细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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LC3-LpqH自噬靶向性抗结核DNA疫苗的制备
目的 制备结核杆菌脂蛋白抗原前体LpqH基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的抗结核DNA疫苗,探究其诱导与靶向自噬的效应.方法 构建pCMV-LpqH与pCMV-LC3-LpqH重组质粒并转染RAW264.7细胞,免疫印迹法检测LC-3与LC3-LpqH的表达.转染pCMV-LpqH或pCMV-LC3-LpqH至GFP-LC3-RAW264.7细胞,免疫荧光法观察LC3-LpqH蛋白的定位.结果 细胞转染pCMV-LpqH后LC-3表达水平增高.pCMV-LC3-LpqH在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性,并且LC3-LpqH与GFP-LC3体外表达后共定位于自噬体上.结论 pCMV-LC3-LpqH的表达能够增强自噬,并将LpqH抗原靶向定位于自噬体,为设计新型抗结核疫苗提供了新思路.
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联合抑制PI3K和MEK的活性可协同抑制顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖
目的 研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002联合丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)特异性抑制剂AZD6244对顺铂耐药卵巢癌细胞株(SKOV3/DDP)增殖的影响.方法 (5、10、20、40、80) μmoL/L LY294002、(1、2、4、8、16)μmol/L AZD6244单独及联合作用于SKOV3/DDP细胞,MTT法检测对细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC50)及合用指数(CI);根据结果确定联合用药的浓度,将实验分为对照组、LY294002组(5μmol/L)、AZD6244组(7μmol/L)及联合组(LY294002 5 μmoL/L+ AZD6244 7 μmol/L);作用48 h后,采用MTT法确定细胞生长曲线,计算细胞倍增时间;平板克隆检测集落形成能力;annexinV-PE/7-ADD染色结合流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,并测定细胞周期;Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2 (p-ERK1/2)、AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及激活型caspase-3蛋白的水平.结果 LY294002及AZD6244均可抑制SKOV3/DDP细胞增殖,两药联合作用IC50明显降低,此时CI＜1,具有协同作用;联合组细胞的生长速度较单独作用组及对照组慢;倍增时间延长;集落形成数减少(P＜0.01);FCM显示联合组凋亡率增高,阻滞于G1期的细胞增多,S期明显减少(P＜0.05);Western blot结果显示,AKT、ERK1/2蛋白表达水平在各组间无明显差异(P＞ 0.05);LY294002组p-AKT水平降低,p-ERK水平增高;AZD6244组p-ERK水平降低,p-AKT水平增高;联合组p-AKT、p-ERK水平均降低,cyclin D1表达较其余各组低,激活型caspase-3较其余各组高.结论 PDK抑制剂LY294002联合MEK抑制剂AZD6244通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期进展协同抑制SKOV3/DDP细胞生长.
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人参皂苷单体Rh2抑制人白血病KG1-α细胞增殖并促进其凋亡
目的 研究人参皂苷单体Rh2对人白血病细胞KG1-α增殖、凋亡的影响.方法 取对数生长期的KG1-α细胞,分别用不同浓度的人参皂苷单体Rb1、Rg1、Rh2诱导,另设空白对照组,阳性对照用阿糖胞苷.运用CCK-8法检测各单体对细胞增殖的影响,筛选出强作用单体.用筛选出的皂苷单体诱导KG1-α细胞,用annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测人参皂苷单体对细胞凋亡的影响,PI染色流式细胞术检测对细胞周期的影响,Western blot法检测人参皂苷单体处理的KG1-α细胞中P53、P21、cylin D1、cleaved caspase-3的表达.结果 CCK-8实验结果显示人参皂苷Rh2、Rb1、Rg1、阿糖胞苷的IC50分别为(75、207、268、1058) μmol/L;与对照组相比,经人参皂苷Rh2诱导24、48 h后,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术结果表明凋亡率由(5.37±0.02)％,分别增加至(8.37 ±0.015)％、(33.22±1.67)％(P＜0.05);同样处理,细胞周期检测结果显示:G0/G1期由(26.78 ±3.14)％,分别上升至(29.26±2.31)％、(44.77 ±2.26)％;S期由(65.43 ±2.22)％,分别下调至(51.46 ±0.57)％、(48.29±1.80)％;Western blot结果显示,cleaved-caspase 3、P53和P21在75 μmol/L Rh2处理后表达上调,而cyclin D1表达下调.结论 人参皂苷Rh2可抑制KG1-α细胞的增殖,促进细胞凋亡.
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腹腔注射胶原蛋白肽增强糖皮质激素免疫抑制模型小鼠的免疫功能
目的 观察腹腔注射胶原蛋白肽对糖皮质激素诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用.方法 采用糖皮质激素诱导的免疫抑制小鼠模型,连续7d腹腔注射给予100、300、600 mg胶原蛋白肽/kg体质量.分别测量小鼠体质量、胸腺和脾脏质量,计算胸腺和脾脏指数;采用全自动血球计数仪检测外周血白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞数、中性粒细胞和淋巴细胞百分比,采用流式细胞术检测CD4 +/CD8+比值;采用MTT法检测刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾脏T淋巴细胞增殖能力.结果 与对照组相比,模型组小鼠中性粒细胞数及其百分比显著升高(P＜0.05),体质量、胸腺指数、脾脏指数、淋巴细胞数及其百分比、CD4 +/CD8+比值、脾脏T淋巴细胞增殖能力显著降低(P＜0.05);腹腔注射胶原蛋白肽后,这些指标均向对照组水平恢复,并呈剂量依赖性关系;其中剂量高600 mg/kg组的小鼠体质量、脾脏指数、淋巴细胞百分比、CD4 +/CD8+比值显著高于模型组,中性粒细胞百分比显著低于模型组(P＜0.05),与对照组相比无显著差异.结论 腹腔注射胶原蛋白肽能够增强小鼠的免疫功能.
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醛糖还原酶通过cAMP反应元件结合蛋白通路调控小胶质细胞向M2型极化
目的 探讨醛糖还原酶(AR)调控小胶质细胞极化的机制.方法 体外培养BV2小胶质细胞,给予醛糖还原酶抑制剂(ARI),通过免疫组织化学染色和酶标仪检测荧光强度的方法检测细胞4-羟基反式-2-壬烯酸(HNE)表达;体外培养N9小胶质细胞,分别用脂多糖(LPS)、HNE、醛糖还原酶抑制剂fidarestat (ARI)及其组合刺激后,利用Western blot法检测在不同刺激条件下N9细胞调控细胞极化和极化相关蛋白的变化;在上述刺激的条件下,联合应用cAMP反应元件结合蛋白(CREB)抑制剂KG-501,利用Western blot法检测极化相关蛋白的变化.结果 阻断AR后使HNE在BV2细胞内堆积;Western blot法检测发现ARI通过增加磷酸化CREB的表达来调控N9细胞向M2型极化;应用CREB抑制剂后,能阻断上述过程.结论 阻断AR可以使CREB的表达上调进而促进小胶质细胞向M2型极化.
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白细胞介素-17A对病毒性心肌炎小鼠抗心肌抗体水平的影响
目的 观察IL-17A对病毒性心肌炎(VMC)小鼠血清抗心肌抗体水平的影响.方法 雄性野生型(WT)和IL-17A基因敲除型(IL-17A-/-)BALB/c小鼠,腹腔注射柯萨奇病毒B3(Cvm)建立病毒性心肌炎模型(VMC-WT组和VMC-IL-17A-/-组),同时选取野生型BALB/c小鼠腹腔注射PBS作为正常对照组(WT组).14 d后取心肌组织作石蜡切片,行HE染色观察病理改变,ELISA测定血清中抗心肌线粒体内膜ADP/ATP载体(ANT)抗体、抗β-肌球蛋白重链(β-MHC)抗体、抗心肌L型钙通道(CACH2)抗体水平.结果 与WT组比较,VMC-WT组小鼠抗ANT抗体、抗β-MHC抗体水平升高明显,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),抗CACH2抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05);与VMC-WT组比较,VMC-IL-17A-/-组小鼠抗ANT抗体水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05),抗β-MHC抗体、抗CACH2抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-17A参与VMC小鼠血清抗ANT抗体的产生,对抗β-MHC抗体、抗CACH2抗体水平无显著影响.
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下调CD59的表达可以抑制HeLa细胞增殖并促进其凋亡
目的 采用RNA干扰与噬菌体肽库展示技术2种方法干预宫颈癌HeLa细胞CD59的表达,以探讨比较2种CD59低表达方式对HeLa细胞增殖与凋亡的影响.方法 将10 ug/mL的CD59短肽封条作用于HeLa细胞8h后,联合CD59干扰质粒pSUPER-siCD59稳定转染HeLa细胞系,采用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用TUNEL染色、annexin V-PE/7-AAD染色结合流式细胞术检测细胞凋亡.结果 CD59短肽封条组与pSUPER-siCD59质粒稳定转染细胞组HeLa细胞增殖明显弱于对照组,TUNEL及流式细胞术检测结果显示2组处理细胞均存在细胞凋亡现象,且短肽封条的效果要好于pSUPER-siCD59质粒.结论 下调CD59表达能抑制其细胞增殖并促进其凋亡,且短肽封条效果要优于CD59 RNA干扰质粒.
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人IFN-β基因启动子荧光表达载体的构建及鉴定
目的 构建人IFN-β基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-IFNB1)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体(pGE3-IFNB1),并在A549细胞中进行表达验证.方法 采用PCR方法扩增出IFN-β启动子区片段,克隆入荧光表达载体pGL3 basic和pGE3 basic,并用脂质体瞬时转染A549细胞,6h后用汉滩病毒(HTNV)感染转染后的细胞,24h后检测重组载体在细胞内的表达情况.结果 重组载体pGL3-IFNB1和pGE3-IFNB1分别经双酶切鉴定及序列测定证实载体构建正确;且在A549细胞内成功表达.经HTNV刺激后表达明显增加.结论 成功构建了人IFN-β启动子荧光素酶报告基因载体(pGL3-IFNB1)及增强型绿色荧光蛋白表达载体(pGE3-IFNB1),为进一步研究病毒诱导产生IFN-β机制提供了有用的工具.
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热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白(CHIP)对HER2的降解作用
热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白(carboxylterminus of the Hsp70 interacting protein,CHIP)是Ballinger等[1]发现的同时具有辅助伴侣分子和E3泛素连接酶活性的特殊蛋白分子.作为辅助伴侣分子,它与Hsp90和Hsc/Hsp70相互作用,调节Hsp介导的蛋白质的异常折叠;而作为E3泛素连接酶,通过泛素化-蛋白酶体途径参与许多疾病相关蛋白的降解过程[2-6].FLAG是广泛应用于细胞生物学和蛋白质工程中的标签,易于检测.为此,本实验拟构建CHIP基因的真核表达载体FLAG-CHIP,将其转染SKBR3细胞,并证明表达的CHIP蛋白具有降解人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)蛋白的功能[7-8],为后续深入研究CHIP的生物学功能奠定基础.
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结核分枝杆菌Zmp1基因原核表达载体的构建及表达鉴定
目的 构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法 以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-Zmp1;转化入大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Westernblot法鉴定.结果 PCR法扩增出Zmp1基因;重组表达质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确;表达的重组Zmp1融合蛋白相对分子质量(Mr)约为94 000,大小与预期融合蛋白一致;重组Zmp1融合蛋白可与His标签单克隆抗体特异性结合.结论 成功构建了Zmp1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中获得重组Zmp1融合蛋白表达.
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含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达
目的 构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达.方法 以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒.将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度.表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达.结果 重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100％.表达病毒滴度达106 TU/mL,可诱导病毒滴度达105 TU/mL,感染性良好.HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关.结论 成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达.
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空肠弯曲菌PEB1 DNA和PEB1蛋白联合免疫小鼠的效果评价
目的 初步检测抗空肠弯曲菌感染外膜黏附蛋白(PEB1)核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫诱导小鼠免疫应答水平.方法 通过灌胃免疫的方法,将制备的核酸疫苗pcDNA3.1(-)-PEB1及蛋白疫苗PEB1采用核酸初次免疫-蛋白加强免疫及分别单独免疫的方法免疫雌性BALB/c小鼠,以PBS及空质粒pcDNA3.1(-)对照,检测各组小鼠体液免疫应答及细胞免疫应答水平.末次免疫后第28天,对各组小鼠灌胃攻击空肠弯曲菌,评价疫苗保护率.结果 免疫后第56天,核酸蛋白联合免疫组小鼠脾淋巴细胞刺激指数(SI)为2.625±0.275,脾细胞培养上清中IFN-γ含量为(258.92±13.472) pg/mL.血清IgG抗体滴度为(2.507±0.124) μg/mL,胃和小肠黏膜冲洗液sIgA抗体滴度为(80.351±5.769)ng/mL,脾细胞培养上清中IL-4(377.47±14.560) pg/mL水平均明显高于各对照组(P＜0.05).小鼠攻击试验显示:核酸蛋白免疫组的疫苗保护率为91.53％.结论 PEB1核酸蛋白联合免疫组诱导的免疫应答水平和疫苗保护率高于单独核酸疫苗免疫组和单独蛋白疫苗免疫组.
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miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖
目的 研究miR-497在宫颈癌HeLa细胞中对细胞周期蛋白E1 (CCNE1)的靶向作用及其对HeLa细胞增殖的影响.方法 构建pre-miR-497、CCNE1野生型(WT-CCNE1)和突变型(MT-CCNE1)真核表达载体,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)验证pre-miR-497载体的有效性,采用MTT法检测miR-497对HeLa细胞增殖的影响,采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR和Western blot法验证miR-497对CCNE1的靶向关系.结果 测序结果提示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-497、pmirGLO-CCNE1野生型和突变型表达载体构建成功,qRT-PCR证明转染pre-miR-497的HeLa细胞miR-497的表达显著升高.MTT法结果显示转染pre-miR-497的HeLs细胞增殖活性显著低于阴性对照miR组(P＜0.05).此外,双萤光素酶法检测共转染pre-miR-497和WT-CCNE1的HeLa细胞,其萤光素酶活性显著低于对照组(P＜0.01),qRT-PCR及Western blot法也分别证实转染pre-miR-497的HeLa细胞其CCNE1的mRNA和蛋白水平显著下调(P＜0.05).结论 miR-497能够通过靶向CCNE1调控宫颈癌HeLa细胞的增殖活性.
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氧气葡萄糖剥夺诱导原代培养的星形胶质细胞释放谷氨酸
目的 观察氧气葡萄糖剥夺(OGD)对原代培养的星形胶质细胞谷氨酸释放的影响,并探讨其释放机制.方法 原代培养SD大鼠海马区星形胶质细胞,将其分为OGD组和对照组.OGD组的细胞置于不含糖和氧的培养基,37℃,950 mL/L N2和50 mL/L CO2,饱和湿度的培养环境下培养,而对照组细胞则正常培养.缺糖缺氧刺激时长分别为0、15、30、60、90、120 min,采用高效液相色谱,测定细胞外液的谷氨酸浓度.分别选用连接子蛋白43(Cx43)特异性反义寡核苷酸(Cx43-ASODN)和Cx43半通道的阻断剂Gap26预处理星形胶质细胞,采用高效液相色谱,测定细胞外液谷氨酸浓度,观察OGD对其谷氨酸释放的影响.结果 与对照组相比较,OGD刺激后,细胞外液谷氨酸浓度升高,并在刺激90 min后,达到峰值,为(5.00±0.30) nmol/mL,显著高于对照组的(2.36±0.15)nmol/mL(P ＜0.05);而OGD条件下,Cx43-ASODN或Cx43半通道阻断剂均可抑制细胞外液谷氨酸浓度的升高,刺激90 min后,细胞外液谷氨酸浓度分别为(4.02±0.18) nmol/mL和(3.93±0.32) nmol/mL,显著低于单纯OGD刺激组(P＜0.05).结论 OGD可以诱导星形胶质细胞通过Cx43半通道释放谷氨酸.
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雷公藤内酯醇调控miR-155抑制类风湿性关节炎患者单核细胞促炎反应
目的 探讨雷公藤内酯醇(TPT)能否通过调控miR-155抑制脂多糖(LPS)刺激的类风湿性关节炎(RA)患者单核细胞炎症反应.方法 分离RA患者外周血单个核细胞(PBMC),CD14+磁珠分选单核细胞,LPS刺激24h后用于实验.ELISA检测不同浓度TPT作用下,单核细胞TNF-α和IL-6的表达;实时定量PCR(qRT-PCR)检测TPT干预前后单核细胞miR-155的表达;LipofectamineTM 2000脂质体分别转染miR-155 mimic和对照24h,TPT再干预24h,通过ELISA检测单核细胞TNF-α和IL-6表达,Western blot法检测单核细胞细胞因子信号抑制蛋白1(SOCS1)、含SH2肌醇磷酸酯酶1(SHIP-1)的表达.结果 TPT抑制LPS刺激的RA患者外周血单核细胞促炎细胞因子和miR-155的表达.过表达miR-155明显逆转TPT抑制的单核细胞促炎细胞因子的表达.TPT上调RA患者单核细胞SOCS1和SHIP-1表达,但过表达miR-155能逆转上调的SHIP-1而不影响SOCS1的表达.结论 TPT抑制miR-155表达而释放其靶标SHIP-1,从而下调LPS诱导的RA患者单核细胞炎症反应.
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川崎病患儿血浆内皮微粒水平与冠状动脉病变的关系
川崎病(Kawasaki disease,KD)又称皮肤黏膜淋巴结综合征,是一种以全身血管炎为主要病理改变的急性发热出疹性疾病,发病机制尚不完全清楚.由于本病可引发严重的心血管病变,从而引起人们的重视.内皮微粒(endothelial microparticles,EMP)是内皮细胞在激活或凋亡状态下所释放的微小囊泡状物质.近年来实验证明EMP在炎症、免疫、凝血[1]及血管功能等方面[2]均有一定的影响,并与心血管疾病的发生密切相关[3-4],为研究EMP与川崎病发展及冠状动脉损害的关系,对41例川崎病患儿血浆内皮微粒进行了检测和分析.
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风湿病患者肺功能降低与BTLA阳性细胞及调节性T细胞的数量减少有关
目的 探讨B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)、调节性T细胞(Treg)与风湿病患者肺功能降低的关系.方法 选取482例风湿病患者,包括类风湿性关节炎(RA) 198例,强直性脊柱炎(AS) 114例、干燥综合征(SS) 102例、骨关节炎(OA)68例,应用肺功能仪检测患者肺功能水平,采用流式细胞术检测患者外周血B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)和调节性T细胞(Treg)表达.结果 与正常组比较,风湿病患者肺功能降低,外周血BTLA、Treg表达降低;与风湿病BTLA、Treg正常组比较,BTLA、Treg异常组肺功能参数第1秒用力呼气容积(FEV1)、大呼气流量(PEF)、50％肺活量位的大呼气流量(FEk)、FEF.降低(P＜0.05或P＜0.01);相关分析显示,肺功能参数用力肺活量(FVC)、大通气量(MVV)、FEV1、FEF.、FE0分别与BTLA、Treg呈正相关,FVC、FEV1、FE‰、FEF75分别与IgA、IgM呈负相关(P＜0.05或P＜0.01).结论 风湿病患者肺功能降低可能与BTLA、Treg表达降低,促使T细胞、B细胞过度异常活化有关.
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扩增阻滞突变系统用于ABO血型基因分型研究
目的 建立一种快速、低成本的ABO血型基因分型方法.方法 设计6对引物,建立扩增阻滞突变系统(ARMS),对30例中国汉族无关个体外周血样本的ABO基因型进行鉴定,并与血清学方法和直接测序结果进行比较.结果 ARMS技术检测30例样本结果同血清学方法、直接测序结果吻合率达到100％.结论 该研究建立的ABO血型基因型鉴定方法可快速检测出28种ABO基因型,具有一定的临床应用价值.
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三种癌细胞株中Bloom综合征解旋酶(BLM)的表达水平高于正常细胞
由于Bloom综合征解旋酶(Bloom's syndrome helicase,BLM)基因缺陷引起的Bloom综合征(Bloom's syndrome,BS)是一种罕见的常染色体隐性遗传病,BS患者的临床特征表现为严重的生长迟缓、学习障碍、免疫缺陷等[1-2].BLM解旋酶在睾丸和胸腺中高表达[3],另一方面,BLM基因的突变和高表达与肿瘤发生相关[4],如结肠癌、肺癌、白血病等.本研究观察了A549人肺癌细胞、SGC7901人胃癌细胞、PC3人前列腺癌细胞与HL-7702[L-02]人正常肝细胞中,BLM解旋酶在mRNA水平及蛋白水平表达量的差异,为寻找新的特异分子治疗靶点提供依据.
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慢病毒介导的H7N9禽流感病毒血凝素基因快速真核表达系统的建立
目的 利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定.方法 提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD18-T-HA重组载体.设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-HA质粒中扩增出平末端HA基因,采用Topo克隆构建表达载体pLenti-HA-V5.将表达载体转染HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)和Westernblot法鉴定HA蛋白的表达,通过血凝实验鉴定重组蛋白的生物学活性.结果 经反转录PCR获得1 683 bp的HA全长基因,完成真核表达载体的构建并表达出相对分子质量(Mr)为70 000的重组蛋白.IFA和Western blot法结果显示该蛋白与阳性血清具有良好的免疫反应,同时血凝实验证实其具有血凝活性.结论 成功利用慢病毒载体建立了HA蛋白的快速真核表达系统,为研制H7N9病毒亚单位疫苗、中和表位研究、假病毒包装奠定基础.
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恶性卵巢肿瘤患者外周血免疫细胞及其亚群的检测分析
目的 探讨卵巢癌患者外周血多种免疫细胞及其亚群与临床病理指标的相关性及意义.方法 采用流式细胞术(FCM)检测24例恶性卵巢肿瘤患者术前外周血和腹水中调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞(n1)、树突状细胞(DC)、自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞亚群,并与20例健康妇女进行比较,同时对其与各临床病理因素的相关性进行统计学分析.结果 与对照组相比,24例恶性卵巢肿瘤患者Treg水平升高,Th1细胞水平和CD8+T细胞表面的活化受体NKG2D均明显减少(P＜0.05)且升高程度与病理分级有关(P＜0.05).与健康对照组相比,患者外周血中总DC水平没有变化,但成熟DC下降,且与临床分期有关(P＜0.05),浆细胞样DC升高,与病理分级有关(P＜0.05).且与外周血相比,患者腹水中NK细胞的CD16+和CD8+T细胞的NKG2D受体水平均下降.结论 恶性卵巢肿瘤患者抗肿瘤免疫综合功能下降,外周血和腹水中肿瘤杀伤效应细胞T细胞和NK细胞的免疫功能都受到明显抑制,且DC的抗原提呈能力下降.
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疣鼻栖鸭恒定链(MDIi)多克隆抗体制备及鉴定
目的 制备抗疣鼻栖鸭恒定链(MDIi)多克隆抗体,鉴定其与组织抗原MDIi的反应性.方法 以PCR扩增获得MDIi序列构建原核表达载体pET-32a/MDIi,转化大肠杆菌进行表达;对表达产物鉴定后,免疫小鼠制备抗MDIi多克隆抗体;间接ELISA测定抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性,间接ELISA检测抗体与疣鼻栖鸭组织MDIi的反应强度.结果 成功构建了pET-32a/MDIi原核表达载体,诱导表达了相对分子质量(M)约40 000的包涵体形式的MDIi重组蛋白,免疫小鼠获得效价为1∶128 000的特异性多克隆抗体,抗体与疣鼻栖鸭组织中的MDIi反应滴度为1∶32 000.结论 成功制备了高效价的特异性抗MDIi多克隆抗体,抗体与组织抗原有较强的免疫反应性.
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11型HPV E7蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
目的 构建人11型乳头瘤病毒(HPV 11)E7蛋白的原核表达载体,表达纯化后制备抗HPV 11 E7蛋白的多克隆抗体.方法 构建pGEX-4T2-HPV11 E7原核表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大肠杆菌表达可溶性融合蛋白GST-HPV11 E7,纯化获取11型HPVE7蛋白.将HPV11 E7蛋白免疫新西兰大白兔获得抗HPV11E7的多克隆抗体,用蛋白G琼脂糖纯化获得IgG型多克隆抗体.Western blot法及免疫荧光染色检测该抗体的效价及特异性.结果 SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导6h后可表达出高水平可溶性GST-HPV11 E7融合蛋白.纯化后免疫新西兰大白兔获得抗HPV11 E7的血清,纯化获得了IgG型多克隆抗体.Western blot及免疫荧光染色结果显示,兔抗HPV11E7 IgG具有效价高和特异性强的特点.结论 成功表达了HPV11 E7蛋白并制备了效价较高、特异性较好的IgG型兔抗HPV11 E7蛋白多克隆抗体.
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分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用
目的 探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用.方法 构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28 a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定.结果 成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株.结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用.
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Th9细胞及其调节呼吸系统疾病的机制研究进展
T细胞是高度异质性的细胞群,CD4+T细胞功能亚群越分越细,以分泌IL-9为主的Th9细胞是一种独立的效应T细胞亚群,转化生长因子β(TGF-β)和IL-4能诱导Th0分化成Th9细胞,同时也可在TGF-β作用下由Th2细胞转化而来.IL-9不仅由Th9细胞分泌而来,Th2细胞、Th17细胞也可分泌;Th9细胞的特异转录因子以及其在疾病中的调控机制极其复杂,Th9细胞在呼吸系统疾病中发挥着重要的免疫调节作用.
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Th17细胞分化调节机制及与自身免疫性疾病关系研究进展
Th17细胞是CD4+辅助T细胞中的一个亚群,以表达特征性的IL-17而得名,在促炎症反应中发挥重要作用.Th17细胞的生物学功能和分化过程均有其特殊性,在慢性炎症、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病的发展中因为扮演着重要的角色,对Th17的进一步研究可以加深对相关疾病的认识并指导临床的治疗.对Th17细胞的表面标志物、分化成熟过程的信号通路以及其与自身免疫性疾病的关系研究取得了新的进展.本文对Th17细胞的生物学特性、分化、负性调节以及Th17细胞与自身免疫性疾病之间的关系进行综述.
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eya基因家族的生物学功能及其在固有免疫和肿瘤免疫中的研究进展
eya基因广泛存在于从果蝇到人类的多种生物中,属于视网膜决定基因网络成员.其表达的蛋白同时具有酪氨酸磷酸酶和苏氨酸磷酸酶活性,是一类重要的转录调控因子.EYA蛋白与细胞的极性形成有关,并且广泛参与到细胞的增殖、凋亡、迁移、DNA损伤修复以及组织血管生成、固有免疫反应和器官发育等一系列生理病理活动中,eya基因的突变与多种先天性疾病以及恶性肿瘤的发生密切相关.随着对该基因相关研究的进一步深入,抑制EYA酪氨酸磷酸酶活性有望成为治疗相关疾病的一个新的作用靶点.
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表观遗传学调控滤泡辅助性T细胞分化的研究进展
滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)定位于淋巴滤泡的辅助性T细胞亚群,主要功能为辅助B细胞参与体液免疫应答,对免疫球蛋白的产生有着重要作用.表观遗传学主要研究在基因的核苷酸序列不发生改变的情况下,基因表达的可遗传性变化,是免疫细胞的分化调控机制之一.研究发现Tfh细胞的分化具有可塑性,本文主要综述了表观遗传学调控在Tm细胞分化方面的研究进展.
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新型调节性T细胞CD4+LAP+Treg与疾病的研究进展
调节性T细胞(Treg)是体内存在的一类抑制免疫应答的T细胞亚群,分为天然调节性T细胞(CD4+CD25+Tmg)和诱导型调节性T细胞(iTreg),通过细胞-细胞互相接触、分泌细胞因子(IL-10、TGF-β1)等途径抑制B细胞、效应性T细胞的增殖、活化和免疫效应,在抑制自身免疫性疾病发展、移植耐受、肿瘤免疫逃逸等方面发挥重要作用.新的调节性T细胞亚群:CD4+ LAP+调节性T细胞(CD4+ LAP+ Treg),已经被证实在多种动物模型中发挥保护作用,可能是Treg发挥免疫抑制功能关键细胞之一,目前已引起国内外学者的关注.本文对CD4+LAP+Treg的发现及其与疾病关系的研究进展进行综述.
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PB-GF转座子系统的构建及其在真核细胞中转座的研究
目的 构建能在真核细胞中发生转座的PB-GF(piggyBac gene-finder)转座子系统,作为发现和研究编码基因的工具.方法 通过克隆技术,构建PB转座子载体pPB[CMV-neo]和PB转座酶表达载体pCAG-PBase,转染HeLa细胞,G418筛选和亚甲基蓝染色,验证PB转座酶在真核细胞中的转座能力.构建PB转座子载体pPB[β-Gal-pA/act-EGFP],使其包含两侧翼端加入PB转座酶识别位点反向末端重复序列(ITR),ITR1和ITR2,以及启动子陷阱和PolyA陷阱的DNA片段;同时与PB转座酶表达载体pCAG-PBase一起,构成PB-GF转座子系统.将PB-GF转座子系统转染HeLa细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测PolyA陷阱报告基因EGFP的表达;通过X-gal染色,观察启动子陷阱报告基因β-Gal的表达,明确PB-GF转座酶系统在真核细胞中的转座情况.结果 成功构建成以转座子PiggyBac为基础的,含有启动子和PolyA陷阱的PB-GF转座子系统,并用该系统转染HeLa细胞24h后观察到有相当数量的EGFP和LacZ阳性的细胞出现,转座效率高达26％.结论 成功构建PB-GF转座子系统并可以在真核细胞中发生转座.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
