细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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CXCR4+骨髓间充质干细胞迁移与氧化型低密度脂蛋白致内皮细胞损伤
目的 研究内皮细胞分泌的基质细胞衍生因子1(SDF-1)是否影响CXCR4+干细胞迁移功能.方法 从骨髓中分离出CXCR4+的骨髓间充质干细胞(CXCR4+BMSC),用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用MTT法检测HUVEC细胞增殖,用RT-PCR检测SDF-1α mRNA的表达,用ELISA检测SDF-1α蛋白表达,用Transwell(R)检测CXCR4+BMSC迁移.结果 ox-LDL的刺激影响HUVEC增殖,并引起SDF-1α mRNA和蛋白表达升高；含SDF-1α培养基上清能促进CXCR4+BMSC迁移,这种迁移可被CXCR4抗体抑制.结论 CXCR4+BMSC可通过SDF-1α/CXCR4轴向引起内皮细胞发生迁移运动.
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牙周膜干细胞诱导骨髓间充质干细胞的牙向分化
目的 探讨牙周膜干细胞(PDLSC)诱导骨髓间充质干细胞(BMMSC)牙向分化的机制,为联合应用PDLSC和BMMSC再生牙周复合体提供实验依据.方法应用Transwell(R)小室法间接联合培养小型猪PDLSC和BMMSC,根据二者混合比例随机分为3组.A组:P∶M=10∶1共培养组；B组:P∶M=1∶1共培养；C组:P:M=1:10共培养,单独PDLSC和BMMSC培养组分别为阳性和阴性对照组.培养14 d,应用免疫荧光染色和实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测scleraxis、osteocalcin(OCN)、osterix(OSX)、细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)蛋白和mRNA表达情况,以判定PDLSC诱导BMMSC成牙的佳配比比例.结果 免疫荧光染色和qRT-PCR结果均显示scleraxis、OCN和OSX相对mRNA表达水平在A、B、C组间没有统计学差异(P>0.05),但相对MEPE mRNA表达水平在A组却明显高于B组和C组(P＜0.01).结论 联合培养可促进BMMSC获得不同程度的PDLSC特性,且少量的PDLSC同样可以促进BMMSC获得牙源性干细胞特性.
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SPARC通过竞争性结合胶原蛋白抑制DDR2的活化
目的 探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)是否与盘状结构域受体2(DDR2)竞争性结合胶原蛋白,并观察SPARC对DDR2磷酸化水平的影响.方法 采用转染小干扰RNA的方法下调人前列腺癌细胞PC-3中DDR2的表达,观察对该细胞中SPARC mRNA表达水平的影响.在HEK293T细胞中同时过表达SPARC和DDR2,在有无胶原蛋白刺激的情况下,通过免疫沉淀及Western blot法检测DDR2磷酸化水平的变化.结果 下调DDR2会引起SPARC mRNA和蛋白表达水平显著下降；而SPARC能够抑制胶原蛋白刺激的DDR2磷酸化.结论 SPARC很可能通过竞争性结合胶原蛋白来抑制DDR2的活化.
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盐酸小檗碱对小鼠脾细胞增殖和凋亡及分泌细胞因子的影响
目的 研究盐酸小檗碱(BBR)对小鼠脾细胞增殖与凋亡及细胞因子产生的影响.方法 采用无菌取BALB/c小鼠脾脏,制成脾细胞悬液,脾细胞预先用(1、2、4) μg/mL BBR处理60 min,加入刀豆蛋白(ConA)刺激脾细胞增殖,细胞培养至24、48、72 h时,用MTT方法检测脾细胞增殖情况；流式细胞术检测脾细胞培养不同时间的凋亡情况,用细胞因子ELISA检测试剂盒定量分析细胞上清液中TNF-α,IL-2和IFN-γ的浓度.结果 与对照组相比,在以上浓度范围内,BBR对ConA刺激下实验组小鼠脾细胞的增殖和TNF-α,IL-2,IFN-γ产生有明显的抑制作用(P＜0.05),且呈浓度及时间依赖性,但对小鼠脾细胞凋亡无明显影响(P>0.05).结论 BBR对小鼠脾细胞具有明显的免疫抑制作用,可作为潜在的免疫抑制药物.
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Rab23在人乳腺癌细胞Bcap-37侵袭迁移中的作用
目的 探讨过表达和敲除Rab23对人乳腺癌Bcap-37细胞侵袭迁移能力的影响.方法 应用Western blot法检测乳腺细胞HBL-100及乳腺癌细胞Bcap-37、MDA-MB-231、MCF-7中Rab23的表达情况.慢病毒转染乳腺癌细胞Bcap-37,筛选出稳定过表达和敲除Rab23的Bcap-37细胞.划痕愈合试验、Transwell实验检测过表达和敲除Rab23后Bcap-37细胞侵袭迁移能力的变化.结果 Western blot法结果显示,Rab23在乳腺和乳腺癌细胞系中均有表达,且Bcap-37细胞表达水平高,与HBL-100细胞相比,差异有统计学意义(P＜0.01)；与空载体Bcap-37细胞比较,过表达Rab23的Bcap-37细胞侵袭迁移能力明显增强(P＜0.01)；敲除Rab23的Bcap-37细胞侵袭迁移能力明显减弱(P＜0.01).结论 Rab23在乳腺癌细胞Bcap-37的侵袭迁移中发挥着重要作用.
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NLRP3炎症小体及其下游分子在幽门螺杆菌感染小鼠的表达
目的 研究NLRP3炎症小体信号通路相关分子在幽门螺杆菌(H.pylori)感染C57BL/6小鼠胃组织和血清中的表达情况,初步探讨NLRP3炎症小体信号通路在H.pylori致病中的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为H.pylori感染组和PBS对照组,于感染后不同时间点处死小鼠,RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3炎症小体和下游信号通路分子mRNA表达,Western blot法检测小鼠胃组织中caspase-1蛋白表达,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-33含量.结果 与对照组相比,H.pylori感染组小鼠胃黏膜均呈慢性炎症改变,且随时间延长,炎症程度逐渐加重.NLRP3炎症小体信号通路相关分子mRNA及caspase-1蛋白表达水平显著升高,血清中IL-1β、IL-18、IL-33的含量均显著增高.结论 H.pyori感染可以激活NLRP3炎症小体信号通路.
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甘肃党参水煎剂对D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的影响
目的 研究甘肃党参水煎剂对D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的影响.方法 采用D-半乳糖诱导亚急性衰老小鼠模型,测定每组小鼠的体质量,计算脾脏指数和胸腺指数,观察脾脏组织超微结构,采用免疫组化法检测CD138的表达,ELISA检测小鼠血清中IgG、IgM和补体C3、C4含量.结果 与正常对照组相比,衰老模型组小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著降低(P＜0.01),与模型组比较,高、低剂量党参组和维生素E组小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著升高(P＜o.ol).正常对照组脾小体中淋巴细胞的超微结构均正常,而模型组小鼠的脾脏超微结构有明显的损伤现象.低、高剂量党参组和维生素E组均使已受损伤的脾脏超微结构得以修复,其中高剂量党参组使受损的脾脏超微结构恢复到接近正常水平.与正常对照组比较,衰老模型组小鼠脾脏组织中CD138的表达率较低(P＜0.01),小鼠血清中IgG、IgM和补体C3、C4含量显著减少(P＜0.01或P ＜0.05);与衰老模型组比较,正常对照组和高剂量党参组小鼠脾脏组织中CD138的表达率较高(P＜0.01),小鼠血清中IgG、IgM和补体C3、C4含量显著增加(P＜0.01或P＜0.05),而党参低剂量组和维生素E组无显著差异(P＞0.05).结论 甘肃党参水煎剂具有增强D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的作用.
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异基因骨髓间充质干细胞移植对EAE小鼠的治疗作用
目的 探讨异基因骨髓间充质干细胞(BMSC)对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)的治疗作用及相关免疫调节机制.方法 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)多肽片段诱导建立C57BL/6J小鼠EAE模型；分离纯化培养BALB/c小鼠BM-SC,对EAE模型小鼠进行移植,移植前后对EAE小鼠进行神经功能评分；流式细胞术检测小鼠淋巴器官CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞(Treg)的数量；荧光定量RT-PCR检测小鼠脾脏IL-2、IL-4、IL-17和IL-23 mRNA水平的表达.结果 异基因BMSC移植后小鼠神经功能评分明显改善；BMSC移植组小鼠胸腺、脾脏、淋巴结Treg数量显著增加；脾脏中IL-2、IL-17表达显著下降,同时IL-4、IL-23表达显著增加.结论 异基因BMSC移植通过调节免疫系统的Treg数量和CD4+T细胞分泌细胞因子的水平对EAE起治疗作用.
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前列腺癌非编码RNA1在雄激素非依赖去势抵抗型前列腺癌细胞中的作用
目的 探讨长链非编码RNA前列腺癌非编码RNA1(PRNCR1)在雄激素非依赖的前列腺癌细胞中的作用.方法 应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP及雄激素非依赖的前列腺癌细胞C4-2中PRNCR1的表达情况,通过RNA干扰技术沉默C4-2细胞中的PRNCR1,Western blot技术检测C4-2细胞中雄激素受体(AR)的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,MTT实验检测沉默PRNCR1表达对细胞增殖的影响,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 PRNCR1在雄激素非依赖的细胞系C4-2中高表达,干扰其表达可以明显降低前列腺癌细胞中AR的表达,抑制前列腺癌细胞的细胞增殖及细胞的侵袭能力,并促进细胞的凋亡.结论 PRNCR1介导AR在前列腺癌去势抵抗中发挥着重要作用.
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脂多糖体外诱导RAW264.7细胞产生NF-κBp65、iNOS及TNF-α
目的 研究脂多糖诱导RAW264.7细胞产生NF-κBp65、TNF-α及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的剂量、时间关系,为抗炎药物的体外筛选提供实验依据.方法 调整RAW264.7细胞密度为1×109/L,种6孔板,实验设正常对照组、(1、2、5、10) μg/mL脂多糖组,免疫细胞化学方法检测NF-κBp65、iNOS及TNF-α的水平.结果 (1、2、5、10) μg/mL脂多糖可显著诱导产生NF-κBp65 (P ＜0.05),2～10 μg/mL时可显著诱导iNOS的生成(P＜0.01),5～ 10μg/mL时可显著诱导TNF-α的生成(P＜0.05).结论 5～ 10μg/mL脂多糖可同时诱导产生NF-κBp65、iNOS及TNF-α,模型性能稳定,可用于多细胞因子途径的抗炎药物筛选.
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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对肝星状细胞增殖活化的影响
目的 观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立空白对照组和3-MA低剂量组(2.5 mmol/L)、中剂量组(5 mmol/L)、高剂量组(10 mmol/L).RT-PCR分析不同浓度3-MA对HSC活化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响,Western blot法检测不同浓度3-MA对HSC中自噬水平标志蛋白LC3Ⅱ、α-SMA以及Ⅰ型胶原蛋白表达水平的影响；MTT法检测3-MA对HSC增殖的影响,流式细胞术分析3-MA对HSC细胞周期的影响.结果 低、中、高剂量3-MA作用于HSC后,HSC-T6细胞自噬水平随3-MA浓度升高逐渐下降,α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达量均明显低于对照组(P＜0.05),LC3Ⅱ、α-SMA以及Ⅰ型胶原蛋白相对表达量均明显低于对照组(P＜0.05).与对照组相比,低、中、高剂量时3-MA对HSC增殖的影响均显著下降(P＜0.05),G2期比例与对照组比较均明显增加(P＜0.05).结论 3-MA可下调大鼠HSC-T6细胞LC3Ⅱ的表达,抑制α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA及蛋白的表达,使HSC-T6细胞周期停滞于G2期,抑制HSC增殖活化.
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类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞亚群的分析
目的 研究类风湿性关节炎(RA)患者不同时期外周血Treg和Th1、Th2、Th17细胞以及中性粒细胞上CD64的表达水平,及它们与RA的活动性指标和自身抗体的相关性.方法 采集78例RA患者和21例健康人外周静脉血,采用流式细胞术检测淋巴细胞亚群(Treg,Th1、Th2、Th17细胞)的变化.结果 RA的CD3+ CD4+T细胞和CD4+ CD25+T细胞增多,活动期RA组Treg比率高于缓解期RA组和健康对照组,缓解期RA组Th2细胞减少,RA中Th1,TH17细胞与健康对照组相比无统计学意义,Treg和Th1、Th2、Th17细胞与RA的活动性指标(ESR,CRP和PLT)均无关联.结论 CD4+T细胞亚群数量异常可能与RA疾病发展有关.
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肺结核患者痰液细胞和血清中miR-618的水平变化及功能预测
目的 检测肺结核患者痰液和血清中miR-618的水平变化及miR-618靶基因细胞因子IL-13的含量,并用生物信息学技术和软件对miR-618的功能进行预测分析.方法 收集健康对照和活动性肺结核患者的痰液和血清,用核酸杂交和实时定量PCR(qRT-PCR)检测痰液和血清中miR-618的水平.用ELISA检测IL-13的含量.TargetScan预测miR-618的靶基因,用DAVID数据库和Cytoscape的BINGO插件对miR-618的预测靶基因进行GO注释分析和生物通路分析.结果 杂交和qRT-PCR结果显示:miR-618在活动性肺结核患者痰液和血清中的水平均比健康对照组显著降低(P＜0.05).IL-13含量虽然在对照组和结核组中无统计学差异,但在结核组有增高的趋势.miR-618预测靶基因的GO注释结果富集在转录调控等生物学过程、DNA结合等分子功能等方面(P＜0.05)；在KEGG通路数据库中miR-618a预测靶基因主要富集于TGF-β信号通路中(P＜0.05).结论 miR-618在活动性肺结核感染患者痰液和血清中的含量都明显降低,miR-618的靶基因主要参与转录调控、RNA代谢等生物学过程.
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慢性充血性心力衰竭患者血清syndecan-4水平及临床意义
目的 探讨慢性充血性心力衰竭(CHF)患者血清中syndecan-4浓度变化与CHF NYHA心功能分级及超声心动图指标变化的关系.方法 选择40名CHF患者和40位健康人；用ELISA检测外周血中的syndecan-4浓度,超声心动图测定左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(FS)、左室舒张末期直径、左室收缩末期直径、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积等数值；观察syndecan-4蛋白水平与CHF NYHA心功能分级及超声心动图指标变化的相关性.结果 CHF组患者血清syndecan-4水平均较对照组显著升高(P＜0.01),且随CHF NYHA心功能分级增加而进行性升高；相关分析显示血清syndecan-4蛋白水平与左室射血分数及左室短轴缩短率分别存在显著负相关(P＜0.05),与左室舒张末期直径,左室收缩末期直径,左室舒张末期容积,左室收缩末期容积分别存在显著正相关(P＜0.05).结论 CHF患者血清syndecan-4浓度显著升高,并与NYHA心功能分级密切相关,血清syndecan-4水平与左室心功能超声参数存在显著相关性,对CHF患者具有一定的诊断价值.
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原发免疫性血小板减少症患者CD4+T细胞CD28的表达及其与IFN-γ/IL-10比率的关系
目的 研究原发免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前、后,外周血CD4+的T淋巴细胞中共刺激分子CD28的表达及与IFN-γ/IL-10比率的关系.方法 采用流式细胞术分析30例ITP患者糖皮质激素治疗前、后和26例正常对照外周血CD4+T细胞上CD28表达率,用ELISA双夹心法检测外周血血清中IFN-γ和IL-10的水平,评价CD4+ CD28+与IFN-γ/IL-10平衡状态、血小板计数之间的关系.结果 ITP患者治疗前CD4+ CD28+的表达显著高于正常对照组(P＜0.05),治疗后与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；ITP患者治疗前IFN-γ水平较正常对照组显著增高,IL-10水平显著降低,IFN-γ/IL-10比值显著增高(P＜0.01),治疗后与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；ITP患者治疗前CD4+ CD28+与IFN-γ/IL-10比值呈正相关(P＜0.05),与血小板计数呈负相关(P＜0.05).结论 共刺激分子CD28与ITP免疫紊乱密切相关,可能通过参与Th1优势状态形成而在ITP的发病中发挥一定作用.
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CARD18在凋亡素基因转染的胃癌细胞的表达及其在临床样本中的检测和意义
目的 探讨caspase募集结构域家族成员18(CARD18)在凋亡素诱导胃癌细胞凋亡的机制及在胃癌发生发展中的作用.方法 运用二维凝胶电泳法分离凋亡素作用胃癌细胞后表达的差异蛋白质,通过基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)和生物信息学方法确定其中部分差异蛋白质,RT-PCR和Western blot法检测CARD 18的表达,采用免疫组化检测56例胃癌组织及癌旁组织中CARD 18的表达,并分析其与胃癌临床病理参数的关系.结果 凋亡素处理后的胃癌细胞CARD18表达下调明显,CARD18蛋白在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.05),且与胃癌的分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 CARD18可作为一个潜在的预后标志物和靶向标志物.
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多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞c-Cbl和Cbl-b基因表达下调
目的 研究多发性骨髓瘤(MM)患者外周血单个核细胞(PBMC)中c-Cbl和Cbl-b基因表达情况.方法 收集23例MM患者和22例健康人PBMC,利用SYBR(R) Green实时荧光定量PCR方法检测MM患者和健康人PBMC中c-Cbl和Cbl-b基因相对表达水平；利用RT-PCR方法分别扩增MM患者和健康人c-Cbl基因第7～10外显子,并对PCR产物进行序列分析.结果 MM组c-Cbl表达水平(中位数0.798％),与健康对照组c-Cbl表达水平(中位数2.443％)相比,显著降低(P＜0.05)；Cbl-b表达水平(中位数0.714％)与健康对照组Cbl-b表达水平(中位数2.179％)比较,也显著降低(P＜0.05).在2例MM患者中检测到c-Cbl基因第7～10外显子存在2个大小不同的片段:483 bp和148 bp,分别为野生型c-Cbl和删除突变的c-Cbl基因,所有PCR产物测序后均未发现突变.结论 MM患者PBMC中c-Cbl和Cbl-b基因表达下调.
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OX40和OX40L在原发性干燥综合征患者外周血中的表达及临床意义
目的 检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血单个核细胞表面共刺激分子OX40和OX40L的表达,并探讨其临床意义.方法 采用免疫荧光标记流式细胞技术检测51例pSS患者及36例健康志愿者外周血T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L分子表达,比较11例初诊pSS患者治疗前后OX40和OX40L表达水平变化,分析其临床意义.结果 与健康志愿者相比,pSS患者外周血CD4+T细胞表面OX40表达显著增高(8.65％ ±3.51％ vs 5.68％ ±1.68％,P＜0.01),而CD8+T细胞表面OX40的表达无统计学差异.pSS患者表面OX40L的表达,在外周血中CD14+单核细胞(6.76％±3.60％ vs 3.15％±1.89％,P＜0.01)和CD19+B细胞(4.69％ ±2.40％ vs 2.76％ ±1.33％,P＜0.01)中均高于健康志愿者.活动期的pSS患者外周血OX40和OX40L的表达高于非活动期患者,伴发多系统损伤pSS患者外周血OX40和OX40L分子的表达显著高于单纯外分泌腺损伤患者.治疗后CD4+T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L的表达显著下降.结论 pSS患者外周血单个核细胞表面OX40和OX40L异常高表达,且与疾病活动度、组织损伤及治疗密切相关.
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非小细胞肺癌原发灶与转移淋巴结中MDR-1、RRM-1、EGFR、ERCC-1的表达差异
目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)原发灶和转移淋巴结中多药耐药蛋白(MDR-1)、核糖核苷酸还原酶M1(RRM-1)、表皮生长因子受体(EGFR)、错配切除修复蛋白1(ERCC-1)表达的差异,并分析这些表达差异性与临床病理类型的关系.方法 采用免疫组织化学染色观察46例NSCLC原发灶及转移淋巴结中MDR-1、RRM-1、EGFR、ERCC-1蛋白的表达情况,用Wilcoxon秩和检验来比较原发灶和淋巴结转移灶表达是否存在差异,用Fisher检验分析差异性是否与病理类型相关.结果 46例各种病理类型的NSCLC,原发病灶与转移淋巴结均存在MDR-1、RRM-1、EGFR、ERCC-1表达,其中ECRR-1的表达差异在腺癌中具有统计学意义(P =0.026),而MDR-1,RRM-1,EGFR的差异性在各病理类型无统计学意义(P>0.05).结论 MDR-1、RRM-1、EGFR、ERCC-1在NSCLC的原发病灶和转移淋巴结中均表达,但只有ERCC-1在肺腺癌原发灶与转移淋巴结的表达具有明显差异.
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新疆出血热病毒核蛋白多克隆抗体的制备及其免疫学评价
目的 原核细胞中表达、纯化新疆出血热病毒BA88166毒株核蛋白(NP)并制备及鉴定抗NP蛋白的多克隆抗体.方法 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出BA88166毒株S基因的cDNA片段,将其构建到原核表达载体pET-32a上,形成重组原核表达质粒pET-88166S.构建好的质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,经镍柱亲和层析法纯化NP-His融合蛋白,SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量(Mr).用该纯化蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blot法检测血清效价和特异性.结果 双酶切鉴定和DNA测序证实构建的pET-88166S重组表达载体正确,目的基因序列与GenBank中公布的序列一致,在E.coli BL21中表达的NP-His融合蛋白经SDS-PAGE分析,其Mr约为66000.ELISA检测抗体效价高于1:25600,蛋白免疫印迹实验结果表明抗体能特异性识别新疆出血热病毒YL04057毒株的NP蛋白及其截短蛋白.结论 成功获得新疆出血热病毒NP-His融合蛋白,得到了特异性兔抗NP蛋白多克隆抗体.
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抗卵泡刺激素受体纳米抗体的制备及鉴定
目的 获得抗卵泡刺激素受体(FSHR)的纳米抗体.方法 使用原核表达的重组蛋白His-FSHR234对新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库进行亲和筛选,将筛选获得的重链抗体的可变区(vhh)基因亚克隆至pET30a表达载体,转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达VHH重组蛋白,镍离子亲和层析柱纯化获得纳米抗体.ELISA检测纳米抗体的抗原结合活性.结果 His-FSHR234筛选富集后,随机挑选40个克隆进行鉴定,其中28个为阳性克隆,挑选4个vhh基因进行克隆,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符.SDS-PAGE显示,VHHFSHR-06、VHHFSHR-25、VHHFSHR-30、VHHFSHR-50分别在相对分子质量(Mr)31000、26000、25000、26000有目的条带.EHSA检测显示,4个纳米抗体对His-FSHR234重组蛋白均具有结合活性,其中VHHFSHR-06的抗原结合活性高.结论 从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中筛选获得了1个具有较高抗原结合活性的抗FSHR的纳米抗体.
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人成纤维细胞生长因子-21单克隆抗体的制备及抗原表位的确定
目的 制备小鼠抗人成纤维细胞生长因子(hFGF)-21单克隆抗体(mAb),通过细菌展示确定该mAb的抗原表位.方法 用hFGF-21作为检测和免疫抗原,间接ELISA筛选分泌抗人hFGF-21 mAb的杂交瘤细胞株；用FITC标记该mAb,并克隆hFGF-21的不同片段到展示载体Apex上,通过流式细胞仪筛选其抗原表位.结果 成功筛选出1株抗hFGF-21抗体的细胞株,其分泌抗体重链的亚型为IgG 2b,轻链为Kappa链；该杂交瘤细胞株腹水的效价为1:4.096×106；传30代及液氮中保存3个月,该细胞株能稳定分泌抗hFGF-21 mAb,且效价稳定；Western blot法检测证明该抗体与人FGF-21有很好的特异性；该mAb与小鼠FGF-21有交叉反应；通过流式细胞仪对抗原表位的筛选,该mAb可与hFGF-21下游的第107～121个氨基酸反应.结论 成功的制备出特异性、高稳定性的小鼠抗hFGF-21 mAb,确定了该mAb的抗原表位在第107～121位氨基酸.
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溃疡性结肠炎发病机制中免疫因素的研究进展
溃疡性结肠炎是一种常见的慢性肠道疾病,近年来发病呈上升趋势,而其发病机制目前尚不明确.目前认为与多种因素有关.环境因素作用于遗传易感者,在肠道菌丛的参与下,启动肠道免疫和非免疫系统,发生免疫反应和炎症,从而出现临床症状.其中免疫异常被认为是溃疡性结肠炎发病的重要因素,主要包括自身抗体、细胞免疫、细胞因子、环氧合酶与基质金属蛋白酶、氧自由基和一氧化氮等.本文综述了溃疡性结肠炎免疫发病机制中的各种影响因素.
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天然免疫屏障-血脑屏障调节的研究进展
天然免疫是人和动物免疫系统的重要组成部分,在抗感染过程中发挥关键作用,其中,血脑屏障是保护脑器官的天然卫士,能够阻止病原体和有害物质从血液进入脑组织和脑脊液,从而保护中枢神经系统稳定.血脑屏障通透性并非恒定不变,受到紧密连接和多种因子调控.本文综述了血脑屏障调节研究的进展.
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吲哚胺-2,3双加氧酶与乳腺癌免疫耐受关系的研究进展
乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤,占女性新发恶性肿瘤的30％,且发病率呈逐年上升趋势.研究表明,吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)在乳腺癌疾病进展、肿瘤耐药及预后中发挥作用,了解IDO在乳腺癌中的作用机制对临床治疗乳腺癌具有重要意义,本文简要综述了IDO和乳腺癌的关系研究概况和进展.
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模式识别受体及其功能
表达在固有免疫细胞上的模式识别受体是宿主抵抗病原微生物的感应器,它们能够识别外来微生物的保守成分,及时向下游传递信号,引发先天免疫反应.这些模式识别受体不仅相互之间存在cross-talk,而且会受到其他受体的调节,从而保证机体对损伤或感染产生适当程度的应答.本综述概述了目前已知的模式识别受体及其他受体对它们的调节作用.
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人survivin蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定
目的 构建人肿瘤抗原survivin的原核表达载体,优化在大肠杆菌中的表达条件,并对survivin/His融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定.方法 设计针对survivin基因序列的特异引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增人survivin全长基因序列(538 bp)克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28 a-survivin,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达survivin/His融合蛋白,并采用Ni亲和层析凝胶纯化重组蛋白.纯化后的重组蛋白经Western blot法、ELISA鉴定其抗原活性.结果 重组表达载体经BamH Ⅰ和HindⅢ鉴定正确；IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)24000大小的重组蛋白；纯化后的蛋白纯度达到90％.Western blot法和ELISA检测证实纯化的survivin蛋白能够与特异性抗体发生反应,表明其具有良好的抗原活性.结论 成功构建了原核表达载体pET28 a-survivin,利用大肠杆菌表达系统实现了融合蛋白的可溶性表达并进行纯化,纯化后survivin蛋白经鉴定具备较高的抗原活性.
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斑点酶免疫渗滤法定量检测雌三醇的实验研究
目的 制备高特异性的抗雌三醇(E3)单克隆抗体(mAb),建立操作简便、敏感、快速适用于基层使用的E3检测方法.方法 采用活化酯法制备偶联物E3-HRP、E3-BSA、3-OVA.应用mAb技术制备抗E3的mAb;以硝酸纤维素膜为固相载体,抗E3 mAb为包被抗体,建立竞争抑制模式的斑点酶免疫渗滤法.结果 筛选出5株可分泌特异性抗E3 mAb的杂交瘤细胞株.mAb效价为1×105～5×105,亲和常数为5.1×108 ～ 5.2×109 L/mol.检测敏感度为2 ng/mL,检测范围2～200 ng/mL.结论 建立了检测速度快、灵敏度高、应用方便的斑点酶免疫渗滤法.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
