蚀、过量分泌的炎性细胞因子及基质金属蛋白酶(matrix metallo-proteinases,MMP)[2-4].
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肿瘤转移相关蛋白1在小鼠肝癌诱发过程中的表达与意义
[目的]建立BALB/c小鼠肝癌动物模型,观察分析肿瘤转移相关蛋白l( MTA1)在建模过程中表达的变化及可能的意义.[方法]采用联合二乙基亚硝胺( DEN)/四氯化碳( CCI4)/乙醇的方法诱导正常成年BALB/c雄性小鼠150 d,HE染色观察小鼠肝脏病变情况,免疫组化染色观察MTA1在肝脏病变部位的表达情况.[结果]实验组小鼠肝脏镜下依次出现炎症、纤维化和肿瘤性改变.在肝脏病变进展的进程中,MTA1的表达量增加；且肝硬化期,MTA1主要在胞质中表达.[结论]MTA1在DEN诱发小鼠肝肿瘤过程中表达量增加、表达位置改变,提示MTA1可能在肝脏肿瘤形成的全程均具有重要作用.
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Notch信号介导共培养脐带间充质干细胞和造血干细胞的相互作用
[目的]探讨脐带间充质干细胞( UC-MSC)体外与造血干细胞共培养后Notch信号分子的改变.[方法]通过胶原酶消化方法分离UC-MSC,通过流式细胞仪检测以及成脂、成骨和成软骨诱导鉴定UC-MSC具备间充质干细胞的特性.进而,将UC-MSC与脐血CD34+造血干细胞(HSC)体外培养,实时PCR方法检测MSC及CD34+细胞表面Notch配体及受体表达以及表达是否存在变化；在共培养体系中加入Notch信号阻滞剂DAPT(γ-secretase抑制剂),比较Hes-1基因活化状态的改变.[结果]体外实验显示UC-MSC在形态学、细胞表面表型和诱导分化能力上均具备间充质干细胞的特性.UC-MSC及CD34+细胞表面存在Notch信号配体及受体的表达,共培养后Jagged 1、Notchl基因表达明显增加；共培养后CD34+细胞中的Hes-1基因表达明显增加而加入DAPT后Hes-1基因表达未检出明显改变.[结论]UC-MSC支持造血中,Notch信号可能发挥重要作用.
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LPS诱导心肌成纤维细胞HMGB1的释放与Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白分泌的相关性研究
[目的]探讨小鼠心肌成纤维细胞(CFs)在LPS刺激下高迁移率族蛋白( HMGB1)释放与Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白分泌的相关性.[方法]从7～14 d BALB/c小鼠心脏中分离培养心肌成纤维细胞,分别用LPS(500 ng/mL)刺激0,6,12,24,36,48 h后收取细胞及其上清.采用RT-PCR检测HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平,通过Western blot检测细胞及其培养上清中HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量；采用免疫荧光分析HMGB1在细胞内的定位.[结果]LPS刺激CFs 6 h时HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平无明显变化,12、24、36、48h后HMGB1、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达量均增加.Western blot 检测发现,LPS刺激CFs24 h后细胞上清可检测到HMGB1蛋白,且细胞中HMGB1的表达呈现先增加后降低的现象.免疫荧光观察到HMGB1的释放伴随着从细胞核到细胞质的转位过程.Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的Western blot结果均呈现增加趋势.[结论]LPS刺激CFs后HMGB1由细胞核转移到细胞质并可主动分泌到胞外,其作用呈现一定的时间依赖性.与心肌纤维化密切相关的Ⅰ、Ⅲ型胶原在LPS刺激后表达量明显增加,提示内源性HMGB1的定位及分泌可能与脓毒症引起的心功能紊乱后期的心肌纤维化可能有一定的关系.
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法舒地尔对LPS刺激小胶质细胞表型演变的影响
[目的]利用体外培养的BV-2小胶质细胞,探讨法舒地尔(Fasudil)抑制LPS激活的炎性反应和小胶质细胞不同亚群的转换.[方法]BV-2小胶质细胞进行常规培养和传代,实验分为PBS对照组、PBS联合Fasudil处理组、LPS刺激组、LPS联合Fasudil干预组.NO产生采用Griess法,TNF-α释放采用ELISA法,而M1和M2亚群分析采用流式细胞技术.[结果]LPS处理导致典型的M1型小胶质细胞特征,而Fasudil 处理可抑制LPS诱导的NO产生和炎性细胞因子TNF-α的释放,并且可以转化炎性M1型细胞至抗炎和修复的M2型细胞.[结论]Fasudil显示了良好的抗炎效果,可能与M1小胶质细胞转化为抗炎和修复功能的M2型细胞有关.
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重叠延伸PCR合成风疹病毒E1蛋白抗原肽基因及其表达
[目的]利用重叠延伸PCR合成风疹病毒E1基因的抗原肽段,构建其原核表达载体并表达蛋白,为进一步获得高质量的rE1重组抗原肽奠定基础.[方法]利用软件对风疹病毒E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化；设计多对寡核苷酸引物,以重叠延伸PCR法合成相应抗原肽段,克隆后测序鉴定.再以酶切连接的方法将合成的抗原肽序列克隆导入原核表达载体pET32a；利用IPTG诱导抗原肽段的表达,SDS-PAGE和Western blot法分析表达产物.[结果]经过6轮重叠延伸PCR扩增,成功获得与预期目的序列一致的风疹病毒E1基因抗原肽并构建获得重组质粒pET32-rE1；在37℃下分别以终浓度为1 mmol/L和0.5 mmol/L的IPTG诱导抗原肽表达,SDSPAGE和Western blot法检测到预期的蛋白条带；且以IPTG 终浓度为1 mmol/L诱导6h后表达量高.[结论]成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因抗原肽段,构建其原核表达载体pET32-rE1并表达该抗原肽.
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醛酮还原酶AKR7A5蛋白的纯化及其对萘醌类化合物的底物特异性研究
[目的]探讨小鼠醛酮还原酶AKR7A5蛋白对萘醌及其衍生物的底物特异性.[方法]IPTG(异丙基硫代半乳糖糖苷)诱导BL21pLysS大肠杆菌中His标签的AKR7A5融合蛋白大量表达,利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱纯化His-AKR7A5融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot法鉴定纯化的AKR7A5蛋白.使用AKR酶活性实验检测纯化的重组AKR7A5蛋白对萘醌类化合物的底物特异性.[结果]经SDSPAGE和Western blot验证,成功纯化了His标签的AKR7A5融合蛋白；AKR酶活性实验结果显示,重组AKR7A5蛋白对散沫花醌有中等亲和力,对胡桃醌和维生素K3有较低的亲和力,对1,4-萘醌无亲和力.[结论]成功纯化了重组AKR7A5蛋白,并检测了其对萘醌类化合物的底物特异性,结果表明醛酮还原酶很可能选择性地参与萘醌类化合物的代谢.
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唑来膦酸刺激健康人和骨肉瘤PBMCs体外扩增γδT细胞
[目的]探讨唑来膦酸( Zol)联合IL-2对健康人和骨肉瘤患者末梢血γδ T细胞的扩增和细胞毒性作用的影响.[方法]取健康人和骨肉瘤患者外周血来源的单个核细胞,分别使用IL-2和Zol联合IL-2刺激体外扩增,流式细胞技术检测γδ T细胞的纯度,并计算其扩增倍数.以Daudi细胞作为阳性对照、Raji细胞为阴性对照,并以人成骨细胞系hFOB细胞作为正常对照,用LDH法检测扩增后γδ T细胞的细胞毒活性的变化.[结果]健康人和骨肉瘤患者外周血单核细胞经过体外14 d的培养,Zol联合IL-2组可高度选择性扩增γδT细胞,并且扩增后γδ T细胞具有杀伤活性,而对正常细胞无杀伤活性.[结论]健康人和骨肉瘤患者PBMCs经唑来膦酸联合IL-2刺激后,可获得高纯度具有较强的杀伤作用的γδT细胞.
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与14-3-3ζ相互作用的蛋白Polo样激酶1的筛选与鉴定
[目的]应用酵母双杂交系统筛选与14-3-3ζ相互作用的蛋白,进一步鉴定其与Polo样激酶1(Plkl)相互作用.[方法]构建pGBKT7-14-3-3ζ诱饵表达载体,筛选HeLa细胞cDNA文库中与14-3-3ζ相互作用蛋白,进一步通过共转酵母、免疫荧光以及外源性和内源性的细胞免疫共沉淀实验验证两者的相互作用.[结果]通过酵母双杂交系统筛选出的阳性相互作用蛋白中包括Plk1,进一步通过共转酵母,外源性和内源性的细胞免疫共沉淀实验证实两者的相互作用,免疫荧光实验证实两者共定位于有丝分裂过程中胞质分裂期的中体.[结论]Plk1是高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在中体的成熟,有丝分裂期染色体的分离,胞质分裂以及DNA的损伤应答等环节发挥重要作用,其与14-3-3ζ的相互作用为14-3-3蛋白家族参与有丝分裂(M期)的调控提供了直接证据.
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Let-7维持乳腺癌干细胞的特性及机制的研究
[目的]研究let-7在乳腺癌干细胞中的表达,探索let-7影响乳腺癌干细胞的特性及机制.[方法]采用SP分选法,分选乳腺癌细胞系MCF-7中的SP及NSP细胞亚群；运用实时定量PCR法检测MCF-7细胞系中SP、NSP亚群let-7a/b/c的表达；通过Western blot法检测Ras、ERK蛋白在MCF-7细胞系中SP、NSP亚群中的表达,探索let-7维持乳腺癌干细胞特性的机制.[结果]SP侧群细胞占MCF-7细胞的3.3％,加入维拉帕米抑制干细胞外排荧光染料Hoechst33342的功能后,SP侧群细胞占乳腺癌MCF-7细胞的比例下降至0.4％.Let-7miRNA在SP细胞中的表达低于NSP细胞,其中let-7b/c在SP及NSP亚群中表达差异大；p-Ras、p-ERK在SP细胞中的表达高于NSP细胞,t-Ras及t-ERK的表达无明显差异.[结论]SP法是一种可有效分离干细胞的方法,乳腺癌细胞系MCF-7中存在肿瘤干细胞亚群；let-7在乳腺癌干细胞中的表达低于普通肿瘤细胞,而p-Ras、p-ERK在乳腺癌干细胞中的表达高于普通肿瘤细胞,let-7的低表达失去了对Ras mRNA的抑制,使Ras信号转导通路激活,进而磷酸化的p-Ras和p-ERK表达升高,维持乳腺癌干细胞的功能.
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血管紧张素-(1-7)对醛固酮激活大鼠肾间质成纤维细胞的影响
[目的]观察血管紧张素-(1-7)[ Ang-(1-7)]对醛固酮(ALD)激活大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)及细胞外基质分泌的影响并初步探讨其机制.[方法]体外培养大鼠肾间质成纤维细胞,分为对照组、Ang-(1-7)组、ALD组、ALD+Ang-(1-7)组.培养48 h后,运用免疫细胞化学染色法检测细胞激活标志物α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)的表达；酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的含量；按上述实验分组干预30 min后,运用Western blot法检测细胞裂解液中磷酸化ERK1/2(pERK1/2)及总ERK1/2( tERK1/2)的表达.[结果]与对照组比较,ALD组及ALD+ Ang-(1-7)组细胞α-SMA、ColⅠ及ERK1/2相对表达量则显著增加(P＜0.05)；与ALD组比较,ALD+ Ang-(1-7)组细胞α-SMA、Col Ⅰ及ERK1/2相对表达量明显减少(P＜0.05).[结论]Ang-(1-7)可抑制ALD介导的肾间质成纤维细胞激活,减少细胞外基质成份Col Ⅰ的分泌,ERK1/2信号通路在这一过程中具有一定作用.
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肠道病毒71型多表位-mGITRL真核表达质粒的构建、表达及其免疫原性研究
[目的]构建肠道病毒71型(EV71)多表位-mGITRL 真核表达质粒并对其免疫原性进行研究.[方法]串联已证实的VP1表位并合成(VP1’)；PCR扩增获得mGITRL,克隆至真核共表达载体pIRES中.对重组质粒进行测序鉴定后,以脂质体介导法转染至COS7细胞,通过Western blot方法检测其在COS7细胞中的表达.将构建好的重组质粒免疫小鼠,应用ELISA法检测小鼠血清中抗VP1的抗体滴度.[结果]PCR扩增出目的基因,测序证实真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL构建成功,Western blot结果显示目的基因在COS7细胞和肌细胞中过表达.小鼠血清中检测出高滴度的抗VP1抗体.[结论]成功扩增出目的基因并构建VP1表位的重组真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL,在COS7细胞和肌细胞中过表达,并获得高滴度的抗VP1抗体.
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凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应
[目的]质谱鉴定凡纳滨对虾相对分子质量(Mr)为21 000的次要过敏原组分肌质钙结合蛋白(SCP),分析它与其他虾、蟹等甲壳类过敏原的免疫交叉反应,以阐明SCP可作为甲壳类食物过敏原检测、检验及脱敏的标准过敏原物质.[方法]运用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定凡纳滨对虾Mr为21000的过敏原组分,利用软件BLAST、ClustalW分析甲壳类食物中该蛋白的氨基酸序列同源性,同时用纯化的21 000过敏原免疫小鼠制备其特异性多克隆抗体,通过该抗体与其他8种甲壳类食物蛋白粗提液的Western blot法结果分析该过敏原的免疫交叉反应.[结果]质谱鉴定结果显示,凡纳滨对虾21 000过敏原为肌质钙结合蛋白；氨基酸序列同源性分析显示其与斑节对虾、中国对虾、克氏原螯虾、细趾小龙虾、褐虾的SCP序列一致性为81％～100％；Western blot结果显示,针对SCP的特异性多克隆抗体与凡纳滨对虾、刀额新对虾、斑节对虾、口虾蛄、罗氏沼虾、克氏原螯虾、远海梭子蟹、锈斑鲟、中华绒螯蟹粗提液在SCP对应的21 000左右处均有反应条带.[结论]凡纳滨对虾Mr为21 000的次要过敏原为肌质钙结合蛋白,其氨基酸序列与多种甲壳类具有很高的同源性以及较强的免疫交叉反应.
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抗反转录病毒药物血液毒性反应患者外周血CD4+T和CD8+T细胞计数与病毒载量相关分析
获得性免疫缺陷综合症(acquired immune deficiency syndrome,AIDS),即艾滋病,是人类因为感染人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)后导致免疫缺陷,并发一系列机会性感染及肿瘤,严重者可导致死亡.在疾病的发展过程中,病毒载量与CD4+T细胞水平已成为判定HIV感染者病程、预测临床进展以及评价抗病毒药物疗效的重要指标[1-2].
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肾透明细胞癌中氧化应激蛋白的表达
[目的]探讨人肾透明细胞癌细胞株RLC-310与人正常肾近曲小管上皮细胞株HK-2,肾癌及其癌旁组织中氧化应激蛋白表达的差异.[方法]体外培养RLC-310和HK-2,采用PF-2D蛋白分级分离系统分离细胞总蛋白,选取差异蛋白组分进行毛细管LC-ESI-MS/MS分析,结合蛋白质数据库检索对差异蛋白进行鉴定,并对代表性氧化应激差异蛋白采用免疫组织化学方法进行验证.[结果]两个细胞株经串联质谱分析共鉴定出12个氧化应激差异表达蛋白,分别是peroxiredoxin-1( PRX-1)、peroxiredoxin-6( PRX-6)、superoxide dismutase [ Cu-Zn] SOD1、glutathione peroxidase 1、catalase、glutathione synthetase、glutathione S-transferase Pi(GSTPi)、thioredoxin、热休克蛋白10( heat shock protein,HSP10)、HSP 60、HSP 70和HSP 90.其中PRX-6、HSP 60、GSTPi三种代表性差异蛋白在人肾透明细胞癌细胞株RLC-310和人正常肾近曲小管上皮细胞株HK-2中均有表达,前者的表达水平较后者显著升高(P＜0.05),这三种蛋白在肾癌组织中表达也较癌旁组织显著升高(P＜0.05).[结论]人肾透明细胞癌中存在抗氧化应激蛋白的差异表达,这些氧化应激蛋白的异常表达在阻止肾癌细胞氧化损伤中起一定作用.
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碱性成纤维细胞生长因子在人胎儿肾脏发育中的表达及其调控作用
[目的]观察人胎儿肾脏发育的形态变化,检测碱性成纤维细胞生长因子( bFGF)在胎儿肾脏发育中的表达,探讨bFGF在肾脏发育中的调控作用.[方法]采用HE染色观察胎儿肾脏发育的形态变化,应用免疫组织化学SP法观察12、16、20、24、28周人胎儿肾脏组织内bFGF蛋白的表达.[结果]HE染色显示,人胚12周时,肾小体大半为发育和成熟阶段肾小体,并有成熟肾小管形成；13～ 16周,成熟期肾小体进一步增多,肾小管数量也增多；17～24周,发育和成熟阶段肾小体所占比例明显增大,成熟期肾小体体积进一步增大,成熟期肾小管数量增多；至28周,大部分为成熟的肾小体和肾小管.免疫组化染色显示,bFGF于胎龄12周的胎儿肾脏开始有表达,不同胎龄均表达在肾小管和集合管上皮中,随着胎龄增加,肾脏发育的成熟及肾小管数量增加,表达逐渐增多,不同胎龄的部分肾小体也有表达.[结论]bFGF可能对人胎儿肾脏的发育和成熟具有重要的调控作用.
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江苏汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其特异性配体HLA分析
[目的]分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其特异性配体HLA I类分子在江苏地区汉族人群的分布特点.方法分别利用real-time PCR法和PCR-SSP方法对173例无血缘关系的江苏汉族健康人群进行KIR和HLA-Cw,HLA-Bw4分型,并分析KIR/HLA配对组合的类型和数量.[结果]江苏汉族人群中,＞92％的个体同时表达四种抑制性KIR(iKIR)( 2DL1, 2DL2/3, 3DL1, 3DL2).2DL2/HLA-C1,2DL3/HLA-C1,2DL1/HLA-C2,3DL1/Bw4的频率分别依次分别为0.243,0.971,0.457,0.590; 2DS1/HLA-C2,2DS2/HLA-Cl的频率为0.162,0.231.54.3％的个体只表达2DL1而不表达相应的配体HLA-C2,32.9％的个体只表达3DL1而缺乏配体HLA-Bw4,另有5.8％的个体只表达HLA-Bw4而不表达3DL1.27.7％的个体同时表达3种iKIR/HLA,26％的个体同时表达两种iKIR/HLA,25.4％的个体只遗传一个iKIR/HLA配对,未发现3种iKIR/HLA同时缺失的个体.[结论]在江苏汉族人群中,存在KIR与HLA表型分离现象,抑制性KIR/HLA配对表达高于刺激性KIR/HLA配对,约1/4个体只表达单个iKIR/HLA配对.
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协同刺激分子B7-H3在重症肌无力患者外周血中的表达
[目的]检测重症肌无力(MG)患者外周血中协同刺激分子B7-H3的表达,并探讨其临床意义.[方法]收集35例MG患者和44例健康对照(HC)外周血标本,采用免疫荧光标记,流式细胞检测外周血单个核细胞模型B7-H3( mB7-H3)的表达,ELISA法检测MG和HC血浆中可溶性B7-H3(sB7-H3)的含量.[结果]MG患者外周血T淋巴细胞、单核细胞和B淋巴细胞上mB7-H3低水平表达,与HC无差异；MG患者外周血sB7-H3浓度为(2.166±0.958) ng/mL,显著低于HC (3.379±0.768) ng/mL；全身型MG(GMG)sB7-H3的浓度为(1.664±0.699)ng/mL,低于眼肌型MG(OMG)(2.396±0.985)ng/mL；并发胸腺异常的MG sB7-H3浓度为(1.593±0.441) ng/mL,低于胸腺正常MG(2.364±1.014) ng/mL; MG sB7-H3含量与QMGS评分呈负相关(r=-0.4189,P=0.012)；免疫细胞mB7-H3与血浆sB7-H3无相关性.[结论]MG患者sB7-H3表达下调,与疾病严重程度相关；在不同病理类型MG患者体内存在差异性表达,提示该分子可能参与了MG的免疫病理进程.
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急性心肌梗死早期患者血清可溶型TRAIL和IL-1O水平变化规律及二者的相关性
[目的]探讨急性心肌梗死( AMI)早期患者血清可溶型TRAIL( sTRAIL)和IL-10水平变化与AMI后心肌损伤的关系及可能机制.[方法]采用ELISA法检测40例发病6小时以内的AMI患者和20例对照组血清sTRAIL与IL-10的水平,观察两者在AMI早期的变化并行相关性研究.[结果]AMI组血清sTRAIL水平较之对照组血清sTRAIL水平显著升高(P＜0.01)；AMI组血清IL-10水平较之对照组血清IL-10水平明显降低(P＜0.01)；AMI组血清sTRAIL与IL-10水平呈明显负相关( R2=0.289,P＜0.01).[结论]sTRAIL及其受体可能通过介导心肌细胞凋亡参与AMI后的心肌损伤；AMI患者血清IL-10水平的下降可能与sTRAIL水平升高有关.
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果蝇硒蛋白D-SelK原核表达及多克隆抗体制备
[目的]克隆编码果蝇硒蛋白D-SelK结构基因并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗D-SelK的抗体.[方法]利用PCR从pGM-T-D-SelK质粒中扩增D-SelK基因,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-D-SelK,以重组质粒转化E.coli BL21 (DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,通过变性、电泳纯化D-SelK蛋白,SDS-PAGE和Westem blot方法鉴定目的蛋白的表达；以表达的D-SelK蛋白免疫家兔,制备抗D-SelK的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定.[结果]扩增了D-SelK基因,克隆于表达载体pGEX-6p-1中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确.经诱导在大肠杆菌中表达出目的蛋白,纯化后免疫家兔,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1∶51 200以上,且具有良好的特异性.[结论]已成功构建D-SelK基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达；制备出兔抗D-SelK抗体,效价及特异性均良好,这为进一步研究功能特异性的D-SelK提供了有效的手段.
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人源性抗乳腺癌单链抗体库的筛选与初步鉴定
[目的]本研究旨在已构建的大容量人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体库的基础上,筛选出高亲和力的特异性单链抗体(scFv)并对抗体基本特性进行初步鉴定.[方法]以人乳腺癌细胞系MCF-7为靶标,经过4轮淘洗,筛选出高亲和力的特异性抗乳腺癌scFv,并对其结构序列进行分析；通过ELISA和Western blot方法,鉴定scFv的亲和力和特异性,以及其蛋白的基本表达情况.[结果]成功构建具有高亲和力的抗乳腺癌单链抗体库,获得scFv的长度约为750 bp,ELISA证实所得抗体对乳腺癌细胞具有良好的亲和力和高度的特异性,IPTG诱导表达及Western blot结果显示,scFv为相对分子质量(Mr)30 000的可溶性蛋白.[结论]本研究在已构建的大容量抗乳腺癌单链抗体库的基础上,筛选获得了高亲和力的抗乳腺癌单链抗体库.研究结果为进一步获得可应用于临床诊断和治疗的乳腺癌靶向性抗体奠定了良好的基础.
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小鼠肝炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
[目的]制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb).[方法]以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb的杂交瘤细胞系.并用Western blot和IFA方法对所获得的mAb进行鉴定.[结果]共获得4株稳定分泌抗N蛋白mAb的杂交瘤细胞系,其亚类鉴定2株为IgG2a,1株为IgG2b,1株为IgG1,轻链均为k型.经鉴定4株mAb均能与重组N蛋白发生特异性反应.[结论]成功获得了特异性抗MHV N蛋白的mAb,为进一步研究N蛋白的结构功能及建立诊断学方法奠定了基础.
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人BRDT-NY多克隆抗体的制备及其在消化道肿瘤中的表达检测
[目的]构建人BRDT-NY原核表达载体,表达人BRDT-NY原核蛋白,制备其多克隆抗体,检测其在消化道肿瘤中的表达.[方法]以质粒pTriplEx2-BRDT-NY为模板,用PCR法扩增人的BRDT-NY基因.将其克隆到原核表达质粒pET28a+中,构建重组质粒pET28a +-BRDT-NY.将该重组质粒转化BL21菌,以IPTG诱导原核蛋白的表达.应用纯化的原核蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,ELISA测定滴度,并用免疫组织化学法分析该蛋白在消化道肿瘤组织中的表达.[结果]成功构建了用于原核蛋白表达的重组质粒,在BL21菌中表达BRDT-NY重组蛋白,用亲和层析Ni柱进行纯化得到人BRDT-NY蛋白.用纯化的BRDT-NY蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度均能达到1/10万.免疫组织化学染色显示BRDT-NY蛋白在消化道肿瘤中有较高的表达率.[结论]该抗体的制备为进一步研究BRDT-NY在消化道肿瘤中的发病机制奠定了基础.
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Notch信号途径在血管形成和内皮细胞中的作用
Notch信号途径除了可以直接调控免疫细胞的发生和功能外,还可以通过血管内皮细胞影响免疫应答.血管形成(angiogenesis)是成年个体血管生长重要的方式,不仅参与组织的发育与再生,还参与多种疾病如肿瘤的发生和进展.血管形成主要的调控信号是血管内皮生长因子及其受体组成的信号途径.近年来的研究表明,进化上高度保守的Notch信号途径也是血管形成的重要调控信号途径.Notch信号途径可参与血管形成中的多个步骤,如顶端细胞的分化、内皮细胞的增殖、成熟血管结构的形成等.此外,Notch信号途径还参与血管形成相关疾病的发生和进展.尤为引入注目的是,近来发现Notch信号途径是肿瘤新生血管的重要调控信号,提示深入揭示Notch信号在血管形成中的作用和机制极有可能为开发新生血管靶向治疗提供靶点.
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子宫蜕膜NK细胞与树突状细胞的协同作用:妊娠成功的关键?
免疫细胞在子宫蜕膜的选择性增多对妊娠发展起着关键性作用,其中引入注目的是子宫自然杀伤(NK)细胞和树突状细胞(DC),子宫NK细胞与滋养细胞的增殖分化、侵蚀以及螺旋小动脉重塑等密切相关,而子宫DC主要介导母体蜕膜对胚胎的免疫耐受,并且与子宫蜕膜血管生成有关.很多研究显示二者互相影响、通过共同协调来维持妊娠的发展及胚胎的发育,本文就此做一综述.
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自噬在自身免疫性疾病中的作用
自噬是细胞的自我消化过程,在细胞发育、分化、存活和内环境稳定中起关键作用,自身免疫病的发生与遗传以及环境等多种因素相关.自噬作用引起自身免疫耐受可防止自由免疫性疾病的发生,自噬功能异常与免疫疾病的发生有关.本文主要综述了自噬的分子机制及其与原发性胆汁性肝硬化、散发包涵体肌炎、克罗恩病、胰岛素依赖型糖尿病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎的关系.
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表达克隆技术在蛋白质相互作用研究中的应用
相互作用蛋白的发现与研究有助于精确地掌握蛋白质相互作用网络中各个蛋白之间的联系以及这些联系产生的生理功能.表达克隆筛选技术是经典的相互作用蛋白筛选技术之一,其基本原理是选择可能还有目的基因的文库,根据实验需要设计不同的筛选方式,经过反复筛选富集目的基因,再通过大规模测序获得目的基因序列.本文着重对报告基因筛选、黏附筛选、血清学筛选等不同筛选[方法]进行概括总结,为更好地利用这一方法进行相互作用蛋白筛选提供参考.
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CD226分子在NK细胞杀伤肿瘤中的作用及其分子机制
在肿瘤免疫中,自然杀伤细胞(NK)和细胞毒性T细胞(CTL)均发挥十分重要的作用,而NK细胞的功能受到表面活化性和抑制性受体的调控.CD226,又名DNAX辅助分子( DNAM-1),是一种表达于NK细胞、CTL细胞和血小板等多种细胞表面的活化性受体,在NK细胞的活化和杀伤功能调控中发挥重要作用.近年研究发现,CD226不仅直接参与调控NK细胞的活化和杀伤功能,在控制肿瘤转移以及调控树突状细胞(DC)功能中也发挥重要作用.本文综述了CD226分子在NK细胞杀伤肿瘤细胞中的作用及其分子机制.
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水通道蛋白8基因3’-非翻译区荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
[目的]构建水通道蛋白8(AQP8)基因3’-UTR荧光素酶报告载体,与microRNA (miRNA)共转染HT29细胞,分析miRNA对其调控作用.[方法]以HT29细胞基因组DNA为模板PCR扩增AQP8基因3’-UTR序列,并将其克隆到荧光素酶报告载体pGL3M上；根据生物信息学软件Targetscan和miRanda预测可能与AQP8基因3’-UTR作用的miRNA,将pGL3-AQP8 3’-UTR和预测miRNA共转染,利用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性.[结果]成功构建AQP8基因3’-UTR序列荧光素酶报告载体；生物信息学软件预测miRNA靶点显示AQP8基因3’-UTR可能是miR-214、miR-15a、miR-330、miR-137、miR-32、miR-612、miR-200a/141、miR-16的作用靶点；与对照组相比,miR-15a、miR-330、miR-32、miR-612、miR-200a、miR-16可使荧光素酶活性降低10％ ～45％.[结论]成功地构建AQP8基因3'UTR荧光素酶报告载体,miR-15a、miR-330、miR-32、miR-612、miR-200a和miR-16可抑制其荧光素酶活性.
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人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立
[目的]建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法.[方法]亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体.将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA( BA-ELISA).对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度.[结果]线性检测范围为(0.42 ～ 50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好；灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0％.该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义.与化学发光法相比较,回归方程为y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义.[结论]建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测.
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卵运铁蛋白夹心ELISA方法的建立及初步应用
鸡蛋营养丰富,是人类一种重要的蛋白质来源.另一方面鸡蛋又是引发过敏反应常见的食物之一.鸡蛋中的过敏原主要存在于蛋清中,包括卵清蛋白(ovalbumin,OVA)、卵类黏蛋白(ovomucoid,OVM)、卵运铁蛋白(ovotransferrin,OVT)和卵溶菌酶(lysozyme,LYS).其中OVT约占蛋清蛋白的12％左右[1].
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
