细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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猪Toll样受体7基因人工miRNA表达质粒的构建与筛选
目的 构建猪Toll样受体7(TLR7)基因的人工miRNA (amiRNA)特异性表达载体,筛选有效amiRNA.方法 RT-PCR扩增猪TLR77基因的1984 ～2648 bp序列,构建融合表达载体pTLR7-EGFP.设计针对猪TLR7的5对amiRNA,构建重组干扰质粒pcDNA5-miRTLR7.将pcDNA5-miRTLR7和pTLR7-EGFP共转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR检测amiTLR7的表达,以荧光显微镜观察和流式细胞术分析干扰效率.结果 5个amiTLR7都成功表达,且均能沉默NIH-3T3细胞中TLR7基因的表达,抑制效率为36.99％到97.28％,其中amiTLR7-3效果佳.结论 成功构建了针对猪TLR基因的amiRNA表达质粒,筛选出了沉默猪TLR7基因的佳干扰序列.
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针灸增强大鼠对百白破疫苗免疫效应的初探
目前疫苗领域主要是研究如何增强疫苗本身的免疫原性和引入适宜的佐剂以增强疫苗激活免疫应答的效应.针灸能通过激活非特异性和特异性免疫应答,激活机体的免疫防御功能[1].其增强机体单核-吞噬细胞系统功能与刺激淋巴细胞增殖分化的作用[2],与佐剂提高疫苗免疫效应中的部分机制相似,因此推测针灸可能增强和扩大疫苗免疫应答的能力,具备作为佐剂的潜能.
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布鲁菌S2株感染巨噬细胞与树突状细胞的比较
目的 比较猪布鲁菌S2菌株感染巨噬细胞和树突状细胞(DC)的特点.方法 采用瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态并计算吞噬率；用ELISA法测定细胞培养上清中的IL-12和TNF-α以及与T细胞共培养上清中IFN-γ和IL-4的含量；用annexin-V-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 感染S2菌株1h后巨噬细胞的吞噬率为(43.6±4.8)％,显著高于DC的吞噬率(13.08±2.36)％ (P ＜0.05)；正常巨噬细胞凋亡率为(3.09±1.21)％感染S2菌株后6、12和24h的凋亡率分别为(19.89±1.36)％、(22.73±2.21)％和(42.44±3.12)％,明显高于DC感染后相同时间点的凋亡率(P＜0.05),正常DC凋亡率为(1.82±0.01)％,DC感染S2菌株6、12、24h凋亡率分别为(3.76±0.13)％、(7.87±0.56)％和(9.08±0.23)％.巨噬细胞在感染S2菌株后24、48 h分泌的IL-12均明显低于DC分泌IL-12的量(P＜0.05)；24、48、72 h分泌的TNF-α量均明显低于DC(P ＜0.01)；在24、48、72 h与T细胞共培养分泌的IFN-γ含量均明显低于DC(P＜0.01).结论 巨噬细胞吞噬猪布鲁菌S2菌株的能力高于DC,猪布鲁菌S2感染后巨噬细胞的凋亡率高于DC,感染S2菌株后DC的活化及提呈抗原并激活T细胞的能力强于巨噬细胞.
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慢性阻塞性肺病模型大鼠血清中IL-17A、IL-27的变化
慢性阻塞性肺病(chronic obstructive lung disease,COPD)是一个重要的公共卫生问题,目前已居全球死亡原因的第4位;其发病机制复杂,目前普遍认为COPD以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征,在肺的不同部位有肺泡巨噬细胞、CD8+T细胞和中性粒细胞增加,部分患者有嗜酸粒细胞增多[1].
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肺炎支原体荚膜多糖与DC-SIGN结合并促进IL-10的分泌
目的 研究肺炎支原体(Mp)荚膜多糖(CPS)与树突状细胞(DC)特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(DC-SIGN,CD09)的相互作用及其对未成熟DC(iDC)分泌IL-10和IL-12的影响.方法 提取并纯化Mp的CPS和脂质相关膜蛋白(LAMPs),用间接免疫荧光检测CPS与DC-SIGN受体的作用；ELISA法检测CPS和LAMPs作用后iDC所分泌的IL-10,IL-12水平.结果 间接免疫荧光可见Mp CPS可结合到DC表面,且DC-SIGN的特异性封闭抗体可阻断CPS与DC的结合；ELISA检测发现CPS与LAMPs共孵育可促进DC分泌IL-10(P ＜0.05),而IL-12的表达水平刺激前后无统计学的差异.结论 Mp的CPS可识别并结合DC的DC-SIGN受体,并促进未成熟DC分泌IL-10.
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低氧对人肺泡上皮细胞糖皮质激素受体表达及对地塞米松抗炎效应的影响
目的 研究低氧条件下人肺泡上皮细胞糖皮质激素受体(GR)的两种亚型GRα和GRβ水平的表达及在地塞米松抗炎效应的变化.方法 以人A549肺泡上皮细胞系为模型,细胞分别在常氧(37℃,950 mL/L空气、50 mL/L CO2)和低氧(37℃,950 mL/L N2、250 mL/L CO2)条件下培养24、48、72 h,Western blot法检测各组细胞GRα和GRβ的蛋白表达水平；脂多糖(LPS 10μg/mL)和不同浓度的地塞米松(DEX 10-8 mol/L～ 10-6 mol/L)一起加入A549细胞培养液中,分别常氧和低氧培养48 h,放射免疫法检测细胞培养上清中的IL-8水平.结果 24h低氧组的GRα水平与24h常氧组相比无明显差别(P＞0.05),48 h和72 h低氧组的GRα水平与相应时间点的常氧组相比明显下降(P＜0.05,P＜0.01),24、48、72 h低氧组GRα水平呈进行性下降(P＜0.05),而各相应时间点的常氧组GRα水平无明显差别(P＞0.05)；低氧组和常氧组各时间点GRβ的表达无明显差别.在10-7 mol/L和10-6 mol/L DEX浓度时,低氧培养48 h的A549细胞上清的IL-8均高于相应的常氧组的IL-8水平(P＜0.05).结论 低氧可以时间依赖性的导致人肺泡上皮细胞A549 GRα表达水平下降并减弱地塞米松的抗炎效应.
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B7-H3Ig重组蛋白的真核表达及其对T细胞的作用
目的 真核表达人B7-H3Ig重组蛋白,探讨B7-H3信号在T细胞中的作用.方法 重叠PCR方法构建B7-H3Ig重组基因,进而获得重组逆转录病毒载体pGEZ-Term/B7-H3Ig,转染L929细胞建立L929/B7-H3Ig基因转染细胞株,纯化获得B7-H3Ig重组蛋白.体外激发型CD3单克隆抗体(mAb)刺激活化T细胞过程中加入B7-H3Ig,观察其对T细胞增殖以及IL-10与IFN-γ分泌的作用.结果 B7-H3Ig经Protein G柱纯化后纯度＞90％,浓度达0.559 mg/mL.重组蛋白结合实验表明CD3 mAb刺激48 h后T细胞表面B7-H3受体表达达到高峰.B7-H3Ig以剂量依赖方式促进CD3 mAb诱导的T细胞体外增殖与IL-10和IFN-γ分泌.结论 成功建立真核表达人B7-H3Ig基因转染细胞株,B7-H3Ig协同刺激T细胞增殖与IL-10和IFN-γ分泌.
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唑来膦酸对骨肉瘤患者PBMCs来源γδT细胞抗骨肉瘤作用的影响
目的 探讨唑来膦酸对骨肉瘤患者外周血单个核细胞(PBMCs)来源γδ T细胞杀伤骨肉瘤作用的影响.方法 使用唑来膦酸联合IL-2体外扩增原发性、复发性和转移性骨肉瘤患者PBMCs来源γδ T细胞,LDH法检测γδ T细胞的杀伤活性,ELISA法检测γδ T细胞分泌IFN-γ情况,并应用不同的抗体确定γδ T细胞识别、杀伤骨肉瘤细胞的途径.建立裸鼠HOS骨肉瘤移植瘤模型,尾静脉分别注射生理盐水、唑来膦酸、γδ T细胞及唑来膦酸联合γδ T细胞,观察并比较不同方法对裸鼠肿瘤生长的抑制作用.结果 骨肉瘤患者PBMCs体外经过唑来膦酸联合IL-2刺激可高度选择性扩增γδ T细胞,并且扩增后的γδ T细胞具有杀伤骨肉瘤细胞的能力.唑来膦酸预处理骨肉瘤细胞后可显著增强γδ T细胞的杀伤活性,γδ T细胞识别、杀伤唑来膦酸预处理骨肉瘤细胞主要通过TCR途径和穿孔素-纤溶酶途径,NKG2D途径和TRAIL途径发挥作用较小.体内实验表明,唑来膦酸联合γδ T细胞治疗对肿瘤生长的抑制作用强烈而持久,显著优于单独唑来膦酸治疗组和单独γδ T细胞治疗组.结论 唑来膦酸能够促进骨肉瘤患者PBMCs来源γδ T细胞的增殖,并能够增强γδ T细胞的抗骨肉瘤作用.
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人脐带血干细胞抑制大鼠肺纤维化及肺巨噬细胞TGF-β1的表达
目的 研究人脐血间充质干细胞对博来霉素所致的大鼠肺纤维化及TGF-β1的影响.方法 取清洁级健康雄性SD大鼠60只随机分为博来霉素组(P组)、干细胞治疗组(M组)、地塞米松治疗组(D组)和阴性对照组(N组),取第2代人脐血间充质干细胞培养至第4代；P组、M组和D组分别经气管注入博来霉素制造肺纤维化模型,M组造模后立即经鼠尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的干细胞,D组造模后第2天开始连续7d腹腔注射地塞米松,N组经气管注入等量生理盐水,在第7、14、28天处死各组大鼠,行HE、Masson染色,免疫组织化学法观察TGF-β1表达及标记细胞情况.结果 M组第7、14、28天肺组织均可见标记的干细胞；HE及Masson染色后观察,与N组相比,P组7d时肺泡炎明显,28 d肺纤维化程度重,M、D组较P组轻且病理切片可见M组较D组肺泡炎及纤维化程度稍轻；肺组织中TGF-β1在P组7d时高,M、D组明显少于P组,M组减少更明显,组间差异有统计学意义.结论 人脐血间充质干细胞可以定植于肺组织中,在肺纤维化早期通过抑制TGF-β1的表达,可能减轻肺泡炎及肺纤维化.
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肺炎链球菌表面蛋白A诱导人中性粒细胞生产CXCL8的机制
目的 研究肺炎链球菌表面暴露的毒性表面蛋白A(PspA)促进CXCL8分泌的可能机制.方法 使用炎症相关的信号分子NF-KB、p38MARK、ERK、JNK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,观察PspA对CXCL8分泌作用的影响.从受PspA刺激的人嗜中性粒细胞中分别提取细胞总蛋白和细胞核提取物,用ELISA法测定p38MAPK蛋白的活力和NF-κB的浓度的改变,并且采用Western blot方法进一步验证PspA对p38MAPK和IkB-α蛋白磷酸化水平的影响.结果 使用NF-κB,p38MARK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,可以扭转PspA促中性粒细胞分泌CXCL8的现象；而ERK,JNK的抑制剂无此效果.另一方面,PspA可以上调中性粒细胞中的P38 MAPK蛋白的含量和NF-κB的浓度,也可以提高p38MAPK和NF-kB通路抑制蛋白IkB-α的磷酸化水平.结论 肺炎链球菌PspA诱导人体中性粒细胞释放CXCL8受p38蛋白和NF-kB途径的调控.
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低强度脉冲超声通过PI3K/Akt通路促进人退变髓核细胞合成细胞外基质
目的 探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人退变髓核细胞合成细胞外基质的影响及机制.方法 取人腰椎退变髓核组织,进行髓核细胞的分离、培养、鉴定,取P3代细胞转至藻酸钙凝珠培养.实验分组如下:LIPUS组:超声刺激1周,20 min/d；对照组:不予超声刺激同条件培养1周；LY294002组:超声刺激并加入LY294002共培养1周.应用ELISA法检测上清中髓核细胞分泌的aggrcan和Ⅱ型胶原(Col2α1)；RT-PCR法检测细胞中aggrecan和Col2α1在mRNA水平的表达差异；Western blot法检测细胞中aggrecan、Col2α1、Akt及p-Akt的表达差异.结果 予以LIPUS刺激后,上清中的aggrecan和Col2α1浓度较对照组升高(P＜0.05),细胞内aggrecan和Col2α1在mRNA及蛋白水平的表达与对照组比较均有增高(P＜0.05),Akt的表达无明显变化(P＞0.05),p-Akt的表达增高(P＜0.05),加入特异性抑制剂LY294002后,aggrecan和Col2α1的合成明显降低(P＜0.05).结论 低强度脉冲超声能通过PI3 K/Akt信号通路促进藻酸钙凝珠立体培养的人退变髓核细胞合成细胞外基质.
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HBV基因转染对肾小管上皮细胞凋亡及表型转化的影响
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染人体后不仅引起肝脏功能和结构的改变,还可引起肝外多种脏器损伤,其中乙型肝炎病毒相关性肾炎(hepatitis Bvirus associated glomerulonephritis,HBV-GN)受人们关注.但其发病机制尚不清楚.研究发现肾小管间质纤维化在肾脏病变中有重要意义[1].我们前期研究发现慢性乙型肝炎患者TGF-β1水平升高,HBV-DNA阳性血清可导致肾小管HK-2上皮细胞凋亡及表型转化[2-3].因此用含3.2 kb HBV全基因组的AM12质粒转染HK-2,进一步探讨HBV在HBV-GN肾损伤中的作用及机制.
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SU11248对鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响及其机制
目的 研究苹果酸舒尼替尼(SU11248)对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 用SU11248处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-2,采用MTT法检测SU11248对CNE-2细胞增殖能力的影响；经2.5pg/mL SU11284作用不同时间后采用实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测CNE-2细胞中P27KIP1、cyclin G1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 SU11248可抑制CNE-2细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为2.5 μg/mL.SU11248作用CNE-2后cyclin G1 mRNA和蛋白呈时间依赖性降低(P＜0.05),而P27KIP1 mRNA和蛋白呈时间依赖性升高(P＜0.05).结论 SU11248能明显抑制CNE-2细胞增殖,可能通过上调P27KIP1、下调cyclin G1而发挥作用.
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小鼠水通道蛋白1基因shRNA慢病毒载体构建与鉴定
目的 应用RNA干扰技术,构建小鼠水通道蛋白1(AQP1)基因重组慢病毒载体并鉴定.方法 对小鼠AQP1 mRNA分析,设计合成的单链引物经退火形成双链寡核苷酸序列,连接入经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切线性化的pLKO.1-TRC慢病毒质粒载体中,菌液PCR鉴定并经测序验证.测序正确后与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞,收集病毒上清经高速离心浓缩后感染小鼠小胶质细胞BV-2,Western blot法分析筛选有效shRNA序列.结果 成功退火合成3对发夹shRNA序列并将其克隆到pLKO.1-TRC载体中,构建重组质粒pLKO-AQP1-SH1、2、3,经菌液PCR鉴定和测序验证载体构建成功.Real-time PCR检测发现重组质粒pLKO-AQP1-SH2感染BV-2细胞后AQP1 mRNA表达低,Western blot结果进一步验证结果的准确性.结论 成功构建出AQP1基因shRNA慢病毒载体.
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p28GANK的表达与食管鳞癌转移的相关性
目的 研究p28GANK表达在食管鳞癌转移中的意义.方法 免疫组化检测p28GANK在78例食管鳞癌及对应的癌旁组织中的表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测p28 GANK在两株食管癌高低转移细胞中的表达差异.结果 免疫组化结果提示p28GANK在食管癌组织中阳性表达率为67.95％ (53/78),显著高于对应癌旁组织阳性表达率11.42％ (8/78)(P＜0.01)；统计分析提示,p28GANK在癌组织表达水平与患者分期、淋巴结转移、淋巴管浸润、远处转移有显著相关性(P＜0.01或P＜0.05)；qRT-PCR及Western blot法结果提示p28GANK mRNA及蛋白在两株高转移食管癌细胞株表达水平均显著高于对应的低转移细胞系(P＜0.05).结论 p28GANK在高转移性食管癌组织及细胞系中表达显著上调.
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反复自然流产患者外周血Th17和Treg细胞相关细胞因子的测定
目的 通过检测反复自然流产(RSA)患者外周血Th17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和Foxp3 mRNA的表达及IL-6、IL-17、TGF-β1的水平,探讨Th17和Treg细胞在RSA发病中的作用.方法 选取2011-12/2012-04郑州大学第三附属医院50例RSA患者为研究对象,同期选取50名健康早孕女性作为对照组.采用实时荧光定量PCR检测外周血RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平,并分析二者之间的相关性；采用ELISA测定血清中IL-6、IL-17、TGF-β1的含量.结果 RSA组RORγt mRNA水平(25.358 ±9.236)显著高于正常对照组(10.611±5.792)；Foxp3 mRNA水平(6.851±2.875)显著低于正常对照组(32.218±5.023).RSA患者RORγt和Foxp3 mRNA表达呈显著负相关(r=-0.530,P=0.018).RSA组IL-6、TGF-β1含量分别为(82.7±23.2)、(269.3±29.6) pg/mL,明显低于正常对照组(210.4±40.6)、(497.8±54.6)pg/mL；IL-17含量(172.8±33.9) pg/mL明显高于正常对照组(53.4±10.8) pg/mL.结论 RORγtmRNA表达上调与Foxp3mRNA表达下调所致的Th17和Treg细胞免疫失衡可能是RSA的原因之一；IL-6、IL-17、TGF-β1含量变化的异常在RSA的发生发展中可能起一定作用.
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丙酮酸羧化酶在胃腺癌中的表达及临床意义
目的 检测丙酮酸羧化酶(PC)在胃腺癌组织中的表达并分析其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法及Western blot法检测PC蛋白在胃腺癌及其对应癌旁组织的表达情况,分析其在肿瘤中表达水平与患者年龄、性别、TNM分期及病理分级等临床病理资料之间的关系,并用Western blot法检测PC蛋白在不同分化胃癌细胞系及永生化胃黏膜上皮细胞系的表达情况.结果 免疫组化及Western blot法均显示PC在胃腺癌组织表达水平显著高于其对应癌旁组织(P＜0.01).PC高表达与患者TNM分期及病理分级显著相关(P＜0.05),而与患者性别、年龄无明显相关性(P＞0.05).Western blot法显示PC在不同分化胃癌细胞系表达水平显著高于永生化胃黏膜上皮细胞(P＜0.01).结论 PC高表达与肿瘤的恶性进展密切相关,提示PC有可能作为胃癌生物治疗的潜在靶点.
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EZH2和RUNX3在肾细胞癌中的表达及其临床意义
目的 检测EZH2和RUNX3蛋白在肾细胞癌中的表达,探讨它们与肾细胞癌临床病理特征间的关系,并分析它们的表达相关性.方法 利用免疫组织化学法分别检测肾细胞癌标本及对应的癌旁正常肾组织(各56例)中EZH2和RUNX3的表达情况,并利用统计学软件进行统计分析.结果 EZH2和RUNX3蛋白在肾癌组织中的阳性表达率分别为67.9％和37.5％,在癌旁正常肾组织的阳性表达率分别为28.6％和67.3％；EZH2和RUNX3在肾癌组织和癌旁正常组织中的表达差异均有统计学意义(P＜0.05),肾细胞癌中EZH2的高表达和RUNX3的低表达均与临床分期相关(P＜0.05),与病理分化程度、性别、年龄等的关系无统计学差异(P＞0.05).Spearman相关分析显示二者在肾癌中的表达没有明显的负相关关系.结论 EZH2和RUNX3可能共同参与了肾癌的发生发展过程,可成为肾癌的早期诊断及判断预后的指标.
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子痫前期患者外周血树突状细胞与T细胞亚群的变化
目的 观察子痫前期患者外周血中的树突状细胞亚群与T细胞亚群相关细胞因子的变化.方法 实验组为子痫前期患者32例,对照组为未孕妇女20例,正常妊娠妇女20例.采集研究对象外周血细胞,流式细胞术检测全血细胞中髓系树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)；分离外周血单个核细胞,经胞内细胞染色检测Th1、Th2、Th17细胞数量及Th1/Th2比值.结果 子痫前期组mDC百分比(0.33±0.12)％和mDC/pDC比值(2.96±1.65)均高于正常妊娠组,二组数据有明显差异(P＜0.05)；pDC百分比(0.16±0.13)％较正常妊娠组(0.21 ±0.12)％有所下降,二组差异有统计学意义(P＜0.05).子痫前期组IFN-γ、IL-4和IL-17的百分比分别为(18.67 ±1.96)％、(1.88±0.51)％和(1.36±0.59)％,与正常妊娠组相比均有显著性差异(P＜0.01).子痫前期组mDC/pDC比率和Th1/Th2之间呈显著正相关(r=0.637,P＜0.01)；Th17表达率与pDC表达率之间呈负相关(r=-0.670,P＜0.05),与mDC/pDC比率之间呈显著正相关(r=0.772,P＜0.01).结论 子痫前期患者外周血中树突状细胞亚群和Th1、Th2、Th17型细胞因子异常表达,可能是患者发生免疫失衡的重要原因.
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儿童1型糖尿病外周血Foxp3+调节T细胞和细胞因子变化及相关分析
目的 探讨初发儿童1型糖尿病(T1DM)外周血CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Foxp3+ Treg)及相关细胞因子的表达水平与自身抗体和胰岛细胞功能的关系.方法 45例儿童T1DM(T1DM组)患儿根据有无并发酮症酸中毒(DKA)和是否出现自身抗体分为DKA组、非DKA组、自身抗体阳性组、自身抗体阴性组,30例正常健康儿童作为对照组.采用流式细胞术检测外周血Foxp3+ Treg百分率,ELISA法检测血清IL-18、IL-10的表达水平,免疫印迹法(IB)检测血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛素瘤相关蛋白2自身抗体(IA-2A)和胰岛素自身抗体(IAA)；电化学发光法(ECLIA)检测血清空腹C肽(FC-P)水平.结果 T1DM组外周血Foxp3+ Treg百分率、血清IL-10水平和FCP含量明显低于正常对照组(P＜0.01),而血清IL-18水平则显著高于正常对照组(P＜0.01)；DKA组、自身抗体阳性组外周血Foxp3+ Treg百分率和FCP含量明显低于非DKA组和自身抗体阴性组(P＜0.01),血清IL-18水平则显著高于非DKA组和自身抗体阴性组(P＜0.01),IL-10在T1 DM各组间差异无统计学意义.T1DM组患者GADA、IA-2A和IAA的检出率明显高于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05).相关分析显示,Foxp3+Treg百分率与IL-10、FC-P水平呈正相关,而与IL-18水平及自身抗体呈负相关；IL-18与自身抗体呈正相关,而与IL-10、FC-P呈负相关；IL-10水平与FC-P含量及胰岛自身抗体无明显相关性.结论 初发儿童1型糖尿病外周血Foxp3+ Treg百分率减低及相关细胞因子的表达水平失衡可能参与了儿童T1DM的发生和发展,并与自身抗体和胰岛细胞功能相关.
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小鼠抗人CD52功能性抗体的制备与鉴定
目的 鼠抗人CD52抗血清的制备与功能鉴定.方法 由人Hut-78细胞提取细胞总RNA,运用RT-PCR方法扩增CD52基因,定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),用脂质体转染法转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、FACS、免疫组织化学技术检测目的蛋白的表达.用CD52合成肽免疫小鼠,通过间接ELISA和流式细胞术分析抗血清,用MTS实验鉴定抗体对白血病LCL细胞系的增殖抑制作用.结果 建立了稳定转染的CHO细胞系.鉴定出有高效价抗体存在.MTS实验检测免疫血清有抑制LCL细胞生长作用.结论 功能性抗体制备成功并建立了稳定转染CD52的CHO细胞系.
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抗SEB单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的基因构建和表达
目的 从分泌抗SEB的单克隆抗体(FMU-SEB-No.1)杂交瘤细胞中,克隆出FMU-SEB-No.1重链和轻链可变区(VH和VL)基因,构建FMU-SEB-No.1单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达.方法 从FMU-SEB-No.1杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增出VH和VL基因；通过在引物上设计linker序列,拼接VH和VL为完整FMU-SEB-No.1的scFv基因(FMU-SEB-scFv).将测序正确的scFv基因克隆入PGEX4T-1载体,转化入E.coli BL21(DE3)进行蛋白表达.通过SDS-PAGE,Western blot法分析其表达水平和特异性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其抗原结合活性.结果 测序结果显示,本实验成功克隆出FMU-SEB-No.1重链及轻链可变区基因,并成功构建FMU-SEB-scFv基因,所得的基因全长为750 bp,编码250个氨基酸.SDS-PAGE和Western blot分析表明,PGEX4T1-FMU-SEB-scFv在E.coli BL21(DE3)可表达为Mr约54 000的可溶型scFv/GST融合蛋白.间接ELISA检测结果表明,可溶型scFv/GST融合蛋白与SEB具有较高的抗原结合活性.结论 制备并鉴定了针对SEB的基因工程抗体,为开发出针对SEB的治疗性抗体奠定了实验基础.
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基于流式细胞术的scFv抗体库筛选技术的建立
目的 利用NlpA前导肽诱导抗体锚定细菌内膜建立筛选scFv抗体库的展示技术,为高亲和力抗体的筛选奠定基础.方法 从pNAD质粒中克隆出NlpA前导肽基因序列,酶切后将该序列克隆进pHEN1表达载体中.以PEAI质粒为模板,利用PCR的方法克隆得到抗-hIL-1β抗体的重链可变区和轻链可变区基因,然后利用重叠PCR的方法构建得到抗-hIL-1β scFv抗体.将scFv抗体插入到NlpA leader-pHEN1表达载体中构建成展示scFv的重组质粒pBSD-scFv.将pBSD-scFv转入到E.coli DH5α中诱导表达,原生质球制备后,采用梯度浓度的抗原进行孵育,后经流式细胞术(FCM)检测抗体展示情况并且分选阳性群体,利用质粒提取的方法来替代PCR方法拯救阳性基因,转化E.coli DH5α,利用FCM再次检测该群体展示的抗体与抗原结合情况.结果 所展示的抗-hIL-1β scFv抗体依次与抗原和FITC标记的抗原特异性抗体孵育后,用FCM实时检测,结果显示出很强的荧光信号并且表现出抗原浓度依赖性.拯救出的pBSD-scFv-原生质球的FCM检测结果与首次展示的FCM结果一致,该系统能够稳定的展示抗体.结论 经过该细菌展示系统展示的scFv抗体能够有效的折叠,与相应的抗原具有很好的特异结合能力.
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人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达
目的 构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定.方法 采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv).连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物.ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性；非竞争酶免法检测抗体亲和力.采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性.结果 测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因.原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50％.复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD =0.93×10-7 mol/L,1L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白.27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强.27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合.结论 成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础.
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肿瘤相关巨噬细胞与肿瘤的发生发展
本文主要综述了肿瘤组织中的巨噬细胞不同类型(M型和M2型)对肿瘤细胞的所产生的不同作用,M1型巨噬细胞可通过多种途径杀伤肿瘤细胞,而M2型巨噬细胞却参与了肿瘤的发生、生长、侵袭和转移的过程,常常表现为促进肿瘤细胞生长、肿瘤血管生成以及肿瘤细胞迁移等作用.大量研究显示,存在于肿瘤组织中的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)大部分表现出M2样的表型,且与肿瘤的治疗和预后密切相关.因此,基于TAM促肿瘤作用,通过抑制M2型巨噬细胞的作用或调控TAM表型的靶向治疗药物研究已取得相应成果.
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CD8α+树突状细胞研究进展
根据细胞表面CD8α的表达差异,小鼠脾脏中树突状细胞(DC)可以分为2种,即CD8α-DC和CD8α+ DC,二者功能迥异.本文回顾了近年来CD8α+ DC的研究动向,重点分析了CD8α+ DC的在肿瘤免疫、移植免疫和生殖免疫等中的作用.
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肿瘤细胞免疫原性死亡相关分子的研究进展
用多种化学药物和放射线治疗肿瘤时,肿瘤细胞可发生免疫原性细胞死亡,即肿瘤细胞在发生凋亡的同时,由非免疫原性的细胞转变为具有免疫原性的细胞,并在机体内激发抗肿瘤免疫效应.肿瘤细胞的免疫原性死亡是一种有多种信号分子和细胞因子参与的复杂过程,这些分子的细胞定位和表达水平的改变直接影响死亡肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用.对肿瘤细胞免疫原性死亡机制的深入研究可为肿瘤的免疫治疗提供新的依据和手段.本文简要综述了与肿瘤细胞免疫原性死亡相关分子的研究进展.
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树突状细胞凋亡的研究进展
树突状细胞(DC)作为强的抗原提呈细胞(APC),其凋亡的变化直接影响了机体的免疫状态.凋亡的增多可导致免疫耐受、感染扩散,而凋亡的减少又可导致自身免疫的发生,因此保持细胞数量的稳态平衡对DC的功能发挥有重要意义.现就近年来对DC在不同的生理、病理情况下的凋亡变化情况研究进展进行综述.
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树突状细胞与胃癌研究进展
胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤,治疗效果不理想,预后较差.树突状细胞(DC)是专职的抗原提呈细胞,其在抗肿瘤免疫中发挥了十分重要的作用.大量研究表明,胃癌组织内浸润的DC密度较低的胃癌患者5年生存率较低,预后较差.因此,探索以DC疫苗为基础的胃癌免疫治疗方法将具有十分重要的意义.动物实验证明DC疫苗在小鼠体内显著的抗肿瘤效果.在临床治疗中,DC疫苗在少数胃癌患者治疗中也取得了显著的临床效果.本文综述了DC与肿瘤免疫,与胃癌的诊断、进展、预后,以及与胃癌免疫治疗的研究现状.
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稳定表达hTERT/Luc的小鼠黑色毒瘤肺转移模型的建立
目的 建立稳定共表达荧光素酶基因和人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小鼠黑色素瘤B16细胞系,并通过尾静脉注射的方式建立小鼠肿瘤肺转移模型.方法 利用DNA重组技术将hTERT基因和荧光素酶基因Luc定向插入到真核表达载体,构建真核表达质粒pIRES-neo-hTERT和pIRES-hyg3-Luc,利用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000共转染小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418及潮霉素B加压筛选出稳定转染的细胞株.应用Western blot法及免疫荧光法检测hTERT和Luc基因在B16细胞中的表达；将稳定共表达hTERT和Luc的B16-hTERT/Luc细胞株通过尾静脉注射的方式接种雄性C57BL/6小鼠建立肿瘤肺转移模型,并通过活体成像技术检测小鼠肺部肿瘤的生长.结果 建立了稳定共表达hTERT和Luc的小鼠黑色素瘤B16单克隆细胞株B16-hTERT/Luc,经检测hTERT基因和荧光素酶基因Luc在单克隆细胞株中的表达分别为84％和98％.通过尾静脉注射的方式成功建立了小鼠肿瘤肺转移模型,应用活体成像技术能方便地检测到B16-hTERT/Luc肿瘤在小鼠体内的生长情况.结论 成功建立了可用于活体成像技术检测的稳定表达hTERT的小鼠黑色素瘤肺转移模型.
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HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定
目的 构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性.方法 应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆人pET-22b原核表达载体；将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次；通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性.结果 成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达；革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid.结论 成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
