细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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胰岛素与硒对糖尿病大鼠骨骼肌细胞胰岛素信号转导的联合作用
目的 观察胰岛素与硒对糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号分子表达的影响.方法 雄性SD大鼠35只,随机分为正常组、糖尿病组、糖尿病胰岛素治疗组(D-In组)、糖尿病亚硒酸钠治疗组(D-Se组)、糖尿病联合胰岛素和亚硒酸钠治疗组(D-In-Se组),每组7只.采取One TouchⅡ血糖仪测定胰岛素和硒联合应用后糖尿病大鼠血糖变化；微柱法测定糖化血红蛋白(HbA1c)；Western blot法和免疫组织化学法检测骨骼肌细胞中胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和葡萄糖转运子4(GLUT4)表达的变化；采用简单相关分析观察IRS-1、PI3K、GLUT4和血糖之间的相关性.结果 D-In-Se组血糖较D-In组和D-Se组明显下降(P＜0.01)；Western blot法和免疫组化结果均显示:胰岛素和硒联合应用能明显增加糖尿病大鼠骨骼肌细胞上IRS-1、PI3K和GLUT4的表达(P＜0.01)；相关分析结果显示:骨骼肌细胞膜上GLUT4蛋白的表达量与胞质中IRS-1及PI3K蛋白的表达均呈正相关,血糖水平与骨骼肌细胞膜上GLUT4蛋白的表达量呈负相关.结论 胰岛素和硒联合应用可通过IRS-1/PI3K途径、增加骨骼肌胞膜上GLUT4蛋白的表达,发挥协同降血糖作用.
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卵巢切除小鼠骨髓间充质干细胞RANKL、OPG促进破骨细胞发育并增强其功能
目的 研究雌激素调控骨髓间充质干细胞(BMSC)表达核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护因子(OPG)对破骨细胞发育和功能的影响.方法 选用健康雌性小鼠行双侧卵巢切除术(OVX),建立绝经后骨质疏松模型.选用同一批次健康小鼠行双侧卵巢脂肪组织部分切除,建立假手术组(sham).用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、RANKL诱导小鼠单核细胞为破骨细胞,同时分别加入sham和OVX组BMSC与单核细胞共培养.抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数2组BMSC对骨髓诱导发育为破骨细胞的数量.甲苯胺蓝染色检测2组共培养体系中破骨细胞骨吸收陷窝的数量.RT-PCR和Western blot法检测sham和OVX组BMSC中OPG、RANKL的表达.结果 TRAP和甲苯胺蓝染色显示,OVX组中破骨细胞数目及吸收陷窝数大于sham组(P＜0.05).RT-PCR和Western blot法结果显示OVX组较sham组OPG表达显著降低,RANKL显著增强(P＜0.05).结论 雌激素能够影响BMSC中OPG和RANKL的表达,雌激素缺乏环境下,BMSC促进破骨细胞发育并增强其功能.
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甘精胰岛素对糖尿病大鼠T细胞亚群及TNF-α、IFN-γ、IL-10水平的影响
目的 观察甘精胰岛素对糖尿病大鼠外周血T淋巴细胞和细胞因子等免疫指标的影响.方法 采用一次性腹腔注射大剂量链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病大鼠模型,给予甘精胰岛素治疗6周,并设立相应对照组,于给药后3周、6周测定其外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-10水平及CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的变化情况.结果 甘精胰岛素能明显降低糖尿病大鼠外周血TNF-α、IFN-γ水平(P＜0.01)、升高IL-10水平(P＜0.01)且能使CD4+/CD8+的比值显著降低(P＜0.01).结论 甘精胰岛素可在一定程度上改善糖尿病大鼠体内的炎症水平.
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肿瘤相关抗原GC结合因子2 shRNA表达载体的构建及鉴定
GC结合因子2(GC-binding factor 2,GCF2)是一种转录抑制因子,因为能与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因启动子上富含GC的序列结合而得名[1].研究表明,GCF2可通过多种途径参与细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡等进程[2-4].GCF2广泛地高表达于肺癌A549细胞、胃腺瘤AGS细胞及白血病K562细胞等人类多种肿瘤细胞,并且发现GCF2在这些细胞中的高表达与肿瘤细胞增殖、侵袭及肿瘤耐药等密切相关[5-7].RNA干扰(RNA interence,RNAi)可特异性地阻断靶基因表达,是研究基因功能的有效技术.
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携带hFGF21基因慢病毒的制备及鉴定
目的 包装人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)慢病毒颗粒、确定包装细胞人胚肾293T(HEK293T)细胞的形态特征以及对目的基因的转导能力.方法 对慢病毒重组质粒Lv105-hFGF21进行测序鉴定,在HEK293T细胞中包装为慢病毒颗粒并浓缩,经反转录PCR(RT-PCR)和电镜检测鉴定后,利用实时定量PCR测定病毒滴度.然后感染Vero细胞,经RT-PCR检测hFGF21 mRNA的表达、免疫荧光检测hFGF21蛋白的表达.结果 RT-PCR结果表明重组慢病毒能转录hFGF21 mRNA,电镜检测结果可以看到典型的慢病毒颗粒形态特征,其直径在40 ～70 nm;重组病毒原液的滴度是3.68×108 VG/mL、浓缩液的滴度是1.25×109 VG/mL；重组慢病毒感染Vero细胞后经RT-PCR检测到细胞中有hFGF21 mRNA表达,免疫荧光测到Veto细胞中有hFGF21蛋白表达.结论 成功包装了hFGF21慢病毒颗粒并在靶细胞中获得表达.
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西酞普兰对小胶质细胞的免疫调节作用
目的 观察抗抑郁药物西酞普兰对体外培养的小胶质细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响,探讨西酞普兰对小胶质细胞丝裂原活化的蛋白激酶家族p38 (p38MAPK)和c-jun氨基末端激酶(JNK)的作用.方法 脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞表达TNF-α和IL-1β.西酞普兰组(20 μmol/L)预处理4h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)观察TNF-α mRNA和IL-1β mRNA的表达；预处理24h后,ELISA检测TNF-α和IL-1β在细胞培养上清的浓度；预处理30min后收获细胞,观察西酞普兰对p38MAPK和JNK磷酸化的影响.结果 西酞普兰显著抑制小胶质细胞TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白表达；西酞普兰抑制LPS诱导的p38MAPK和JNK的磷酸化.结论 西酞普兰可能是通过抑制MAPK途径对小胶质细胞发挥免疫抑制作用.
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瘦素对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响及其机制
目的 探讨瘦素(leptin)对人乳腺癌MCF-7细胞迁移及侵袭能力的影响,并探讨其机制.方法 RT-PCR,Western blot法检测MCF-7细胞leptin受体(OB-R)的表达；Western blot法检测leptin (100 ng/mL)对MCF-7细胞信号通路分子p-ERK1/2,p-AKT,p-STAT3表达的影响；细胞划痕实验检测leptin对MCF-7细胞迁移能力的影响；TranswellTM细胞侵袭实验检测leptin 对MCF-7细胞侵袭能力的影响；RT-PCR,Western blot法检测leptin对MCF-7细胞基质金属蛋白酶(MMP-9),转化生长因子β(TGF-β)表达的影响.结果 Leptin长短受体(OB-Rb,OB-Rt)在MCF-7细胞中均有表达；Leptin能显著上调MCF-7细胞p-ERK1/2,p-STAT3,p-AKT的表达(P＜0.05)；Leptin能促进MCF-7细胞的迁移及侵袭能力(P＜0.05),JAK/STAT,PI3K/AKT信号通路抑制剂AG490(50 μmol/L),LY294002(10 μmol/L)能抑制leptin对MCF-7细胞的促迁移和侵袭作用(P＜0.05),而MAPK/ERK通路抑制剂PD98059(10 μmol/L)作用不明显(P ＞0.05); Leptin促进MCF-7细胞MMP-9,TGF-β的表达,AG490,LY294002能抑制其作用(P＜0.05),PD98059对其无影响(P＞0.05).结论 Leptin可能通过JAK/STAT、PI3K/AKT信号通路上调MMP-9,TGF-β的表达促进MCF-7细胞迁移和侵袭.
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骨髓间充质干细胞对雌激素缺乏所致骨质疏松症的治疗作用
目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)治疗雌激素缺乏骨质疏松症的疗效.方法 建立卵巢摘除术后骨质疏松症模型和假手术模型,通过小鼠尾静脉注射BMSC,利用micro-CT扫描小鼠股骨检测BMSC发挥免疫调控功能治疗骨质疏松症的效果,同时运用ELISA测定经治疗后小鼠血清TNF-α的表达水平,用F1TC-annexin V/7-amino actimycin D染色和流式细胞仪观察治疗前后BMSC诱导T淋巴细胞凋亡程度的改变.结果 通过卵巢摘除术构建的小鼠骨质疏松模型其股骨干骺端骨密度、骨小梁数量及骨体积分数较sham组均有一定程度的降低,血清TNF-α较sham组相比,有一定程度升高.通过尾静脉注射BMSC,OVX组股骨干骺端骨密度、骨小梁数量及骨体积分数有一定的提高.经BMSC治疗后,小鼠T淋巴细胞凋亡数量增多,而TNF-α表达水平降低.结论 BMSC因其具有免疫调控的能力,在治疗骨质疏松症中可能有一定作用.
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复合营养素促进CCl4诱导的肝硬化大鼠肝脏的修复和再生
目的 探索复合营养素对CCl4诱导的肝硬化大鼠肝脏的再生和肝损伤的修复作用.方法 按2 mL/kg体质量的剂量予以腹腔注射400 ml/L CCl4葵花籽油溶液,每周2次,持续12周,构建大鼠肝硬化模型.给予复合营养素进行营养干预,同时设立正常对照组和未给予复合营养素的自发恢复组.收集大鼠肝组织和血液标本,免疫组织化学染色检测肝组织肝再生增强因子(ALR)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,ELISA检测血清肝细胞生长因子(HGF)水平,全自动生化分析仪检测血清转氨酶、总胆红素和白蛋白水平及血糖、血脂水平,质谱检测血浆氨基酸水平.结果 营养干预组大鼠ALR和PCNA表达高于自发恢复组；营养干预组大鼠血清肝细胞生长因子水平高于自发恢复组(98.92±2.42 vs 60.99±27.63,t=3.349,P=0.020)；营养干预组大鼠血清转氨酶(60.18±6.39vs84.6±17.91,t=3.146,P=0.019)和总胆红素(2.08±0.46 vs6.97±2.58,t=4.56,P=0.001)水平低于自发恢复组,白蛋白水平(33.15±1.36 vs 24.62±2.48,t=7.39,P=0.000)高于自发恢复组；营养干预组大鼠血浆支链氨基酸(BCAA)水平高于自发恢复组(381.53±35.86 vs 283.05±79.14,t=2.78,P=0.02).结论 复合营养素可能促进CCl4诱导的肝硬化大鼠肝脏的再生和肝损伤的修复,其再生可能与血浆支链氨基酸水平的升高有关.
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表皮生长因子受体及HER2在胆囊癌中的表达
胆囊癌发病率逐年增加,许多胆囊癌患者诊断的时候已经处于晚期,特别是广泛转移的患者,已经丧失了手术机会,只能姑息治疗.探讨新的、有效的治疗方法,发现有效的治疗药物,具有积极的临床意义.本研究采用免疫组织化学技术观察了表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及人类表皮生长因子受体2(human epidermal growthfactor receptor-2,HER2)在胆囊癌中的表达,以探讨胆囊癌分子靶向治疗的可能性.
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哮喘大鼠淋巴液和血液中Th17细胞百分率升高及IL-23、IL-17的表达增加
目的 验证免疫反应能否改变哮喘大鼠外周血和淋巴液中CD4+ IL-17+ Th17细胞数量及其相关细胞因子IL-23、IL-17的表达.方法 流式细胞仪检测大鼠血液和淋巴液中CD4+ IL-17+ Th17细胞百分率,ELISA检测血液和淋巴液上清中IL-17、IL-23水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测淋巴液和血液中IL-23 p19 mRNA表达.结果 末次激发后各时间点(0、24、48h)收集单个核细胞(MNC),体外培养18 h,探讨哮喘模型中细胞因子产生和CD4+IL-17+Th17细胞变化的影响.哮喘组淋巴液和血液MNC的体外培养体系中CD4+IL-17+Th17细胞百分率和IL-23 p19 mRNA的表达水平均显著高于正常对照组(P＜0.05)；另外,各组淋巴液MNC的CD4+ IL-17+ Th17和IL-23 p19 mRNA的表达水平均显著高于血液(P＜0.05).各组淋巴液上清IL-23、IL-17水平均显著高于血液(P＜0.05),与正常组比较,哮喘组的细胞因子和体外培养体系中细胞数量明显增加.结论 哮喘促使Th17细胞的增殖和释放IL-23、IL-17,可能与其在血液和淋巴液中发挥不同的免疫作用有关.
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慢性阻塞性肺病大鼠肺功能降低与Th1/Th2极化、STAT4/6表达的关系
目的 研究慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠Th1/Th2极化、转录信号转导子及转录激活子(STAT)蛋白表达及与肺功能的关系.方法 将60只大鼠随机均分为空白组、假手术组、模型组.采用脂多糖(LPS)复制COPD大鼠模型,模型复制成功后28 d,检测大鼠肺功能变化,采用HE染色观察大鼠肺组织形态学变化,ELISA检测血清IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-13变化,采用PCR法检测大鼠肺组织IFN-γmRNA、IL-4 mRNA的表达、Western blot法检测大鼠肺组织STAT4、STAT6蛋白表达.结果 与空白组、假手术组比较,模型组大鼠肺组织炎性细胞浸润,血清IFN-γ、IL-12、Th1/Th2升高,肺功能和血清IL-4、IL-13降低；同时肺组织IFN-γmRNA和STAT4蛋白表达升高,IL-4 mRNA和STAT6蛋白降低(P＜0.05或P＜0.01).相关性分析显示,COPD大鼠肺功能参数分别与IFN-γ、Th1/Th2、STAT4蛋白呈负相关,与IL-4、IL-13、IL-4 mRNA、STAT6蛋白呈正相关(P＜0.01或P＜0.05).结论 COPD肺功能降低与气道炎症反应、Th1/Th2细胞失衡有关,STAT4、STAT6参与调控Th1/Th2细胞表达,共同导致COPD发生.
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热毒宁注射液抑制肺内鼠巨细胞病毒的复制增殖并下调IFN-γ及IL-6的表达
目的 观察热毒宁对鼠巨细胞病毒(MCMV)肺炎的抗病毒及免疫调节的作用.方法 建立鼠巨细胞病毒肺炎模型,BALB/c小鼠随机分5组,空白对照组、免疫低下对照组、巨细胞病毒肺炎模型组、热毒宁治疗组、更昔洛韦治疗组.采用HE染色法观察肺组织的病理学变化,实时定量PCR(qRT-PCR)检测肺组织的MCMV-DNA量,ELISA测定肺组织IFN-γ及IL-6的水平.结果 与MCMV肺炎模型组比较,热毒宁、更昔洛韦治疗组的肺损伤减轻；热毒宁、更昔洛韦治疗组的MCMV-DNA量较MCMV肺炎模型组明显下降,且更昔洛韦治疗组下降较明显,差异有统计学意义(P＜0.05)；较MCMV肺炎模型组,热毒宁治疗组的IFN-γ上升至1.4倍,IL-6下降了30.2％；更昔洛韦治疗组的IFN-γ上升至1.6倍,IL-6下降了47.6％；两治疗组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)；热毒宁治疗组的IFN-γ/IL-6较MCMV模型组增大,接近免疫低下对照组水平.结论 热毒宁可抑制肺内MCMV的复制增殖,抑制IFN-γ及IL-6的表达.
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Wnt3a过表达对小鼠胚胎肝干细胞凋亡的抑制作用
目的 研究Wnt3a对ELSC14.5小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响.方法 采用表达绿色荧光蛋白的腺病毒载体系统(Ad-GFP-Wnt3a)转入小鼠ELSC14.5细胞,以Ad-GFP组为空白对照组,Ad-wnt3a组为实验组.实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测Wnt3a及凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Mcl-1的mRNA和蛋白的表达；Hoechst33258染色法结合annexin-PE/7-ADD法检测细胞的凋亡情况.结果 qRT-PCR和Western blot结果显示,Wnt3a在ELSC14.5细胞中特异性表达,表明腺病毒系统Ad-Wnt3a能高效感染ELSC14.5细胞.与对照组相比,抗凋亡因子Bcl-2、mcl-1的mRNA和蛋白的表达显著升高(P＜0.05),而促凋亡因子Bax的mRNA和蛋白的表达显著降低(P＜0.05).Hoechst33258染色结合annexin-PE/7-ADD法结果显示,Wnt3a高表达的ELSC14.5细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染的细胞数量很少,细胞凋亡率降低.结论 Wnt3a通过上调Bcl-2家族中抗凋亡因子和下调促凋亡因子来抑制小鼠胚胎肝干细胞的凋亡,延长其生存.
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氧化型低密度脂蛋白对NF-κB信号通路的作用
目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC) P65、P50、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)表达的影响.方法 设立空白对照组(15、30、60、120) μg/mL ox-LDL分别刺激12、24、48 h的ox-LDL诱导组及NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氢基甲酸盐(PDTC)干预联合ox-LDL诱导组.提取核蛋白,Western blot法检测NF-κB信号通路P65和P50的蛋白表达；ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-6的浓度变化.结果 Western blot法结果显示ox-LDL诱导HUVEC后P65和P50随ox-LDL诱导时间延长及诱导浓度增加而表达增加,各诱导组之间均存在统计学差异(P＜0.05).而给予PDTC干预后,P65和P50蛋白表达较ox-LDL诱导组明显降低(P＜0.05).ELISA结果显示经ox-LDL诱导24h后,细胞上清液中的TNF-α和IL-6显著高于正常对照组,而用PDTC干预联合ox-LDL诱导后TNF-α和IL-6浓度明显降低.各组间比较有显著统计学差异(P＜0.05).结论 ox-LDL激活NF-κB信号通路存在时间和浓度效应关系,可增强TNF-α、IL-6表达.
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肝移植术后急性排斥患者外周血中T淋巴细胞上PD-1分子表达的特征及意义
目的 检测肝移植患者外周血中CD8+T细胞及CD4+T细胞程序性死亡分子1(PD-1)的表达,结合临床表现,探讨其与急性排斥反应的关系.方法 入组35例肝移植患者,其中发生急性排斥反应(急排组)15例,未发生急性排斥反应(稳定组)20例,19例健康者为对照组,应用流式细胞仪检测外周血中CD8+T细胞及CD4+T细胞上PD-1分子的表达,并分析其与肝功能指标之间的相关性.结果 稳定组中CD8+T细胞及CD4+T细胞PD-1分子表达水平都显著高于急排组(P＜0.01),而对照组与急排组之间无统计学差异.两种细胞上PD-1分子的表达水平与谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平呈明显的负相关关系.结论 CD8+T细胞及CD4+T细胞上PD-1分子的表达在保护移植肝及维持肝正常功能中发挥重要作用.
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慢性淋巴细胞白血病患者外周血调节性T细胞的百分率及与预后的关系
目的 探讨慢性淋巴细胞性白血病(CLL)患者外周血中调节性T细胞(Treg)表达及其与预后的相关性.方法 采用流式细胞术检测30例健康体检者和28例初诊的CLL患者治疗前后外周血的CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+ Treg数量,并对19例患者进行了治疗随访.结果 初诊CLL患者CD4+ CD25+ Treg高于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；初诊CLL患者CD4+CD25+Foxp3+Treg分别高于治疗后组和健康对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05),治疗后CD4+CD25+Foxp3+ Treg高于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).初诊CLL患者CD4+CD25+Foxp3+Treg与CD38表达率、β2微球蛋白表达量、Zeta相关蛋白70(ZAP-70)阳性表达、临床Binet分期和Rai分期均呈正相关.结论 CD4+CD25+Foxp3+Treg有可能作为评估CLL患者疾病进展、疗效及预后的指标之一.
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抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析
目的 在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析.方法 将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因,克隆到T载体上进行序列测定确证.然后分别构建含有嵌合轻、重链基因的表达载体pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H.构建完成的表达载体电转化CHO-S细胞,G418筛选获得稳定表达细胞株.扩大培养、收集上清用MabSelect Sure亲和层析填料纯化.纯化后的抗体进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠体内保护活性评价.结果 PCR鉴定及测序结果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L构建完成,序列正确；Dot blot结果表明获得表达量高的稳转株细胞；SDS-PAGE及Western blot法证明抗体纯化获得成功,ELISA结果表明该抗体具有结合与F1抗原的活性；小鼠体内攻击实验表明其保护活性与鼠mAb大致相同.结论 成功在CHO-S细胞中表达了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗体.
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空肠弯曲菌FlhF单克隆抗体的制备与鉴定
目的 原核表达空肠弯曲菌FlhF蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb).方法 扩增空肠弯曲菌flhF基因并将其插入到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,分别以亲和纯化柱纯化后的蛋白rHis-FlhF和rGST-FlhF为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选.采用间接ELISA测定mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性.结果 成功构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-flhF和pGEX-6p-1-flhF,并融合表达rHis-FlhF和rGST-FlhF蛋白.筛选获得2株稳定分泌抗FlhF的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2C12和7A9,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1×109和2 ×107,Western blot法分析表明2株mAb 均能与纯化蛋白rHis-FlhF有良好的反应性,Dot-ELISA试验表明2株mAb均能与空肠弯曲菌标准株发生特异性反应.结论 成功制备了具有较高特异性的空肠弯曲菌FlhF蛋白的mAb.
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辛酸-硫酸铵法纯化细胞培养上清中单克隆抗体的条件优化
常用的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)纯化方法有辛酸-硫酸铵沉淀法、离子交换色谱法、免疫亲和色谱法、蛋白A亲和层析法等,以此纯化小鼠IgG类或IgM类mAb[1-2].其中辛酸-硫酸铵沉淀法简单易行,无需复杂的仪器及设备,实验中所用试剂均为普通试剂,容易获得,比其他纯化方法更值得推广.本文探讨辛酸-硫酸铵法纯化细胞培养上清中IgG类型的mAb优化条件,目的在于更好的回收细胞培养上清中的mAb,减少mAb制备过程中的大量抗体丢失,为mAb的进一步开发利用提供实验条件.
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NLRP3炎性体与2型糖尿病研究进展
炎性体是由多种蛋白形成、能活化caspase-1的复合物,活化的caspase-1作用于IL-1β和IL-18前体分子并促进其分泌发挥生物学作用.NLRP3炎性体活化途径与2型糖尿病的发生发展过程中的代谢失衡、胰岛素抵抗性的产生和胰岛β细胞的功能紊乱密切相关,干预NLRP3炎性体的活化有望用于2型糖尿病的治疗.
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诱导性CD4+CD25+调节性T细胞的研究进展
诱导性CD4+CD25+调节性T细胞(iTreg)是调节性T细胞的一个重要亚群,在维持机体免疫稳态和免疫相关疾病的发生发展中起重要作用.本文综述了iTreg的分子标记、外周诱导、稳定性以及与疾病的关系等相关方面的研究进展.
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滤泡辅助性T细胞与肝脏疾病的研究进展
滤泡辅助性T细胞(Tfh)是近年来发现的调节体液免疫应答的新型CD4+T细胞亚群,Tfh被认为是辅助B细胞产生抗体的主要的辅助细胞.CD4+CXCR5+是Tfh的标志,Tfh与其他CD4+T亚群存在明显差别,包括转录因子(Bcl-6)、趋化因子受体(CXCR5)的高表达,迁移至淋巴滤泡并辅助B细胞产生抗体等.IL-21是Tfh分泌的辅助性细胞因子,通过与B细胞的IL-21R结合,使之分化为产生抗体的细胞.该类细胞的异常可能与肝脏疾病的发病机制有关.
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衣原体持续性感染的分子机制研究进展
衣原体是一种专性细胞内寄生菌,既可引起急性感染,也能导致某些慢性疾病,如盆腔炎、关节炎、动脉粥样硬化及哮喘等.衣原体的持续性感染是引起宿主慢性炎症反应并导致严重后遗症的重要原因,但其引起持续性感染的分子机制目前仍不完全清楚.本文综述了衣原体持续性感染形成的可能机制,为进一步了解衣原体的致病机制及其防治方面提供新的研究思路.
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非折叠蛋白反应在肿瘤免疫中的作用
非折叠蛋白反应(UPR)是细胞为克服内质网应激而引发的自身保护性反应,启动UPR主要依赖葡萄糖调节蛋白78和三个膜结合感受器分子.肿瘤细胞在生长、浸润和转移过程中经历的缺血、缺氧、营养剥夺等多种环境压力会对肿瘤细胞造成内质网应激,为克服内质网应激,肿瘤细胞会诱发UPR,通过内质网相关的降解、自噬等方式维持自身稳定并促进肿瘤的生存、进展和转移；同时,肿瘤细胞还可通过UPR适应并改变生存微环境,引发炎症并影响抗原提呈,从而抵抗机体免疫系统的攻击,促进肿瘤细胞的免疫逃逸.因此,UPR通路中的关键分子有望成为肿瘤免疫治疗的新靶点.
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人感染H7N9禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶的B细胞表位预测
目的 利用计算机软件预测人感染H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的B细胞表位.方法 以HA、NA的氨基酸序列为基础,用Protean、PORTER、MEGA等生物信息学软件综合预测HA、NA蛋白可能的B细胞表位,再结合吴玉章的平均抗原指数方案进一步筛选.结果 HA蛋白有可能的B细胞表位位于其N端的第53 ～ 57、179～183区段,HA蛋白的其它区段:62 ～66、98 ～ 101、164 ～166、315～320、424～ 426、443 ～ 445、493～ 496等也有可能存在B细胞表位.NA蛋白有可能的B细胞表位位于N端的第321～329、379～ 386区段,NA蛋白的其他区段:46 ～ 48、52～54、74～ 78、136～ 141、145～ 150、160 ～164、194～ 197、246 ～ 248、333～ 343、426～ 431等也有可能存在B细胞表位.结论 综合多种方案预测了H7N9病毒HA、NA蛋白的B细胞表位,为人感染H7N9禽流感病毒表位疫苗研究提供了实验基础.
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小鼠肾小球系膜细胞的分离、原代培养及鉴定
目的 建立小鼠系膜细胞(MC)的分离、培养及鉴定的方法.方法 采用分样筛法分离出肾小球、通过优生选择法进行系膜细胞原代培养.相差显微镜、HE染色、扫描电镜、透射电镜观察小鼠系膜细胞的结构,免疫荧光细胞化学技术鉴定原代系膜细胞,血管紧张素Ⅱ刺激MC观察生物学特性.CCK-8法确定细胞生长曲线.结果 原代培养的肾小球经20～30 d系膜细胞逐渐铺满皿底.传代后MC一般6～10h贴壁,第2～3天进入指数增殖期,第3～5天进入平台期.α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体免疫荧光染色阳性,nephrin抗体间接免疫荧光阴性.血管紧张素Ⅱ刺激15 min后,系膜细胞明显收缩.结论 成功建立了小鼠系膜细胞的分离、培养及鉴定的方法体系.
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嗜肺军团菌重组MOMP蛋白间接ELISA方法的建立及其在血清学诊断中的应用
目的 表达及纯化出嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)作为诊断抗原,研究其在嗜肺军团菌感染血清学诊断中的实用价值.方法 将已成功构建的重组质粒pET-momp转化到大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞中,诱导重组MOMP表达,运用SDS-PAGE和亲和层析法纯化.用DRG军团菌IgG、IgM、IgA的ELISA试剂盒筛选出58份阳性血清和32份阴性血清,用纯化的MOMP蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA,同时与R&D公司军团菌的IgG、IgM、IgA ELISA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后用受试者工作特征(ROC)曲线对这2种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及检测结果的一致性,来评价重组MOMP间接ELISA的应用价值.结果 成功诱导表达并纯化出相对分子质量(Mr)大约为45 000的重组MOMP蛋白.重组MOMP建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与R&D公司的ELISA试剂盒进行比较,IgG抗体灵敏度90.9％,特异度91.7％,一致性Kappa值0.784(P ＜0.05),ROC曲线下的面积0.913; IgM抗体灵敏度91.4％,特异度90.6％,一致性Kappa值0.809(P ＜0.05),ROC曲线下的面积为0.910; IgA抗体灵敏度92.1％,特异度88.9％,一致性Kappa值0.793(P ＜0.05),ROC曲线下的面积0.905.结论 成功诱导表达及纯化出重组MOMP蛋白,将其作为诊断抗原所建立的间接ELISA表现出了较好的特异性,灵敏度和一致性,为军团病的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
