细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位: 中国免疫学会;第四军医大学
- 主办单位: 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子: 0.81
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1007-8738
- 国内刊号: 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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热应激对小鼠TLR-4表达的影响及相关研究
目的:探讨热应激对小鼠Toll样受体4(TLR-4)表达的影响及TLR-4表达与脾脏指数的关系.方法:采用ELISA法检测35℃、42℃热应激小白鼠血液TLR-4蛋白含量,并计算脾脏指数,HE染色、观察其组织病理学变化.结果:在35℃及42℃热应激组均有TLR-4的表达,35℃组2h达到高水平,与对照组相比差异显著(P<0.05),然后随应激时间延长而降低,42℃5 h达到高水平,与对照组差异不显著(P>0.05).35℃及42℃应激组脾脏指数均较正常组明显降低(P<0.05),组织病理学观察白髓比例减小,脾小体有不同程度的缩小、分布及结构不规则.结论:轻度、短时热应激促进TLR-4的表达;免疫功能的降低与脾脏变化有一定关系.
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尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡并下调HSP70基因表达
目的:探讨尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及其机制.方法:以不同浓度的尼美舒利处理体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和/或Western blot法检测caspase-9和PARP的剪切情况及HSP70的表达水平;通过RNAi技术沉默HSP70基因表达,观察其对细胞凋亡的影响.结果:尼美舒利可抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡,导致caspase-9和PARP的剪切活化及HSP70的mRNA和蛋白表达下调;在人肝癌SMMC-7721细胞中转染靶向HSP70的siRNA可沉默HSP70表达、剪切活化caspase-9和PARP,进而显著促进细胞凋亡.结论:尼美舒利可诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡,这一作用可能与抑制HSP70表达有关.
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健脾清化方有效单体对活化的肾成纤维细胞株和系膜细胞株增殖的影响
目的:观察健脾清化方有效单体对活化的肾成纤维细胞株和系膜细胞株的影响.方法:采用体外培养肾成纤维细胞株和系膜细胞株的方法,将其分为空白对照组、TGF-β12 ng/mL组、TGF-β1 2 ng/mL+中药10-5 g/mL组和TGF-β12 ng/mL+中药10-6g/mL组.采用MTT法观察24 h中药单体对两种细胞株的作用以及ELISA法对TGF-β的分泌情况.结果:与空白对照组相比,加入TGF-β1刺激因子可以促进两种细胞株的活化(P<0.05),以及TGF-β的分泌(P<0.01),中药单体可以抑制活化的细胞株增殖和TGF-β的分泌(P<0.05或P<0.01).结论:健脾清化方中药单体可以抑制活化的肾成纤维细胞株和系膜细胞株的增殖,有效防治肾纤维化,其可能的作用机制与其抑制TGF-β的分泌有关.
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IL-17对小鼠心肌成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ胶原表达的作用研究
目的:探讨IL-17对小鼠心肌成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ胶原蛋白表达的影响及其分子机制.方法:从7~14 d BALB/c小鼠心脏中分离培养心肌成纤维细胞,分别用100 ng/mL IL-17刺激0、24、48、72 h,PCR检测其表面IL-17受体、免疫荧光检测Ⅰ/Ⅲ型胶原表达水平,Western blot法检测PKCβ、Erk1/2、NF-κB磷酸化水平.结果:心肌成纤维细胞表面有IL-17RA/C的表达;IL-17刺激心肌成纤维细胞24 h后Ⅰ/Ⅲ型胶原表达明显增加,Western blot显示IL-17刺激心肌成纤维细胞后分别在30、45、45 min导致PKCβ、Erk1/2、NF-κB的磷酸化.结论:IL-17可以诱导心肌成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ型胶原的表达,其分子机制可能是PKCβ-ERK1/2-NF-κB依赖性的.
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Hyper-IL-6基因诱导的体内抗肝癌免疫功能
目的:建立稳定表达Hyper-IL-6基因的小鼠肝癌细胞株,探讨Hyper-IL-6用于诱导抗肝癌主动免疫治疗的可行性.方法:用脂质体法将Hyper-IL-6基因转染小鼠肝癌细胞系MM45T.Li,通过G418筛选获得抗性细胞株,命名为MM45T-HIL-6,RT-PCR和ELISA法检测目的基因的表达.同时筛选空载体pEGFP-C1转染的阳性克隆命名为MM45T-mock作为对照.将BALB/c小鼠随机分为3组,于各组小鼠右侧腋部皮下分别接种细胞MM45T.Li、MM45T-mock和MM45T-HIL-6 5×105个/只,体内实验观察MM45T.Li、MM45T-mock及MM45T-HIL-6的成瘤性,流式细胞仪检测荷瘤小鼠外周血中CD4+,CD8+T淋巴细胞亚群水平.结果:RT-PCR和ELISA检测结果表明,筛选到的小鼠肝癌细胞株MM45T-HIL-6中存在Hyper-IL-6的表达,而MM45T.Li和MM45T-mock不表达.体内成瘤实验结果显示,与MM45T.Li、MM45T-mock相比,MM45T-HIL-6的成瘤性下降;流式细胞分析结果显示,与接种MM45T.Li和MM45T-mock的小鼠相比,接种MM45T-HIL-6稳定表达HYPER-IL-6基因的小鼠肝癌细胞株的小鼠外周血中CD4+,CD8+T淋巴细胞水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:转染Hyper-IL-6基因的小鼠肝癌细胞株能够诱导小鼠抗肝癌主动免疫反应.
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脂氧素A4对横纹肌溶解所致急性肾损伤大鼠肾的保护作用
目的:探讨脂氧素A4( LXA4)是否能减轻横纹肌溶解所致急性肾损伤( AKI)大鼠肾损害程度并探讨其机制.方法:将SD大鼠随机分成健康对照组、AKI组和LXA4干预组(造AKI模型同时腹腔注射LXA4);采用大鼠双侧后腿注射甘油建立横纹肌溶解所致AKI动物模型.常规生化方法检测血肌酐、血尿素氮的水平,HE染色观察肾脏组织学改变,ELISA法检测血清TNF-α及IL-6水平,比色法检测肾组织MPO的活性,Western blot法检测肾组织NF-KB的蛋白表达.结果:与AKI组相比,LXA4干预组的血尿素氮及肌酐水平明显下降(P<0.05),肾脏病理损害明显改善;血清TNF-α及IL-6水平表达明显下降(P<0.05),肾组织MPO的活性及NF-κB表达明显下降(P<0.05).结论:LXA4对横纹肌溶解所致急性肾损伤有明显的保护作用,可能与LXA4降低肾组织NF-κB活化,减少炎症因子的产生和炎症细胞的浸润有关.
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甘草次酸对胶原诱导性关节炎滑膜成纤维样细胞炎症细胞因子表达和分泌的影响
目的:观察甘草次酸(GA)对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜成纤维样细胞(CIA-FLS) TNF-α、IL-1β表达分泌的影响,并观测与传统治疗药物MTX联合应用后的效果.方法:组织块培养法体外分离纯化CIA大鼠膝关节滑膜组织中CIA-FLS细胞.实验分为空白组、MTX组、GA组和GA+ MTX组4组,分别对CIA-FLS细胞进行体外药物干预实验.每组分别干预1、3、5d.Real time qPCR法检测各组CIA-FLS细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达水平,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β水平.结果:药物干预1d,CIA-FLS TNF-α、IL-1β表达均降低,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).药物干预3d,CIA-FLS TNF-α、IL-1β表达均降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),3组组间差异无统计学意义(P>0.05).药物干预5d,CIA-FLS MTX、GA、GA+ MTX均可明显抑制TNF-α、IL-1β表达(P<0.05),处理组间差异有统计学意义,按照强弱依次是GA+ MTX>MTX >GA( P<0.05).MTX、GA、GA+ MTX抑制TNF-α、IL-1β表达均呈时效依赖性,作用时间延长,抑制作用越明显(P<0.05).结论:GA、MTX、GA+ MTX对CIA-FLS炎症因子TNF-α、IL-1β表达和分泌的抑制作用依次递增,并呈时间依赖性.
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靶向人白细胞源性精氨酸氨肽酶基因shRNA重组腺病毒的构建
目的:构建靶向人白细胞源性精氨酸氨肽酶(LRAP)基因的shRNA重组腺病毒,有效抑制LRAP基因在人视网膜血管内皮细胞中的表达.方法:设计并合成3对靶向人LRAP基因shRNA的单链寡核苷酸,退火后克隆至腺病毒穿梭载体pRNAT-H1.1/Adeno得到3个重组穿梭质粒.将重组穿梭质粒和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183-AD-1中进行同源重组形成腺病毒表达质粒,并在293a细胞中包装形成重组腺病毒颗粒.重组腺病毒经扩增和滴度测定后感染原代培养的人视网膜血管内皮细胞,应用荧光实时定量PCR测定LRAP mRNA的相对表达量,筛选得到沉默效率高的LRAP shRNA重组腺病毒,并应用Western blot法验证经RNA干扰后视网膜血管内皮细胞中LRAP的蛋白表达水平.结果:PCR、酶切和DNA测序证实LRAP shRNA重组穿梭质粒和表达质粒的插入序列正确.收获病毒后的PCR证实重组腺病毒颗粒包装成功.实时荧光定量PCR筛选得到具有大沉默效率的重组腺病毒,其沉默效率达到约79%.Western blot法证实经RNA干扰后,人视网膜血管内皮细胞中的LRAP蛋白水平显著降低.结论:成功构建了靶向人LRAP基因的shRNA重组腺病毒,可有效抑制人视网膜血管内皮细胞中LRAP基因的表达.
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氧化型低密度脂蛋白抗体对单个核细胞CD36 mRNA表达的影响
目的:通过观察氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)抗体对单个核细胞CD36 mRNA表达的影响,探讨OX-LDL抗体影响泡沫细胞形成的可能机制.方法:U937细胞和新西兰兔外周血单个核细胞分别被分成4组:空白对照组(普通培养基孵育)、OX-LDL刺激组(培养基中添加50μg/L的兔抗人OX-LDL多克隆抗体)、抗体干预组(培养基中添加50 μg/L的兔抗人OX-LDL多克隆抗体及100 μg/L的纯化人OX-LDL)及单纯抗体组(培养基中添加100 μg/L的纯化人OX-LDL),经培养24 h后,利用半定量RT-PCR技术分析CD36的mRNA表达水平.结果:无论在U937细胞或兔单个核细胞中,OX-LDL刺激组及抗体干预组CD36 mRNA的表达量均显著高于对照组,而经抗体干预后,CD36 mRNA表达量在U937细胞和在兔单个核细胞分别降低了约64.80%和35.18%,种属间差异有统计学意义.结论:抗OX-LDL抗体可以抑制单个核细胞CD36抗原的表达,从而抑制泡沫细胞形成过程中OX-LDL向细胞内的聚集.
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人可溶型FcγRIIb的制备及其功能初步研究
目的:检测正常人和SLE患者血清中可溶型FcγRIIb( husFcγRIIb)含量,诱导表达并纯化人可溶性FcγRIIb,检测其与血清中免疫复合物结合力及对B细胞抗体分泌功能的影响.方法:ELISA法检测人血清中可溶型FcγRIIb含量,IPTG诱导含有pET-sFcγRIIb的大肠杆菌BL21,镍琼脂糖磁珠纯化目的蛋白,可溶型FcγRIIb包被ELISA板,ELISA方法检测其与血清中免疫复合物结合能力,免疫磁珠法分选B细胞,分组刺激培养,ELISA检测培养物上清中IgM含量.结果:SLE患者血清中可溶型FcγRIIb浓度低于正常人(P<0.05);诱导表达并纯化获得相对分子质量(Mr)为41 500的重组蛋白;重组可溶型FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,二者孵育后吸光度(A)值随血清中免疫复合物浓度逐渐增高,至受体结合度饱和时达大;不同刺激条件下B细胞培养10 d,各实验组抗体浓度均高于细胞对照组(P<0.01),SPA组、SPA+ husFcγRIIb组抗体浓度无显著差异(P>0.05),SPA+ IgG型抗人IgM组抗体滴度明显高于SPA组(P<0.01),SPA+husFcγRIIb+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显低于SPA+ IgG型抗人IgM组(P<0.01)、SPA组(P<0.01)和SPA+ husFcγRIIb组(P<0.01).结论:SLE患者血清中可溶性FcγRIIb含量低于正常人,重组人可溶性FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,抑制免疫复合物对B淋巴细胞的激活,减少IgM型抗体的分泌.
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人GPC3基因真核表达载体的构建及重组蛋白表达纯化
目的:人磷脂酰肌醇蛋白3是肝癌的诊断标志物和潜在治疗靶点.本研究目的在于获得足量的GPC3蛋白用于结构、功能及应用研究.方法:通过RT-PCR从人胎肝中克隆GPC3编码cDNA,利用XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点,将GPC3ORF编码基因插入毕赤酵母表达载体pPICZ A中,构建真核表达质粒pPICZ A-GPC3.以该表达质粒转染毕赤酵母菌株GS115,在含有Zeocin的YPD平板上进行筛选.然后使用HRP标记的山羊抗人IgG在醋酸-硝酸纤维素双层膜上进行Dot blot筛选.对筛选获得的菌株进行诱导表达,表达上清经SDS-PAGE和Western blot检测.结果:筛选获得的阳性菌株诱导表达上清SDS-PAGE结果表明在预期位置观察到GPC3重组蛋白条带,且该蛋白条带与抗GPC3单克隆抗体(mAb)孵育后呈现特异性反应.工程菌株经高密度培养后,发酵上清中重组GPC3表达量约5 mg/L,进而通过阳离子交换层析从发酵上清中纯化了重组蛋白.结论:利用毕赤酵母表达并纯化了重组人GPC3蛋白,为进一步研究GPC3的结构和功能奠定了基础.
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苯对人外周血单个核细胞S+ G2/M期阻滞、细胞凋亡和DNA氧化损伤的影响
目的:研究苯致人外周血单个核细胞( PBMCs)周期阻滞与凋亡,探讨苯对PBMC DNA氧化损伤效应的影响.方法:离体培养24 h后加S9液,设置苯低、中、高浓度组(0.5,5,50 μmol/L)和乙醇溶剂对照组,染毒处理24 h后,采用四唑盐比色法检测PBMCs相对存活率;流式细胞术检测细胞周期构成比及凋亡率;DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)含量、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力;硫代巴比妥酸TBA比色法测定丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞中谷胱甘肽(GSH)含量;SCGE检测DNA断裂;微核实验检测染色体畸变.结果:与对照组相比,0.5 μmoL/L苯染毒组细胞存活率明显下降(P<0.05),G0/G1期细胞百分比明显减少(P<0.05),S期和G2/M期百分比明显增加(P<0.05),且细胞凋亡率明显上升(P<0.05),细胞内ROS、MDA、微核率、彗星率和彗星尾长呈剂量依赖性增加,差异均具有统计学意义(P<0.05),而SOD和GSH呈剂量依赖性减少(P<0.05).结论:苯可以导致PBMCs细胞凋亡和S+G2/M期阻滞,增加细胞脂质过氧化作用,改变细胞内氧化还原状态,诱导DNA氧化损伤.
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CD326分子胞外区表皮生长因子样结构域融合蛋白的表达与纯化
目的:构建含有CD326分子胞膜外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like1+2结构域的真核表达载体,在COS7细胞中表达相应蛋白并纯化.方法:用PCR扩增编码EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域的cDNA,插入真核表达载体pSecTag2B,脂质体法转染COS-7细胞,利用重组蛋白C端的组氨酸标签(6×His-tag)进行金属螯合亲和层析纯化,后用SDS-PAGE和Western blot法检测纯化的包含EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域融合蛋白的纯度.结果:序列测定的结果显示含有CD326分子胞膜外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域序列的载体构建正确.经Ni2+-NTA树脂柱亲和层析纯化得到3种融合蛋白,相对分子质量(Mr)分别约为3 600,7 700和12 000.纯度均约为95%.Western blot检测结果显示3种融合蛋白都具有下游的c-myc表位.结论:成功构建了含有CD326分子胞外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2 结构域的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达.为制备抗CD326分子不同结构域的单克隆抗体提供了免疫原.
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脂滴包被蛋白对鸡前脂肪细胞脂质蓄积的影响
目的:探讨脂滴包被蛋白( perilipin 1)对鸡前脂肪细胞脂质蓄积的影响.方法:首先构建pcDNA3.1-perilipin 1基因真核表达载体,转染鸡原代前脂肪细胞,24h后添加油酸诱导前脂肪细胞分化.然后利用Western blot方法检测perilipin 1 的表达;利用油红O提取比色法研究perilipin 1对鸡前脂肪细胞脂质蓄积的影响;利用Real-time RT-PCR方法分析其他与脂类代谢相关的重要基因(FAS、ACC、ATGL)的表达变化.结果:转染pcDNA3.1-perilipin 1基因真核表达载体能明显上调perilipin 1的表达.perilipin 1表达量升高后,鸡前脂肪细胞脂质蓄积能力增强,但其他与脂类代谢相关的重要基因(FAS、ACC、ATGL)的表达量没有发生明显的变化.结论:过表达perilipin 1促进鸡前脂肪细胞的脂质蓄积.
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白藜芦醇对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响
目的:探讨不同浓度白藜芦醇(Res)对小鼠原代肝细胞脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达水平的影响.方法:采用胶原酶灌注方法,分离培养小鼠原代肝细胞;利用200 μmol/L油酸(0A)刺激小鼠原代肝细胞12 h后,加入0、20、50、100 μmol/L白藜芦醇,培养12 h后,采用Bodipy 493/503染色,荧光显微镜观察肝细胞内脂滴的形态和数量;采用Folch法抽提细胞内脂类,采用定量试剂盒测定甘油三酯(TG)的含量;采用Western blot法分析脂滴表面蛋白perilipin、adipophilin、TIP-47的表达水平.结果:与空白对照相比,采用20、50、100μmol/L白藜芦醇处理后均能够降低原代肝细胞内的脂滴大小和数量,定量分析显示细胞内TG含量明显降低,并存在剂量依赖关系,但以50 μmol/L浓度效果为显著.Western blot结果显示,白藜芦醇能够降低原代肝细胞中perilipin、adipophilin和TIP-47的表达水平,其中以perilipin下降为明显.结论:白藜芦醇能够抑制肝细胞内中性脂肪的储积,以50 μlmol/L浓度效果为显著.可能通过调节细胞内脂滴表面蛋白的表达水平,从而影响脂滴的储积.
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IL-12依赖于TRAIL途径增强NK细胞对Jurkat细胞的杀伤功能
目的:探讨IL-12增强正常人NK细胞对Jurkat细胞杀伤功能的相关机制.方法:纯化正常人NK细胞,分为加或不加IL-12两个刺激组,通过基因芯片筛选差异基因,并通过流式细胞术在单个细胞水平检测相关杀伤分子的表达.结果:基因芯片系统结果显示IL-12刺激组和未刺激组相比,17种基因具有显著性差异(fold change≥10),其中5种基因上调,12种基因下调.在IL-12的刺激作用下,TRAIL的表达在CD56+ CD16+和CD56-CD16+ NK细胞上显著增加.同时,Jurkat细胞亦高表达TRAIL受体TRAIL-R2( DR5).TRAIL中和抗体RIK-2可以阻断IL-12诱导的NK细胞对Jurkat细胞的杀伤功能.结论:TRAIL是IL-12增强正常人NK细胞对Jurkat细胞杀伤功能的主要途径之一.
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人胎睾丸发生过程中VEGF的表达研究
目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)在人胚胎睾丸组织发生过程中的表达特征,探讨其在睾丸发生中的作用.方法:采用HE染色观察睾丸发育,SP免疫组织化学法检测VEGF在不同胎龄睾丸组织中的表达变化.结果:人胚胎睾丸发育正常;VEGF在胎儿睾丸间质细胞、生殖细胞中均有不同程度表达,间质细胞以12 ~24周为表达高峰,生殖细胞以16 ~24周为表达高峰,24周后随着胎龄的增长均呈下降趋势(P<0.01).结论:VEGF在人胎睾丸发生、发育过程中有不同程度的表达,表明其在睾丸发生过程中起着一定的作用.
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房颤患者右心耳组织SIRT1表达以及与氧化应激的相关性
目的:观察房颤患者右心耳组织SIRT1的表达及其与心房氧化应激的关系.方法:选择行心脏手术的风湿性心脏病患者共38例,按照是否合并房颤分为两组:持续性房颤组25例(AF组),其房颤持续时间超过6个月;窦性心律组13例(SR组).在术中取其部分右心耳组织,采用免疫组化法检测右心耳组织SIRT1蛋白表达,同时测定右心耳组织匀浆中丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(SOD)活力和金属硫蛋白(MT)的含量.结果:免疫组化结果发现AF组患者SIRT1表达(45.8±4.03)%高于SR组(19.7±2.54)%,差异有统计学意义(P<0.05).房颤组MDA为(7.24±1.05)nmol/mg,SOD为(1034.25±84.32)U/mg,MT为(7.21±1.46)μg/g,窦性心律组MDA为(3.01±0.47) nmol/mg,SOD为(723.63±65.23) U/mg,MT为(4.31±1.23) μg/g,两者相比有显著性差异(P<0.05).房颤组SIRT1表达与MDA、SOD、MT呈负相关,相关系数分别为-0.447、-0.521、-0.394(P<0.05).结论:房颤患者右心耳组织SIRT1表达增加,与氧化应激指标呈负相关,提示SIRT1可能通过抑制氧化应激在房颤中起作用.
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MCP-1在慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪性肝病肝组织中的表达
目的:研究慢性乙型肝炎(CHB)合并非酒精性脂肪肝病(NAFLD)患者肝组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平.方法:CHB合并NAFLD患者21例作为实验组,单纯CHB患者46例作为对照组,采用实时定量RT-PCR方法检测肝组织中MCP-1 mRNA表达水平,免疫组化检测肝组织中MCP-1蛋白表达水平,非参数Mann-Whiteny检验比较CHB合并NAFLD患者和单纯CHB患者肝组织中MCP-1表达水平差异.结果:CHB合并NAFLD组肝组织中MCP-1 mRNA相对表达水平0.034(0.024 ~0.058)高于单纯CHB组MCP-1mRNA相对表达水平0.016 (0.012~0.024),差异有统计学意义(P<0.01);CHB合并NAFLD组肝组织MCP-1免疫组化积分8.7±2.5高于单纯CHB组免疫组化积分(6.2±3.5),差异有统计学意义(P<0.01).结论:CHB合并NAFLD患者肝组织中MCP-1表达水平高于单纯CHB患者.
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IL-12对小鼠哮喘模型气道炎症及TNF-α和IL-10水平的影响
支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病[1],被世界卫生组织列为疾病中四大难症之一[2],在世界范围内广泛流行.已成为美国18岁以下人群住院的第3位原因,仅次于肺炎和外伤.目前全球的哮喘患者已达3亿,我国的哮喘儿童多达2 000万.虽然具有极高的发病率和死亡率,但其发病机制仍不十分清楚.近年研究发现细胞因子在哮喘发病过程中的作用十分重要,尤其是IL-12与哮喘的关系极为密切.目前的研究已经证实,IL-12是关键的抗炎性细胞因子,哮喘发生时体内存在IL-12的代谢失调,但是它在哮喘免疫防治过程中发挥作用的具体机制以及它与其他细胞因子IL-10、TNF-α之间的相互关系还不十分清楚.本研究应用重组小鼠IL-12(rmIL-12)进行哮喘小鼠防治,观察它对哮喘气道炎症,IL-10和TNF-α水平的影响,探讨其防治哮喘的可能机制,为临床上哮喘的预防和控制提供实验依据.
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EV71结构蛋白VP1的原核表达及VP1单克隆抗体的制备
目的:原核表达EV71结构蛋白VP1并制备其单克隆抗体.方法:以肠道病毒71型( EV71) P1基因为模板,设计引物扩增出目的片段VP1,将其连接至大肠杆菌表达载体pET-32a(+)上,转化大肠杆菌TG1,筛选出阳性克隆后进行测序.将重组表达载体pET-32a (+)-VP1转化大肠杆菌表达菌株BLgold( DE3),对该工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,表达产物以包涵体的形式存在.包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解,经过Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白.用纯化的VP1蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体(mAb).结果:获得了24株mAb,其中1株EV71 Western blot法鉴定呈阳性,5株EV71间接免疫荧光法(IFA)鉴定阳性.结论:成功地制备了VP1的mAb.
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抗CD40L单克隆抗体对哮喘大鼠血液和淋巴液调节性T细胞的影响
目的:研究抗CD40L单克隆抗体(抗CD40L mAb)对哮喘大鼠外周血和淋巴液中CD4+ CD25+调节性T细胞( Treg)数量及其功能的影响.方法:抗CD40L mAb处理血液和淋巴液中的单个核细胞(MNCs),流式细胞仪(FCM)检测MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞的百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-10和TGF-β1的含量.结果:体外培养72 h后,淋巴液来源MNCs中CD4+ CD25+Foxp3+ Treg的比例均明显高于血液来源的MNCs,末次激发后各组淋巴液和血液来源MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例随细胞收集时间距末次激发时间延长呈先升高后降低的趋势;哮喘组淋巴液和血液来源MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+Treg比例均显著低于正常对照组和抗CD40L mAb组(P<0.05);末次激发后0、12 h收集的血液MNCs培养上清中抗CD40L mAb组TGF-β1的水平显著高于哮喘组和正常对照组(P<0.05);末次激发后24h收集的淋巴液来源MNCs培养上清中抗CD40L mAb组IL-10的水平显著高于哮喘组和正常对照组(P<0.05).结论:抗CD40L mAb促进CD4+ CD25+Foxp3+T细胞增殖,并在哮喘激发早期(0、12 h)促进血液来源CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞分泌TGF-β1,哮喘激发后期(24 h)促进淋巴液来源CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞分泌IL-10.
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Mucin16蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备与鉴定
目的:在原核生物中表达带有His标签的mucin 16N端重组蛋白(简称为His-mucin 16N),制备抗mucin 16的单克隆抗体(mAb).方法:将mucin 16基因片段插入原核表达载体pET-32,在大肠杆菌中表达重组蛋白,用亲和纯化方法纯化后免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合.筛选可稳定分泌抗mucin 16抗体的阳性单克隆杂交瘤细胞株,用Western blot、ELISA、免疫荧光和免疫组化等方法分析和鉴定抗mucin 16的mAb.结果:表达并纯化了His-mucin 16N蛋白;筛选出几株可稳定分泌特异性抗人mucin 16 mAb的细胞株;挑选出效价高、特异性好的1株进行纯化.获得的抗mucin 16 mAb,可用于Western blot、ELISA、免疫组化、免疫荧光等检测,并鉴定该抗体亚型为IgG1.通过上述免疫学实验,分析了在不同肿瘤细胞中mucin 16的表达情况.结论:在原核生物中成功表达和纯化带His标签的mucin 16N重组蛋白,制备出具有高特异性的抗mucin16的mAb.
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抗IL-13Rα2单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定
目的:在成功制备小鼠抗人IL-13 Rα2高亲和力单克隆抗体(mAb)的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列.方法:从1株小鼠抗人IL-13 Rα2 mAb杂交瘤细胞LX147-7中提取总RNA,以此为模板反转录获得cDNA,用针对小鼠mAb重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应.将PCR产物连入克隆载体,经筛选阳性克隆,PCR和酶切鉴定正确后送测序,测序结果进行生物信息学分析.结果:成功克隆了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因.结论:获得了抗人IL-13Rα2 mAbLX147-7重链和轻链的可变区基因序列,为构建相关基因工程抗体打下了良好基础.
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嗜碱性粒细胞在过敏反应和固有免疫应答中的作用研究新进展
嗜碱性粒细胞和肥大细胞都表达高亲和力FcεRI,并在胞质颗粒内含有成熟预释放的组胺.大量研究显示这两种细胞在变应性炎症中起着截然不同的作用.啮齿类动物肥大细胞数量上超过嗜碱性粒细胞,嗜碱性粒细胞也一直被认为在变应性炎症中只起着次要作用.人类嗜碱性粒细胞是早期Th2细胞因子IL-4和IL-13的主要产生细胞,对于Th2免疫应答的发展有着重要作用.嗜碱性粒细胞利用其表达的IL-4、IL-13以及CD40L促进B细胞上IgE抗体类别转换.通过特异性染色技术可以对嗜碱性粒细胞在变应性反应受累的不同器官进行定位.嗜碱性粒细胞的活化并不仅仅局限于抗原-IgE交联反应所诱导,也可以由寄生虫抗原、外源凝集素和病毒超抗原所激发.随着IgE非依赖性活化途径的研究深入,嗜碱性粒细胞在固有性免疫应答和适应性免疫应答中的作用越来越受到关注.
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5-羟色胺与免疫系统的关系及其在免疫相关疾病中的作用
5-羟色胺(5-HT)是一种由色氨酸衍生而来的自体活性物质,主要作为神经递质影响神经系统的功能.近年来研究发现,5-HT通过结合表达在免疫细胞上的受体,调节免疫细胞功能,在机体神经免疫调节网络中发挥重要作用.本文主要综述了5-HT在免疫细胞中的合成和储存,对固有免疫应答、适应性免疫应答的影响以及与免疫相关疾病的关系.
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临床输血及其免疫血液学检测易出现的问题及管理措施
根据《献血法》、《医疗机构临床用血管理办法》和《临床输血技术规范》,结合临床输血前免疫血液学检测中易出现问题的原因进行分析,并提出相应的管理措施.临床医生必须加强对输血相关法规及现代免疫血液学知识的学习,严格掌握输血适应症;临床护士在血液标本采集、取血及输血过程中必须严格执行查对制度;输血科工作人员在血型鉴定、交叉配血和发血工作中必须严格执行各项规章制度和操作规程,才能确保临床输血安全有效.
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视网膜神经胶质细胞及其分泌的细胞因子与视网膜病变
视网膜内常见的神经胶质细胞包括星形胶质细胞、Müller细胞(放射状胶质细胞)和小胶质细胞.近研究表明,这些神经胶质细胞能释放多种细胞因子,包括VEGF、bFGF、TGF、IGF、TNF及IL等,这些细胞因子不仅在调节视网膜神经细胞生长发育中起着重要作用,而且是参与视网膜病变的重要因素.
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醛糖还原酶的研究进展
醛糖还原酶(AR)是糖代谢多元醇通路中的限速酶,除了将葡萄糖催化还原为山梨醇外,还可以催化还原大量脂质过氧化反应产生的醛及其衍生物.近的研究显示,AR除在糖尿病并发症中发挥作用外,还在很多炎性疾病中发挥着重要作用,如动脉粥样硬化、脓毒症、哮喘、眼葡萄膜炎等.在发生炎症时,AR的存在可以促进促炎性因子如iNOS、CD86等的表达,进一步集中炎症反应.同时,也调节着组织损伤后,免疫系统的作用发挥.此外,AR在人类的肿瘤中如肺癌、结肠癌、肺癌、宫颈癌、卵巢癌中过度表达,提示在上述癌症的病理过程中,AR可能发挥作用.AR抑制剂(ARI)对糖尿病并发症的临床治疗,已经进入了3期实验,显示AR作为某些炎性疾病的治疗靶点,具有良好的应用前景.因此,本文对近年来AR的功能研究进展进行综述,并对其作为疾病治疗靶点的前景进行了展望.
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ATF-2基因RNA干扰表达载体的构建及鉴定
目的:构建活化转录因子2( ATF-2)基因RNA干扰的真核表达载体,观察其对HepG2肝癌细胞株增殖及凋亡的影响.方法:根据ATF-2 mRNA序列,合成两条寡聚DNA片段,退火后克隆人质粒载体PBA-siU6,DNA测序鉴定重组质粒PBA-siATF-2.脂质体介导质粒转染HepG2细胞.Western blot法检测ATF-2蛋白表达;MTT方法检测细胞增殖率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果:ATF-2基因RNA干扰载体经测序分析证实插入64 bp序列正确无误;Western blot法显示干扰组细胞内ATF-2蛋白表达量明显降低;ATF-2基因的下调导致HepG2细胞增殖阻滞和凋亡发生.结论:成功构建了ATF-2基因RNAi真核表达载体,下调HepG2细胞ATF-2基因表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.
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丙型肝炎病毒抗体化学发光检测方法的建立
丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatits C virus,HCV)引起肠道外传播的一类传染病,输血及血液制品引起传播是本病的主要途径.目前,国内抗HCV检测主要是ELISA和进口的全自动化学发光法.进口的全自动化学发光检测,由于配套的全自动分析仪和试剂价格昂贵,限制了其在临床上的应用.本研究研制了一种更为便宜、更易操作的HCV抗体化学发光试剂盒.
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应用酵母双杂交技术筛选与乙型肝炎病毒x抗原结合蛋白1结合的肝细胞蛋白编码基因
目的:构建乙型肝炎病毒x抗原结合蛋白1( XBP1)的真核表达载体并筛选人肝细胞中与XBP1相互作用的基因.方法:通过PCR扩增获得XBP1基因,构建真核表达载体pGBKT7-XBP1,转化酵母菌AH109并在其中进行表达.随后与预转化了人肝细胞文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-β-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行双重筛选获得阳性克隆.提取文库质粒pACT2-DNA并与pGBKT7-XBP1共同转化AH109酵母菌株,于铺有X-β-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行筛选以排除假阳性克隆.挑取真阳性克隆送测序,并进行生物信息学分析.结果:筛选出20种与XBP1相互作用的蛋白,其中包括金属硫蛋白,平滑肌细胞相关蛋白,去唾液酸糖蛋白受体,丙酮酸脱氢酶激酶1,甜菜碱甲基转移酶,视黄醇结合蛋白,补体因子B、人补体C9,转化生长因子β1,丝氨酸蛋白酶抑制剂;cAMP应答元件结合蛋白,拓扑异构酶Ⅱβ等已知功能基因及1个未知功能序列.结论:筛选到多种XBP1相互作用的基因,包括与细胞内结构、细胞生长相关蛋白基因,参与细胞内代谢的蛋白基因,参与信号转导途径、免疫及其他相关蛋白基因,参与DNA的复制、转录、重组、修复的基因.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 |
1995 | 01 02 03 |
1994 | 01 02 |
1993 | 01 02 03 04 |
1992 | 01 02 03 04 |
1991 | 01 02 03 04 |
1990 | 01 02 |
1989 | 01 02 03 04 |