细胞与分子免疫学杂志
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology 세포여분자면역학잡지
- 主管单位： 中国免疫学会；第四军医大学
- 主办单位： 陕西省免疫学会,中国免疫学会
- 影响因子： 0.81
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-8738
- 国内刊号： 61-1304/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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Rab23通过上调Rac1的水平促进Sa3鳞状细胞癌细胞的侵袭
目的 探讨Ras相关蛋白23(Rab23)对Sa3鳞状细胞癌细胞侵袭能力的影响,以及Rab23是否通过调控Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1(Rac1)促进Sa3细胞的侵袭.方法 用慢病毒感染的方式建立Rab23过表达和干涉的Sa3稳定感染细胞系.TranswellTM小室侵袭实验检测Rab23对Sa3细胞侵袭能力的影响;Western blot法检测Rab23对Rac1表达的影响;在稳定感染细胞系中加入Rac1抑制剂ⅡZ62954982后,进行TranswellTM小室侵袭实验检测Rac1在Rab23促进Sa3细胞侵袭中的作用.结果 过表达Rab23可以显著增强Sa3细胞的侵袭能力,而干涉Rab23则显著降低Sa3细胞侵袭能力.Rab23促进Rac1的表达.Rac1抑制剂显著抑制Rab23对Sa3细胞侵袭的促进作用.结论 Rab23通过上调Rac1的表达促进Sa3细胞的侵袭.
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Basigin(CD147)剪接异构体3抑制食管癌细胞的增殖及侵袭和迁移
目的 研究basigin(BSG,CD147)剪接异构体3(BSG3)在食管癌组织中的表达水平,及其对食管癌细胞功能的影响.方法 免疫组织化学染色检测食管癌组织及正常食管组织BSG3的表达;实时定量PCR分析BSG1、BSG3在食管癌组织及正常食管组织中转录水平的差异;通过真核表达载体转染的方法在Eca109食管癌细胞中过表达BSG3,MTT法检测Eca109食管癌细胞的增殖活性,TranswellTM侵袭小室实验检测Eca109细胞的侵袭能力,划痕实验检测Eca109细胞的迁移能力.结果 与正常食管组织相比,食管癌组织中BSG1和BSG3均高表达,过表达BSG3能够有效抑制Eca109细胞的增殖、侵袭和迁移能力.结论 BSG3在食管癌组织高表达,且能够拮抗BSG1的功能,抑制食管癌细胞增殖、侵袭和迁移能力.
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兔实验性骨关节炎六种血清学生物标志物的变化
目的 定量检测新西兰大白兔血清中白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、白细胞介素6(IL-6)、2型胶原C端肽(CTX2)、环氧合酶2(COX2)和前列腺素E2(PGE2)随时间变化的关系(时效性),探讨联合6种血清学生物标志物对骨关节炎早期诊断的价值和意义.方法 40只新西兰大白兔,随机均分为实验组和对照组.实验组兔用关节腔注射胶原酶的方法制备实验性兔骨关节炎模型,对照组兔关节腔不注射胶原酶.用膝关节病理切片和X线检查及HE染色来检测造模是否成功.造模成功后每隔2周对两组兔血清中IL-1β、MMP-13、IL-6、CTX2、COX2和PGE2的水平进行检测.结果 实验组各个时间点6种生物标志物的水平均高于对照组,尤其在第4周变化为明显.结论 联合检测血清中IL-1β、MMP-13、IL-6、CTX2、COX2、PGE2有助于骨关节炎的早期诊断.
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硒肽Se-ZnCu-65P增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能并抑制一氧化氮和过氧化氢的分泌
目的 研究硒肽Se-ZnCu-65P对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力与NO和H2O2分泌水平的影响.方法 以不同剂量的具有超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)双抗氧化酶活性的硒肽Se-ZnCu-65P作用于脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,培养24h,采用MTT法检测巨噬细胞的相对活力,中性红摄入法检测巨噬细胞的吞噬能力,硝酸还原酶法测定NO分泌水平,钼酸铵比色法测定H2O2分泌水平.结果 Se-ZnCu65P单独作用于巨噬细胞时,可增强细胞的相对活力,却不影响细胞的吞噬能力;能降低巨噬细胞分泌H2O2的水平,而不能抑制NO的分泌.而LPS诱导的巨噬细胞吞噬能力增强,同时NO和H2O2的水平也显著上升.当Se-ZnCu-65P作用于LPS诱导的巨噬细胞时,细胞的吞噬能力进一步增强,细胞NO和H2O2的水平却显著降低.结论 Se-ZnCu-65P能有效提高LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的相对活力,增强细胞的吞噬能力,降低NO和H2O2的分泌水平.
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黄芩苷增强N2a/APPswe细胞的抗氧化能力并促进核因子E2相关因子2(Nrf2)的核转位
目的 探讨黄芩苷对阿尔茨海默病(AD)转基因N2a/APPswe细胞的保护作用及可能机制.方法 应用(0.1、0.5、1、5、10、20) μmol/L黄芩苷处理N2a/APPswe细胞,MTT法检测黄芩苷对细胞存活率的影响.用(1、5、10)μ mol/L黄芩苷处理细胞48 h,通过黄嘌呤氧化酶法检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性,硫代巴比妥酸法检测各组细胞培养上清液的丙二醛(MDA)的含量.荧光实时定量PCR测定核因子FE2相关因子2(Nrf2)的mRNA表达,Western blot法检测细胞总Nrf2、核内Nrf2和核因子κB(NF-κB)的蛋白水平.免疫荧光染色观察Nrf2在细胞内的分布.结果 MTT试验结果显示,黄芩苷能促进N2a/APPswe细胞增殖.与对照组相比,模型组SOD活性明显降低,MDA含量明显增多,而黄芩苷能提高SOD活性,抑制MDA的生成,尤其以高剂量组为明显.黄芩苷处理组与模型组相比Nrf2 mRNA和总蛋白表达均无明显差异,但黄芩苷处理后能显著增加细胞核内Nrf2的含量,下调细胞核内NF-κB的水平.免疫荧光染色结果也证明,黄芩苷能促进Nrf2的核转位.结论 黄芩苷增强N2a/APPswe细胞的抗氧化能力并促进Nrf2的核转位.
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人蔗糖酶蛋白在大肠杆菌的诱导表达与纯化
目的 构建人蔗糖酶(hSUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白.方法 采用反转录PCR法扩增得到hSUC基因片段,并将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 克隆得到1482 bp目的基因,酶切和测序证实hSUC基因片段成功插入到pET-28a(+)表达载体.表达的融合蛋白质相对分子质量(Mr)为61 240,Westernb1ot结果显示融合蛋白可以与hSUC抗体特异性结合.结论 成功在大肠杆菌中表达和纯化hSUC融合蛋白.
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链脲佐菌素诱导小鼠B细胞可抑制MIN-6细胞分泌胰岛素并促进胰岛素自身抗体的产生
目的 探讨链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠后B淋巴细胞对自身免疫性糖尿病发展的作用.方法 以低剂量STZ诱导ICR小鼠,建立小鼠自身免疫性糖尿病模型,采用放射免疫法和ELISA分别检测胰岛素和胰岛素自身抗体,判断模型的诱导情况;以CD19磁珠分选STZ诱导的小鼠以及正常小鼠外周血B淋巴细胞,通过流式细胞术检测磁珠分选情况;以PBS处理的MIN-6细胞为空白对照组(A组),以正常小鼠B细胞和MIN-6细胞共培养为B组,以经20 μg/mL脂多糖(LPS)预处理的正常小鼠B细胞和MIN-6细胞共培养为C组,以STZ诱导小鼠后的B细胞与MIN-6细胞共培养为D组,通过SYBR@Green染料实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、放射免疫法分别检测处理后的胰岛素mRNA及其蛋白表达情况,并通过ELISA检测胰岛素自身抗体水平以及转化生长因子β(TGF-β)水平.结果 与A组相比,STZ诱导组小鼠体质量减少、血糖升高、血清中胰岛素含量降低、胰岛素自身抗体升高;通过免疫磁珠分选,以流式细胞仪检测的结果显示,CD19+B细胞所占比例达到98％;与A组及B相比,C组和D组中MIN-6细胞胰岛素mRNA水平以及共培养上清中胰岛素水平均降低,并且胰岛素自身抗体和TGF-β的表达均增加.结论 STZ诱导的自身免疫性糖尿病小鼠模型的B淋巴细胞可能通过增加胰岛素自身抗体的产生来抑制胰岛MIN-6细胞产生胰岛素.
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重组抗表皮生长因子疫苗P64k-EGF的构建及免疫原性分析
表皮生长因子(epidemal growth factor,EGF)的相对分子质量(Mr)为6000,由53个氨基酸组成;是具有酪氨酸激酶活性的表皮生长因子受体(epidemal growth factor receptor,EGFR)的主要配体,而EGFR在多种上皮源肿瘤中过表达[1-4].EGF可以通过自分泌和旁分泌进入组织内与EGFR单体结合,促使其结构改变后与其他EGFR家族成员单体或自身形成异源或同源二聚体从而激活酪氨酸激酶,进而激活下游与肿瘤细胞分裂、抗凋亡和新血管形成等相关分子事件[5-9].
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结核分枝杆菌脂蛋白G在HEK293T细胞中的表达及纯化
目的 构建含结核分枝杆菌(MTB)脂蛋白G(LprG)基因的真核表达载体pcDNA3.1-His-LprG-FLAG,并在HEK293T细胞中表达和纯化LprG融合蛋白.方法 以MTB H37Rv基因组DNA为模板,用PCR法扩增LprG基因,并通过DNA重组构建真核表达载体pcDNA3.1-His-LprG-FLAG,酶切鉴定并测序.将重组质粒转染HEK293T细胞后,应用Western blot法检测His-LprG-FLAG融合蛋白的表达.利用Ni-NTA金属亲和层析柱从细胞上清和细胞裂解液中纯化融合蛋白His-LprG-FLAG,并用SDS-PAGE和Western blot法检测纯化后的蛋白.结果 成功构建了pcDNA3.1-His-LprG-FLAG的真核表达载体,Western blot 结果表明转染质粒后,HEK293T细胞裂解液中检测到目的蛋白,相对分子量(Mr)为27 000.经Ni-NTA金属亲和层析柱纯化后得到高纯度的融合蛋白His-LprG-FLAG.结论 成功构建并在HEK293T细胞中表达和纯化了His-LprG-FLAG融合蛋白.
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脂肪细胞分化成熟过程中瘦素对Hedgehog信号通路的上调作用
目的 研究瘦素(leptin)对Hedgehog (Hh)信号通路的调节作用.方法 使用3T3-L1细胞诱导脂肪细胞分化,实时定量PCR和Western blot法分别检测脂肪细胞分化过程中Hh信号通路关键转录因子胶质瘤相关癌基因同源物(Gli) mRNA和蛋白的表达,以及leptin对其表达水平的影响.结果 在脂肪细胞分化过程中,诱导后的0、4、7、10 d,Gli1、Gli2、Gli3的mRNA和蛋白的表达逐渐受到抑制,以Gli1为显著;而应用100 ng/mL leptin则可以促进Gli1、Gli2、Gli3的mRNA和蛋白表达.结论 在脂肪细胞分化成熟过程中,leptin和Hh具有交互作用,leptin可上调Hh通路信号分子Gli的表达,leptin可能通过激活Hh信号通路发挥抑制脂肪生成作用.
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树突状细胞体外诱导方案的对比
目的 探讨并比较不同细胞因子组合、诱导时间对树突状细胞(DC)体外诱导、成熟,分泌细胞因子水平和刺激淋巴细胞增殖能力的影响,为建立DC体外高效、规模化培育体系提供依据.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),贴壁法获得DC前体细胞,用白细胞介素4(IL-4)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导2d,将其分为6组.A组加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1α和前列腺素E2(PGE2);B组加入α干扰素(IFN-α);C组加入脂多糖(LPS);3组细胞继续培育2d.D～F组细胞先进行1/3体积换液,24h后,分别再加入上述A～C组的成熟因子,再继续诱导2d.分别收获各组上清和细胞,进行细胞计数,采用流式细胞术进行表型分析;采用ELISA检测各组DC分泌IL-12p70的水平、采用细胞增殖检测试剂盒刺激淋巴细胞增殖的能力.结果 6组体外诱导体系均能培育出形态学类似DC的细胞,DC数量与纯度(均达到96％以上),各组间无显著性差异.A组与D组比较:CD40、CD80、CD83、CD86共刺激分子表达水平相近,但D组DC分泌IL-12p70水平高于A组;B组与E组比较:E组DC的CD86表达水平显著高于B组,CD80表达量略高于B组,2组DC分泌IL-12p70的水平相近;C组与F组比较:CD40、CD80、CD83、CD86共刺激分子表达水平和分泌IL-12p70的水平均相近.6组DC刺激淋巴细胞增殖水平均相近.三种不同成熟因子(组合)比较:B组DC共刺激分子CD80水平明显低于C组和A组,且IL-12p70分泌水平低,而C组和A组共刺激分子表达水平与IL-12p70分泌水平相近.结论 TNF-α、IL-1α和PGE-2三种细胞因子联合以及LPS可有效地诱导DC表达高水平免疫共刺激分子、分泌高水平IL-12p70.
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神经调节蛋白1通过增强其受体磷酸化促进人冠状动脉平滑肌细胞的增殖和迁移
目的 探讨神经调节蛋白1(NRG1)对人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)增殖和迁移的影响.方法 培养HCASMC,Western blot法检测HCASMC中表皮生长因子受体2(ErbB2)、ErbB3和ErbB4的表达以及ErbB2、ErbB3和ErbB4的磷酸化;MTT法检测不同浓度NRG1刺激对HCASMC增殖的影响,利用Transwell TM小室检测不同浓度NRG1刺激对HCASMC迁移能力的影响.结果 ErbB2、ErbB3和ErbB4均能在HCASMC中表达,加入NRG1处理后,与空白对照组比较,3个受体磷酸化水平均明显增加.不同浓度的NRG1干预对HCASMC增殖和迁移的影响不同,10 ng/mL的NRG1能明显促进HCASMC的增殖和迁移.结论 NRG1通过增强其受体ErbB2、ErbB3和ErbB4的磷酸化促进HCASMC的增殖和迁移,进而可能促进HCASMC在血管生成中的作用.
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小鼠DNA依赖的干扰素调节因子激活物分子结构特征及其功能
目的 研究小鼠DNA依赖的干扰素调节因子激活物(DAI)的分子结构特征以及抗病毒天然免疫应答与信号转导的分子机制.方法 应用反转录PCR技术从小鼠脾脏淋巴细胞中克隆DAI基因,并利用生物信息学软件对其遗传演化关系及分子结构特征进行分析;双荧光素酶报告系统检测小鼠DAI受到聚脱氧腺苷酸-脱氧胸苷酸[poly (dA-dT)]和聚脱氧鸟苷酸-脱氧胞苷酸[poly(dG-dC)]作用后β干扰素(IFN-β)启动子和核因子κB(NF-κB)调控元件启动的荧光素酶活性.结果 克隆的小鼠DAI基因开放读框全长为1236bp,编码411个氨基酸,与牛、猪、大鼠等哺乳动物DAI相应序列的同源性为60％、63.1％、84％,由2个Z-DNA结合结构域Zα和Zβ、DNA结合区3(D3)和信号转导结构域(SD)组成.小鼠DAI受到poly (dA-dT)作用后,IFN-β启动子和NF-κB调控元件起始的相对荧光素酶活性均显著增加;而小鼠DAI受到poly(dG-dC)作用后,只有NF-κB起始的相对荧光素酶活性显著增加,IFN-β启动子起始的相对荧光素酶活性并无显著变化.结论 小鼠DAI能识别富含A/T或C/G的DNA序列,可能在宿主抗DNA病毒感染的天然免疫反应中发挥重要作用.
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白消安联合环磷酰胺诱导小鼠急性移植物抗宿主病模型的建立
目的 以白消安(BS)联合环磷酰胺(CP)作为移植前预处理方案建立稳定的小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型.方法 雄性BALB/c(H-2kd)为受体鼠,雌性C57 BL/6 (H-2kb)为供鼠,受体鼠接受100 mg/kg BS和200 mg/kg CP预处理后,输入2×107个供鼠的骨髓细胞或2×10 7个骨髓细胞联合2×107个脾细胞.记录移植后小鼠一般情况,观察aGVHD临床表现,HE染色后检查组织病变情况,流式细胞术检测脾脏、骨髓中细胞嵌合度.结果 移植骨髓联合脾细胞组小鼠,移植后7d开始出现典型aGVHD临床表现,肝、脾、肠、皮肤、肺等组织出现GVHD相关病理形态学改变,并达到完全供者嵌合,中位生存期为10 d,30 d内全部死亡;单移植骨髓细胞组小鼠无aGVHD表现,生存期大于45d.结论 成功建立了稳定可靠的aGVHD小鼠模型,可用于aGVHD的发病机制、防治效果的实验性研究.
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2型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及其相互作用蛋白的纯化
目的 构建2型登革病毒(DENV2)非结构蛋白3(NS3)与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化(TAP)法获得与NS3相互作用的蛋白.方法 根据DENV2基因序列,设计引物;以DENV2 cDNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和标签(FLAG-StrepⅡ)的哺乳真核表达载体pCI-SF,获得重组表达质粒pCI-NS3-SF;将上述重组质粒通过转染试剂LipofectamineTM 2000瞬时转染进入HEK293T细胞,Westem blot法验证NS3融合蛋白的表达;通过TAP法分离纯化与NS3相互作用的蛋白.结果 成功构建了NS3融合蛋白表达载体,利用TIAP系统分离得到与NS3蛋白相互作用的宿主蛋白.结论 串联亲和纯化法可以有效的分离与DENV2 NS3相互作用的细胞蛋白.
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重组甲型流感病毒NS2蛋白抑制感染小鼠肺组织干扰素的产生
目的 用大肠杆菌表达获得甲型流感病毒(IAV)非结构蛋白2(NS2),并观察NS2蛋白对小鼠肺组织γ干扰素(IFN-γ)产生的影响.方法 构建pET22b(+)/NS2原核表达质粒并转化大肠杆菌Rosetta-gami (2),通过诱导表达、纯化获得NS2.将40只BALB/c小鼠,随机分8组,分别为正常对照组、200μg/kg NS2联合病毒组、200 μg/kg NS2联合RNA组、100 μg/kg灭活病毒、0.2×半数致死量(LD50)病毒组、50 μg/kg病毒RNA组、200 μg/kg NS2组和100 μg/kg NS2组,各组滴鼻给予小鼠处理.通过反转录PCR、Western blot法分别检测肺组织IFN-y的mRNA和蛋白表达.结果 在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下表达并纯化获得重组NS2;将NS2或/和IAV滴鼻给小鼠后,反转录PCR和Western blot法检测表明NS2联合病毒组的小鼠肺组织IFN-γ mRNA和蛋白水平较病毒组均降低.结论 NS2抑制IAV所诱导的小鼠肺组织IFN-γ mRNA和蛋白的水平.
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锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡
目的 构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响.方法 以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒pEGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒pEGFP-N1-zmp1并转染RAW264.7细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测zmp1 mRNA的水平;藻红蛋白标记的膜联素V/7-氨基放线菌素D(annexinV-PFE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测Zmp1蛋白对细胞凋亡影响.结果 扩增出zmp1基因;真核表达质粒经过XhoⅠ和BamH Ⅰ双酶切及基因测序鉴定构建成功;转染细胞24h后,经荧光倒置显微镜观察到绿色荧光;qRT-PCR结果显示转染pEGFP-N1-zmp1的RAW264.7细胞zmp1 mRNA的表达显著升高;转染后48 h,细胞早期凋亡率有所增加.结论 在RAW264.7细胞中成功表达了Zmp1并能促进巨噬细胞凋亡.
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类风湿性关节炎及骨关节炎患者外周血单个核细胞及滑膜成纤维细胞中白细胞介素27水平增高
目的 检测类风湿性关节炎(RA)及骨关节炎(OA)外周血单个核细胞(PBMC)和滑膜成纤维细胞(FLS)白细胞介素27(IL-27)及其受体的水平.方法 收集20例RA、20例OA、20例正常人PBMC和4例RA及4例OA患者滑膜组织,培养FLS,采用实时荧光定量PCR法检测PBMC和FLS中IL-27 mRNA的水平;采用免疫细胞化学法检测RA、OA患者FLS IL-27Rα的表达.结果 RA及OA患者PBMC中IL-27 mRNA水平分别是正常人的1.81倍及2.07倍;RA患者和OA患者PBMC中IL-27mRNA水平无明显差异,但RA患者FLS中IL-27 mRNA是OA患者的3.74倍;RA组FLS的IL-27Rα较OA组水平增高.结论 RA、OA患者IL-27水平增加,且RA患者FLS中IL-27水平高于PBMC.
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血清高敏C反应蛋白和氧化型低密度脂蛋白自身IgG抗体可作为急性冠脉综合征的预后指标
目的 探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清高敏C反应蛋白(hsCRP)和氧化型低密度脂蛋白自身IgG(oxLDL-IgG)水平变化及其与ACS患者预后的相关性.方法 分别采用夹心ELISA和间接ELISA检测79例发病6h以内的ACS患者和40例对照组血清hsCRP与oxLDL-IgG的水平,研究二者在ACS早期的变化规律.对ACS患者随访2年,记录心血管不良事件的发生例数,探讨hsCRP和oxLDL-IgG与ACS患者预后的相关性.结果 与对照组相比,ACS组血清hsCRP水平显著升高,ACS组血清oxLDL-IgG反应指数也明显升高.血清hsCRP与oxLDL-IgG水平高的ACS患者2年内不良事件的发生率明显高于血清hsCRP与oxLDL-IgG水平低的患者.结论 ACS患者血清hsCRP与oxLDL-IgG的水平可作为判定ACS患者预后的指标.
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BCL6共抑制因子样蛋白1(BCORL1)在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 观察BCL6共抑制因子样蛋白1(BCORL1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,并通过下调肺癌A549细胞中BCORL1的水平观察对A549细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 收集68例NSCLC组织及对应的癌旁组织,应用免疫组织化学染色分析BCORL1和E钙黏素(E-cadherin)在NSCLC及对应癌旁组织中的表达;采用小干涉RNA(siRNA)下调肺癌A549细胞中BCORL1的水平,TranswellTM小室法检测A549肺癌细胞迁移和侵袭能力.结果 BCORL1蛋白在NSCLC组织中表达水平显著高于对应癌旁组织,而E-cadherin蛋白在NSCLC组织中表达水平则显著低于对应癌旁组织;相关性分析证实BCORL1蛋白与E-cadherin蛋白在NSCLC组织中的表达呈显著负相关;临床相关分析发现BCORL1蛋白表达与淋巴结转移和TNM分期具有显著的相关性;特异性siRNA下调BCORL1水平后,E-cadherin蛋白上调;敲低BCORL1后,明显抑制A549肺癌细胞侵袭和迁移.结论 BCORL1在NSCLC组织中高表达且与E-cadherin表达呈显著负相关,其高表达与NSCLC恶性临床病理特征相关.敲低BCORL1,上调E-cadherin表达并抑制肺癌细胞侵袭和迁移能力.
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C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移
目的 探讨C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)对卵巢癌细胞增殖和转移的抑制作用.方法 ELISA分别检测卵巢癌患者与健康志愿者血清,SKOV3、3AO和HO8910上皮性卵巢癌细胞与IOSE80正常卵巢上皮细胞培养上清中CTRP6的水平;采用人CTRP6重组蛋白处理高转移性卵巢癌HO8910细胞,ELISA检测HO8910细胞白细胞介素8(IL-8)和血管内皮生长因子(VEGF)的分泌水平,采用CCK-8法检测细胞增殖、TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力;采用CTRP6小干扰RNA(CTRP6 siRNA)或CTRP6抗体处理HO8910细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 CTRP6在卵巢癌患者血清和上皮性卵巢癌细胞培养上清中水平降低;CTRP6重组蛋白处理HO8910细胞48 h后,细胞增殖和侵袭能力显著下降;利用siRNA抑制CTRP6表达后,细胞增殖和迁移能力显著增强;CTRP6抗体处理后,细胞增殖和迁移能力亦显著增强.结论 CTRP6在卵巢癌患者血清和上皮性卵巢癌细胞上清中水平降低;CTRP6可阻断IL-8/VEGF通路从而抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖和迁移.
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hnRNPD在食管鳞状细胞癌的表达及意义
目的 研究食管鳞状细胞癌(ESCC)组织异质性胞核核糖核蛋白D(hnRNPD)的表达与ESCC临床病理特征的关系,通过下调人ESCC细胞中hnRNPD水平,观察对ESCC细胞生长的影响及可能机制.方法 用免疫组织化学染色法检测ESCC组织及癌旁组织中hnRNPD的蛋白表达;转染siRNA-hnRNPD下调hnRNPD基因表达,用Western blot法验证沉默效果;MTT法及克隆形成实验检测下调hnRNPD基因表达后ESCC细胞生长情况的变化;采用藻红蛋白标记的膜联素V/7-氨基放线菌素D(annexin V-PE/7-AAD)双染色法结合流式细胞术检测基因下调后细胞凋亡变化.结果 hnRNPD在ESCC组织中高表达;hnRNPD在ESCC组织中表达水平与肿瘤分期存在相关性;hnRNPD基因表达的下调能明显抑制ESCC细胞的生长和克隆形成能力;下调hnRNPD基因表达后,与对照组相比,ESCC细胞凋亡明显增加.结论 下调hnRNPD基因表达通过增加细胞凋亡抑制ESCC细胞生长及克隆形成能力.
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早产儿氧暴露后外周血单个核细胞活性氧增加使SIRT1产生核质穿梭
目的 观察早产儿氧暴露后,外周血单个核细胞(PBMC)内去乙酰化酶沉默接合型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)与活性氧(ROS)产生的关系.方法 将诊断为呼吸窘迫综合征且需要吸氧的胎龄＜32周的早产儿,根据吸入氧体积分数(FiO2)分为低剂量吸氧组(FiO2 ＜300 mL/L),中剂量吸氧组(FiO2 300 mL/L ～400 mL/L),高剂量吸氧组(FiO2＞ 400 mL/L).在吸氧48 h后,采集外周血分离PBMC及血清,MitoSOXTM Red标记结合激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)的生成量,全光谱分光光度仪检测血清中丙二醛(MDA)含量,免疫荧光技术检测SIRT1定位,Western blot法检测PBMC中SIRT1蛋白水平.结果 随着吸入氧体积分数的增加,PBMC内的ROS、MDA含量逐渐增加,SIRT1转位率逐渐增加,SIRT1蛋白水平明显降低.结论 氧暴露诱导早产儿PBMC中产生大量的ROS,并促使SIRT1核质穿梭,抑制SIRT1的抗氧化应激能力.
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转染的miR-1908通过靶向转化生长因子β1抑制肾脏纤维化
目的 探讨miR-1908在肾纤维化中的调控作用.方法 运用实时定量PCR检测纤维化进程中人肾组织中miR-1908和转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA的水平;运用生物学信息分析和萤光素酶报告基因技术探索miR-1908对TGF-β1的靶向调控关系;体外转染miR-1908腺病毒表达载体后,运用Western blot法检测人原代肾间质细胞中TGF-β1、smad2/3和基质金属蛋白酶2 (MMP-2)的蛋白水平;对早期肾纤维化模型小鼠腹腔注射miR-1908腺病毒表达载体6周后,Masson染色观察肾纤维化情况.结果 miR-1908在人肾纤维化过程中水平逐渐降低,与TGF-β1 mRNA水平变化趋势相反;过表达miR-1908后,原代肾间质成纤维细胞中TGF-β1、smad2/3和MMP-2的蛋白水平均显著下调;注射miR-1908腺病毒表达载体6周后,与未注射组相比,小鼠肾纤维化症状明显缓解.结论 miR-1908通过靶向TGF-β1,对抑制肾脏纤维化有一定作用.
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血液病患者不规则抗体阳性率及特异性检测结果的分析
目的 了解血液病患者不规则抗体阳性率及其特异性分布.方法 应用微柱凝胶法对3986例血液病患者进行ABO、RhD血型鉴定和不规则抗体筛选,对筛选阳性的血标本再进行抗体特异性、抗体效价、Ig类型及37℃反应性检测.结果 在3986例血液病患者中检出不规则抗体阳性86例,其中男33例,女53例.在86例不规则抗体中,自身冷抗体12例,同种抗体74例.同种抗体中Rh血型系统64例,MNS血型系统5例,Lewis血型系统3例,Kidd血型系统2例.Rh血型系统单特异性抗体44例中,抗D4例,抗E21例;混合抗体20例中,抗Ec 13例,抗Ce 7例.不规则抗体Ig类型:同种抗体IgG类66例,IgM类8例;自身抗体IgM类12例.抗体效价区间为4～512.结论 血液病患者不规则抗体阳性率略高于正常人群和其他疾病患者,在输血前对其进行不规则抗体筛选及特异性鉴定,选择不含相应抗原的血液输注,是预防溶血性输血反应,确保输血安全有效的重要措施.
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抗人LOC339524单克隆抗体的制备和应用
目的 制备特异性抗人LOC339524的单克隆抗体(mAb)并进行应用.方法 将LOC339524蛋白的非糖基化抗原序列的编码基因进行三段重复表达,合成的基因克隆到质粒pET28a上.采用大肠杆菌表达系统获得LOC339524重组蛋白,以此作为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得mAb.ELISA测定抗体特异性及效价.Western blot法鉴定LOC339524重组蛋白、免疫组织化学技术分别检测人心肌组织和H9C2细胞中LOC339524蛋白的表达,采用制备的抗体检测不同心脏病患者血清LOC339524水平.结果 筛选出2株能稳定分泌抗人LOC339524蛋白mAb的杂交瘤细胞株,5-D3和4-F8.其中5-D3效价高于4-F8,达2×106.Westem blot法、免疫组织化学技术证明5-D3能特异性识别人和大鼠LOC339524蛋白,应用制备的抗体可成功检测不同心脏病患者血清LOC339524的水平.结论 成功制备了特异性好、效价高的抗人LOC339524蛋白mAb.
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抗IL-4全人源单链抗体的筛选和鉴定
目的 表达人白细胞介素4(IL-4),从全人源单链抗体(scFv)文库中筛选抗IL-4全人源scFv并鉴定其特异性.方法 采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET102/IL-4/BL21表达IL-4,进行纯化鉴定.利用全人源噬菌体抗体文库表达抗IL-4全人源scFv,用表达的IL-4作为抗原,筛选阳性克隆菌株经PCR、酶切及测序鉴定.采用斑点杂交检测抗IL-4scFv的特异性.结果 表达的IL-4融合蛋白相对分子质量(Mr)为27 000.采用该抗原筛选出了表达抗IL-4的阳性克隆,PCR结果显示,在约1000bp处有扩增的目的条带.酶切结果显示,有2株克隆的指纹图谱相同,其余均不同.选取指纹图谱不同的且与IL-4结合能力强的4个scFv的克隆进行测序,显示有3个的序列正确.斑点杂交显示,这3株克隆表达的scFv均具有特异性.结论 成功筛选到抗IL-4全人源scFv.
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氨基甲酰化及抗氨基甲酰化蛋白抗体在类风湿性关节炎中的研究进展
类风湿性关节炎(RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾病,发病机制不明.目前诊断RA的检验指标为抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)及类风湿因子(RF).尽管ACPA及RF有较高的诊断价值,但仍需要探寻新的检验指标提高疾病的诊断率.氨基甲酰化是一种造成蛋白质结构及功能改变的非酶介导的翻译后修饰,与RA的发病有关.近年来研究发现,氨基甲酰化蛋白刺激机体产生的抗氨基甲酰化蛋白抗体作为新的指标,对RA有预测、诊断及判断预后的价值.本综述主要对氨基甲酰化、抗氨基甲酰化蛋白抗体以及它们在RA中的作用进行分析.
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非淋巴组织中调节性T细胞的研究进展
无论在健康还是疾病状态下,许多非淋巴组织中都存在着相当数量的调节性T细胞(Treg),它们有着特殊的表型,并且在局部免疫应答中发挥着独特的功能.如内脏脂肪组织中的Treg高表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ,是联系免疫调节异常与代谢性疾病如2型糖尿病的关键;损伤再生的骨骼肌中的Treg高表达双调蛋白,可以促进肌肉修复;肿瘤组织中的Treg表型各有不同,但都参与了肿瘤的免疫逃逸.深入研究分布于各个组织的特殊的调节性T细胞将会对一些疾病的认识和治疗策略产生重要的影响.现就其相关研究进展进行综述.
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干扰素诱导的跨膜蛋白家族及其抗病毒机制的研究进展
病毒一直严重威胁着人类健康.机体固有免疫系统是抵御病毒入侵的第一条防线,而干扰素(IFN)通过激活多种IFN诱导基因(ISG)在其中发挥重要作用.IFN诱导的跨膜蛋白(IFITM)分子作为ISG家族的重要成员在多物种广泛表达,其结构及重要氨基酸位点对其功能的发挥至关重要,IFITM分子在多种病毒感染过程中发挥防御作用.同时IFITM分子单核苷酸多态性(SNP)也与疾病的严重程度及预后相关.本文综述了IFITM家族的演化、拓扑结构及细胞定位、抗病毒作用和基因变异与多种病毒性疾病的关系.
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单核细胞在丙型肝炎病毒感染中作用机制的研究进展
人成熟单核细胞为组织巨噬细胞和树突状细胞(DC)的前体细胞,具有异质性,不同亚群表型特征和功能存在差异.单核细胞表达大量的黏附分子和趋化因子受体,在抗肿瘤、抗微生物感染以及淋巴细胞激活等方面都发挥关键作用.丙型肝炎病毒(HCV)感染时,病毒蛋白可通过影响单核细胞重要免疫调节细胞因子的分泌以及后续的DC成熟抑制和Th1细胞应答的破坏和失能,干扰机体抗病毒特异性免疫应答以建立持续性感染,而阻断上述过程关键因子也成为治疗HCV感染新的免疫策略.本文主要综述HCV感染后单核细胞介导的免疫效应的功能特点及机制的相关研究进展.
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脂滴与免疫应答反应关系的研究进展
脂滴是一个复杂且活动旺盛的多功能细胞器,基本功能主要参与脂类合成和贮存,脂滴相关蛋白参与了多种脂质关联生物学过程,包括细胞信号转导、脂代谢的调控、膜运输、炎症相关蛋白的合成与分泌等.近年来关于脂滴与免疫应答反应的研究表明,根据细胞所处的阶段或状态不同脂滴存在不同的亚群,发挥特异性细胞功能.病原微生物的感染与细胞内脂积累密切相关,在免疫因子合成、抗原递呈、自噬等免疫过程中脂滴参与并起到关键的作用.本文针对脂滴在免疫应答反应方面的新研究进行综述.
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巨噬细胞在移植排斥中的作用及其机制的研究进展
器官移植是目前器官终末期疾病的有效治疗措施,但是移植术后的排斥反应仍是阻碍患者和移植物长期存活的主要原因.对于巨噬细胞,人们更多关注的是它在移植排斥中发挥的促炎症反应作用,然而,随着细胞与分子免疫学的发展,越来越多的证据表明巨噬细胞还可以促进移植物的存活.不仅如此,巨噬细胞在移植后的组织损伤修复及再生过程中亦拥有举足轻重的地位,如何调控巨噬细胞减轻排斥反应,甚至促进植物的功能重建是今后的研究方向.现就巨噬细胞的极化、巨噬细胞在移植物内的聚集及其在同种异体移植与异种移植中的免疫排斥作用、移植损伤修复、移植免疫耐受等方面进行论述.
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巨噬细胞异质性及其在炎症调控中的研究进展
巨噬细胞主要参与构成机体固有免疫体系,在炎症调控中发挥重要作用.巨噬细胞具有异质性,局部炎症反应特异性微环境活化成为M1型巨噬细胞和/或M2型巨噬细胞,且M1型和M2型巨噬细胞可相互转化.巨噬细胞除具有吞噬功能外,M1型巨噬细胞尚具有促进Th1细胞反应、促炎并诱导组织破坏的功能,而M2型巨噬细胞还具有抗炎、清除细胞碎片、促进血管生成及Th2细胞反应等功能,介导组织修复.M1型和M2型巨噬细胞对炎症发挥重要调控作用而影响炎症相关疾病的转归.本文主要总结了巨噬细胞异质性及其在炎症调控中的研究进展.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 |
| 1995 | 01 02 03 |
| 1994 | 01 02 |
| 1993 | 01 02 03 04 |
| 1992 | 01 02 03 04 |
| 1991 | 01 02 03 04 |
| 1990 | 01 02 |
| 1989 | 01 02 03 04 |
