细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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脂多糖和植物血凝素对小鼠外周血单个核细胞microRNA水平的影响
目的 研究脂多糖(LPS)和植物血凝素(PHA)两种淋巴细胞多克隆激活剂对小鼠外周血单个核细胞(PBMC)中microRNA (miRNA)水平的影响.方法 分别采用100 ng/mL LPS刺激培养1、2h的小鼠PBMC,2.5 μg/mL PHA刺激培养2、4h的小鼠PBMC.应用实时荧光定量PCR检测培养细胞和上清中miR-9、miR-122-3p、miR-181d及miR-342-3p的表达水平.结果 与相应空白对照组相比,LPS刺激1h或2h后,培养上清及PBMC中miR-9、miR-122-3p、miR-181d及miR-342-3p的表达水平未见明显改变.PHA刺激未改变培养上清和PBMC中miR-9、miR-122-3p及miR-342-3p的水平,但显著上调培养上清和PBMC中miR-181d的水平.PHA刺激4h组与PHA刺激2h组间,miR-181d表达水平未见明显差异.结论 PHA刺激可促进小鼠PBMC中miR-181d的表达与分泌.
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人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的原核表达和活性鉴定
目的 对入源中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)进行原核表达、纯化,并验证其免疫学活性.方法 通过化学合成法合成人源NGAL成熟肽cDNA序列,构建原核表达载体pCold-NGAL,转化至E.coli BL21(DE3) plysS中.摸索pCold-NGAL佳诱导条件,表达并纯化重组蛋白;使用SDS-PAGE、Western blot法和免疫比浊法鉴定纯化后的重组NGAL蛋白的相对分子质量(Mr)和以及与NGAL单克隆抗体(mAb)的结合活性.结果 经双酶切和测序验证,原核表达载体pCold-NGAL成功构建.优化诱导条件后,重组NGAL蛋白在E.coli BL21(DE3) plysS中以可溶性蛋白形式表达,Mr约为25 000.通过Ni2+亲和层析纯化获得高纯度重组NGAL蛋白,SDS-PAGE分析其纯度高于98.0％.经Western blot法和免疫比浊法鉴定,重组NGAL蛋白可与NGALmAb特异性结合.结论 成功表达和纯化了重组NGAL蛋白,并具有免疫学活性.
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TNFSF14高表达的Tca8113舌癌细胞增殖及迁移能力增强
目的 构建肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14)基因慢病毒载体,体外感染人舌癌Tca8113细胞,观察TNFSF14基因对Tca8113细胞的影响.方法 将TNFSF14基因进行慢病毒包装,感染舌癌Tca8113细胞,通过嘌呤霉素筛选后,实时定量PCR法检测TNFSF14在Tca8113中的表达,MTT检测感染TNFSF14基因后Tca8113细胞的增殖活性,流式细胞术分析细胞周期变化,TranswellTM迁移实验检测细胞迁移能力的变化.结果 慢病毒感染后,检测到细胞中TNFSF14 mRNA较对照组表达量升高,MTT法和流式细胞术结果显示TNFSF14可促进Tca8113细胞增殖,TranswellTM实验显示TNFSF14促进Tca8113细胞迁移.结论 高表达TNFSF14的Tca8113细胞增殖及迁移能力增强.
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米索前列醇预防非甾体抗炎药引起的小鼠肠黏膜损伤
目的 探讨米索前列醇对非甾体抗炎药(NSAID)肠黏膜损伤的预防性保护作用.方法 双氯芬酸钠灌胃建立NSAID肠黏膜损伤模型.雄性BABL/c小鼠60只随机分组,分别标记为:正常对照组、模型组、(200、400、800 μg/kg)米索前列醇组.连续6d灌胃处理.于第4天下午,除正常组外,其他用5 mg/kg双氯芬酸(10 mL/kg)灌胃处理.第7天对小鼠进行处理:采用FITC标记的葡聚糖检测肠黏膜通透性,分别取小肠组织标本进行HE染色,反转录PCR检测肠黏膜葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA的表达,Western blot法检测以上分子的蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组小肠黏膜损伤严重,黏膜通透性显著升高,小肠黏膜绒毛发生变性、坏死、脱落、炎细胞浸润.而不同浓度米索前列醇给药组的肠黏膜损伤有不同程度的减轻,通透性改善;小肠GRP78蛋白的表达及GRP78、TNF-α、CHOPmRNA的表达与模型组相比明显下调.结论 米索前列醇对NSAID肠病的预防有一定的作用.
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慢病毒介导的shRNA敲低FHL1的表达促进HeLa和HepG2细胞生长
目的 通过构建靶向四个半LIM结构域蛋白1(FiHL1)基因的慢病毒介导的短发夹RNA (shRNA),观察FHL1表达降低对HeLa细胞和HepG2细胞生长的影响.方法 构建FHL1基因的shRNA干扰病毒载体,将重组质粒转染人胚肾293T细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测转染pLenti-H1 FHL1 shRNA对FHL1表达的抑制效果.慢病毒感染官颈癌HeLa细胞和HepG2肝癌细胞,经2～3周嘌呤霉素筛选后得到FHL1稳定低表达的细胞,利用生长曲线实验和克隆形成实验检测FHL1基因表达降低后对细胞生长的影响,利用软琼脂实验检测对肿瘤细胞非锚定依赖性生长的影响.结果 qRT-PCR和Western blot结果显示,构建的shRNA病毒载体能够明显抑制FHL1的表达;生长曲线实验和克隆形成实验显示,慢病毒介导的FHL1 shRNA能够明显促进肿瘤细胞的生长;软琼脂实验结果表明,FHL1低表达能够促进肿瘤细胞的非锚定依赖性生长.结论 构建的pLenti-H1 FHL1 shRNA慢病毒载体可有效地抑制FHL1表达,明显促进HeLa细胞和HepG2细胞的增殖.
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肺炎支原体脂质相关膜蛋白促进树突状细胞成熟
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)是社区获得性肺炎主要的病原体[1].在儿童和青少年中,10％ ～ 30％的社区获得性肺炎是由Mp感染所致[2-3].Mp缺乏细胞壁,其所引起的一系列炎症反应很大程度上是其细胞膜上的脂蛋白,又称脂质相关膜蛋白(lipid-associated membrane proteins,LAMP)所致[1,4-5].研究已证实LAMP是Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)的配体(包括TLR2/1和TLR2/6).LAMP与单核巨噬细胞表面的TLR结合后,可通过髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)和肿瘤坏死因子受体相关因子6,激活核因子κB和激活蛋白1,诱导单核巨噬细胞合成分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)和IL-6等炎症细胞因子及产生活性氧和一氧化氮等[6-7],促进炎症反应.树突状细胞(dendritic cell,DC)表面可表达TLR[8],LAMP与DC表面的TLR结合后,对DC的功能有何影响?目前尚无相关的文献报道.本实验观察了Mp对DC吞噬功能及膜分子表达的影响.
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黄芪多糖联合顺铂处理降低Lewis肺癌移植瘤CD44表达并降低血清Ⅳ型胶原蛋白和透明质酸的水平
目的 观察黄芪多糖(APS)联合顺铂(cisplatin)对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、血清Ⅳ型胶原蛋白(Col4)和透明质酸(HA)含量及移植瘤细胞CD44表达的影响.方法 90只C57BL/6 J小鼠,设空白对照组10只,其余80只依次造模为荷瘤小鼠,并随机分为8组:模型组(等体积生理盐水)、顺铂阳性对照组(6 mg/kg顺铂)、(50、100、200) mg/kg APS组,联合用药组(顺铂剂量减半,APS各剂量同上).于造模次日起各组分别腹腔注射等体积的药物0.3 mL.顺铂每周1次,其余药物每天1次,连续20d.于第21天眼球取血,采用放免法测定血清Col4、HA的含量,采用免疫组织化学染色和图像分析方法检测移植瘤细胞中CD44的表达,并计算各组抑瘤率.结果 顺铂组、(50、100、200) mg/kg APS组及联合用药组,小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑瘤率分别为49.30％、17.21％、39.68％、42.98％、51.02％、57.21％、65.11％.各治疗组均可降低小鼠血清中Col4和HA含量,抑制移植瘤细胞CD44的表达.结论 APS能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的生长,降低移植瘤细胞CD44的表达,减少血清中Col4和HA含量;与顺铂减半剂量联合使用后作用增强,说明APS对顺铂有一定的增效减毒功能.
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感染猪布鲁菌S2株死亡的巨噬细胞碎片启动抗布鲁菌感染的免疫应答
目的 研究猪布鲁菌S2株感染后死亡的巨噬细胞在启动抗布鲁菌感染免疫应答中的作用.方法 以猪布鲁菌S2株体外感染小鼠腹腔巨噬细胞,感染1h后,饥饿培养5d致细胞死亡;细胞碎片与骨髓源性树突状细胞(DC)共培养24、48、72 h,ELISA检测细胞上清中白细胞介素12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α);以S2株体外感染羧基荧光黄二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记的小鼠巨噬细胞,饥饿避光培养,将细胞碎片与藻红蛋白标记的DC避光共培养1h后,激光共聚焦显微镜检测DC摄取巨噬细胞碎片情况;以S2株感染后死亡的巨噬细胞碎片接种于BALB/c小鼠腹腔,1周后加强免疫1次;加强免疫3d后,ELISA检测血清中IL-4、IL-2和γ干扰素(IFN-γ)水平.结果 负载S2株感染后死亡巨噬细胞碎片的DC TNF-α的分泌水平明显高于未感染组,但不分泌IL-12;且S2株感染后死亡的巨噬细胞能被DC摄取到细胞内;接种S2株感染后死亡的巨噬细胞的小鼠血清中IL-2、IL-4和IFN-γ水平明显高于对照组.结论 感染猪布鲁菌S2株死亡的巨噬细胞可激活DC、使其提呈抗原、并诱导机体产生抗感染免疫.
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肿瘤坏死因子α增强全反式维甲酸诱导早幼粒白血病细胞的凋亡
目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对全反式维甲酸(ATRA)诱导人早幼粒白血病细胞凋亡的影响.方法 分别单独使用ATRA或者联合使用ATRA与TNF-α作用于NB4人急性早幼粒白血病细胞,细胞计数检测细胞增殖,annexin V-FTTC/PI染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞表面CD11b表达的变化.结果 与单独使用ATRA相比,联合使用ATRA和TNF-α时,NB4细胞在整个分化过程中增殖速度更慢、凋亡率更高,在分化第2天CD11b阳性细胞的比例更高.结论 TNF-α可能具有增强ATRA诱导早幼粒白血病细胞分化及凋亡的作用.
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过表达转录因子21抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖和迁移并促进其凋亡
目的 探讨转录因子21(TCF21)基因对SMMC-7721肝癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及机制.方法 采用脂质体将pcDNA3.1(+)TCF21及pcDNA3.1(+)质粒稳定转染入SMMC-7721细胞,分别为TCF21过表达组、空载体组、未处理组.采用反转录PCR检测转染前后TCF21 mRNA水平、Western blot法检测TCF21蛋白水平;MTT法检测细胞的增殖能力,划痕实验检测转染后细胞的迁移能力;异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FTTC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测转染后KISS1、P53和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白水平.结果 TCF21基因转染SMMC-7721细胞后,细胞内TCF21 mRNA和蛋白水平均明显增加.与对照细胞相比,过表达TCF21的肝癌细胞增殖能力减弱、癌细胞迁移能力降低、细胞凋亡增加.Western blot结果显示上调TCF21表达,可增加KISS1、P53水平并降低MMP-9的水平.结论 过表达TCF21可抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖、迁移并促进其凋亡.
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白藜芦醇抑制结肠癌干细胞增殖并增强MICA/B的表达
目的 研究白藜芦醇(Res)对结肠癌干细胞(CCSC)增殖、凋亡和免疫原性的影响.方法 采用无血清培养法由HCT116结肠癌细胞诱导培养CCSC,通过检测CCSC标志物CD133、CD44进行鉴定.MTT法检测Res对CCSC增殖的影响;annexin V-FTTC/PI双染色结合流式细胞术检测Res对CCSC凋亡的影响;流式细胞术检测Res对CCSC生长周期及主要组织相容性复合体Ⅰ类分子相关链A/B(MICA/B)表达的影响.结果 HCT116细胞在无血清培养下成球生长.球形细胞中CD133+细胞占91.07％±1.79％,CD44+细胞占90.33％±1.78％.与对照组相比,Res能明显抑制CCSC增殖,并且呈时间、剂量依赖性;Res作用48 h后,CCSC细胞周期G0/G1期比例显著升高,S期下降,呈剂量依赖性;随着药物浓度增加,CCSC的凋亡率增加,MICA/B的表达增强.结论 从HCT116结肠癌细胞成功诱导培养出CCSC,Res能剂量依赖性地抑制CCSC的增殖,与阻滞细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡有关;Res能增强CCSC中MICA/B的表达,增强其免疫原性.
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益气养阴方对肺间质纤维化大鼠肺组织TNF-α、TGF-β1和IFN-γ mRNA水平的影响
目的 观察益气养阴方对大鼠肺间质纤维化模型肺组织形态结构及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β1)、γ干扰素(IFN-γ) mRNA水平的影响.方法 通过气管内滴注博莱霉素建立大鼠肺间质纤维化模型后,随机分为正常组、模型组、中药组、醋酸泼尼松(激素)组、中药联合激素组.造模后第28天,开始灌胃给药,持续给药28 d后处死.分离出大鼠肺组织,行HE染色和Masson染色以观察形态学改变,原位杂交法检测肺组织中TNF-α、TGF-β1、IFN-γ的mRNA表达.结果 模型组TNF-α mRNA、TGF-β1 mRNA阳性细胞率较其他4组明显升高,IFN-γ mRNA阳性细胞率较其他4组降低;中药组与激素组、中药联合激素组相比,TNF-α mRNA阳性细胞率降低,IFN-γ mRNA阳性细胞率略高;中药组TGF-β1 mRNA阳性细胞率略低于激素组.结论 益气养阴方降低肺间质纤维化模型大鼠肺组织中TNF-α、TGF-β1的mRNA表达及增加肺组织内IFN-γmRNA的表达.
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上调miR-21表达促进肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成
目的 探讨miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中的表达及其在肺成纤维细胞增殖、转分化、胶原蛋白合成中的作用.方法 将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=5)和模型组(n=25).经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型,分别于第3、7、14、28、56天随机处死5只小鼠,而对照组于第56天全部处死作为总体对照,采用荧光实时定量PCR测定肺组织中miR-21表达.另外,NIH3T3肺成纤维细胞分别予LipofectamineTM 2000转染试剂(空白对照组)以及miR-21阴性对照物、模拟物、抑制物处理,通过MTT法检测细胞增殖能力,应用荧光实时定量PCR和Western blot法分别检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、含1型血小板结合蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶1(ADAMTS-1)、1型胶原蛋白(Col1)、3型胶原蛋白(Col3)mRNA与蛋白表达情况.结果 模型组第7～56天,肺组织中miR-21表达水平明显高于对照组,第28天达到高峰.在共同培养24、48、72、96 h后,miR-21模拟物组细胞活力较空白对照组增加,而miR-21抑制物组细胞活力较空白对照组降低.与空白对照组比较,miR-21模拟物组α-SMA、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平升高,ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平减少;然而miR-21抑制物组α-SMA、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平下降,ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平上升.阴性对照组上述指标与空白对照组比较,无显著性差异.结论 miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中表达上调,miR-21高表达可促进肺成纤维细胞增殖、转分化以及胶原蛋白的合成.
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过表达CC趋化因子受体7的C3H10 T1/2细胞具有更强的免疫抑制效应
目的 研究过表达CC趋化因子受体7(CCR7)的C3H10 T1/2小鼠间充质干细胞系在小鼠皮肤移植模型中,是否具有比原始C3H10 T1/2细胞更强的免疫抑制作用.方法 培养扩增稳定的小鼠C3H10 T1/2细胞,并利用慢病毒工具导入EGFP-CCR7基因;以C57BL/6小鼠为供体获取皮片,以BALB/c小鼠为受体建立小鼠同种异系皮肤移植模型;实验动物分4组:CCR7+ C3H10 T1/2细胞组、C3H10 T1/2组、同种异系对照组和同系对照组(受者小鼠移植同系小鼠皮片),分别于移植模型成功当天,经尾静脉注射1×106 C3H10 T1/2细胞、1×106 CCR7+ C3H10 T1/2细胞、等体积生理盐水(对照组);观察皮片移植后的存活情况,并于皮片移植第12天,测定小鼠脾淋巴细胞中Th17细胞与调节性T细胞(Treg)的比例,HE染色观察皮片病理变化.结果 受者小鼠皮片移植后12 d,外观、组织病理形态观察以及流式细胞术检测结果表明,CCR7+ C3H10 T1/2细胞与C3H10 T1/2细胞的皮片存活情况均优于同种异系对照组;CCR7+ C3H10 T1/2细胞皮片移植后存活情况优于C3H10 T1/2细胞组,且移植免疫反应程度轻于C3H10 T1/2细胞组.结论 CCR7+ C3H10 T1/2细胞相对于正常的C3H10 T1/2细胞,拥有更好的免疫抑制效应,可有效的降低移植免疫炎性反应,改善移植物的生存状态.
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羟基红花黄色素A通过抑制动脉内皮细胞中TNFR1/NF-κB信号通路而发挥抗炎作用
目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠动脉血管内皮细胞肿瘤坏死因子α受体1/核因子κB (TNFR1/NF-κB)信号通路的作用.方法 以(1.2、12、120)μmol/L HSYA预处理体外培养的小鼠动脉血管内皮细胞,之后以肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导细胞,采用Western blot法检测HSYA对TNFR1介导NF-κB信号通路相关蛋白核因子κB抑制蛋白α(IκBα)表达的影响;采用实时定量PCR检测HSYA对TNF-α诱导的NF-κB下游分子细胞间黏附分子1(ICAM-1)和E选择素(E-selectin)mRNA表达的抑制作用;采用流式细胞术检测细胞膜TNFR1表达量的变化;利用TNF-α转化酶(TACE)抑制剂TAPI-0检测TACE是否参与HSYA对TNFR1介导信号的抑制作用.结果 HSYA可呈剂量依赖性抑制TNFR1介导的NF-κB上游分子IκBα蛋白降解;HSYA可显著抑制NF-κB下游分子ICAM-1和E-selectin的mRNA表达;HSYA可显著减少细胞膜TNFR1蛋白含量;TAPI-0可抑制HSYA对TNFR1信号的调控作用.结论 HSYA可抑制血管内皮细胞中TNFR1/NF-κB信号通路而发挥抗炎作用,TACE参与介导HSYA的抗炎作用.
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Sonic hedgehog信号通路相关分子表达上调对脂多糖致小鼠急性肺损伤的保护作用
目的 探讨Sonic hedgehog(SHH)信号通路在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)中的表达变化及意义.方法 实验动物随机分为对照组、5 mg/kg LPS处理组、50 mg/kg环巴胺处理组.HE染色观察肺组织病理改变,测定肺湿干质量比值(W/D),反转录PCR检测肺组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)及SHH、Patched(PTC)及下游转录因子GLI1的mRNA表达,Western blot法检测肺组织SHH和GLI1的蛋白表达.结果 LPS处理组肺组织病理损伤评分、W/D、TNF-α mRNA表达水平明显高于对照组.LPS处理组SHH、PTC、GLI1的mRNA表达水平,在6h与对照组相比,无明显差异,LPS处理12、24 h时表达水平明显高于对照组,与时间呈正相关.与对照组相比,LPS处理组6、12、24 h的SHH、GLI1蛋白表达水平均明显升高,且与时间呈正相关.环巴胺处理后,SHH、PTC、GLI1的mRNA表达及SHH、GLI1的蛋白表达水平均降低,同时肺组织病理损伤评分、W/D及TNF-α mRNA表达均高于LPS处理组.结论 LPS所致ALI的发展过程中存在SHH信号通路的激活,且SHH信号通路相关分子表达上调,可减轻肺损伤参与肺组织损伤后修复.
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p53凋亡刺激蛋白2抑制奥沙利铂诱导的结肠癌细胞自噬并促进凋亡
目的 研究p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2) p53依赖以及非依赖的自噬抑制作用,在提高奥沙利铂(OXA)促细胞凋亡中的作用.方法 HCT116(p53-/-)细胞分为雷帕霉素(rapamycin)联合ASPP2组、ASPP2组、p53组、ASPP2联合p53组、3-甲基嘌呤(3-MA)组、对照组(OXA或单独饥饿处理)6组.凋亡检测时添加单独空病毒(GFP-Ad)组、rapamycin组作为对照.各组细胞转染绿色荧光蛋白微管相关蛋白1轻链3(GFP-LC3)质粒,在荧光显微镜下观察并计数LC3阳性细胞数;Westemblot法检测各组自噬相关分子表达水平;annexinV-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡水平.结果 3-MA处理组与ASPP2处理组具有相同的自噬抑制作用,且能够促进OXA或饥诱导的细胞凋亡,但促凋亡作用低于ASPP2组;rapamycin联合ASPP2处理能够有效抵消ASPP2的自噬抑制作用,但仍具有促进OXA或饥饿诱导的细胞凋亡,且促凋亡作用同样低于ASPP2组.结论 OXA增强结肠癌细胞自噬,而ASPP2过表达能够抑制OXA的自噬诱导作用;ASPP2能够通过P53依赖以及P53非依赖途径促进细胞凋亡;ASPP2通过p53依赖以及p53非依赖途径所引起的促细胞凋亡并非完全通过抑制自噬来实现.
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组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1缺陷小鼠造血干细胞增殖加快且凋亡增加
目的 研究组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1缺陷(MYSM1-/-)小鼠骨髓造血干细胞(HSC)的静息状态、增殖与凋亡情况.方法 分离MYSM1-/-小鼠和野生对照(MYSM1+/+)小鼠的骨髓细胞,利用免疫磁珠和流式细胞仪分选获得表面标志为lin-Sca-1+ c-kit+的HSC.采用腹腔注射溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)的方法检测HSC增殖与细胞周期、采用Hoechst 33342-派若宁(pyronin)Y双染色法检测静息态HSC的比例、采用异硫氰酸荧光素标记膜联素V/7-氨基放线菌素D(annexin V-FITC/7-AAD)双染色法检测HSC凋亡.比较MYSM1-/-小鼠和MYSM1+/+对照小鼠HSC数目、细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡的变化情况.结果 MYSM1-/-小鼠的骨髓细胞、HSC总数与野生型小鼠相比明显降低;HSC的S期比例增加、增殖加快、静息期细胞减少但功能有缺陷的MYSM1-/-HSC凋亡率显著上升.结论 MYSM1对维持HSC的静息状态有非常重要的作用,其缺陷可引起静息态的HSC大量进入S期,异常增殖的HSC凋亡增加并终引起HSC和骨髓细胞总数减少.
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过量碘抑制甲状腺细胞自噬并诱导凋亡与桥本甲状腺炎有关
目的 探讨过量碘对人甲状腺细胞自噬、凋亡的影响以及与桥本甲状腺炎的关系.方法 免疫组织化学法检测桥本甲状腺炎患者甲状腺组织中自噬及凋亡相关蛋白表达水平,以良性甲状腺腺瘤手术标本的正常组织作为正常对照.用不同浓度的碘化钾(KI)处理Nthy-or 3-1甲状腺细胞12 h后,利用Western blot法检测细胞自噬相关蛋白哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平,分别采用流式细胞术、MTT法检测细胞凋亡和增殖水平.结果 与正常甲状腺组织比较,桥本甲状腺炎组织中自噬水平较低,凋亡蛋白水平较高.与对照组比较,浓度梯度KI处理致甲状腺细胞mTOR表达水平明显升高,而LC3B-Ⅱ表达水平明显下降,以10 mmol/L KI处理时变化明显;高浓度KI处理促进甲状腺细胞凋亡率明显升高;细胞增殖率随KI浓度增加而呈下降趋势,50 mmol/L KI处理时增殖率低.结论 过量碘能够抑制甲状腺细胞自噬,诱导其凋亡.桥本甲状腺炎患者甲状腺组织中自噬水平低下,较高水平的凋亡,提示过量碘可能与桥本甲状腺炎的发病有关.
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活动性结核患者单核细胞中B淋巴细胞诱导成熟蛋白1的mRNA水平降低
目的 研究活动性结核患者单核细胞中B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(Blimp-1)的mRNA水平与结核分枝杆菌(MTB)潜伏感染者和健康者相比是否发生改变.方法 收集活动性结核患者、结核菌潜伏感染者和和健康者的抗凝外周血,从外周血中分离并纯化单核细胞,荧光定量PCR检测单核细胞中Blimp-1 mRNA的水平.而后分别用MTB的H37Rv菌株全菌裂解液和ESAT-6/CFP-10的抗原多肽刺激健康者的单核细胞,荧光定量PCR检测刺激前后单核细胞中Blimp-1 mRNA的水平.结果 与健康者相比,活动性结核患者、潜伏感染者单核细胞Blimp-1的mRNA水平显著降低;与未刺激的单核细胞相比,全菌裂解液刺激后的单核细胞Blimp-1的mRNA水平显著降低,而ESAT-6/CFP-10抗原多肽刺激后的单核细胞中Blimp-1的mRNA水平无显著变化.结论 活动性结核患者和MTB潜伏感染者单核细胞Blimp-1的mRNA水平降低,MTB全菌裂解液刺激的人单核细胞中Blimp-1的mRNA水平降低.
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慢性乙型肝炎患者外周血趋化因子和炎症因子的水平
慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染而导致的炎症性疾病.是以局部单核细胞、淋巴细胞及中性粒细胞浸润为主的感染性疾病[1].HBV感染宿主细胞后可诱导宿主细胞中趋化因子分泌及其受体表达,趋化因子/受体的相互作用进一步介导中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等向炎症部位聚集,参与组织损伤[2].白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)是第一个被发现的CXC趋化因子,CXC趋化因子配体1[chemokine(C-X-C motif) ligand 1,CXCL1]和CXCL2也属于趋化因子CXC 族,它们都是中性粒细胞趋化因子.中性粒细胞趋化因子在慢性乙型肝炎患者外周血的水平尚不清楚.
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CCL21基因过表达上调重症肌无力患者CK8/18阳性胸腺上皮细胞的抗原呈递功能相关基因
目的 明确重症肌无力(MG)患者胸腺组织CC趋化因子配体21(CCL21)的分布;通过CCL21基因转染MG患者细胞角蛋白8/18(CK8/18)阳性胸腺上皮细胞(TEC),探讨CCL21过表达对CK8/18阳性TEC中抗原提呈功能相关分子表达的影响.方法 采用免疫组织化学检测CCL21、CK8/18阳性细胞在MG患者胸腺的表达及分布,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测MG患者胸腺CCL21、CCL19及CC趋化因子受体7(CCR7)的mRNA水平;pCMV-CCL21质粒转染MG患者分离的CK8/18阳性TEC,qRT-PCR检测转染前后TEC功能性基因CD80、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、CD86、HLA-DR、HLA-A的mRNA水平.结果 MG胸腺组织中CK8/18阳性细胞明显多于正常对照,且在皮质及髓质区均有分布,CCL21蛋白、CCR7mRNA的水平显著增高.pCMV-CCL21质粒转染TEC后,HLA-A、HLA-DR、ICAM和CD80 mRNA水平显著增加.结论 CCL21过表达,可引起MG患者CK8/18阳性胸腺上皮细胞抗原呈递功能相关基因的表达增高.
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急性冠脉综合征患者血浆chemerin和C反应蛋白水平升高
目的 探讨急性冠脉综合征患者血浆趋化素(chemerin)和C反应蛋白(CRP)水平变化.方法 用ELISA测定急性心肌梗死(AMI)组、不稳定型心绞痛(UA)组、稳定型心绞痛(SA)组及对照组血浆chemerin水平,免疫发光夹心法测定CRP水平.结果 AMI组和UA组血浆chemerin水平显著高于对照组和SA组,且AMI组血浆chemerin水平显著高于UA组.AMI组和UA组血浆CRP水平显著高于对照组和SA组.血浆chemerin水平与CRP、空腹血糖、左室舒张末期内径显著正相关,与左室射血分数显著负相关.结论 急性冠脉综合征患者血浆chemerin和CRP水平升高.
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CD147介导CD4+肿瘤浸润淋巴细胞促进乳腺癌进展
目的 分析各T淋巴细胞亚群中CD147的表达水平以及CD147表达量在健康对照者外周血,乳腺癌患者外周血、淋巴结和肿瘤浸润淋巴细胞中CD4+T细胞的变化,分析CD147对乳腺癌患者预后的影响.方法 采用Robust Multi-array Averaging的标准化方法提取GEO芯片GSE14308、GSE36765和GSE6532中的CD147表达数据.不同的基因表达水平的比较采用方差分析,生存曲线采用Log-Rank检验以及Cox比例风险回归模型进行多因素分析.结果 CD147在C57BL/6J小鼠淋巴结中的Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞表达水平是Th0细胞的8～12倍.在乳腺癌患者的CD4+肿瘤浸润淋巴细胞中,CD147的表达水平显著高于健康对照者外周血、乳腺癌患者外周血和淋巴结中的CD4+T细胞.Log-Rank分析中,CD147表达量高低与无复发生存时间显著相关.Cox多元回归模型显示CD147高表达是乳腺癌复发的危险因素(风险度=1.764;95％可信区间:1.088～ 2.859).结论 CD147可能通过上调CD4+T细胞的功能参与炎症反应,促进乳腺癌的进展.
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DNA的G四链体抗体的制备和鉴定
目的 构建DNA的G四链体抗体的原核表达质粒,利用BL21 (DE3)菌表达此抗体,并进行纯化及鉴定.方法 化学合成DNA的G四链体抗体的基因BG4,插入以pET-26b(+)为骨架构建的载体pSANG10中,构建DNA的G四链体抗体表达载体pSANG10-BG4.以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌进行该抗体的自诱导表达,渗透压裂解法收集此抗体,并经His亲和层析纯化,用SDS-PAGE及Western blot法鉴定此抗体,并在SW480结肠癌细胞中验证此抗体功能.结果 DNA的G四链体抗体表达载体经双酶切及基因测序鉴定构建成功.该抗体相对分子质量(Mr)为30 000～37 000,以可溶性的形式表达于BL21菌细胞间质,表达产物与目的蛋白大小一致.结论 成功制备了DNA的G四链体抗体.
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结核分枝杆菌抗毒素higA的原核表达及多克隆抗体制备
目的 克隆编码结核分枝杆菌抗毒素基因higA并在大肠杆菌中表达,纯化higA蛋白后,制备兔抗higA的多克隆抗体.方法 利用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增higA基因;构建重组表达质粒pET-32a(+)-higA;筛选出阳性重组质粒后,转化大肠杆菌BL21,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达;利用SDS-PAGE与Western blot法鉴定目的蛋白的表达;以纯化的higA蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗higA的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定.结果 成功扩增出了higA基因,克隆于载体pET-32a(+)质粒中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确;转化大肠杆菌BL21后能成功诱导higA蛋白[相对分子质量(Mr)36 630]的表达;利用纯化的higA蛋白免疫新西兰大白兔后,能有效地刺激特异性higA抗体的产生,抗体的效价达到1∶3200以上.结论 成功在大肠杆菌中表达出higA蛋白,并制备出效价及特异性良好的兔抗higA多克隆抗体.
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阻断ICOS/ICOSL途径用于治疗自身免疫性疾病的研究进展
可诱导共刺激分子(ICOS)及其配体ICOSL是CD28/B7家族的成员,它所提供的共刺激信号可以为T细胞提供活化所需要的第2信号.ICOS与ICOSL通路的主要功能为增强记忆反应、增殖反应、调控效应T细胞的活化和改变Th1/Th2细胞亚群分化及细胞因子分泌;影响B细胞抗体的分泌.近年来研究显示多种自身免疫性疾病与ICOS/ICOSL途径相关,包括该途径直接参与Behcet病、多发性肌炎等多种自身免疫性疾病的发病机制;作为评估自身免疫性疾病活动度的血清学指标或治疗疗效的生物学标志.提示干扰该途径可为治疗自身免疫性疾病提供新的策略.
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胶质母细胞瘤的发生机制及靶向治疗进展
胶质母细胞瘤是成人脑部肿瘤中恶性程度高的原发性肿瘤,由于血管丰富、浸润性及易复发性等特点,目前除早期手术治疗、化疗及放疗外还没有很好的治疗手段.随着分子生物学及其他学科的快速发展,人们对胶质母细胞瘤的发病机制有了深入的了解.通过研究发现,胶质母细胞瘤的发生涉及多种信号途径的参与,深入研究这些信号途径,对于阐明其发病分子机制并将其转化为临床实践的分子靶向治疗目标具有重要的理论意义和实际应用价值.本文将从细胞因子、配体-受体、信号通路等多个层次,对胶质母细胞瘤的发病分子机制进行归纳综述.
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自然杀伤T细胞与肝脏疾病的研究进展
自然杀伤T(NKT)细胞是一类天然存在的介导先天免疫和获得性免疫的免疫调节细胞,能特异识别CD1d分子递呈的糖脂类抗原.NKT细胞在肝脏内含量丰富,是肝脏固有免疫系统的重要组成部分,活化的NKT细胞与肝脏炎症、纤维化、损伤及病毒感染密切相关.本文从NKT细胞的生物学特性、免疫调节作用和在病毒性肝病和非病毒性肝脏疾病中研究进展三个方面进行了综述,为今后研究NKT在肝脏疾病中作用和发病机制提供参考依据.
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内质网应激通过多种信号通路调节系统性红斑狼疮发病的研究进展
系统性红斑狼疮(SLE)是一种复杂的自身免疫性疾病.内质网是细胞发挥各种功能的重要场所,是整合多种应激反应的交汇点.内质网膜上存在完整的信号调节机制-内质网应激(ERS)反应机制,细胞凋亡、炎症、免疫异常参与SLE的发病过程,并且ERS可作为共同通路将凋亡、炎症、免疫等多条信号通路联系起来,再通过其下游信号对细胞凋亡、炎症、免疫反应等生理病理活动进行调控.为更好地理解SLE的发病机制,本文对ERS、细胞凋亡、炎症、免疫反应与SLE之间关系的研究进展进行了综述.
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猪T细胞受体β链转录组与基因组分子结构研究进展
T细胞受体(TCR)是T细胞的表面标志,作为T细胞识别和结合内/外源性抗原的表面分子,TCR在免疫应答和免疫调节中发挥着重要的作用.但由于其基因的遗传多样性和结构复杂性,对猪αβT细胞特别是病原感染或免疫特异的克隆性增殖规律研究在国内尚属空白.随着对猪免疫系统的研究深入,对其TCR的研究也取得了很大进展,本文综述了猪TCR β链不同组成区域的分类、转录组的多样性及复杂性、基因组的结构特征等方面的研究进展,以加深对猪TCR结构复杂性的认识和理解,为特异性TCR的筛选奠定理论基础.
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肿瘤相关巨噬细胞的研究进展
肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是一群具有免疫抑制功能的细胞,作为肿瘤微环境的重要组成成分,TAM以多种方式在肿瘤的发生、发展和转移中发挥着重要的作用.本文总结了TAM的表型,调控TAM在肿瘤组织中富集和分化的因素,TAM在肿瘤生长和转移中的作用以及以TAM为靶点的抗肿瘤策略等方面的研究进展,以期为肿瘤的生物治疗提供新的思路.
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自噬在结核分枝杆菌感染免疫应答作用的研究进展
结核分枝杆菌(MTB)是结核病致病病原体,长期协同进化使得MTB制定出专门针对人类宿主免疫系统的逃逸机制.自噬作为细胞内环境稳定机制,广泛地参与宿主对抗MTB的固有免疫及适应性免疫效应等.本综述主要总结了自噬-免疫网络相交的细节过程:传递固有免疫受体信号、协同细胞因子发挥作用、调节免疫相关GTP酶,增强抗原提呈及参与T细胞的稳态调控等交叉信号通路.关于自噬-抗MTB多条免疫通路分子水平的深入研究,将为以自噬为基础的新型治疗带来新的策略.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
