细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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辐射损伤导致造血干/祖细胞衰老的机理研究
目的 探讨辐射损伤导致骨髓造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的可能机制.方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为辐照组和假辐照组,辐照组小鼠经6.5 Gy的X射线全身一次性辐照,假辐照组小鼠处理同辐照组,但不辐照.辐照后24 h免疫磁珠分选法分离并计数两组小鼠的Sca-1+造血干/祖细胞细胞(Sca-1+ HSC/HPC),流式细胞术检测细胞周期,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老细胞百分率；混合造血祖细胞集落(CFU-Mix)培养观察分选细胞增殖分化能力,单细胞凝胶电泳(SCGE)检测辐照导致细胞的DNA损伤,RT-PCR检测细胞衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21 Cipl/wafl mRNA的表达；Western blot法检测p16INK4a、p21Cipl/Wafl蛋白表达.结果 免疫磁性分析法分离纯度的Sca-1+ HSC/HPC可达94％,辐照后小鼠每支股骨的Sca-1+ HSC/HPC数量急剧下降,细胞出现G1期阻滞；形成CFU-Mix集落数量和形成集落的细胞数明显降低；SA-β-Gal染色阳性率显著增高,彗星实验显示细胞拖尾明显延长；p16INK4a、p19Arf、p53、p21cipl/wafl mRNA表达明显增强,p16INK4a、p21Cipl/Wafl蛋白的表达水平上调.结论 辐射导致HSC/HPC DNA的损伤和衰老相关生物学改变,p16INK4a-Rb和p19Arf-p53-p21 Cipl/Wafl信号通路可能起一定作用.
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双氢杨梅树皮素抑制人肝星状细胞增殖和减少胶原蛋白、TGF-β1和PDGF生成
双氢杨梅树皮素为藤茶所富含的黄酮类化合物,其含量高达27％ ～28％[1-2],又名蛇葡萄素、二氢杨梅素、福建茶素、白蔹素等.藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄的嫩茎叶[3],为广西瑶族民间药用的草药之一[4].有文献报道,双氢杨梅树皮素对实验性肝纤维化具有抗肝纤维化的作用[5-6].肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的主要来源,HSC的活化是肝纤维化形成的中心环节和必要条件,其中胶原蛋白是ECM的主要成分,转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF)是刺激HSC活化的关键因子.本实验采用MTT法及ELISA法分析双氢杨梅树皮素对Lx-2细胞增殖和胶原蛋白、细胞因子(TGF-β1、PDGF)生成的影响.
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佐剂关节炎大鼠肺功能降低与调节性T细胞减少及Foxp3表达下调相关
目的 观察佐剂关节炎(AA)大鼠肺功能、调节性T细胞(Treg)及其表面标志物-叉头状转录因子(Foxp3)变化,探讨Treg、Foxp3在RA肺病变中的作用.方法 将30只大鼠随机分为正常组和模型组,每组15只,向模型组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 mL致炎,复制成AA模型.致炎30 d后,观察大鼠足跖肿胀度、关节炎指数,采用动物肺功能仪检测大鼠肺功能,流式细胞术检测大鼠外周血Treg表达,RT-PCR、免疫组化、免疫印迹法检测大鼠肺组织Foxp3 mRNA、Foxp3蛋白表达.结果 与正常组比较,AA大鼠组织肿胀度和关节炎指数升高,肺功能参数降低,外周血CD4+ CD25+ Treg、CD4+ CD25+Foxp3+ Treg表达降低,同时,肺组织Foxp3 mRNA和Foxp3蛋白表达水平亦降低(P＜0.01或P＜0.05).结论 AA大鼠在发生关节炎症的同时,其肺功能水平降低,Treg、Foxp3表达降低,免疫平衡失调.
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Sirt3 抑制血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖
目的 检测小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中Sirtuin3(Sirt3)的表达,探讨Sirt3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠VSMCs增殖中的作用.方法 用RT-PCR、Western blot法检测细胞中是否有Sirt3基因和蛋白表达；用不同浓度AngⅡ(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5 mol/L)分别刺激细胞,用RT-PCR、Western blot法检测AngⅡ对Sirt3表达的影响；用Sirt3 siRNA转染干扰Sirt3mRNA水平后5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Edu)试剂盒检测细胞增殖水平.结果 Western blot法、RT-PCR结果均显示正常C57小鼠VSMCs中有一定量Sirt3蛋白和mRNA表达；10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5mol/L AngⅡ刺激细胞后Sirt3 mRNA水平及蛋白表达量均明显升高(P＜0.01),其中10-6 mol/L组比10-7 mol/L组和10-5mol/L组升高更明显,差异有统计学意义(P ＜0.05)；Sirt3敲减组细胞增殖较对照组明显增加(P＜0.01),Sirt3沉默+AngⅡ(10-6 mol/L)组较AngⅡ组细胞增殖明显增加(P＜0.01).结论 小鼠VSMCs中有一定量的Sirt3表达,AngⅡ刺激可使Sirt3 mRNA水平和蛋白表达量明显升高；Sirt3可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖.
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胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性CTL的表达
目的 观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的表达.方法 C57BL/6小鼠随机分为实验组CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组CTPHBcAg18-27、HBcAg18-27-Tapasin及空白组(生理盐水).经肌肉免疫小鼠,ELISA检测T淋巴细胞分泌细胞因子；流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞内的细胞因子；CCK-8法检测T淋巴细胞增殖活性.结果 实验组能有效刺激小鼠T细胞分泌Th1型细胞因子；FCM检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平明显高于其他组；且实验组T淋巴细胞增殖活性明显高于对照组及空白组.结论 CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫C57BL/6小鼠后,能提高T淋巴细胞增殖活性,能有效刺激T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及增加CTLs的表达.
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稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响
目的 构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catemn信号通路的影响.方法 重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组.MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达.结果 RT-PCR和Western blot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P＜0.05)；G1细胞比例明显减少(P＜0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P＜0.05)；cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P ＜0.05); GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P＞0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P＜0.05).结论 成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖.
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干扰NaV1.9对RAW264.7细胞增殖、吞噬和迁移的影响
目的 应用RNA干扰技术沉默RAW264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响.方法 通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选获得稳定细胞株.用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定干扰效率,CCK-8法测定稳定细胞株的增殖活性,流式细胞术检测细胞的细胞周期及吞噬能力,Transwell小室法检测细胞的迁移功能.结果 成功建立稳定干扰NaV1.9的细胞株,RT-PCR法鉴定干扰效率达80％.CCK-8法及流式细胞术结果显示,降低NaV1.9的表达使细胞增殖活性下降(P＜0.05)；流式细胞术结果显示,抑制NaV1.9的表达使细胞吞噬能力降低(P＜0.05)；Transwell小室法结果显示,干扰NaV1.9的表达使细胞迁移能力减弱(P＜0.05).结论 建立了稳定干扰NaV1.9的RAW264.7细胞株,下调NaV1.9的表达使巨噬细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能显著降低.
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敲减AKR1A1基因对H2O2及4-羟基壬烯醛诱导的1321N1脑星形细胞瘤细胞损伤的影响
目的 初步探讨星形胶质细胞瘤细胞中的醛酮还原酶1A1(AKRIA1)在抗氧化应激和有毒醛代谢中的作用.方法 通过LipofectamineTM RNAiMax以siRNA转染1321N1细胞,用Western blot法和qRT-PCR检测1321N1细胞中AKR1A1基因抑制水平.siRNA转染后的细胞经H2O2和4-羟基壬烯醛处理后使用MTT法检测细胞成活率；采用2 ',7’-二氯二氢荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)标记法检测敲减AKR1A1基因对H2O2诱导的1321N1细胞内活性氧(ROS)水平的影响.结果 Western blot法和qRT-PCR结果显示1321N1细胞经特异性siRNA转染后,AKR1A1基因的表达受到明显抑制(70％).MTT法检测结果显示,siRNA-AKR1A1转染后的1321N1细胞在H2O2或4-羟基壬烯醛压力下的细胞成活率显著降低,而且敲减AKR1A1的1321细胞内H2O2诱导的ROS水平显著高于对照细胞.结论 使用的特异性siRNA能有效抑制AKR1 A1基因在1321N1星形细胞瘤细胞中表达,AKR1A1参与1321N1脑星形细胞瘤细胞中的4-羟基壬烯醛代谢,并且很可能参与调节脑细胞的抗氧化应激机制.
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含B7-H1 shRNA基因的慢病毒表达载体的制备及其抑制效果鉴定
目的 设计针对B7-H1的shRNA序列,构建慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后检测其对U251细胞中B7-H1基因的沉默效果.方法 设计3对针对B7-H1 mRNA的shRNA,化学合成正义链和反义链,退火后与酶切后的pLKO.1载体进行连接.测序正确后包装成病毒并感染U251细胞,分别用qRT-PCR及Western blot法检测干扰效果.结果 qRT-PCR及Western blot结果证实设计的3条RNA干扰序列中有2条可有效沉默U251细胞中B7-H1的表达.结论 所制备的针对B7-H1的shRNA慢病毒能特异性沉默B7-H1.
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甘草甜素下调接触性皮炎小鼠血清IFN-γ的水平
甘草甜素(glycyrrhizin,GL)是中药甘草根的一种活性成分,是一种T细胞诱导剂[1],有多种药理作用[2].T细胞参与了机体免疫应答的不同类型和过程,Th1细胞主要分泌IL-2和IFN-γ等.接触性皮炎是由变应原所诱发的T细胞介导的炎症性皮肤病[3].一些研究认为接触性皮炎与Th1细胞和其产生的细胞因子有关[4],由于接触致敏引起小鼠朗格汉斯细胞(Langerhans cell,LC)的迁移,随后在引流淋巴结内免疫刺激的树突状细胞的积聚,都与细胞因子有关[5].那么甘草甜素能否对这些细胞因子有影响呢?为进一步探讨甘草甜素治疗变应性接触性皮炎的作用机制,我们检测了接触性皮炎小鼠血内IFN-γ浓度,现报告如下.
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Oct4腺病毒真核表达载体的构建及对心肌再生的作用
目的 构建八聚体结合转录因子4(0ct4)腺病毒真核表达载体pAV.Exld.-CMV＞ mOCT4/IRES/eGFP,探讨Oct4腺病毒载体对小鼠心肌再生的作用.方法 利用Gateway(R)技术构建pAV.Exld.-CMV＞ mOCT4/IRES/eGFP载体,腺病毒包装后,用微量进样器直接注射到小鼠心肌,利用RT-PCR、免疫荧光分别检测心肌组织中Oct4的表达,HE染色检测Oct4表达后心肌组织是否正常.构建小鼠心梗模型,HE染色鉴定,在梗死区周围直接注射Oct4腺病毒载体,4周后Western blot法检测心肌梗死区肌钙蛋白的表达.结果 免疫荧光法检测到外源性Oct4在心肌细胞核中表达呈红色荧光,RT-PCR在Oct4腺病毒组中可检测到Oct4的表达,而空病毒组与对照组则检测不到；HE染色结果表明Oct4在活体心肌表达后心肌组织形态正常,心肌梗死区周围注射Oct4腺病毒载体4周后肌钙蛋白在Oct4组的表达量与对照组、空病毒组比较有明显差异(P＜0.5).结论 外源Oct4可在活体心肌中表达,能促进梗死区心肌的再生.
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小鼠BTLA慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的 构建小鼠BTLA慢病毒表达载体,并对表达产物进行鉴定.方法 以pET-28a-mBTLA质粒为模板,通过PCR技术构建pMD18-T-mBTLA质粒,将小鼠BTLA基因全长编码序列克隆到慢病毒转移载体,通过脂质体转染293T细胞包装成小鼠BTLA慢病毒颗粒.PCR技术和基因测序对重组质粒进行鉴定.荧光显微镜观察重组慢病毒感染293T细胞形态学变化.RT-PCR和Western blot法鉴定BTLA在重组慢病毒感染293T细胞中的表达.50％组织培养感染剂量法(TCID5o法)检测重组慢病毒滴度.结果 成功构建的pMD18-T-mBTLA质粒和pSL6-mBTLA质粒,经双酶切电泳后均出现大小约为1 kb的条带与mBTLA编码序列的大小相符.基因测序并比对分析进一步证实mBTLA编码序列成功整合到质粒载体.病毒上清PCR扩增和293T细胞形态学观察证实Lenti-mBTLA慢病毒包装成功.TCID50法测定Lenti-mBTLA慢病毒滴度为1.3×108 pfu/mL.RT-PCR和Western blot法证实Lenti-mBTLA慢病毒能有效表达mBTLA mRNA和蛋白质.结论 成功构建了表达小鼠BTLA的慢病毒.
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脂多糖体外诱导牙周膜成纤维细胞发生内质网应激
目的 观测脂多糖(LPS)是否诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)发生内质网应激.方法 体外培养HPDLF,分别用LPS(0.1、1、10 μg/mL)刺激0、3、6、9h后收集细胞,提取RNA.采用实时荧光定量PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOPmRNA表达水平,通过RT-PCR检测XBP1mRNA表达水平及剪切活化情况.结果 LPS作用HPDLF3 h后GRP78、CHOP、XBP1mRNA表达水平显著上调,其中XBP1mRNA表达水平在6h达到高峰,并且出现活化的剪切形式XBP1s,而GRP78、CHOPmRNA表达水平持续上调.结论 LPS作用HPDLF后细胞发生内质网应激,且存在浓度和一定的时间依赖性.
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肾癌相关抗原G250的原核表达、纯化及抗原活性检测
目的 构建原核表达质粒pET-42a-hG250,表达并纯化肾癌相关抗原G250融合蛋白,并检测G250融合蛋白的抗原活性.方法 利用PCR从pGEM-T-G250质粒中扩增G250基因片段(112～1242 bp),测序正确后将其克隆至原核表达载体pET-42a中构建重组载体pET-42a-hG250.将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导G250蛋白的原核表达,随后将表达的融合蛋白进行纯化.经SDS-PAGE分析后,Western blot法检测纯化的蛋白,将纯化蛋白进一步包板后用ELISA对其抗原活性进行评价.结果 酶切和测序结果证实pET-42a-hG250原核表达载体构建成功；转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的G250融合蛋白；Western b1ot法和ELISA检测证实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应,显示纯化后的G250融合蛋白具有良好的免疫原性.结论 成功构建了肾癌相关抗原G250基因的原核表达载体,纯化获得了G250融合蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性.
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C5a及其受体拮抗剂在Aβ1-42处理的BV2细胞TNF-α和CD88表达中的作用
目的 探讨C5a在阿尔茨海默病(AD)小胶质细胞病变模型中释放炎性因子的作用及其机制,明确C5a受体拮抗剂对上述病变过程的干预作用.方法 制备Aβ1-42寡聚体,用Aβ1-42寡聚体刺激BV-2小胶质细胞建立AD小胶质细胞病变模型.实验组分为Aβ1-42干预组、Aβ1-42+ C5a组、Aβ1-42+ C5aRA组、Aβ1-42+ C5a+ C5aRA组,分别加入不同浓度的C5a、C5aRA、C5a+ C5aRA进行干预,以小胶质细胞无干预组为空白对照.通过流式细胞术测定细胞表面C5a受体(CD88)的表达、ELISA法检测上清液中炎症因子TNF-α的浓度.结果 Aβ1-42刺激小胶质细胞分泌TNF-α,Aβ1-42组TNF-α浓度与空白对照组相比明显增加(P＜0.05),该组CD88表达高于空白对照组(P ＜0.01)；Aβ1-42+ C5a组的TNF-α浓度高于单纯Aβ1-42组(P＜0.05),Aβ1-42+ C5aRA组TNF-α浓度低于单纯Aβ1-42组(P＜0.01),而Aβ1-42+ C5a组及Aβ1-42+ C5aRA组的CD88表达与单纯Aβ1-42组相比无显著差异(P＞0.05).结论 C5a能刺激小胶质细胞分泌炎症因子TNF-α,且与Aβ1-42有协同作用,而C5aRA则能有效抑制该通路.
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儿童咳嗽变异性哮喘外周血CD4+CD25+CD127lo/-Treg及IL-17表达水平与肺炎支原体DNA的关系
儿童咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)是一种潜在、隐匿形式哮喘,临床常无感染征象.近年来有学者提出该病可能与某些病原体感染密切相关[1].研究发现,肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia,MP)感染可诱发哮喘,且与哮喘发作及恶化有关.CVA是由多种细胞和细胞因子共同参与的气道慢性炎症性疾病,CD4+ CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)有可能在支气管哮喘的发生发展中发挥着重要作用[2].细胞因子网络失衡在哮喘的发病机制中起着重要作用,主要涉及IL-1、IL-8、IL-12、IL-13、IL-7、IL-18和TNF-α等[3].故本研究选择本院收治的CVA患儿和同期呼吸道感染患儿、正常儿童进行CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg、IL-17含量和MP-DNA的水平检测,以探讨儿童CVA发病与CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg、IL-17水平和MP感染的关系.
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携带GFP的慢病毒感染人脐带间充质干细胞及其对Oct4表达的影响
目的 将携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒感染人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),并观察其对Oct4表达的影响.方法 采用组织块贴壁法分离、培养hUCMSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物；利用含GFP的慢病毒,以不同感染复数(MOI值)感染hUCMSCs,荧光显微镜下观察GFP的表达情况,并用流式细胞仪检测GFP的阳性率,确定佳MOI值；实验分为未感染组和感染组；MTT法检测感染慢病毒后对细胞增殖的影响；GFP慢病毒感染hUCMSCs后体外持续培养2周和8周,采用定量RT-PCR (qRT-PCR)和免疫荧光染色检测细胞中Oct4的表达变化.结果 体外培养出的hUCMSCs呈长梭形成纤维细胞样,第3代细胞高表达CD29、CD105和CD90,低表达CD34、CD45；荧光显微镜观察在感染96 h后荧光表达强；当以MOI=20感染细胞96 h后,GFP阳性率达75％以上；与未感染组相比,MTT显示GFP慢病毒对细胞增殖没有明显影响(P＞0.05)；qRT-PCR检测Oct4在培养2周和8周的细胞中相对表达量分别为0.9075 ±0.0124和0.8600 ±0.0135；免疫荧光染色显示Oct4在培养2、8周中均有表达且定位于胞核.结论 慢病毒携带的GFP基因能够表达于hUCMSCs中,且不影响Oct4的表达.
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PCAF在肝细胞癌中的表达及临床意义
目的 探讨P300/CBP相关因子(PCAF)在肝癌中的表达情况以及临床意义.方法 采用免疫组化技术检测35例手术切除肝癌组织及相应癌旁肝组织中PCAF的表达情况.采用x2检验检测PCAF蛋白的表达和临床资料间的相关性,采用Kaplan-Meier Log Rank检验进行单因素生存分析,采用Cox回归模型进行多因素分析.结果 PCAF蛋白在癌旁肝组织与肝癌组织中的表达具有显著性差异(P＜0.05),并且与肿瘤TNM分期以及肿瘤转移相关(P＜0.05).COX多因素分析表明,肝癌患者术后导致较差预后的独立影响因素包括PCAF表达降低、更高的肿瘤TNM分期以及肿瘤转移.结论 肝细胞癌中的PCAF表达下调,并且与预后相关.PCAF有可能成为肝癌重要的生物学标志.
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免疫亲和质谱技术鉴定抗血管性血友病因子单克隆抗体SZ-125的抗原表位
目的 应用免疫亲和分离与质谱分析技术,结合合成肽法和氨基酸定点诱变技术,鉴定抗血管性血友病因子(vWF)单克隆抗体(mAb) SZ-125的抗原表位.方法 采用胰蛋白酶水解vWF A3区蛋白,产生一系列肽段,利用固定在琼脂糖珠上的SZ-125与其发生免疫亲和反应.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,对抗原决定簇肽段-抗体复合物进行分析.用人工合成分析得到的氨基酸序列并对其中的重要氨基酸位点进行了原位点突变.合成蛋白及突变蛋白均验证了其与抗体SZ-125间的结合力.结果 与SZ-125结合部位即连续表位的肽段为1001 EGGPSQIGDALGFAVR1016.免疫分析证实,合成肽段NH2-EGGPSQIGDALGFAVR-COOH可以与SZ-125结合.进一步通过定点诱变技术,分析得到决定抗原-抗体结合的关键氨基酸为E1001、F1013、V1015、R1016.结论 运用免疫亲和质谱、肽段合成、氨基酸定点突变等手段,精确定位了mAbSZ-125所结合的具体氨基酸位点.
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柯萨奇病毒A组16型疫苗免疫后中和抗体检测方法的比较
目的 采用3种方法检测灭活的柯萨奇病毒A组16型(CA16)疫苗的免疫保护性抗体水平,旨在构建评价疫苗免疫保护的检测平台.方法 CA16候选株疫苗(3726,4430和4432)按0、4、6、8周,经腹腔接种小鼠、大鼠和豚鼠,采集0、4、6、8周和10周血样.通过竞争抑制ELISA、细胞微孔病变实验和乳鼠攻毒保护实验评估免疫血清中和抗体水平,利用SPSS16.0软件分析3种检测方法相关性.结果 血清中和抗体在首次加强免疫2周后达到峰值；竞争抑制ELISA和细胞微孔病变实验测得中和效价的相关系数为0.861;竞争抑制ELISA和乳鼠攻毒保护的相关系数为0.8；细胞微孔病变实验和乳鼠攻毒保护的相关系数为0.89.结论 竞争抑制ELISA检测中和抗体与“金标准”相比具有灵敏、快速、大量、低廉等特点,具有广阔的应用前景.
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膜结合性补体调节蛋白及其在肿瘤免疫治疗中的控制策略
通过抗体进行的肿瘤免疫治疗,其机制大多是通过活化补体直接引起肿瘤细胞溶解(CDC)或加强抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用.而许多研究证实,肿瘤细胞表面表达的膜结合性补体调节蛋白(mCRPs)能抑制补体系统的激活,而保护肿瘤细胞免遭CDC的杀伤,因此许多抗体介导的肿瘤免疫治疗的效果往往不尽人意.相关研究表明,通过阻断mCRPs或抑制mCRPs表达能使肿瘤的杀伤效果有明显的提高,因而控制mCRPs在未来的免疫治疗中很有潜力,本文简述了相关研究进展.
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人体调节性B细胞表型及相关功能分子研究
调节性B细胞在维持人体免疫平衡中的作用愈来愈受到重视,本文主要总结了部分自身免疫病中调节性B细胞的表型及相关功能分子、细胞因子的研究现状,阐述其在不同自身免疫疾病中发挥调节功能的复杂性等.
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IL-8/CXCR1/2轴与膀胱癌关系的研究进展
白细胞介素8(IL-8)是一种具有趋化作用的小分子分泌型炎症性细胞因子,属于CXC趋化因子家族的成员,又名CXC趋化因子8(CXCL8).近年研究发现体内多种细胞如单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、角质形成细胞、肿瘤细胞等都具有分泌IL-8的能力.IL-8与其相应受体CXCRl/2结合后,除了对中性粒细胞有趋化和诱导其脱颗粒作用外,还可以通过促进血管形成、影响肿瘤细胞增殖、存活及运动,在肿瘤的发生、发展和转移中发挥重要作用.本文主要综述了IL-8及其受体与膀胱癌生物学行为的关系.
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胸腺上皮细胞的发育分化及其分子调控
T细胞在胸腺中发育成熟依赖特殊的微环境,而胸腺上皮细胞(TECs)是微环境中重要的成分之一.TECs主要分为皮质上皮细胞(cTECs)和髓质上皮细胞(mTECs),分别介导胸腺细胞的阳性选择和阴性选择过程.cTECs和mTECs来源于共同的胸腺上皮干细胞(TEPCs),经过一系列发育过程,终分化为功能及表型成熟的TECs.TECs发育分化过程除受到自身内在基因如转录因子Foxn1和Aire的调控以外,还需要与间质细胞、胸腺细胞相互作用,接受外源信号如TNFR家族成员RANK、CD40和LTβR信号的调节,这些信号尤其对mTECs的发育至关重要.而成纤维细胞生长因子(FGFs)和Wnt通路则对TECs的扩增和功能维持非常重要.本文综述了TECs发育分化过程以及参与调控该过程的信号分子通路.
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哺乳动物成熟红细胞之死:“自杀”还是“他杀”?
关于红细胞的死亡方式是否为程序性死亡(即凋亡)的问题,一直是研究者们关注和争论的焦点.研究证实,人体内几乎所有的细胞都按照其基因所编码的“程序”,在外界刺激(渗透压、氧离子及营养短缺)的作用下,起始衰老和死亡的过程.但是成熟的人类红细胞既没有细胞核,也没有线粒体等细胞器,不能像一般细胞一样通过基因调控细胞的死亡.近研究表明,成熟红细胞的死亡是不同于一般凋亡和免疫作用的一种新方式,研究者为其命名为“eryptosis”,即erythrocyte(红细胞)和apoptosis(凋亡)的组合.本文从个体、细胞和分子水平概述了成熟红细胞细胞凋亡的研究进展并比较了其与一般细胞凋亡的异同.
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评价环境雄激素类化合物重组Lac Z报告基因酵母细胞的建立
目的 建立环境雄激素内分泌干扰物酵母评价体系.方法 以载体双表达的方式构建该重组基因酵母细胞.在表达载体中,用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)启动子驱动雄激素受体基因(AR)的表达,并使其与V5抗原表位相融合；在报告载体中,用雄激素效应元件(ERE)调控的Lac Z作为报告基因.将两者转化于酵母细胞(W303-1A)中,构建成雄激素调控的重组Lac Z基因酵母细胞.用不同浓度的雄激素[去氢表雄酮(DHT)和丙酸睾酮(TP)]和雌激素(雌二醇、雌三醇、雌酮、二乙基已烯雌酚和乙炔基雌二醇),对重组基因酵母细胞分别进行敏感度和特异度研究.结果 去氢表雄酮和丙酸睾酮与该重组基因酵母细胞有明显的剂量效应关系,说明其具有良好的特异度,而与雌二醇、雌三醇、雌酮、二乙基已烯雌酚和乙炔基雌二醇5种雌激素化合物均无明显的剂量效应关系,说明其具有较强的特异性.结论 该重组基因酵母细胞可用于对环境雄激素类化合物的筛选.
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小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养及极化相关实验方法的建立
目的 建立小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养,并将其极化为M1和M2型巨噬细胞的方法.方法 获取小鼠骨髓细胞,以GM-CSF诱导其中单核细胞向巨噬细胞分化发育,并辅以LPS和IFN-γ以及IL-4刺激巨噬细胞分别向M1型和M2型分化.采用流式细胞术、实时定量PCR和ELISA的实验检测极化后细胞内以及细胞培养上清中的标志性细胞因子如IL-12、IL-10、Argl、Yml、MMR等的表达情况.结果 形态学观察发现骨髓获取的细胞经诱导分化后呈现巨噬细胞特征性的贴壁形态；流式细胞术行胞内染色表明,极化后的M1型与M2型巨噬细胞各自表达其特征性的细胞因子IL-12和Argl；实时定量PCR和ELISA分别检测所培养细胞胞内以及培养上清中的细胞因子,结果表明所刺激的M1型巨噬细胞高表达IL-12、iNOS、TNF-α等炎性因子,而M2型巨噬细胞表达MMR、Argl、Yml等标志因子.结论 建立了稳定的M1和M2型巨噬细胞体外培养体系.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
